Name: encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Studien ble delvis støttet av tilskudd tildelt B.R. av National Institutes of Health (R01EY019320), Department of Veterans Affairs (RX000444 og BX003050), og South Carolina SmartState Endowment.

Alle eksperimenter ble utført i samsvar med ARVO Statement for bruk av dyr i oftalmisk og visjonsforskning og ble godkjent av Medical University of South Carolina Animal Care and Use Committee under protokoll-ID 00399.
1. Cellekultur
<ol><li>Generer humane retinal pigment epitelceller (ARPE-19) cellelinje som stabilt uttrykker genet av valget i henhold til publiserte protokoller14,15.</li>
	<li>Vedlikehold celler i Dulbecco's Modifi...

<ol>
	<li>Allen, T. M., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+entering+the+mainstream.">Drug delivery systems: entering the mainstream.</a> Science. 303 (5665), 1818-1822 (2004).</li><li>Tonnesen, H. H., Karlsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+in+drug+delivery+systems.">Alginate in drug delivery systems.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 28 (6), 621-630 (2002).</li><li>Vilos, C., Velasquez, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+strategies+based+on+polymeric+microparticles.">Therapeutic strategies based on polymeric microparticles.</a> Journal of Biomedical Biotechnology. 672760, (2012).</li><li>Gasperini, L., Mano, J. F., Reis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+polymers+for+the+microencapsulation+of+cells.">Natural polymers for the microencapsulation of cells.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (100), 20140817 (2014).</li><li>Gasper, D. P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Novel strategy to produce a drug delivery system for skin regeneration. Uma nova estrat&#233;gia para produzir um dispositivo para entrega de f&#225;rmacos que ser&#225; usado na regenera&#231;&#227;o da pele. , (2012).</li><li>Huang, S., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+derived+materials-based+cell+and+drug+delivery+systems+in+skin+regeneration.">Naturally derived materials-based cell and drug delivery systems in skin regeneration.</a> Journal of Controlled Release. 142 (2), 149-159 (2010).</li><li>Nograles, N., Abdullah, S., Shamsudin, M. N., Billa, N., Rosli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+characterization+of+pDNA-loaded+alginate+microspheres+for+oral+administration+in+mice.">Formation and characterization of pDNA-loaded alginate microspheres for oral administration in mice.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 113 (2), 133-140 (2012).</li><li>Moore, K., Amos, J., Davis, J., Gourdie, R., Potts, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polymeric+microcapsules+containing+a+low+molecular+weight+peptide+for+controlled+release.">Characterization of polymeric microcapsules containing a low molecular weight peptide for controlled release.</a> Microscopy and Microanalysis. 19 (1), 213-226 (2013).</li><li>Xu, Y., Skotak, M., Hanna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospray+encapsulation+of+water-soluble+protein+with+polylactide.+I.+Effects+of+formulations+and+process+on+morphology+and+particle+size.">Electrospray encapsulation of water-soluble protein with polylactide. I. Effects of formulations and process on morphology and particle size.</a> Journal of Microencapsulation. 23 (1), 69-78 (2006).</li><li>Gryshkov, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+engineering+of+high+voltage+alginate+encapsulation+of+mesenchymal+stem+cells.">Process engineering of high voltage alginate encapsulation of mesenchymal stem cells.</a> Materials Science and Engineering: C. 36, 77-83 (2014).</li><li>Thanos, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+secretion+of+ciliary+neurotrophic+factor+to+the+vitreous,+using+the+encapsulated+cell+therapy-based+NT-501+intraocular+device.">Sustained secretion of ciliary neurotrophic factor to the vitreous, using the encapsulated cell therapy-based NT-501 intraocular device.</a> Tissue Engineering. (11-12), 1617-1622 (2004).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-year+intraocular+delivery+of+ciliary+neurotrophic+factor+by+encapsulated+cell+technology+implants+in+patients+with+chronic+retinal+degenerative+diseases.">Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term,+sustained+intraocular+delivery+of+a+VEGF+antagonist+using+encapsulated+cell+technology+implant+for+the+treatment+of+choroidal+neovascular+diseases.">Long term, sustained intraocular delivery of a VEGF antagonist using encapsulated cell technology implant for the treatment of choroidal neovascular diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, 455 (2012).</li><li>Annamalai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulated+Cell+Technology-Based+Delivery+of+a+Complement+Inhibitor+Reduces+Choroidal+Neovascularization+in+a+Mouse+Model.">Encapsulated Cell Technology-Based Delivery of a Complement Inhibitor Reduces Choroidal Neovascularization in a Mouse Model.</a> Translational Visual Science Technology. 7 (2), 3 (2018).</li><li>Alge, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Pigment+Epithelium+Is+Protected+Against+Apoptosis+by+&#945;B-Crystallin.">Retinal Pigment Epithelium Is Protected Against Apoptosis by &#945;B-Crystallin.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (11), 3575-3582 (2002).</li><li>Chiu, K., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreous+injection+for+establishing+ocular+diseases+model.">Intravitreous injection for establishing ocular diseases model.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), 313 (2007).</li><li>Jove Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+Safety+of+Lampalizumab+for+Geographic+Atrophy+Due+to+Age-Related+Macular+Degeneration:+Chroma+and+Spectri+Phase+3+Randomized+Clinical+Trials.">Efficacy and Safety of Lampalizumab for Geographic Atrophy Due to Age-Related Macular Degeneration: Chroma and Spectri Phase 3 Randomized Clinical Trials.</a> JAMA Ophthalmology. 136 (6), 666-677 (2018).</li><li>Kassa, E., Ciulla, T. A., Hussain, R. M., Dugel, P. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+inhibition+as+a+therapeutic+strategy+in+retinal+disorders.">Complement inhibition as a therapeutic strategy in retinal disorders.</a> Expert Opinion in Biological Therapy. 19 (4), 335-342 (2019).</li><li>Cashman, S. M., Ramo, K., Kumar-Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non+Membrane-Targeted+Human+Soluble+CD59+Attenuates+Choroidal+Neovascularization+in+a+Model+of+Age+Related+Macular+Degeneration.">A Non Membrane-Targeted Human Soluble CD59 Attenuates Choroidal Neovascularization in a Model of Age Related Macular Degeneration.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19078 (2011).</li><li>Vincent, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+combination+PDGF+/+VEGF-antagonist+ECT+devices.">Generation of combination PDGF / VEGF-antagonist ECT devices.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54, 3290 (2013).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+treatment+of+geographic+atrophy+in+age-related+macular+degeneration.">Ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for treatment of geographic atrophy in age-related macular degeneration.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (15), 6241-6245 (2011).</li><li>Chew, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+for+macular+telangiectasia+type+2:+results+from+a+phase+1+safety+trial.">Ciliary neurotrophic factor for macular telangiectasia type 2: results from a phase 1 safety trial.</a> American Journal of Ophthalmology. 159 (4), 659-666 (2015).</li><li>Birch, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+trial+of+ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+retinitis+pigmentosa.">Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).</li></ol>

Denne celleinnkapslingsteknikken er relativt rask og enkel å utføre; Visse punkter må imidlertid huskepå for å oppnå nøyaktige nedstrømsresultater. Celler bør opprettholdes i kultur i en Petri-skål før innkapsling og holdes på riktig samløp. Innkapsling bør utføres i en riktig ventilasjonshette med regulert luftstrøm, om mulig. For sterk av en luftstrøm kan påvirke kapseldannelse, spesielt i langsiktige eksperimenter. Sterile redskaper og løsninger er avgjørende for langsiktig vedlikehold av celler i ...

Cellebaserte terapier representerer revolusjonerende biologiske teknikker som har blitt brukt mye i medisin. Nylig har de blitt brukt med hell i behandlingen av nevrodegenerative sykdommer, øyesykdommer og kreft. Celleterapi dekker et bredt spekter av felt fra celleerstatning til legemiddellevering, og denne protokollen fokuserer på sistnevnte. Biologisk nedbrytbare alginatmikrokapsler (MC) har vist effektivitet som leveringssystem, og de blir mye brukt i biomedisinsk felt. Alginat har blitt brukt i mikroenkapsling på grunn av sin enkle gelling prosess, biologisk nedbrytbarhet, utmerket biokompatibilitet, og stabilitet under in vivo forhold1,2,3,4.
Elektrospraymetoden, som mikroenkapslingsteknikk, har blitt brukt til å innkapsle peptider og proteiner ved hjelp av alginat (base polymer) og poly-l-ornithin (sekundær belegg polymer). Begge polymerer er naturlig funnet og brukes til deres biokompatibilitet5,6,7. Men den største utfordringen i cellebasert terapi er undertrykkelse av vertsimmunsystemet for å unngå bivirkninger forårsaket av immunsuppressive legemidler. Permeabiliteten av alginatmikrokapsler regnes som en egnet egenskap for celleinnkapsling, noe som gjør det mulig å spre næringsstoffer, avfall og terapeutiske faktorer inn og ut av celler mens du maskerer dem fra vertenimmunrespons8,9,10.
I øyet har innkapslede celler blitt brukt i kliniske studier for konstant levering av biologer (dvs. vekstfaktorer11,,12 og vekstfaktorantagonister13) for behandling av retinitt pigmentosa eller aldersrelatert makuladegenerasjon. Andre mål som komplementhemmere14 blir også undersøkt i prekliniske omgivelser.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 1&#34; Blunt needle</td>
			<td>SAI Infusion technology</td>
			<td>B30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginic acid sodium salt, from brown algae</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A0682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulfate Ophthalmolic solution (1%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-215-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 mL Syringe 26 G x 3/8 (0.45 mm x 10 mm)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>DG518105 500029609 REF 309625</td>
			<td>to generate the guide hole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride, Anhydrous, granular</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Tears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>NDC 0078-0429-47</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniotaire: Hypromellose (2.5%) Ophthalmolic Demulcent Solution (Sterile)</td>
			<td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td>NDC 59390-182-13</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Needle/syringe Tip: 27 Gauge, Small Hub RN NDL, custum length (12mm), point style 3, 6/PK</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe: 2.5 &#181;L, Model 62 RN SYR, NDL Sold Separately</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7632-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer, 1M</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP299100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High voltage generator</td>
			<td>ESD EMC Technology</td>
			<td>ES813-D20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>L3224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ornithine hydrochloride, 99%</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone Ophthalmolic Ointment</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>NDC 61314-631-36</td>
			<td>antibiotic to prevent infection after intravitreal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenolephrine Hydrochloride Ophthalmolic Solution (2.5%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-201-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringe filters, 0.2 um</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28143-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>GRASEBY</td>
			<td>MS16A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye

Mange nåværende terapeutiske midler under utvikling for sykdommer i den bakre stangen i øyet er biologer. Disse stoffene må administreres ofte, vanligvis via intravitreale injeksjoner. Innkapslede celler som uttrykker den biologiske av valget blir et verktøy for lokal proteinproduksjon og frigjøring (f.eks. via langsiktig legemiddellevering). I tillegg benytter innkapslingssystemer permeable materialer som tillater diffusjon av næringsstoffer, avfall og terapeutiske faktorer inn og ut av celler. Dette skjer mens du maskerer cellene fra vertens immunrespons, og unngår behovet for undertrykkelse av vertsimmunsystemet. Denne protokollen beskriver bruken av alginat som polymer i mikroenkapsling kombinert med elektrospraymetoden som mikroenkapslingsteknikk. ARPE-19 celler, en spontant oppstår menneskelig RPE cellelinje, har blitt brukt i langsiktige celleterapi eksperimenter på grunn av sin levetid funksjonalitet, og det brukes her for innkapsling og levering av kapslene til musen øyne. Manuskriptet oppsummerer trinnene for cellemikroenkapsling, kvalitetskontroll og okulær levering.

ARPE-19 celler er en spontant udødeliggjort menneskelig RPE cellelinje som har vist seg å være egnet til innkapsling og langsiktig overlevelse ved implantasjon av kapsler i øyet. Verktøyene for alginatinnkapsling er vist i figur 1. I denne studien ble det vist at ved innkapsling i alginat ble cellene i alginatkapsler bekreftet av lysfeltavbildning (figur 2A). Levende døde analyser ble utført på cellene inne i kapslene, og viste 90 % levedyktighet etter i...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Presentert her er en protokoll for bruk av alginat som polymer i mikroenkapsling av udødelige celler for langsiktig levering av biologer til gnagerøyne.

Innkapslet celleteknologi for levering av biologer til museøyet

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

Denne teknikken er en pålitelig måte å levere innhold som narkotika, proteiner, eller celler til bestemte steder i vev eller dyr. Du kan spore leveringen og justere utgivelsen av innholdet slik at det passer til eksperimentet du ønsker. Den kan brukes til å behandle mange sykdommer fra sårheling til okulære og hjertesykdommer.Den største fordelen med denne metoden er evnen til å levere terapeutiske celler ved hjelp av alginat mikrokapsler til målstedene uten å forårsake immunreaksjoner og opprettholde en vedvarende levering av friske utskillede terapeutiske midler i lengre tid. Begynn med å kultere retinale epitelceller i henhold til manuskriptretninger. Pass cellene når de når 70 til 80% samløpet ved hjelp av standard vevskulturprosedyrer.For å kapsle cellene, bland natriumalginat med avionisert vann for en endelig konsentrasjon på 2% vekt for å volum og rense blandingen via filtrering med et 0,2 mikrometer sterilt sprøytefilter. Trypsinize, sentrifuge, og vaske cellene med 10 millimolar HEPES bufret saltløsning. Bruk et hemocytometer for å telle cellene og justere den endelige cellekonsentrasjonen til en million per en milliliter alginatløsning.Legg 300 mikroliter aliquots av alginat og celler blandingen i en tre milliliter sprøyte og fest den til en sprøytepumpe. Forbered et gellingbad i henhold til manuskriptretninger og legg det i et sterilt 50 milliliter beger under sprøytespissen på en syv millimeter nål for å bade sprøyteavstand. Juster spenningen til åtte kilovolt og strømningshastigheten til 30 millimeter per time for å produsere mikrokapsler som er omtrent 150 mikrometer i størrelse.Koble den svarte bakken klipsen til kobbertråden som er halvveis nedsenket i gellingbadet og koble klipsen av den røde anodeledningen til nålen. Det tar ca 30 minutter å forberede innkapslede celler ut av hver en milliliter batch av alginat og celleblanding. Når de dannes, vask mikrokapslene med vaskeløsning to ganger og inkuber dem med 10% FBS supplert DMEM-medier i en fuktet inkubator ved 37 grader Celsius og 5% CO2.Etter en 24-timers inkubasjon, lag en 500 mikroliters prøve av mikrokapsler for farging ved å vaske dem to ganger i vaskeoppløsning. Bruk et LIVE/DEAD-analysesett for å farge dem for levedyktighet. For å sikre at mikrokapslene er riktig størrelse, fortynne dem i serumfritt medium.Aspirer dem forsiktig med en 2,5 mikroliter Hamilton sprøyte. Løs sakte ut ett mikroliters fall på et mikroskopsklie og bestem integriteten til mikrokapslene ved hjelp av et oppreist Brightfield-mikroskop. I en passende bedøvet mus, påfør okulært smøremiddel for å opprettholde øyefuktighet og bruk en 26 gauge 3/8 tommers skråsprøytepinne for å etablere en innledende øyepunktering like under limbus.Pass på å nærme øyet fra neseretning i en 45 graders vinkel som holder skråspissen oppover for å unngå linseperforering. Deretter må du sørge for at hele nålespissen settes inn i øyet for generering av førhull, men vær forsiktig så du ikke beveger deg for langt og punkterer den timelige netthinnen. Når dette er fullført, trekk langsomt nålen tilbake.I mikromanipulatoren plasserer du en 27 gauge stump spiss 2,5 mikroliter Hamilton sprøyte som er fylt med kapseloppløsning og linje nålen opp med det første føringshullet. Hold dyrets hode i stabil stilling og manøvrer nålen med vilje mot øyet. For å sikre riktig kanyleposisjon i glasslegemet, sett sprøyten inn til nålespissen kan visualiseres bak linsen.Injiser deretter kapseloppløsningen langsomt i løpet av 25 til 30 sekunder. Og når den er ferdig, trekk gradvis tilbake den stumpe spisssprøyten for å minimere øyeskade. Juster eventuelt kapselstørrelsen ved å justere spenningen og strømningshastigheten i henhold til manuskriptets retninger.Innkapslingen av cellene i alginat ble bekreftet med Brightfield imaging og en LIVE / DEAD analyse viste at 90% av cellene var levedyktige post-innkapsling. Langvarig levedyktighet av cellene ble sikret ved å oppløse kapslene i natriumsitrat og replating. Intravitreal injeksjon ble utført under visuell inspeksjon som tillot visualisering av kapsler i glasslegemet.Når du prøver denne prosedyren, må du ikke bruke PBS til noen vasketrinn fordi PBS oppløses dannet alginat mikrokapsler. Etter utviklingen brukes laboratoriet vårt som et leveringssystem for å behandle former for hjertesvikt og hypertensjon. Denne teknikken regnes som et lovende verktøy for fremtidig behandling av forskjellige kardiovaskulære og nevrologiske sykdommer.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

Konstruere en Kollagen Hydrogel for levering av Stem Cell-lastet Chitosan Mikrokuler

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Cell klemme som en robust, Microfluidic Intracellulær Levering Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Mikro Vortex-assistert Electroporator for sekvensiell Molecular Levering

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Culturing Mouse Cardiac Valves in the Miniature Tissue Culture System

Dyrking Mouse Cardiac Ventiler i miniatyr Tissue Culture System

Heart valve disease is a major burden in the Western world and no effective treatment is available. This is mainly due to a lack of knowledge of the ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

Målrettet plasmamembran Levering av en hydrofob Cargo innkapslet i en Liquid Crystal partikler Carrier

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Intraductal Levering til kanin melkekjertlene

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

Fabrikasjon av ekstracellulære matrise-avledet Skum og Mikrocarriers som Tissue-spesifikke cellekultur og Delivery plattformer

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

Forbereder proteinproduserende syntetiske celler ved hjelp av cellefrie bakterielle ekstrakter, liposomer og emulsjonsoverføring

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies

Segmentering av vekst av endotelceller i 6-brønnsplater på en orbital shaker for mekanobiologiske studier

Shear stress imposed on the arterial wall by the flow of blood affects endothelial cell morphology and function. Low magnitude, oscillatory and ...

Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

Formulere og karakterisere Lipid nanopartikler for genlevering ved hjelp av en mikrofluidisk blandeplattform

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...