Name: encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Studien stöddes delvis av bidrag som tilldelats B. R. av National Institutes of Health (R01EY019320), Department of Veterans Affairs (RX000444 och BX003050), och South Carolina SmartState Endowment.

Alla experiment utfördes i enlighet med ARVO uttalande för användning av djur i oftalmisk och Vision Research och godkändes av Medical University of South Carolina Animal Care and Use Committee enligt protokoll-ID 00399.
1. Cellkultur
<ol><li>Generera mänskliga retinal pigment epitelceller (ARPE-19) cellinje stabilt uttrycker genen val enligt publicerade protokoll14,15.</li>
	<li>Underhåll celler i Dulbecco's Modified Eagle Med...

<ol>
	<li>Allen, T. M., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+entering+the+mainstream.">Drug delivery systems: entering the mainstream.</a> Science. 303 (5665), 1818-1822 (2004).</li><li>Tonnesen, H. H., Karlsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+in+drug+delivery+systems.">Alginate in drug delivery systems.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 28 (6), 621-630 (2002).</li><li>Vilos, C., Velasquez, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+strategies+based+on+polymeric+microparticles.">Therapeutic strategies based on polymeric microparticles.</a> Journal of Biomedical Biotechnology. 672760, (2012).</li><li>Gasperini, L., Mano, J. F., Reis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+polymers+for+the+microencapsulation+of+cells.">Natural polymers for the microencapsulation of cells.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (100), 20140817 (2014).</li><li>Gasper, D. P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Novel strategy to produce a drug delivery system for skin regeneration. Uma nova estrat&#233;gia para produzir um dispositivo para entrega de f&#225;rmacos que ser&#225; usado na regenera&#231;&#227;o da pele. , (2012).</li><li>Huang, S., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+derived+materials-based+cell+and+drug+delivery+systems+in+skin+regeneration.">Naturally derived materials-based cell and drug delivery systems in skin regeneration.</a> Journal of Controlled Release. 142 (2), 149-159 (2010).</li><li>Nograles, N., Abdullah, S., Shamsudin, M. N., Billa, N., Rosli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+characterization+of+pDNA-loaded+alginate+microspheres+for+oral+administration+in+mice.">Formation and characterization of pDNA-loaded alginate microspheres for oral administration in mice.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 113 (2), 133-140 (2012).</li><li>Moore, K., Amos, J., Davis, J., Gourdie, R., Potts, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polymeric+microcapsules+containing+a+low+molecular+weight+peptide+for+controlled+release.">Characterization of polymeric microcapsules containing a low molecular weight peptide for controlled release.</a> Microscopy and Microanalysis. 19 (1), 213-226 (2013).</li><li>Xu, Y., Skotak, M., Hanna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospray+encapsulation+of+water-soluble+protein+with+polylactide.+I.+Effects+of+formulations+and+process+on+morphology+and+particle+size.">Electrospray encapsulation of water-soluble protein with polylactide. I. Effects of formulations and process on morphology and particle size.</a> Journal of Microencapsulation. 23 (1), 69-78 (2006).</li><li>Gryshkov, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+engineering+of+high+voltage+alginate+encapsulation+of+mesenchymal+stem+cells.">Process engineering of high voltage alginate encapsulation of mesenchymal stem cells.</a> Materials Science and Engineering: C. 36, 77-83 (2014).</li><li>Thanos, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+secretion+of+ciliary+neurotrophic+factor+to+the+vitreous,+using+the+encapsulated+cell+therapy-based+NT-501+intraocular+device.">Sustained secretion of ciliary neurotrophic factor to the vitreous, using the encapsulated cell therapy-based NT-501 intraocular device.</a> Tissue Engineering. (11-12), 1617-1622 (2004).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-year+intraocular+delivery+of+ciliary+neurotrophic+factor+by+encapsulated+cell+technology+implants+in+patients+with+chronic+retinal+degenerative+diseases.">Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term,+sustained+intraocular+delivery+of+a+VEGF+antagonist+using+encapsulated+cell+technology+implant+for+the+treatment+of+choroidal+neovascular+diseases.">Long term, sustained intraocular delivery of a VEGF antagonist using encapsulated cell technology implant for the treatment of choroidal neovascular diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, 455 (2012).</li><li>Annamalai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulated+Cell+Technology-Based+Delivery+of+a+Complement+Inhibitor+Reduces+Choroidal+Neovascularization+in+a+Mouse+Model.">Encapsulated Cell Technology-Based Delivery of a Complement Inhibitor Reduces Choroidal Neovascularization in a Mouse Model.</a> Translational Visual Science Technology. 7 (2), 3 (2018).</li><li>Alge, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Pigment+Epithelium+Is+Protected+Against+Apoptosis+by+&#945;B-Crystallin.">Retinal Pigment Epithelium Is Protected Against Apoptosis by &#945;B-Crystallin.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (11), 3575-3582 (2002).</li><li>Chiu, K., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreous+injection+for+establishing+ocular+diseases+model.">Intravitreous injection for establishing ocular diseases model.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), 313 (2007).</li><li>Jove Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+Safety+of+Lampalizumab+for+Geographic+Atrophy+Due+to+Age-Related+Macular+Degeneration:+Chroma+and+Spectri+Phase+3+Randomized+Clinical+Trials.">Efficacy and Safety of Lampalizumab for Geographic Atrophy Due to Age-Related Macular Degeneration: Chroma and Spectri Phase 3 Randomized Clinical Trials.</a> JAMA Ophthalmology. 136 (6), 666-677 (2018).</li><li>Kassa, E., Ciulla, T. A., Hussain, R. M., Dugel, P. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+inhibition+as+a+therapeutic+strategy+in+retinal+disorders.">Complement inhibition as a therapeutic strategy in retinal disorders.</a> Expert Opinion in Biological Therapy. 19 (4), 335-342 (2019).</li><li>Cashman, S. M., Ramo, K., Kumar-Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non+Membrane-Targeted+Human+Soluble+CD59+Attenuates+Choroidal+Neovascularization+in+a+Model+of+Age+Related+Macular+Degeneration.">A Non Membrane-Targeted Human Soluble CD59 Attenuates Choroidal Neovascularization in a Model of Age Related Macular Degeneration.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19078 (2011).</li><li>Vincent, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+combination+PDGF+/+VEGF-antagonist+ECT+devices.">Generation of combination PDGF / VEGF-antagonist ECT devices.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54, 3290 (2013).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+treatment+of+geographic+atrophy+in+age-related+macular+degeneration.">Ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for treatment of geographic atrophy in age-related macular degeneration.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (15), 6241-6245 (2011).</li><li>Chew, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+for+macular+telangiectasia+type+2:+results+from+a+phase+1+safety+trial.">Ciliary neurotrophic factor for macular telangiectasia type 2: results from a phase 1 safety trial.</a> American Journal of Ophthalmology. 159 (4), 659-666 (2015).</li><li>Birch, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+trial+of+ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+retinitis+pigmentosa.">Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).</li></ol>

Denna cell inkapsling teknik är relativt snabb och lätt att utföra; Vissa punkter måste dock beaktas för att uppnå korrekta resultat i senare led. Celler bör upprätthållas i kultur i en petriskål före inkapsling och hållas på rätt konfluensa. Inkapsling bör utföras i en ordentlig ventilationsfläkt med reglerat luftflöde, om möjligt. För stark av en luftström kan påverka kapselbildning, särskilt i långsiktiga experiment. Sterila redskap och lösningar är avgörande för långsiktigt underhåll av ...

Cellbaserade terapier representerar revolutionerande biologiska tekniker som har tillämpats i stor utsträckning inom medicinen. Nyligen har de framgångsrikt tillämpats vid behandling av neurodegenerativa sjukdomar, ögonsjukdomar och cancer. Cellterapier täcker ett brett spektrum av områden från cellersättning till läkemedelsleverans, och detta protokoll fokuserar på det senare. Biologiskt nedbrytbara alginatmikrokapslar (MC) har visat effektivitet som ett leveranssystem, och de blir allmänt används inom det biomedicinska området. Alginat har använts i mikroinkapsling på grund av sin enkla geleringsprocess, biologisk nedbrytbarhet, utmärkt biokompatibilitet och stabilitet under in vivo-förhållanden1,,2,,3,4.
Elektrospraymetoden, som en mikroinkapslingsteknik, har framgångsrikt använts för att kapsla in peptider och proteiner med alginat (baspolymer) och poly-l-ornitin (sekundär beläggningspolymer). Båda polymererna är naturligt förekommande och används för deras biokompatibilitet5,,6,7. Emellertid, den största utmaningen i cellbaserade terapier är undertryckande av värd immunsystemet för att undvika biverkningar orsakade av immunsuppressiva läkemedel. Permeabiliteten av alginatmikrokapslar anses vara en lämplig egenskap för cellinkapsling, vilket möjliggör spridning av näringsämnen, avfall och terapeutiska faktorer till och från celler samtidigt som de maskeras från värdens immunsvar8,9,10.
I ögat har inkapslade celler använts i kliniska prövningar för konstant leverans av biologiska läkemedel (dvs. tillväxtfaktorer11,,12 och tillväxtfaktorantagonister13) för behandling av retinitis pigmentosa eller åldersrelaterad makuladegeneration. Andra mål såsom komplementhämmare14 undersöks också för närvarande i prekliniska miljöer.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 1&#34; Blunt needle</td>
			<td>SAI Infusion technology</td>
			<td>B30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginic acid sodium salt, from brown algae</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A0682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulfate Ophthalmolic solution (1%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-215-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 mL Syringe 26 G x 3/8 (0.45 mm x 10 mm)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>DG518105 500029609 REF 309625</td>
			<td>to generate the guide hole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride, Anhydrous, granular</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Tears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>NDC 0078-0429-47</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniotaire: Hypromellose (2.5%) Ophthalmolic Demulcent Solution (Sterile)</td>
			<td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td>NDC 59390-182-13</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Needle/syringe Tip: 27 Gauge, Small Hub RN NDL, custum length (12mm), point style 3, 6/PK</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe: 2.5 &#181;L, Model 62 RN SYR, NDL Sold Separately</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7632-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer, 1M</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP299100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High voltage generator</td>
			<td>ESD EMC Technology</td>
			<td>ES813-D20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>L3224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ornithine hydrochloride, 99%</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone Ophthalmolic Ointment</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>NDC 61314-631-36</td>
			<td>antibiotic to prevent infection after intravitreal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenolephrine Hydrochloride Ophthalmolic Solution (2.5%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-201-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringe filters, 0.2 um</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28143-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>GRASEBY</td>
			<td>MS16A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye

Många nuvarande therapeutics under utveckling för sjukdomar i den bakre polen i ögat är biologiska. Dessa läkemedel måste administreras ofta, vanligtvis via intravitreal injektioner. Inkapslade celler som uttrycker det biologiska valet håller på att bli ett verktyg för lokal proteinproduktion och proteinfrisättning (t.ex. via långvarig läkemedelstillförsel). Dessutom, inkapsling system använder genomsläppliga material som tillåter spridning av näringsämnen, avfall, och terapeutiska faktorer i och ut ur celler. Detta inträffar vid maskering av cellerna från värdens immunsvar, undvika behovet av undertryckande av värdimmunsystemet. Detta protokoll beskriver användningen av alginat som en polymer i mikrokapsling i kombination med elektrospraymetoden som en mikroencapsulationsteknik. ARPE-19 celler, en spontant förekommande mänskliga RPE cellinje, har använts i långsiktiga experiment cellterapi på grund av dess livstid funktionalitet, och det används här för inkapsling och leverans av kapslarna till mus ögon. Manuskriptet sammanfattar stegen för cellmikroinkapsling, kvalitetskontroll och okulär leverans.

ARPE-19 celler är en spontant förevigade mänskliga RPE cellinje som har visat sig vara mottagliga för inkapsling och långsiktig överlevnad vid implantation av kapslar i ögat. Verktygen för alginat inkapsling visas i figur 1. I denna studie visades att cellerna i alginatkapslar bekräftades vid bildbehandling med ljust fält (figur 2A). Levande döda analyser utfördes på cellerna inuti kapslarna, vilket visade 90% lönsamhet post-inkapsling (<strong cla...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Presenteras här är ett protokoll för användning av alginat som en polymer i microencapsulation av förevigade celler för långsiktig leverans av biologiska läkemedel till gnagare ögon.

Inkapslade cellteknik för leverans av biologiska läkemedel till musöga

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

Denna teknik är ett pålitligt sätt att leverera något innehåll såsom droger, proteiner, eller celler till specifika platser i vävnader eller djur. Du kan spåra leveransen och ställa in utgåvan av innehållet så att det passar det experiment du önskar. Det kan användas för att behandla ett flertal sjukdomar från sårläkning till okulär och hjärt sjukdomar.Den största fördelen med denna metod är förmågan att leverera terapeutiska celler med hjälp av alginat mikrokapslar till målställena utan att orsaka några immunreaktioner och upprätthålla en varaktig leverans av färska utsöndring therapeutics under en längre tid. Börja med att kulting retinal epitelceller enligt manuskriptet riktningar. Passage cellerna när de når 70 till 80%konfluency med hjälp av standard vävnadskultur förfaranden.För att kapsla in cellerna, blanda natriumalginat med avjoniserat vatten för en slutlig koncentration på 2%vikt till volym och rena blandningen via filtrering med ett 0,2 mikrometer sterilt sprutfilter. Trypsinize, centrifug, och tvätta cellerna med 10 millimolar HEPES buffrad saltlösning. Använd en hemocytometer för att räkna cellerna och justera den slutliga cellkoncentrationen till en miljon per en milliliter alginatlösning.Ladda 300 mikroliter alikvoter av alginat och celler blandningen i en tre milliliter spruta och fäst den på en spruta pump. Förbered ett geleringsbad enligt manuskriptriktningar och placera det i en steril 50 milliliter bägare nedanför sprutspetsen på en sju millimeters nål till badsprutningsavstånd. Justera spänningen till åtta kilovolt och flödet till 30 millimeter per timme för att producera mikrokapslar som är cirka 150 mikrometer stora.Anslut den svarta jordklämman till koppartråden som är halvvägs nedsänkt i geleringsbadet och anslut klämman på den röda anodtråden till nålen. Det tar cirka 30 minuter att förbereda inkapslade celler ur var och en milliliter sats av alginat och cellblandning. När de bildas, tvätta mikrokapslarna med tvättlösning två gånger och inkubera dem med 10%FBS kompletterade DMEM-media i en befuktad inkubator vid 37 grader Celsius och 5%CO2.Efter en 24-timmars inkubation, förbereda ett 500 mikroliterprov av mikrokapslar för färgning genom att tvätta dem två gånger i tvättlösning. Använd en LIVE / DEAD-analys kit för att färga dem för lönsamhet. För att säkerställa att mikrokapslarna är lämpligt stora, späd dem i serumfria medier.Aspirera dem försiktigt med en 2,5 mikroliter Hamilton spruta. Mata långsamt ut en mikroliter droppar på ett mikroskop glida och bestämma integriteten hos mikrokapslar med hjälp av en upprätt Brightfield mikroskop. I en lämpligt sövd mus, tillämpa okulär smörjmedel för att upprätthålla ögonfukt och använda en 26 gauge 3/8 tums avfasad spruta nål för att fastställa en inledande ögat punktering strax under limbus.Se till att närma ögat från en nasal riktning i 45 graders vinkel hålla avfasad spets uppåt för att undvika lins perforering. Se därefter till att hela nålspetsen sätts in i ögat för att ge dig fram i styrhålet, men var noga med att inte resa för långt och punktera den temporala näthinnan. När detta är klart, dra långsamt tillbaka nålen.Inom mikromanipulator, placera en 27 gauge trubbig spets 2,5 microliter Hamilton spruta som har fyllts med kapsellösning och linje nålen upp med den ursprungliga guide hål. Håll djurets huvud i stabilt läge och manövrera avsiktligt nålen mot ögat. För att säkerställa ett korrekt nålläge inom glaskroppen, för in sprutan tills nålspetsen kan visualiseras bakom linsen.Injicera sedan kapsellösningen långsamt under loppet av 25 till 30 sekunder. Och när den är klar, gradvis dra tillbaka den trubbiga spets sprutan för att minimera skador på ögat. Om det behövs, justera kapselstorleken genom att justera spänningen och flödet enligt manuskriptriktningar.Inkapsling av cellerna i alginat bekräftades med Brightfield bildframställning och en LIVE/DEAD analys visat att 90%av cellerna var livskraftiga post-inkapsling. Cellernas långsiktiga lönsamhet säkerställdes genom upplösning av kapslarna i natriumcitrat och replating. Intravitreal injektion utfördes under visuell inspektion som tillåtet för visualisering av kapslar i glaskroppen.Vid försök med detta förfarande, använd inte PBS för några tvättsteg eftersom PBS löser upp bildade alginatmikrobkapslar. Efter dess utveckling används vårt labb som ett leveranssystem för att behandla former av hjärtsvikt och högt blodtryck. Denna teknik anses vara ett lovande verktyg för framtida behandling av olika kardiovaskulära och neurologiska sjukdomar.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

Konstruera en Kollagen Hydrogel för leverans av Stem Cell-laddad kitosanmikrosfärer

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Cell Klämma som en robust, mikroflödes Intracellular Delivery Platform

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Micro Vortex-assisted Electroporator för sekventiell Molekylär Leverans

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Culturing Mouse Cardiac Valves in the Miniature Tissue Culture System

Odling Mouse hjärtklaffar i miniatyr Tissue Culture System

Heart valve disease is a major burden in the Western world and no effective treatment is available. This is mainly due to a lack of knowledge of the ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

Riktade Plasma Membrane Leverans av en hydrofob Cargo inkapslad i en Liquid Crystal nanopartiklar Carrier

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Intraduktal Leverans till kaninen bröstkörteln

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

Tillverkning av extracellulär matrix-härledda Skum och Mikrobärare som Vävnadsspecifik Cellodling och Delivery Platforms

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

Förbereda proteinproducerande syntetiska celler med cellfria bakterieextrakt, liposomer och emulsion överföring

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies

Segmentering av tillväxten av endotelceller i 6-brunnsplattor på en orbital shaker för mekanobiologiska studier

Shear stress imposed on the arterial wall by the flow of blood affects endothelial cell morphology and function. Low magnitude, oscillatory and ...

Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

Formulera och karakterisera Lipid Nanopartiklar för genleverans med hjälp av en mikrofluidisk blandningsplattform

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...