Name: encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye
Uploaded: 2020-03-30T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Çalışma kısmen Ulusal Sağlık Enstitüleri (R01EY019320), Gazi İşleri Bakanlığı (RX000444 ve BX003050) ve Güney Carolina SmartState Vakfı tarafından B.R.'ye verilen hibelerle desteklenmiştir.

Tüm deneyler, Göz Ve Görme Araştırmalarında Hayvanların Kullanımına İlişkin ARVO Bildirimi uyarınca gerçekleştirildi ve Güney Carolina Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi Tarafından 00399 protokolü altında onaylandı.
1. Hücre Kültürü
<ol><li>İnsan retinapigment epitel hücreleri oluşturmak (ARPE-19) hücre hattı stably yayınlanan protokollere göre tercih edilen geni ifade14,15.</li>
	<li>Dulbecco'nun Modif...

<ol>
	<li>Allen, T. M., Cullis, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drug+delivery+systems:+entering+the+mainstream.">Drug delivery systems: entering the mainstream.</a> Science. 303 (5665), 1818-1822 (2004).</li><li>Tonnesen, H. H., Karlsen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alginate+in+drug+delivery+systems.">Alginate in drug delivery systems.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 28 (6), 621-630 (2002).</li><li>Vilos, C., Velasquez, L. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+strategies+based+on+polymeric+microparticles.">Therapeutic strategies based on polymeric microparticles.</a> Journal of Biomedical Biotechnology. 672760, (2012).</li><li>Gasperini, L., Mano, J. F., Reis, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+polymers+for+the+microencapsulation+of+cells.">Natural polymers for the microencapsulation of cells.</a> Journal of the Royal Society Interface. 11 (100), 20140817 (2014).</li><li>Gasper, D. P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Novel strategy to produce a drug delivery system for skin regeneration. Uma nova estrat&#233;gia para produzir um dispositivo para entrega de f&#225;rmacos que ser&#225; usado na regenera&#231;&#227;o da pele. , (2012).</li><li>Huang, S., Fu, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Naturally+derived+materials-based+cell+and+drug+delivery+systems+in+skin+regeneration.">Naturally derived materials-based cell and drug delivery systems in skin regeneration.</a> Journal of Controlled Release. 142 (2), 149-159 (2010).</li><li>Nograles, N., Abdullah, S., Shamsudin, M. N., Billa, N., Rosli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+and+characterization+of+pDNA-loaded+alginate+microspheres+for+oral+administration+in+mice.">Formation and characterization of pDNA-loaded alginate microspheres for oral administration in mice.</a> Journal of Bioscience and Bioengineering. 113 (2), 133-140 (2012).</li><li>Moore, K., Amos, J., Davis, J., Gourdie, R., Potts, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+polymeric+microcapsules+containing+a+low+molecular+weight+peptide+for+controlled+release.">Characterization of polymeric microcapsules containing a low molecular weight peptide for controlled release.</a> Microscopy and Microanalysis. 19 (1), 213-226 (2013).</li><li>Xu, Y., Skotak, M., Hanna, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospray+encapsulation+of+water-soluble+protein+with+polylactide.+I.+Effects+of+formulations+and+process+on+morphology+and+particle+size.">Electrospray encapsulation of water-soluble protein with polylactide. I. Effects of formulations and process on morphology and particle size.</a> Journal of Microencapsulation. 23 (1), 69-78 (2006).</li><li>Gryshkov, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+engineering+of+high+voltage+alginate+encapsulation+of+mesenchymal+stem+cells.">Process engineering of high voltage alginate encapsulation of mesenchymal stem cells.</a> Materials Science and Engineering: C. 36, 77-83 (2014).</li><li>Thanos, C. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sustained+secretion+of+ciliary+neurotrophic+factor+to+the+vitreous,+using+the+encapsulated+cell+therapy-based+NT-501+intraocular+device.">Sustained secretion of ciliary neurotrophic factor to the vitreous, using the encapsulated cell therapy-based NT-501 intraocular device.</a> Tissue Engineering. (11-12), 1617-1622 (2004).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-year+intraocular+delivery+of+ciliary+neurotrophic+factor+by+encapsulated+cell+technology+implants+in+patients+with+chronic+retinal+degenerative+diseases.">Two-year intraocular delivery of ciliary neurotrophic factor by encapsulated cell technology implants in patients with chronic retinal degenerative diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53 (12), 7484-7491 (2012).</li><li>Kauper, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long+term,+sustained+intraocular+delivery+of+a+VEGF+antagonist+using+encapsulated+cell+technology+implant+for+the+treatment+of+choroidal+neovascular+diseases.">Long term, sustained intraocular delivery of a VEGF antagonist using encapsulated cell technology implant for the treatment of choroidal neovascular diseases.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 53, 455 (2012).</li><li>Annamalai, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Encapsulated+Cell+Technology-Based+Delivery+of+a+Complement+Inhibitor+Reduces+Choroidal+Neovascularization+in+a+Mouse+Model.">Encapsulated Cell Technology-Based Delivery of a Complement Inhibitor Reduces Choroidal Neovascularization in a Mouse Model.</a> Translational Visual Science Technology. 7 (2), 3 (2018).</li><li>Alge, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+Pigment+Epithelium+Is+Protected+Against+Apoptosis+by+&#945;B-Crystallin.">Retinal Pigment Epithelium Is Protected Against Apoptosis by &#945;B-Crystallin.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 43 (11), 3575-3582 (2002).</li><li>Chiu, K., Chang, R. C., So, K. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravitreous+injection+for+establishing+ocular+diseases+model.">Intravitreous injection for establishing ocular diseases model.</a> Journal of Visualized Experiments. (8), 313 (2007).</li><li>Jove Science Education Database. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lab+Animal+Research.+Anesthesia+Induction+and+Maintenance.">Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance.</a> Journal of Visualized Experiments. , (2019).</li><li>Holz, F. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+and+Safety+of+Lampalizumab+for+Geographic+Atrophy+Due+to+Age-Related+Macular+Degeneration:+Chroma+and+Spectri+Phase+3+Randomized+Clinical+Trials.">Efficacy and Safety of Lampalizumab for Geographic Atrophy Due to Age-Related Macular Degeneration: Chroma and Spectri Phase 3 Randomized Clinical Trials.</a> JAMA Ophthalmology. 136 (6), 666-677 (2018).</li><li>Kassa, E., Ciulla, T. A., Hussain, R. M., Dugel, P. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Complement+inhibition+as+a+therapeutic+strategy+in+retinal+disorders.">Complement inhibition as a therapeutic strategy in retinal disorders.</a> Expert Opinion in Biological Therapy. 19 (4), 335-342 (2019).</li><li>Cashman, S. M., Ramo, K., Kumar-Singh, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Non+Membrane-Targeted+Human+Soluble+CD59+Attenuates+Choroidal+Neovascularization+in+a+Model+of+Age+Related+Macular+Degeneration.">A Non Membrane-Targeted Human Soluble CD59 Attenuates Choroidal Neovascularization in a Model of Age Related Macular Degeneration.</a> PLoS ONE. 6 (4), e19078 (2011).</li><li>Vincent, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+combination+PDGF+/+VEGF-antagonist+ECT+devices.">Generation of combination PDGF / VEGF-antagonist ECT devices.</a> Investigative Ophthalmology &amp; Visual Science. 54, 3290 (2013).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+treatment+of+geographic+atrophy+in+age-related+macular+degeneration.">Ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for treatment of geographic atrophy in age-related macular degeneration.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (15), 6241-6245 (2011).</li><li>Chew, E. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ciliary+neurotrophic+factor+for+macular+telangiectasia+type+2:+results+from+a+phase+1+safety+trial.">Ciliary neurotrophic factor for macular telangiectasia type 2: results from a phase 1 safety trial.</a> American Journal of Ophthalmology. 159 (4), 659-666 (2015).</li><li>Birch, D. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Randomized+trial+of+ciliary+neurotrophic+factor+delivered+by+encapsulated+cell+intraocular+implants+for+retinitis+pigmentosa.">Randomized trial of ciliary neurotrophic factor delivered by encapsulated cell intraocular implants for retinitis pigmentosa.</a> American Journal of Ophthalmology. 156 (2), 283-292 (2013).</li></ol>

Bu hücre kapsülleme tekniği nispeten hızlı ve gerçekleştirmek kolaydır; ancak, doğru downstream sonuçları elde etmek için bazı noktalar akılda tutulmalıdır. Hücreler kapsülleme den önce bir Petri kabında kültür de muhafaza edilmeli ve uygun bir araya tutulmalıdır. Kapsülleme, mümkünse düzenlenmiş hava akışı ile uygun bir havalandırma kaputunda yapılmalıdır. Çok güçlü bir hava akımı kapsül oluşumunu etkileyebilir, özellikle uzun vadeli deneylerde. Steril gereçler ve çözümle...

Hücre temelli tedaviler tıpta yaygın olarak uygulanan devrimci biyolojik teknikleri temsil eder. Son zamanlarda, onlar başarıyla nörodejeneratif hastalıkların tedavisinde uygulanmıştır, göz hastalıkları, ve kanser. Hücre tedavileri hücre protezinden ilaç dağıtımına kadar geniş bir alanı kapsamaktadır ve bu protokol ikincisine odaklanır. Biyobozunur aljinat mikrokapsüller (MC) bir dağıtım sistemi olarak etkinliğini göstermiştir, ve yaygın biyomedikal alanda kullanılmaktadır. Aljinat basit jelleşme işlemi, biyobozunurluk, mükemmel biyouyumluluk ve in vivo koşullar altında stabilite nedeniyle mikrokapsülasyon kullanılmıştır1,2,3,4.
Elektrosprey yöntemi, mikrokapsülleme tekniği olarak, aljinat (baz polimer) ve poli-l-ornitin (ikincil kaplama polimeri) kullanılarak peptidve proteinleri kapsüllemek için başarıyla kullanılmıştır. Her iki polimerdoğal olarak bulunur ve biyouyumluluk için kullanılır5,6,7. Ancak, hücre tabanlı tedavilerde ana sorun immünsupresif ilaçların neden olduğu yan etkileri önlemek için konak bağışıklık sisteminin bastırılmasıdır. Aljinat mikrokapsüllerin geçirgenliği hücre kapsülülasyonu için uygun bir özellik olarak kabul edilir, hangi besin difüzyon sağlar, atık, ve hücrelerin içine ve dışında terapötik faktörler in host bağışıklık yanıtı onları maskeleme8,9,10.
Gözde, kapsüllü hücreler retinitis pigmentosa veya yaşa bağlı makula dejenerasyonu tedavisi için biyolojik (yani, büyüme faktörleri11,,12 ve büyüme faktörü antagonistleri13)sürekli teslimat için klinik çalışmalarda kullanılmıştır. Kompleman inhibitörleri14 gibi diğer hedefler de şu anda klinik öncesi ortamlarda araştırılmaktadır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>3 mL Syringe</td>
			<td>BD</td>
			<td>309656</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>30 G 1&#34; Blunt needle</td>
			<td>SAI Infusion technology</td>
			<td>B30-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alginic acid sodium salt, from brown algae</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A0682</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Atropine Sulfate Ophthalmolic solution (1%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-215-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD 1 mL Syringe 26 G x 3/8 (0.45 mm x 10 mm)</td>
			<td>Becton, Dickinson and Company</td>
			<td>DG518105 500029609 REF 309625</td>
			<td>to generate the guide hole</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium chloride, Anhydrous, granular</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C1016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GenTeal Tears</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>NDC 0078-0429-47</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goniotaire: Hypromellose (2.5%) Ophthalmolic Demulcent Solution (Sterile)</td>
			<td>Altaire Pharmaceuticals Inc.</td>
			<td>NDC 59390-182-13</td>
			<td>to lubricate the eyes during anesthesia</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Needle/syringe Tip: 27 Gauge, Small Hub RN NDL, custum length (12mm), point style 3, 6/PK</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7803-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton Syringe: 2.5 &#181;L, Model 62 RN SYR, NDL Sold Separately</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>7632-01</td>
			<td>for intravitreal delivery of capsules</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES buffer, 1M</td>
			<td>Fisher Bioreagents</td>
			<td>BP299100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High voltage generator</td>
			<td>ESD EMC Technology</td>
			<td>ES813-D20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity Kit</td>
			<td>Thermofisher Scientific</td>
			<td>L3224</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ornithine hydrochloride, 99%</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>A12111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neomycin and Polymyxin B Sulfates and Dexamethasone Ophthalmolic Ointment</td>
			<td>SANDOZ</td>
			<td>NDC 61314-631-36</td>
			<td>antibiotic to prevent infection after intravitreal injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenolephrine Hydrochloride Ophthalmolic Solution (2.5%)</td>
			<td>Akorn</td>
			<td>NDC 17478-201-15</td>
			<td>for pupil dilation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S-5886</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile syringe filters, 0.2 um</td>
			<td>VWR</td>
			<td>28143-312</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe pump</td>
			<td>GRASEBY</td>
			<td>MS16A</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

encapsulated cell technology for the delivery of biologics to the mouse eye

Gözün arka kutbu hastalıkları için geliştirilmekte olan birçok mevcut tedavi biyolojiktir. Bu ilaçların sık sık uygulanması gerekir, genellikle intravitreal enjeksiyonları yoluyla. Tercih edilen biyolojik ifade kapsüllü hücreler yerel protein üretimi ve salınımı için bir araç haline gelmektedir (örneğin, uzun süreli ilaç teslimatyoluyla). Buna ek olarak, kapsülleme sistemleri besin, atık ve terapötik faktörlerin hücre içine ve dışarı difüzyon sağlayan geçirilebilir malzemeler kullanır. Bu konak bağışıklık yanıtı hücreleri maskeleme sırasında oluşur, konak bağışıklık sisteminin baskılanması için ihtiyaç kaçınarak. Bu protokol, mikrokapsüllemede polimer olarak aljinat kullanımını, elektrosprey yöntemi ile birleştiğinde mikrokapsülleme tekniği olarak tanımlar. ARPE-19 hücreleri, kendiliğinden ortaya çıkan insan RPE hücre hattı, yaşam boyu işlevselliği nedeniyle uzun vadeli hücre tedavisi deneylerde kullanılmıştır, ve kapsüllerin kapsülleme ve fare gözlerine teslimi için burada kullanılmaktadır. El yazması hücre mikrokapsülasyonu, kalite kontrolü ve oküler teslimat için adımları özetler.

ARPE-19 hücreleri kapsüllerin göze yerleştirilmesi üzerine kapsülleme ve uzun süreli sağkalım için uygun olduğu gösterilmiştir bir spontan ölümsüzleştirilmiş insan RPE hücre hattı vardır. Aljinat kapsülleme araçları Şekil 1'degösterilmiştir. Bu çalışmada aljinat kapsüllerinin kapsüllenmesi üzerine aljinit kapsüllü hücrelerin parlak alan görüntüleme ile doğrulanmış olduğu gösterilmiştir(Şekil 2A). Kapsüllerin içinde...

Watch this Scientific Journal Video about Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye at JoVE.com

Encapsulated Cell Technology for the Delivery of Biologics to the Mouse Eye

Burada sunulan kemirgen gözlere biyolojik uzun süreli teslimat için ölümsüzleştirilmiş hücrelerin mikrokapsülasyonu bir polimer olarak aljinat kullanımı için bir protokoldür.

Fare Gözüne Biyolojik Teslim için Kapsüllü Hücre Teknolojisi

Many current therapeutics under development for diseases of the posterior pole of the eye are biologics. These drugs need to be administered frequently, ...

Bu teknik, ilaçlar, proteinler veya hücreler gibi içerikleri dokularda veya hayvanlardaki belirli yerlere sunmanın güvenilir bir yoludur. Teslimatı izleyebilir ve istediğiniz deneye uyacak şekilde içeriğin serbest bırakılmasını ayarlayabilirsiniz. Yara iyileşmesinden oküler ve kalp hastalıklarına kadar birçok hastalığın tedavisinde kullanılabilir.Bu yöntemin en büyük avantajı, herhangi bir bağışıklık reaksiyonuna neden olmadan hedef bölgelere aljinat mikrokapsüller kullanarak terapötik hücreler sunabilmek ve daha uzun bir süre için taze salgılanan terapötik sürekli bir teslimat korumaktır. El yazması yönlere göre retinal epitel hücrelerini bireleyerek başlayın. Standart doku kültürü prosedürlerini kullanarak hücreleri %70-80'e ulaştıklarında geçiş.Hücreleri kapsüllemek için sodyum aljinat %2'lik son konsantrasyoniçin deiyonize su ile karıştırın ve 0,2 mikrometre steril şırınga filtresi ile filtrasyon yoluyla karışımı arındırın. Trypnize, santrifüj, ve 10 milimolar HEPES tamponlu tuzlu çözelti ile hücreleri yıkayın. Hücreleri saymak ve aljinat çözeltisi bir mililitre başına bir milyon son hücre konsantrasyonu ayarlamak için bir hemositometre kullanın.Üç mililitreşyon şırınga içine aljinat ve hücre karışımı 300 mikrolitre aliquots yükleyin ve bir şırınga pompası ekleyin. El yazması talimatlara göre bir jelleme banyosu hazırlayın ve banyo püskürtme mesafesi banyo yedi milimetrelik bir iğne de şırınga ucu altında steril 50 mililitrelik bir kabın içinde yerleştirin. Yaklaşık 150 mikrometre büyüklüğünde mikrokapsül üretmek için voltajı sekiz kilovolta ve akış hızını saatte 30 milimetreye ayarlayın.Siyah zemin tonasını, jellebanyosuna yarı yarıya batırılmış bakır kabloya bağlayın ve kırmızı anodu telinin klibini iğneye bağlayın. Bu aljinat ve hücre karışımı her bir mililitre toplu kapsüllü hücreleri hazırlamak için yaklaşık 30 dakika sürer. Oluşturulduğunda, mikrokapsülleri iki kez yıkama solüsyonu ile yıkayın ve 37 santigrat derece ve %5 CO2'de nemlendirilmiş bir kuvözde %10 FBS destekli DMEM media ile kuluçkaya yatırın.24 saatlik kuluçkadan sonra, 500 mikrolitrelik mikrokapsül örneğini yıkama çözeltisinde iki kez yıkayarak boyama için hazırlayın. Canlılık için onları lekelemek için bir LIVE / DEAD tsay kiti kullanın. Mikrokapsüllerin uygun şekilde boyutlandırıldığından emin olmak için serumsuz ortamda seyreltin.Dikkatle 2.5 mikrolitre Hamilton şırınga ile onları aspire. Yavaşça bir mikrolitre bir mikroskop slayt üzerine düşer ve dik brightfield mikroskop kullanarak mikrokapsülbütünlüğünü belirlemek. Uygun bir anestezili farede, göz nemini korumak için oküler yağlayıcı uygulayın ve limbusun hemen altında bir ilk göz delinmesi oluşturmak için 26 gauge 3/8 inç yontma şırınga iğnesi kullanın.Lens inmesini önlemek için burun ucunu yukarı doğru tutarak 45 derecelik bir açıyla göze yaklaştırın. Daha sonra, tüm iğne ucu kılavuz delik üretimi için göze takılı olduğundan emin olun, ama çok uzak seyahat ve temporal retina delinme meye dikkat edin. Bu tamamlandığında, yavaşça iğneyi geri çek.Mikromanipülatörün içine, kapsül solüsyonuyla doldurulmuş 27 kalibrelik künt ucu 2.5 mikrolitre Hamilton şırıngası yerleştirin ve iğneyi ilk kılavuz deliğiyle hizalayın. Hayvanın başını sabit bir pozisyonda tutun ve iğneyi göze doğru kasıtlı olarak hareket ettirin. Vitreus içinde doğru bir iğne pozisyonu sağlamak için, iğne ucu merceğin arkasında görselleştirilene kadar şırıngayı takın.Daha sonra kapsül çözeltisini 25-30 saniye boyunca yavaşça enjekte edin. Ve tamamlandıktan sonra, yavaş yavaş göz yaralanmasını en aza indirmek için künt ucu şırınga geri çekin. Gerekirse, gerilim ve akış hızını el yazması yönlere göre ayarlayarak kapsül boyutunu ayarlayın.Aljinitteki hücrelerin kapsülasyonu Brightfield görüntüleme ile doğrulandı ve LIVE/DEAD sedası hücrelerin %90'ının kapsülleme sonrası canlı olduğunu gösterdi. Hücrelerin uzun süreli canlılığı sodyum sitrat ve rekaplama kapsülleri çözülerek sağlanmıştır. İntravitreal enjeksiyon vitreus kapsülgörselleştirilmesi için izin görsel muayene altında yapıldı.Bu prosedürü denerken, PBS oluşan aljinit mikrokapsülleri eritterken herhangi bir yıkama adımı için PBS kullanmayın. Gelişiminden sonra, bizim laboratuvar kalp yetmezliği ve hipertansiyon formları tedavi etmek için bir dağıtım sistemi olarak kullanılır. Bu teknik, farklı kardiyovasküler ve nörolojik hastalıkların gelecekteki tedavisi için umut verici bir araç olarak kabul edilir.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Constructing a Collagen Hydrogel for the Delivery of Stem Cell-loaded Chitosan Microspheres

Kök Hücre yüklü Chitosan Mikrokürelerin teslimi için bir Kollajen Hidrojel oluşturma

Multipotent stem cells have been shown to be extremely useful in the field of regenerative medicine1-3. However, in order to use these cells effectively ...

Cell Squeezing as a Robust, Microfluidic Intracellular Delivery Platform

Sağlam, mikroakışkan Hücre içi Delivery Platform olarak hücre Sıkma

Rapid mechanical deformation of cells has emerged as a promising, vector-free method for intracellular delivery of macromolecules and nanomaterials. This ...

Microscale Vortex-assisted Electroporator for Sequential Molecular Delivery

Microscale Vortex destekli Sıralı Moleküler Teslimat için Electroporator

Electroporation has received increasing attention in the past years, because it is a very powerful technique for physically introducing non-permeant ...

Culturing Mouse Cardiac Valves in the Miniature Tissue Culture System

Minyatür Doku Kültürü Sistemde Fare Kalp Vanalar Kültürleme

Heart valve disease is a major burden in the Western world and no effective treatment is available. This is mainly due to a lack of knowledge of the ...

Targeted Plasma Membrane Delivery of a Hydrophobic Cargo Encapsulated in a Liquid Crystal Nanoparticle Carrier

Sıvı Kristal Nanopartikül Carrier bir Hidrofobik Kargo Encapsulated, hedeflenen Plazma Zarı Teslimat

The controlled delivery of drug/imaging agents to cells is critical for the development of therapeutics and for the study of cellular signaling processes. ...

Intraductal Delivery to the Rabbit Mammary Gland

Rabbit Meme Bezi için İntraduktal Teslimat

Localized intraductal treatments for breast cancer offer potential advantages, including efficient delivery to the tumor and reduced systemic toxicity and ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

Doku spesifik Hücre Kültürü ve Delivery Platform olarak Ekstrasellüler Matriks kaynaklı Köpükler ve mikro Fabrikasyon

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Preparing Protein Producing Synthetic Cells using Cell Free Bacterial Extracts, Liposomes and Emulsion Transfer

Hücre Serbest Bakteriyel Özler, Lipozomlar ve Emülsiyon Transferi Kullanarak Protein Üreten Sentetik Hücreler Hazırlama

The bottom-up assembly approach for construction of synthetic cells is an effective tool for isolating and investigating cellular processes in a cell ...

Segmenting Growth of Endothelial Cells in 6-Well Plates on an Orbital Shaker for Mechanobiological Studies

Mechanobiyolojik Çalışmalar için Orbital Çalkalayıcıda Endotel Hücrelerinin 6 Kuyu Plakalarında Parçalanması

Shear stress imposed on the arterial wall by the flow of blood affects endothelial cell morphology and function. Low magnitude, oscillatory and ...

Formulating and Characterizing Lipid Nanoparticles for Gene Delivery using a Microfluidic Mixing Platform

Mikroakışkan Karıştırma Platformu Kullanarak Gen Teslimatı için Lipid Nanopartiküllerinin Formülei ve Karakterizasyonsu

Lipid-based drug carriers have been used for clinically and commercially available delivery systems due to their small size, biocompatibility, and high ...