Name: a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats at JoVE.com

وقد حظي هذا العمل بدعم المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (81603315 ، 81603316) ، وخطه مفتاح R & D لمقاطعه جيانغشي في الصين (20171ACH80001) ، ومشاريع التعاون الصناعي والأكاديمي في كليات وجامعات مقاطعه فوجيان في الصين (2018Y41010011).

وقد وافق المعهد الوطني للصحة علي إجراءات واستخدام المواد الحيوانية لرعاية واستخدام الماشية المختبرية. يتم تعديل هذا البروتوكول علي وجه التحديد لاختبارات انسداد الشريان الدماغي الأوسط/ضخ (MCAO/R) والوظيفة الحسية الحركية.
1-التصميم التجريبي والتجميع
<ol><li>استخدام الفئران MCAO/R ?...

<ol>
	<li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+chemokine-like+factor+1,+a+novel+C-C+chemokine,+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats.">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112 (2014).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1/2+and+p38+MAPK+activation.">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167 (2014).</li><li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+(STAIR)+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke:+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015.">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243 (2017).</li><li>Kumar, A., Aakriti, V., Gupta, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+An+update.">A review on animal models of stroke: An update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>Tong, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enhanced+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+nonhuman+primates+using+an+endovascular+trapping+technique.">An enhanced model of middle cerebral artery occlusion in nonhuman primates using an endovascular trapping technique.</a> AJNR Am. Journal of Neuroradiology. 36, 2354-2359 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9, 541-551 (2014).</li><li>Abrah&#225;m, H., Somogyv&#225;ri-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li><li>Sun, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coumarin+derivatives+protect+against+ischemic+brain+injury+in+rats.">Coumarin derivatives protect against ischemic brain injury in rats.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 67, 39-53 (2013).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Smith, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+site+and+lesion+topology+determine+efficacy+of+a+human+neural+stem+cell+line+in+a+rat+model+of+chronic+stroke.">Implantation site and lesion topology determine efficacy of a human neural stem cell line in a rat model of chronic stroke.</a> Stem Cell. 30, 785-796 (2012).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Forsythia+suspense+extract+with+antioxidant+and+anti-inflammatory+properties+in+a+model+of+rotenone+induced+neurotoxicity.">Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 52, 72-83 (2016).</li><li>Milani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly-arginine+peptides+reduce+infarct+volume+in+a+permanent+middle+cerebral+artery+rat+stroke+model.">Poly-arginine peptides reduce infarct volume in a permanent middle cerebral artery rat stroke model.</a> BMC Neuroscience. 17, 19 (2016).</li><li>DeGraba, T. J., Ostrow, P., Hanson, S., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+performance,+histologic+damage,+and+calcium+influx+in+rats+treated+with+NBQX+after+focal+ischemia.">Motor performance, histologic damage, and calcium influx in rats treated with NBQX after focal ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14, 262-268 (1994).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+preclinical+animal+model+to+assess+brain+recovery+after+acute+stroke.">Validation of a preclinical animal model to assess brain recovery after acute stroke.</a> European Journal of Pharmacology. 835, 75-81 (2018).</li><li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IMM-H004+prevents+toxicity+induced+by+delayed+treatment+of+tPA+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemia+involving+PKA-and+PI3K-dependent+Akt+activation.">IMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and PI3K-dependent Akt activation.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 2107-2118 (2014).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-3-n-butylphthalide+Promotes+Neurogenesis+and+Neuroplasticity+in+Cerebral+Ischemic+Rats.">L-3-n-butylphthalide Promotes Neurogenesis and Neuroplasticity in Cerebral Ischemic Rats.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 21, 733-741 (2015).</li></ol>

العديد من النماذج وضع الأساليب والمؤشرات السلوكية التي تستخدم بشكل جيد في نقص التروية الدماغية الحاده قد لا يكون لها تغييرات كبيره في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية الدماغية16,17. ومع ذلك ، فان عدد المرضي الذين يعانون من نقص ترويه الدماغ في مراحل الا?...

وينقسم نقص التروية الدماغية إلى ثلاث مراحل مع مؤشرات مختلفه بعد السكتة الدماغية: المرحلة الحاده (في غضون أسبوع واحد) ، ومرحله الانتعاش (1 أسبوع إلى 6 أشهر) ، ومرحله العواقب (أكثر من 6 أشهر). في الوقت الحاضر ، تركز معظم الدراسات علي المرحلة الحاده من نقص التروية الدماغية بسبب تاثيره الكبير والنماذج البحثية متعددة النسبية1،2،3. ومع ذلك ، لا يمكن تجاهل مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية الدماغية بسبب مضاعفاتها طويلة الأجل من الإعاقات. ولذلك ، فان الغرض من هذه الدراسة هو استكشاف نموذج الحيوانية مستقره وموثوق بها وبسيطه نسبيا للبحث في الانتعاش ومراحل عواقب نقص التروية في الدماغ.
من بين العديد من نماذج نقص ترويه الدماغ التجريبية ، ونحن نستخدم انسداد الشريان الدماغي الأوسط (MCAO) عن طريق الادراج الترباس الموضوع في الشريان الدماغي الأوسط الأيمن (MCA). هذا النموذج يشبه السكتة الدماغية البشرية ، والتي يمكن ان تنتج كميات أكبر احتشاء ، والنتيجة في العديد من الاضطرابات السلوكية المتعلقة السكتة الدماغية ، ويمكن ان تسمح ضخ الدم (ص) عن طريق أزاله الترباس الموضوع4،5،6. ويعتبر MCAO/R أيضا نموذج الذهب معيار الحيوانية من نقص التروية الدماغ7. وعلاوة علي ذلك ، فان شده أصابه الدماغ يعتمد علي القطر وطول الادراج من الترباس الموضوع ، ومده نقص التروية في الدماغ ، ووزن الحيوانية (أكبر الفئران لديها أدمغه أكبر والاوعيه الدماغية أكثر سمكا)8. ولذلك ، عن طريق تغيير نوع الترباس الموضوع ، والوقت احتشاء ، ووزن الفئران ، ويمكن الاطلاع علي نموذج مناسب للانتعاش ومراحل عواقب نقص التروية الدماغية في الفئران MCAO/R. للتحقق من صحة نموذج الفئران ، قمنا باجراء دراسة لمده يوم واحد ، 35 يوم ، و 60 يوم ، و 90 يوما لنموذج MCAO/R باستخدام الاختبارات الخاصة بالوظائف الحسية والحركية (اختبار التباين الثنائي ، وفحص شبكه المشي ، واختبار الروتارود ، واختبار حبل الرفع).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical Microscope</td>
			<td>Leica (Germany)</td>
			<td>S8</td>
			<td>Microscopic operating instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Gellette</td>
			<td>/</td>
			<td>Cutting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Shaking Bed</td>
			<td>Taicang Experimental Equipment Factory</td>
			<td>THZ-C</td>
			<td>To keep the brain sections stained evenly and at a constant temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>700D</td>
			<td>For taking pictures of TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Shaver</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>3000#</td>
			<td>Removal of hair from the neck of rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Hamostatic</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>14 cm</td>
			<td>Using for brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Pro Plus Software</td>
			<td>Media Cybernetics Inc.</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Analyze the infarct volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>217170702</td>
			<td>Anesthetic gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microshear</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Auxiliary skin and muscle anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pphthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Using for cutting the skin of neck</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Brain Slice Mold</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>400 g</td>
			<td>For standard, uniform cutting of brain tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Rotating Bar Fatigue Apparatus</td>
			<td>Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>ZH-300B</td>
			<td>To test the sensorimotor function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anaesthesia Machine</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>ABM3000</td>
			<td>A gas anesthetic machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Thermostat</td>
			<td>Beijing Damida Technology Co., Ltd.</td>
			<td>DM.7-YLS-20A</td>
			<td>To maintain animal body temperature constant during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>16 cm</td>
			<td>Using for decapitate and brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>4-0 / 5-0</td>
			<td>Using for skin and muscle sutures / Using for vascular ligations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Bolt</td>
			<td>Beijing Cinontech Co. Ltd.</td>
			<td>2636/2838/3040/3043-A4</td>
			<td>Blockage of the middle cerebral artery in rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>LOT#BCBP3272V</td>
			<td>Brain section staining reagent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats

وكان الغرض من هذه الدراسة لإنشاء والتحقق من صحة نموذج نقص ترويه الدماغ الحيوانية في مراحل الانتعاش والعواقب. تم اختيار نموذج انسداد الشريان الدماغي الأوسط/الضخ (MCAO/R) في الفئران الذكور سبرايج-داولي. عن طريق تغيير وزن الفئران (260 − 330 ز) ، ونوع الخيط الترباس (2636/2838/3040/3043) والدماغ احتشاء الوقت (2-3 ح) ، وارتفاع درجه لونغا ، وحجم احتشاء أكبر ونسبه نجاح أكبر نموذج تم فرزها باستخدام النتيجة لونغا وتلطيخ عقاري. تم الحصول علي حاله النموذج الأمثل (300 g ، 3040 الترباس الموضوع ، 3 ح الدماغ احتشاء الوقت) واستخدامها في فتره المراقبة اليوم 1-90 بعد ضخ عن طريق تقييم وظائف حسي وحجم احتشاء. وفي ظل هذه الظروف ، كان لاختبار عدم التماثل الثنائي فارق كبير من 1 إلى 90 يوما ، وكان لاختبار الشبكة والمشي فارق كبير من 1 إلى 60 يوما ؛ يمكن ان يكون كل من الاختلافات اختبار الوظيفية حسي مناسبه. وهكذا ، تم العثور علي الشرط الأكثر ملاءمة لنموذج الفئران رواية في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية في الدماغ: 300 g الفئران التي خضعت MCAO مع الترباس 3040 الموضوع ل 3 ح احتشاء الدماغ ومن ثم reperfused مستخدمه. وكانت الاختبارات الوظيفية الحسية المناسبة اختبارا ثنائيا لعدم التماثل واختبارا لشبكه المشي.

باستخدام الاجراء المذكور أعلاه لنموذج MCAO/R مع نقاط لونغا وتلطيخ عقاري, علاجات مختلفه من متوسط الوزن (275/300/320 ز), أنواع الترباس (2636/2838/3040/3043; الجدول 1) والأوقات الدماغية (2-3 h) واستخدمت ضخ يوم 1 لشاشه لنموذج نقص التروية الدماغ الأمثل في الفئران. وكانت المعلمات نموذج من 300...

Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats at JoVE.com

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

الغرض من هذه الدراسة هو إنشاء والتحقق من صحة نموذج الحيوانية للبحوث في مراحل الانتعاش والعواقب من نقص التروية في الدماغ عن طريق اختبار احتشاء الدماغ والوظيفة الحسية الحركية بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط/ضخ (MCAO/R) بعد 1-90 أيام في الفئران.

نموذج قبل السريرية لتقييم تعافي الدماغ بعد السكتة الدماغية الحاده في الفئران

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

تستخدم هذه الدراسة نموذجًا حيوانيًا راسخًا للبحث في مراحل التعافي والآثار من نقص التروية في الدماغ. المزايا الرئيسية لهذه التقنية هي أنها مستقرة وموثوقة وبسيطة نسبيا. تبدأ بوضع الجرذ تخدير على طاولة إصلاح الجراحية.طوال الجراحة، والحفاظ على درجة حرارة الجسم من الفئران في 37 درجة مئوية في الحرارة صغير. ربط الفم إلى قناع آلة التخدير وتأكيد التخدير العميق من عدم وجود التوتر القصوى، وردود الفعل القرنية والألم. إصلاح أطراف الفئران إلى طاولة العمليات باستخدام الضمادات الورقية.مع ماكينة حلاقة كهربائية، قم بإزالة معطف الرقبة وتعقيم الرقبة مع 75٪ من الكحول. استخدم مقص العيون لقطع 2-3 سنتيمتر على طول الشكل الطولي المركزي للرقبة. ثم مع ملقط العيون، وفصل العضلات تحت الجلد.استخدام الداهم محلية الصنع لفضح مجال الرؤية بشكل كامل. يجب توخي الحذر لتقديم تقنية متعفنة مناسبة لجميع العمليات الجراحية البقاء على قيد الحياة. وينبغي ممارسة التقنية التي تم توضيحها لاحقا في الفيديو من خلال الإجراء بأكمله.استخدم ملقط صغيرة لعزل الشريان السباتي المشترك والشريان السباتي الخارجي والشريان السباتي الداخلي. العمل تحت المجهر، واستخدام 8-0 الغرز لligate الشريان السباتي المشترك مع عقدة صلبة ، الشريان السباتي الخارجي بعيدا عن نهاية القلب مع عقدة صلبة ، الشريان السباتي الداخلي مع عقدة فضفاضة ومن ثم لخط الشريان السباتي الخارجي بالقرب من نهاية القلب. باستخدام مقص صغير، وقطع فتحة صغيرة في الشريان السباتي الخارجية وأدخل بلطف الترباس الموضوع.Ligate خياطة الشريان السباتي الخارجي الذي هو عقدة رقيقة وفضفاضة وقطع الشريان السباتي الخارجي. تخفيف عقدة فضفاضة من الشريان السباتي الداخلي والاستمرار في إدراج الترباس الموضوع إلى بداية الشريان الدماغي الأوسط ملحوظ مع خياطة وقطع الترباس الموضوع المكشوفة. بعد أن يتم التوصل إلى وقت الإقفاري بعد ساعتين إلى ثلاث ساعات، وإصلاح كسر الشريان السباتي الخارجية باستخدام ملقط صغيرة وسحب بلطف من الترباس الموضوع مع آخر الملصات الصغيرة.بعد سحب تماما الواجهة الأمامية من الترباس الخيط من الشريان السباتي الداخلي، ligate الشريان السباتي الخارجية التي اصطف مع 8-0 خياطة ثم قم بإزالة الترباس الموضوع تماما. بعد تخفيف الشريان السباتي المشترك ، داب حوالي 50000 وحدة من مسحوق الصوديوم البنسلين على سطح الجرح لمنع العدوى. استخدام أربعة خياطة لخياطة العضلات تحت الجلد والجلد.بعد وضع الجرذ مرة أخرى إلى القفص، استخدم حقنة ملليلتر واحدة لإعطاء ما يقرب من 0.2 ملليلتر من الماء للجرذ عن طريق الفم لمنع الجفاف بعد الجراحة. اختيار الحيوانات وفقا لأطول درجة ل TTC تلطيخ أو دراسات السيارات الحسية. بعد احتضان الدماغ معزولة لتك تلطيخ في ناقص 20 درجة مئوية من 30 دقيقة، وضعه في قبل تبريد فئران الدماغ العفن.باستخدام شفرة ما قبل التبريد، وقطع الدماغ إلى ستة أقسام متتالية سميكة اثنين ملليمترين. وصمة عار المقاطع مع 2٪ TTC في لوحة ثقافة ستة بئر واحتضان لمدة 30 إلى 60 دقيقة في 37 درجة مئوية في حين تهتز. كل 10 دقائق، الوجه المقاطع حتى نقص تروية الدماغ والمناطق غير المصابة هي بيضاء وحمراء واضحة.خط شرائح الدماغ عموديا على الورق المقوى الأسود في النظام من الجزء الخلفي إلى الجزء الأمامي من الدماغ باستخدام مسطرة لضمان أن الطول الكلي لكل خط هو نفسه وأخذ الصور. استيراد الصورة وتحديد شرائح الدماغ. حدد المقدمة السوداء واكتب Alt Delete لتعبئة لون الخلفية ثم التحكم D لإلغاء التحديد.وأخيراً، احفظ الصورة على سطح المكتب. لتحليل حجم infarct، أولاً فتح البرنامج واستيراد الصورة. لتعديل العيب، قم بضبط السطوع باستخدام أداة تحسين التباين بحيث تكون الخلفية سوداء.في التصفية، استخدم أداة الوسيط لإزالة الأضواء. لحساب منطقة الدماغ الطبيعية اليسرى، حدد اللون باستخدام تجزئة وضبط قيمة H، S وأنا لفصل شرائح الدماغ من الخلفية السوداء. العودة إلى حجم العد وانقر على العد.انقر على الكائنات المنقسمة في تحرير لفصل الدماغ من خط الوسط الذي سيميز تلقائيا مناطق الدماغ اليمنى واليسرى. لحساب منطقة الدماغ الحق في التحويل، قم باستيراد الصورة، وضبط الخلفية، وإزالة الضوء كما تم ذلك من قبل. حدد حجم العد وانقر على رسم دمج الكائنات أداة في تحرير.حدد يدوياً منطقة الإقفارية وانقر فوق عدد لحساب منطقة الإقفاري. لحساب منطقة الدماغ السليمة الصحيحة، قم أولاً باستيراد الصورة وضبط الخلفية وإزالة الأضواء كما تم ذلك من قبل. حدد اللون باستخدام تجزئة وضبط قيمة H، S وأنا لفصل شرائح الدماغ صحية من الخلفية السوداء.العودة إلى حجم العد وانقر على العد لحساب هذه المنطقة. انقر على الكائنات المنقسمة في تحرير لفصل الدماغ من خط الوسط الذي سيميز تلقائيا مناطق الدماغ اليمنى واليسرى. تأخذ الفئران التي تم اختيارها للدراسات الحركية الحسية واختبار assymetry الثنائية ولصق الشريط الورقي على الجزء الصافث من كل مخلب أمام ثلاث مرات باستخدام ضغط متساو.لكل فأر، سجل مع الكاميرا عدد المرات التي اتصالات مخلب كل الأمامية وإزالة الشريط في غضون خمس دقائق بما في ذلك مرات مخلب المتضررة والمتأثرة. كرر التفاف وتسجيل بعد 30 دقيقة ثم حساب القيم. بالنسبة لاختبار المشي في الشبكة، ضع الجرذ في وسط منصة سطح الشبكة المرتفعة مع فتحات 2.5 سنتيمتر مربع.دفع الوركين الفئران قليلا لتشجيعه على التحرك عبر السطح. باستخدام الكاميرا، سجل عدد من أخطاء القدم التي أدلى بها الأطراف المتضررة اليمنى والمتأثرة اليسار ورقم الخطوة الإجمالية في دقيقة واحدة مع الكاميرا. لاختبار قضيب الدوار، قم بإعداد جهاز التعب شريط الدورية الفئران إلى سرعة 13 دورة في الدقيقة على مدى فترة خمس دقائق باستخدام برنامج الدعم.بدء تشغيل برنامج الكمبيوتر ووضع الفئران على حلقات قضيب الدوار في نفس الوقت. إنهاء المحاكمة إذا سقط الجرذ من الحلبة أو بعد خمس دقائق وتسجيل وقت الدوران. اترك الجرذ ليرتاح لمدة 30 دقيقة، ثم كرر الاختبار مرتين أكثر واختر القيمة القصوى كآخر وقت دوار.لرفع حبل الاختبار، ووضع أداة رفع حبل على مكتب. يكون الجرذان قبضة الحبل مع forelimbs والسماح لها شنق. تسجيل وقت تعليق وحساب الدرجات.عندما تمت دراسة إصابة الدماغ الإقفارية الناجمة عن انسداد الشريان الدماغي الأوسط وإعادة ضخه ، ثبت أن وزن 300 جرام 3040 thread bolt ووقت الدماغ في مزرعة لمدة ثلاث ساعات هو الأنسب مع أكبر احتشاء دماغي ، وأعلى درجة أطول ، وأكبر نسبة نجاح في النموذج. وقد تحسن هذا بشكل ملحوظ بالمقارنة مع العلاج التقليدي ل 275 غرام الوزن، 2636 مؤشر الترباس والساعتين الدماغي. لدراسة حالة التعافي من نقص التروية في الدماغ، تم تنفيذ تلطيخ TTC وكشفت عن حجم النقش وتقلص في 23.4٪ في اليوم الأول بعد انسداد الشريان الدماغي الأوسط وإعادة ضخ، 19.6٪ في اليوم 35، 16.1٪ على 60 و 15.7٪ على 90.بعد يوم واحد من انسداد الشريان الدماغي الأوسط وإعادة ضخ، والتحيز الحركي الحسي في اختبار قياس الحساسية الثنائية، وأوقات خطأ المشي في الشبكة في اختبار المشي في الشبكة ورفع درجة حبل في اختبار رفع الحبل يتم زيادتها في حين أن وقت قضيب الدوار في اختبار قضيب الدوار انخفض مما يشير إلى أهمية هذه الاختبارات في دراسة نقص التروية الحادة في الدماغ. فقط الحفاظ على التحيز الحركي الحسي اضطرابات وظيفية كبيرة مع طريقة تعتمد على الوقت بعد 35 و 60 و 90 يوما من انسداد الشريان الدماغي الأوسط و reperfusion. بالنسبة لاختبار المشي في الشبكة ، كانت هناك اختلافات كبيرة في أوقات خطأ المشي في الشبكة لمدة 35 و 60 يومًا.وأشارت هذه النتائج إلى أن هذين الاختبارين يمكن أن يكونا مناسبين لاختبار الانتعاش في الفئران. من أجل ضمان النجاح، يجب أن يكون العمل لطيف ويجب أن تكون العملية ثابتة. قد تكون الاختبارات السلوكية الأخرى مثل اكتشاف المشية مناسبة أيضًا لهذا النموذج.تطوير هذا النموذج يمكن أن يمهد الطريق للباحثين لاستكشاف نقص تروية الدماغ في مراحل الانتعاش وتتمة.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

زرع الخلايا الشمية مغمد لتقييم الانتعاش وظيفية بعد إصابة العصب المحيطي

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

إعداد شرائح الدماغ الحادة باستخدام محسن N-الميثيل-د-أسلوب استرداد واقية جلوكاميني

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Utilizing 3D Printing Technology to Merge MRI with Histology: A Protocol for Brain Sectioning

استخدام 3D تكنولوجيا الطباعة لدمج التصوير بالرنين المغناطيسي مع الأنسجة: بروتوكول لالدماغ باجتزاء

Magnetic resonance imaging (MRI) allows for the delineation between normal and abnormal tissue on a macroscopic scale, sampling an entire tissue volume ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

ترانسيكتيون جزئي في العصب البصري في الفئران: نموذج المنشأة مع نهج منطوق جديد لتقييم ثانوي ضمور خلايا الشبكية العقدة

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

تقييم في فيفو لتعطيل حاجز الدم في الدماغ في نموذج الفئران من السكتة الدماغية

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

نموذج السكتة الدماغية الضوئية الخثارية المخصبة بالفيبرين والحساسة ل tPA

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

نموذج الفئران من عدوى الدماغ EcoHIV

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

المهام الحركية المزدوجة لتحليل المشي وتقييمه لدى مرضى ما بعد السكتة الدماغية

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

تحفيز الجافية واختبار فون فراي حول الحجاج في الفئران كنموذج قبل سريري للصداع

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

نموذج لعلاج التهاب الأوعية الدموية الدماغية بعد السكتة الدماغية الناجمة عن انسداد الشريان الدماغي الأوسط في الفئران

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...