Name: a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00
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Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Foundation of China (81603315, 81603316), Schlüssel F & E-Plan der Provinz Jiangxi in China (20171ACH80001), industrielle und akademische Kooperationsprojekte in Hochschulen und Universitäten der Provinz Fujian in China (2018Y41010011).

Das Verfahren und die Verwendung von Tierkörpern wurden vom Nationalen Institut für Gesundheit für die Pflege und Verwendung von Labortieren genehmigt. Dieses Protokoll ist speziell für die Tests der mittleren Zerebralen Arterienverschluss/-reperfusion (MCAO/R) und der sensorimotorischen Funktion angepasst.
1. Experimentelles Design und Gruppierung
<ol><li>Verwenden Sie ein Mratten-MCAO/R-Modell, um eine ischämische Methode des Rattengehirns mit schwereren Hirnverletzungen und einem hö...

<ol>
	<li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+chemokine-like+factor+1,+a+novel+C-C+chemokine,+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats.">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112 (2014).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1/2+and+p38+MAPK+activation.">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167 (2014).</li><li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+(STAIR)+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke:+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015.">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243 (2017).</li><li>Kumar, A., Aakriti, V., Gupta, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+An+update.">A review on animal models of stroke: An update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>Tong, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enhanced+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+nonhuman+primates+using+an+endovascular+trapping+technique.">An enhanced model of middle cerebral artery occlusion in nonhuman primates using an endovascular trapping technique.</a> AJNR Am. Journal of Neuroradiology. 36, 2354-2359 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9, 541-551 (2014).</li><li>Abrah&#225;m, H., Somogyv&#225;ri-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li><li>Sun, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coumarin+derivatives+protect+against+ischemic+brain+injury+in+rats.">Coumarin derivatives protect against ischemic brain injury in rats.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 67, 39-53 (2013).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Smith, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+site+and+lesion+topology+determine+efficacy+of+a+human+neural+stem+cell+line+in+a+rat+model+of+chronic+stroke.">Implantation site and lesion topology determine efficacy of a human neural stem cell line in a rat model of chronic stroke.</a> Stem Cell. 30, 785-796 (2012).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Forsythia+suspense+extract+with+antioxidant+and+anti-inflammatory+properties+in+a+model+of+rotenone+induced+neurotoxicity.">Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 52, 72-83 (2016).</li><li>Milani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly-arginine+peptides+reduce+infarct+volume+in+a+permanent+middle+cerebral+artery+rat+stroke+model.">Poly-arginine peptides reduce infarct volume in a permanent middle cerebral artery rat stroke model.</a> BMC Neuroscience. 17, 19 (2016).</li><li>DeGraba, T. J., Ostrow, P., Hanson, S., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+performance,+histologic+damage,+and+calcium+influx+in+rats+treated+with+NBQX+after+focal+ischemia.">Motor performance, histologic damage, and calcium influx in rats treated with NBQX after focal ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14, 262-268 (1994).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+preclinical+animal+model+to+assess+brain+recovery+after+acute+stroke.">Validation of a preclinical animal model to assess brain recovery after acute stroke.</a> European Journal of Pharmacology. 835, 75-81 (2018).</li><li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IMM-H004+prevents+toxicity+induced+by+delayed+treatment+of+tPA+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemia+involving+PKA-and+PI3K-dependent+Akt+activation.">IMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and PI3K-dependent Akt activation.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 2107-2118 (2014).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-3-n-butylphthalide+Promotes+Neurogenesis+and+Neuroplasticity+in+Cerebral+Ischemic+Rats.">L-3-n-butylphthalide Promotes Neurogenesis and Neuroplasticity in Cerebral Ischemic Rats.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 21, 733-741 (2015).</li></ol>

Viele Modelle, die Methoden und Verhaltensindikatoren, die gut in akuten zerebralen Ischämie verwendet werden möglicherweise keine signifikanten Veränderungen in der Erholung und Fortsetzung Sephase der GehirnIschämie16,17. Jedoch, die Zahl der Patienten mit Gehirn ischämische in der Genesung und Sequela-Stadien ist die größte. Es ist wichtig, ein geeignetes Tiermodell für die Erholung und Fortsetzung von Ischämie-Schlag zu wählen.
<p class="jove_co...

Die Hirnischämie ist in drei Stadien mit verschiedenen Post-Stroke-Indikatoren unterteilt: das akute Stadium (innerhalb einer Woche), die Erholungsphase (1 Woche bis 6 Monate) und die Fortsetzungsphase (mehr als 6 Monate). Derzeit konzentrieren sich die meisten Studien auf das akute Stadium der Gehirnischämie wegen seiner signifikanten Wirkung und multi-relative Forschungsmodelle1,2,3. Jedoch, die Erholung und Fortsetzung Sendestadien des Gehirns Ischämie kann nicht ignoriert werden, aufgrund ihrer langfristigen Komplikation von Behinderungen. Daher ist der Zweck dieser Studie, ein stabiles, zuverlässiges und relativ einfaches Tiermodell zu erforschen, um die Erholungs- und Fortsetzungsstadien der Gehirnischämie zu erforschen.
Unter den vielen experimentellen Gehirn-Ischämie-Modellen verwenden wir mittlere Hirnarterienverschluss (MCAO) über Gewindebolzeneinfügung in die rechte mittlere Hirnarterie (MCA). Dieses Modell ähnelt dem menschlichen Schlaganfall, der größere Infarktvolumina erzeugen kann, zu vielen Verhaltensstörungen im Zusammenhang mit Schlaganfall führt und eine Blutreperfusion (R) durch Entfernen der Gewindeschraube4,5,6ermöglichen kann. MCAO/R gilt auch als das Goldstandard-Tiermodell der Gehirnischämie7. Darüber hinaus hängt die Schwere der Hirnverletzung vom Durchmesser und der Einfügelänge des Gewindebolzens, der Dauer der Gehirnischämie und dem Tierischen Gewicht (größere Ratten haben größere Gehirne und dickere Hirngefäße)ab 8. Daher kann durch die Änderung des Gewindeschraubentyps, der Infarktzeit und des Rattengewichts ein geeignetes Modell für die Erholung und Diesina-Stadien der Gehirnischämie bei MCAO/R-Ratten gefunden werden. Um das Rattenmodell zu validieren, führten wir eine 1-Tägige, 35-Tage-, 60-Tage- und 90-Tage-Studie des MCAO/R-Modells mit TTC-Färbungs- und sensorimotorischen Funktionsexperimenten durch (bilateraler Asymmetrietest, Grid-Walking-Test, Rotarod-Test und Hebeseiltest).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical Microscope</td>
			<td>Leica (Germany)</td>
			<td>S8</td>
			<td>Microscopic operating instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Gellette</td>
			<td>/</td>
			<td>Cutting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Shaking Bed</td>
			<td>Taicang Experimental Equipment Factory</td>
			<td>THZ-C</td>
			<td>To keep the brain sections stained evenly and at a constant temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>700D</td>
			<td>For taking pictures of TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Shaver</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>3000#</td>
			<td>Removal of hair from the neck of rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Hamostatic</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>14 cm</td>
			<td>Using for brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Pro Plus Software</td>
			<td>Media Cybernetics Inc.</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Analyze the infarct volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>217170702</td>
			<td>Anesthetic gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microshear</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Auxiliary skin and muscle anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pphthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Using for cutting the skin of neck</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Brain Slice Mold</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>400 g</td>
			<td>For standard, uniform cutting of brain tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Rotating Bar Fatigue Apparatus</td>
			<td>Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>ZH-300B</td>
			<td>To test the sensorimotor function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anaesthesia Machine</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>ABM3000</td>
			<td>A gas anesthetic machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Thermostat</td>
			<td>Beijing Damida Technology Co., Ltd.</td>
			<td>DM.7-YLS-20A</td>
			<td>To maintain animal body temperature constant during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>16 cm</td>
			<td>Using for decapitate and brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>4-0 / 5-0</td>
			<td>Using for skin and muscle sutures / Using for vascular ligations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Bolt</td>
			<td>Beijing Cinontech Co. Ltd.</td>
			<td>2636/2838/3040/3043-A4</td>
			<td>Blockage of the middle cerebral artery in rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>LOT#BCBP3272V</td>
			<td>Brain section staining reagent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats

Der Zweck dieser Studie war es, ein tierisches Gehirn Ischämie-Modell in der Erholung und Fortsetzung Sephase zu etablieren und zu validieren. Es wurde ein Modell der mittleren zerebralen Arterienverschluss/Reperfusion (MCAO/R) bei männlichen Sprague-Dawley-Ratten gewählt. Durch die Änderung des Gewichts der Ratte (260 bis 330 g), des Gewindeschraubentyps (2636/2838/3040/3043) und der Hirninfarktzeit (2-3 h) wurden eine höhere Longa-Punktzahl, ein größeres Infarktvolumen und ein größeres Modellerfolgsverhältnis anhand der Longa-Punktzahl und der TTC-Färbung abgeschirmt. Die optimale Modellbedingung (300 g, 3040 Gewindebolzen, 3 h Hirninfarktzeit) wurde erfasst und in einer Beobachtungszeit von 1-90 Tagen nach der Reperfusion mittels Beurteilung der sensorimotorischen Funktionen und des Infarktvolumens verwendet. Unter diesen Bedingungen hatte der bilaterale Asymmetrietest einen signifikanten Unterschied von 1 bis 90 Tagen, und der Grid-Walking-Test hatte einen signifikanten Unterschied von 1 bis 60 Tagen; beide Unterschiede könnten ein geeigneter sensorimotorischer Funktionstest sein. So wurde der am besten geeignete Zustand eines neuartigen Rattenmodells in den Erholungs- und Sequela-Stadien der Gehirnischämie gefunden: 300 g Ratten, die MCAO mit einem 3040 Fadenbolzen für einen 3 h Hirninfarkt unterzogen und dann reperfiert wurden. Die entsprechenden sensorimotorischen Funktionstests waren ein bilateraler Asymmetrietest und ein Grid-Walking-Test.

Verwendung des oben genannten Verfahrens für ein MCAO/R-Modell mit Longa-Punktzahl und TTC-Färbung, verschiedene Behandlungen mit mittlerem Gewicht (275/300/320 g), Schraubentypen (2636/2838/3040/3043; Tabelle 1) und ischämische Zeiten (2-3 h) und 1 Tag Reperfusion wurden verwendet, um für das optimale Gehirn Ischämie-Modell bei Ratten zu überprüfen. Modellparameter mit 300 g Gewicht, 3040 Gewindebolzen und 3 h Hirninfarktzeit waren am besten geeignet für den grö...

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A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

Der Zweck dieser Studie ist es, ein Tiermodell für die Forschung in der Erholung und Fortsetzung der Gehirn-Ischämie zu etablieren und zu validieren, indem Hirninfarkt und sensorimotorische Funktion nach mittlerer ZerebrierungSverschluss/Reperfusion (MCAO/R) nach 1-90 getestet werden. Tage in Ratten.

Ein präklinisches Modell zur Beurteilung der Gehirnerholung nach akutem Schlaganfall bei Ratten

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

Diese Studie verwendet ein etabliertes Tiermodell, um die Erholung und die Fortsetzungsstadien der Gehirn-Ischämie zu erforschen. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie stabil, zuverlässig und relativ einfach ist. Beginnen Sie, indem Sie eine anästhesierte Ratte auf einen chirurgischen Fixiertisch legen.Während der gesamten Operation, halten Sie die Körpertemperatur der Ratte bei 37 Grad Celsius in einem kleinen Tierthermostat. Verbinden Sie den Mund mit der Anästhesie-Maschinenmaske und bestätigen Sie tiefe Anästhesie durch mangelende Extremitätsspannung, Hornhautreflexe und Schmerzen. Befestigen Sie die Gliedmaßen der Ratte mit Papierverbänden am Operationstisch.Mit einem elektrischen Rasierer, entfernen Sie den Nackenmantel und sterilisieren Sie den Hals mit 75%Alkohol. Verwenden Sie eine Augenschere, um zwei bis drei Zentimeter entlang der zentralen Längsform des Halses zu schneiden. Und dann mit ophthalmologischen Zangen, trennen Sie den subkutanen Muskel.Verwenden Sie hausgemachte Retraktor, um das Feld der Vision vollständig zu entlarven. Es muss darauf geachtet werden, dass für alle chirurgischen Überlebensoperationen eine geeignete aseptische Technik vorliegt. Die später im Video dargestellte Technik sollte während des gesamten Verfahrens geübt werden.Verwenden Sie die Mikrozange, um die gemeinsame Halsschlagader, die äußere Halsschlagader und die innere Halsschlagader zu isolieren. Arbeiten unter dem Mikroskop, verwenden Sie 8-0 Nähte, um die gemeinsame Halsschlagader mit hartem Knoten, externe Halsschlagarterie weit weg vom Herzende mit hartem Knoten, innere Karotisarterie mit losem Knoten zu ligan und dann die äußere Halsschlagader in der Nähe des Herzendes auszusäumen. Schneiden Sie mit einer Mikroschere eine kleine Öffnung in die äußere Halsschlagader und legen Sie vorsichtig eine Gewindeschraube ein.Ligate die Naht der äußeren Halsschlagader, die dünn und locker Knoten ist und schneiden Sie die äußere Halsschlagader. Lösen Sie den losen Knoten der inneren Halsschlagader und setzen Sie den Gewindebolzen am Anfang der mit der Naht markierten mittleren Hirnarterie ein und schneiden Sie den freiliegenden Gewindebolzen ab. Nachdem die ischämische Zeit nach zwei bis drei Stunden erreicht ist, fixieren Sie die Fraktur der äußeren Halsschlagader mit Mikrozangen und ziehen Sie den Fadenbolzen vorsichtig mit einer anderen Mikrozange heraus.Nachdem Sie das vordere Ende der Gewindeschraube vollständig aus der inneren Halsschlagader zurückgezogen haben, ligaten Sie die äußere Halsschlagader, die mit 8-0 ausgekleidet wurde und entfernen Sie dann die Gewindeschraube vollständig. Nach dem Lösen der gemeinsamen Halsschlagader, tupfe etwa 50.000 Einheiten Penicillin-Natriumpulver auf der Wundoberfläche, um eine Infektion zu verhindern. Verwenden Sie vier Nähte, um subkutane Muskeln und Haut zu naht.Nachdem Sie die Ratte wieder in den Käfig gebracht haben, verwenden Sie eine Ein-Milliliter-Spritze, um der Ratte oral etwa 0,2 Milliliter Wasser zu geben, um eine postoperative Dehydrierung zu verhindern. Wählen Sie die Tiere nach der längsten Punktzahl für TTC Färbung oder sensorische motorische Studien. Nach der Inkubation des Gehirns isoliert für TTC Färbung bei minus 20 Grad Celsius von 30 Minuten, legen Sie es in einer vorgekühlten Ratte Gehirn Scheibe Schimmel.Schneiden Sie das Gehirn mit einer vorgekühlten Klinge in sechs zwei Millimeter dicke aufeinanderfolgende Abschnitte. Die Abschnitte mit 2%TTC in einer Sechs-Brunnen-Kulturplatte färben und 30 bis 60 Minuten bei 37 Grad Celsius beim Schütteln bebrüten. Alle 10 Minuten die Abschnitte umzudrehen, bis die Gehirnischämie und die nicht betroffenen Bereiche sichtbar weiß und rot sind.Line das Gehirn schneidet vertikal auf dem schwarzen Karton in der Reihenfolge von hinten nach vorne des Gehirns mit einem Lineal, um sicherzustellen, dass die Gesamtlänge jeder Linie gleich ist und fotografieren. Importieren Sie das Foto und wählen Sie die Gehirnscheiben aus. Wählen Sie schwarzen Vordergrund aus, und geben Sie Alt Delete ein, um die Hintergrundfarbe zu füllen, und steuern Sie dann D, um die Auswahl aufzuheben.Speichern Sie schließlich das Bild auf dem Desktop. Um das Infarktvolumen zu analysieren, öffnen Sie zuerst die Software und importieren Sie das Foto. Um eine Fehleränderung vorzunehmen, passen Sie die Helligkeit mit dem Kontrastverbesserungswerkzeug so an, dass der Hintergrund schwarz ist.Verwenden Sie im Filter das Medianwerkzeug, um die Hervorhebungen zu entfernen. Um den linken normalen Hirnbereich zu berechnen, wählen Sie Farbe mit Segmentierung und passen Sie den Wert von H, S und I an, um die Gehirnscheiben vom schwarzen Hintergrund zu trennen. Kehren Sie zur Zählgröße zurück und klicken Sie auf Count.Klicken Sie in der Bearbeitung auf geteilte Objekte, um das Gehirn von der Mittellinie zu trennen, wodurch links und rechts automatisch der Gehirnbereich getrennt wird. Um den rechten Hirnbereich des Infarts zu berechnen, importieren Sie das Bild, passen Sie den Hintergrund an, und entfernen Sie die Hervorhebungen wie zuvor. Wählen Sie die Anzahl Größe und klicken Sie auf Zeichnen Merge Objekte Werkzeug in bearbeitung.Wählen Sie manuell den ischämischen Bereich aus und klicken Sie auf Anzahl, um das ischämische Gebiet zu berechnen. Um den richtigen gesunden Gehirnbereich zu berechnen, importieren Sie zuerst das Bild, passen Sie den Hintergrund an, und entfernen Sie die Highlights wie zuvor. Wählen Sie Farbe mit Segmentierung und passen Sie den Wert von H, S und I an, um die gesunden Gehirnscheiben vom schwarzen Hintergrund zu trennen.Kehren Sie zur Zählgröße zurück, und klicken Sie auf Anzahl, um diesen Bereich zu berechnen. Klicken Sie in der Bearbeitung auf geteilte Objekte, um das Gehirn von der Mittellinie zu trennen, wodurch links und rechts automatisch der Gehirnbereich getrennt wird. Nehmen Sie Ratten, die für sensorische motorische Studien und für bilaterale Assymmetrietests ausgewählt wurden, und wickeln Sie Papierband auf den saftigen Teil jeder Vorderkralle dreimal mit gleichem Druck.Zeichnen Sie für jede Ratte mit der Kamera auf, wie oft jede Vorderkklappe Kontakte und entfernt das Band innerhalb von fünf Minuten einschließlich nicht betroffener und betroffener Pfotenzeiten. Wiederholen Sie das Umwickeln und Die Aufzeichnen nach 30 Minuten, und berechnen Sie dann die Werte. Legen Sie die Ratte für den Gitterlauftest in die Mitte einer erhöhten Gitteroberflächenplattform mit 2,5 QuadratzentimeterÖffnungen.Drücken Sie die Hüften der Ratte leicht, um sie zu ermutigen, sich über die Oberfläche zu bewegen. Zeichnen Sie mit der Kamera die Anzahl der Fußfehler auf, die von den rechten, nicht betroffenen und linken betroffenen Gliedmaßen und der Gesamtzahl der Schrittzahlen in einer Minute mit der Kamera gemacht wurden. Richten Sie für die Rotorstangenprüfung das Rattendrehstab-Ermüdungsgerät über einen Zeitraum von fünf Minuten mit der unterstützenden Software auf eine Geschwindigkeit von 13 Umdrehungen pro Minute ein.Starten Sie das Computerprogramm und legen Sie die Ratte gleichzeitig auf die Rotorstangenringe. Beenden Sie die Testversion, wenn die Ratte vom Ring fällt oder nach fünf Minuten und notieren Sie die Rotierende Zeit. Lassen Sie die Ratte 30 Minuten ruhen, wiederholen Sie dann den Test noch zweimal und wählen Sie den Maximalwert als letzte Drehzeit aus.Legen Sie das Hebeseilinstrument für die Hebeseilprüfung auf einen Schreibtisch. Lassen Sie die Ratte das Seil mit seinen Vorderbeinen greifen und hängen lassen. Zeichnen Sie die Zeit des Aufhängens auf und berechnen Sie die Partituren.Als eine ischämische Hirnverletzung, die durch mittlere Hirnarterienverschluss und Reperfusion induziert wurde, untersucht wurde, erwiesen sich 300 Gramm Gewicht 3040 Fadenbolzen und drei Stunden Hirninfarktzeit als die am besten geeignete mit dem größten Hirninfarkt, der höchsten längsten Punktzahl und dem größten Modellerfolgsverhältnis. Dies wurde im Vergleich zur konventionellen Behandlung von 275 Gramm Gewicht, 2636 Gewindebolzen und zweistündiger Hirninfarktzeit deutlich verbessert. Um den Erholungsstatus der Gehirn-Ischämie zu untersuchen, wurde TTC-Färbung durchgeführt und es zeigte den Infarkt und Schrumpfvolumen bei 23,4% am ersten Tag nach der mittleren zerebralen Arterie okklusion und Reperfusion, 19,6% am 35. Tag, 16,1% am 60. und 15,7% am 90.Nach einem Tag mittlerer Zerebrierungsverschluss und Reperfusion, sensorischer motorischer Verzerrung im bilateralen Assymemetrietest, Rasterlauffehlerzeiten im Gitterlauftest und Hebeseilpunktzahl im Hebeseiltest werden alle erhöht, während die Rotorstangenzeit im Rotorstabtest verringert wird, was auf die Bedeutung dieser Tests bei der Untersuchung akuter Hirnischämie hindeutet. Nur sensorische motorische Voreingenommenheit hielt große Funktionsstörungen mit einer zeitabhängigen Art und Weise nach 35, 60 und 90 Tagen mittlerer Zerebralpisse und Reperfusion aufrecht. Für den Grid Walking Test gab es signifikante Unterschiede bei den Fehlerzeiten des Gitters für 35 und 60 Tage.Diese Ergebnisse deuteten darauf hin, dass diese beiden Tests geeignet sein könnten, um die Erholung bei Ratten zu testen. Um den Erfolg zu gewährleisten, sollte die Aktion sanft und die Bedienung sollte stabil sein. Andere Verhaltenstests wie die Gangerkennung sind möglicherweise auch für dieses Modell geeignet.Die Entwicklung dieses Modells könnte den Weg für Forscher ebnen, um die Gehirn-Ischämie in den Erholungs- und Folgestadien zu erforschen.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Transplantation von olfaktorischen Zellen ensheathing zu Funktionswiederherstellung nach peripheren Nervenschäden Bewerten

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Forschung

Neurowissenschaften

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Vorbereitung der akuten Gehirnscheiben mit einem optimierten N-Methyl-D-Glucamine-schützende Recovery-Methode

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Utilizing 3D Printing Technology to Merge MRI with Histology: A Protocol for Brain Sectioning

3D-Drucktechnologie Verwendung MRI mit Histologie fusionieren: Ein Protokoll für Hirn Sectioning

Magnetic resonance imaging (MRI) allows for the delineation between normal and abnormal tissue on a macroscopic scale, sampling an entire tissue volume ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Partielle Sehnerv Durchtrennung bei Ratten: ein Modell gegründet mit einem neuen operativen Ansatz zur sekundären Degeneration der retinalen Ganglienzellen bewerten

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Eine In-Vivo -Bewertung der Störung der Blut - Hirn-Schranke in einem Rattenmodell des ischämischen Schlaganfalls

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

Ein mit Fibrin angereichertes und tPA-sensitives photothrombotisches Schlaganfallmodell

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

Ein Rattenmodell der EcoHIV-Gehirninfektion

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Motorische Doppelaufgaben für die Ganganalyse und -bewertung bei Patienten nach einem Schlaganfall

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Durale Stimulation und periorbitale von Frey-Tests bei Mäusen als präklinisches Modell von Kopfschmerzen

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

Ein Modell für die Enzephalomyosynangiose-Behandlung nach einem durch Verschluss der mittleren Hirnarterie induzierten Schlaganfall bei Mäusen

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...