Name: a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats at JoVE.com

עבודה זו נתמכת על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (81603315, 81603316), מפתח R & D תוכנית של מחוז ג'יאנגשי בסין (20171ach80001), פרויקטים תעשייתיים ושיתוף פעולה אקדמי במכללות ואוניברסיטאות של מחוז פוג'יין ב סין (2018Y41010011).

הנוהל והשימוש בנושאי בעלי חיים אושרו על ידי המכון הלאומי לבריאות לטיפול ושימוש בחיות מעבדה. פרוטוקול זה מותאם במיוחד עבור המבחנים של סגר עורק המוח האמצעי/reperfusion (MCAO/R) ו sensorimotor פונקציה.
1. תכנון וקיבוץ ניסיוניים
<ol><li>השתמש עכברוש MCAO/R מודל למסך המוח חולדה השיטה מודל שיטת עם פג?...

<ol>
	<li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+chemokine-like+factor+1,+a+novel+C-C+chemokine,+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats.">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112 (2014).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1/2+and+p38+MAPK+activation.">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167 (2014).</li><li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+(STAIR)+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke:+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015.">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243 (2017).</li><li>Kumar, A., Aakriti, V., Gupta, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+An+update.">A review on animal models of stroke: An update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>Tong, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enhanced+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+nonhuman+primates+using+an+endovascular+trapping+technique.">An enhanced model of middle cerebral artery occlusion in nonhuman primates using an endovascular trapping technique.</a> AJNR Am. Journal of Neuroradiology. 36, 2354-2359 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9, 541-551 (2014).</li><li>Abrah&#225;m, H., Somogyv&#225;ri-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li><li>Sun, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coumarin+derivatives+protect+against+ischemic+brain+injury+in+rats.">Coumarin derivatives protect against ischemic brain injury in rats.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 67, 39-53 (2013).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Smith, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+site+and+lesion+topology+determine+efficacy+of+a+human+neural+stem+cell+line+in+a+rat+model+of+chronic+stroke.">Implantation site and lesion topology determine efficacy of a human neural stem cell line in a rat model of chronic stroke.</a> Stem Cell. 30, 785-796 (2012).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Forsythia+suspense+extract+with+antioxidant+and+anti-inflammatory+properties+in+a+model+of+rotenone+induced+neurotoxicity.">Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 52, 72-83 (2016).</li><li>Milani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly-arginine+peptides+reduce+infarct+volume+in+a+permanent+middle+cerebral+artery+rat+stroke+model.">Poly-arginine peptides reduce infarct volume in a permanent middle cerebral artery rat stroke model.</a> BMC Neuroscience. 17, 19 (2016).</li><li>DeGraba, T. J., Ostrow, P., Hanson, S., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+performance,+histologic+damage,+and+calcium+influx+in+rats+treated+with+NBQX+after+focal+ischemia.">Motor performance, histologic damage, and calcium influx in rats treated with NBQX after focal ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14, 262-268 (1994).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+preclinical+animal+model+to+assess+brain+recovery+after+acute+stroke.">Validation of a preclinical animal model to assess brain recovery after acute stroke.</a> European Journal of Pharmacology. 835, 75-81 (2018).</li><li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IMM-H004+prevents+toxicity+induced+by+delayed+treatment+of+tPA+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemia+involving+PKA-and+PI3K-dependent+Akt+activation.">IMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and PI3K-dependent Akt activation.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 2107-2118 (2014).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-3-n-butylphthalide+Promotes+Neurogenesis+and+Neuroplasticity+in+Cerebral+Ischemic+Rats.">L-3-n-butylphthalide Promotes Neurogenesis and Neuroplasticity in Cerebral Ischemic Rats.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 21, 733-741 (2015).</li></ol>

דגמים רבים הקמת שיטות ואינדיקטורים התנהגותיים כי הם משמשים היטב איסכמיה מוחית חריפה לא יכול להיות שינויים משמעותיים בשלבים ההתאוששות והרצף של איסכמיה של המוח16,17. עם זאת, מספר המטופלים עם הסכמי המוח של שלבי ההתאוששות והרצף הוא הגדול ביותר. זה חיוני כדי לבחו?...

איסכמיה של המוח מחולקת לשלושה שלבים עם מחווני שלאחר שבץ שונים: השלב האקוטי (בתוך שבוע), שלב ההחלמה (1 שבוע עד 6 חודשים), ובשלב הסקוויה (יותר מ -6 חודשים). כיום, רוב המחקרים מתמקדים בשלב אקוטי של איסכמיה של המוח בשל השפעתה המשמעותית ומודלים רב יחסיים מחקר1,2,3. עם זאת, לא ניתן להתעלם מההתאוששות ומשלבים הרצף של איסכמיה מוחית עקב סיבוך לטווח ארוך של מוגבלויות. לכן, מטרת מחקר זה היא לחקור מודל יציבה, אמין בעלי חיים פשוטה יחסית כדי לחקור את שלבי ההתאוששות והרצף של איסכמיה של המוח.
בין הדגמים הרבים של איסכמיה של המוח ניסיוני, אנו משתמשים בעורק מוחין באמצע הסגר (MCAO) באמצעות בורג פתיל החדרת לתוך עורק המוח האמצעי הימני (MCA). מודל זה דומה שבץ האדם, אשר יכול לייצר כרכים סיכונים גדולים, התוצאה של הפרעות התנהגותיות רבות הקשורות לקו, והוא יכול לאפשר reperfusion דם (R) על ידי הסרת הברק פתיל4,5,6. MCAO/R נחשב גם מודל החיים תקן זהב של איסכמיה של המוח7. יתר על כן, חומרת הפגיעה במוח תלוי בקוטר ואת אורך הכניסה של בורג פתיל, משך של איסכמיה המוח, ואת משקל בעלי חיים (חולדות גדול יותר יש מוח גדול יותר כלי מוחין עבה)8. לכן, על ידי שינוי סוג הברק פתיל, את הזמן הסיכונים, ואת משקל החולדה, מודל מתאים ניתן למצוא עבור שלבי ההתאוששות והרצף של איסכמיה של המוח בחולדות MCAO/R. כדי לאמת את המודל עכברוש, ביצעו יום אחד, 35 יום, 60 יום, ו 90-יום מחקר של מודל MCAO/R באמצעות כתמים TTC ו sensorimotor פונקציות ניסויים (בדיקת סימטריה דו צדדית, מבחן הליכה הרשת, מבחן rotarod ומבחן חבל הרמה).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical Microscope</td>
			<td>Leica (Germany)</td>
			<td>S8</td>
			<td>Microscopic operating instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Gellette</td>
			<td>/</td>
			<td>Cutting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Shaking Bed</td>
			<td>Taicang Experimental Equipment Factory</td>
			<td>THZ-C</td>
			<td>To keep the brain sections stained evenly and at a constant temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>700D</td>
			<td>For taking pictures of TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Shaver</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>3000#</td>
			<td>Removal of hair from the neck of rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Hamostatic</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>14 cm</td>
			<td>Using for brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Pro Plus Software</td>
			<td>Media Cybernetics Inc.</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Analyze the infarct volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>217170702</td>
			<td>Anesthetic gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microshear</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Auxiliary skin and muscle anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pphthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Using for cutting the skin of neck</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Brain Slice Mold</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>400 g</td>
			<td>For standard, uniform cutting of brain tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Rotating Bar Fatigue Apparatus</td>
			<td>Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>ZH-300B</td>
			<td>To test the sensorimotor function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anaesthesia Machine</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>ABM3000</td>
			<td>A gas anesthetic machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Thermostat</td>
			<td>Beijing Damida Technology Co., Ltd.</td>
			<td>DM.7-YLS-20A</td>
			<td>To maintain animal body temperature constant during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>16 cm</td>
			<td>Using for decapitate and brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>4-0 / 5-0</td>
			<td>Using for skin and muscle sutures / Using for vascular ligations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Bolt</td>
			<td>Beijing Cinontech Co. Ltd.</td>
			<td>2636/2838/3040/3043-A4</td>
			<td>Blockage of the middle cerebral artery in rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>LOT#BCBP3272V</td>
			<td>Brain section staining reagent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats

מטרת מחקר זה היתה להקים ולאמת מודל איסכמיה של המוח בעלי חיים בשלבי ההחלמה והסקוולה. עורק המוח האמצעי סגר/reperfusion (MCAO/R) מודל בחולדות ממין זכר-דאולי נבחר. על ידי שינוי משקל העכברוש (260-330 גרם), את סוג הברק חוט (2636/2838/3040/3043) ואת המוח סיכונים זמן (2-3 h), הציון של Longa גבוה יותר, נפח סיכונים גדול יותר יחס הצלחה מודל גדול הוקרן באמצעות הציון של Longa ו TTC כתמים. מצב מודל אופטימלי (300 g, 3040 בורג חוט, 3 h סיכונים זמן המוח) נרכש והשתמשו בתקופת התצפית 1-90 יום לאחר reperfusion באמצעות הערכה של sensorimotor פונקציות ונפח סיכונים. בתנאים אלה, מבחן ה-סימטריה הדו היה הבדל משמעותי בין 1 ל 90 ימים, ואת מבחן רשת הליכה היה הבדל משמעותי בין 1 ל 60 ימים; שני ההבדלים יכולים להיות מבחן פונקציונלי sensorimotor מתאים. כך, המצב המתאים ביותר של מודל עכברוש הרומן בשלבי ההתאוששות ובשלבים של איסכמיה המוח נמצא: 300 g חולדות שעברו MCAO עם בורג 3040 המוח סיכונים ולאחר מכן מחדש. המבחנים הsensorimotor פונקציונליים המתאימים היו בדיקת סימטריה דו-צדדית ומבחן הליכה ברשת.

באמצעות ההליך הנ ל מודל MCAO/R עם הציון של Longa וצביעת TTC, טיפולים שונים של משקל ממוצע (275/300/320 g), סוגי בריחים (2636/2838/3040/3043; שולחן 1) ושעות האיסכמי (2-3 h) ו 1 יום reperfusion שימשו למסך עבור המודל איסכמיה המוח אופטימלית בחולדות. מודל פרמטרים של 300 גרם משקל, 3040 בורג חוט, ו 3 h המוח סיכונ...

Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats at JoVE.com

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

מטרת מחקר זה היא להקים ולאמת מודל בעלי חיים עבור מחקר בשלבים שחזור והצלה של איסכמיה של המוח על ידי בדיקת אוטם המוח ואת הפונקציה sensorimotor לאחר חסימה באמצע עורק מוחין/reperfusion (MCAO/R) לאחר 1-90 ימים בחולדות

מודל טרום קליני להעריך את ההתאוששות המוח לאחר שבץ חריף בחולדות

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

מחקר זה משתמש במודל מבוסס של בעלי חיים כדי לחקור את ההתאוששות ואת שלבי ההמשך של מכון המוח. היתרונות העיקריים של טכניקה זו הם שהיא יציבה, אמינה ופשוטה יחסית. התחל על ידי הנחת חולדה הרדמה על שולחן תיקון כירורגי.לאורך כל הניתוח, לשמור על טמפרטורת הגוף של החולדה ב 37 מעלות צלזיוס בתרמוסטט בעלי חיים קטן. חבר את הפה למסכת מכונת ההרדמה ואשר הרדמה עמוקה על ידי חוסר מתח בגפיים, רפלקסים בקרנית וכאב. תקן את גפי החולדה לשולחן הניתוחים באמצעות תחבושות נייר.בעזרת מכונת גילוח חשמלית, הסירו את מעיל הצוואר ועקרו את הצוואר ב-75% אלכוהול. השתמש מספריים עיניים לחתוך שניים עד שלושה סנטימטרים לאורך הצורה האורך המרכזית של הצוואר. ואז עם מטלות עיניים, להפריד את השריר התת עורי.השתמש מפשק תוצרת בית כדי לחשוף באופן מלא את שדה הראייה. יש לדאוג להציג טכניקה אספטית מתאימה לכל הליכי ההישרדות הכירורגיים. הטכניקה הממחירה מאוחר יותר בסרטון צריכה להיות מתורגלת לאורך כל ההליך.השתמש במטחני המיקרו כדי לבודד את העורק הראשי המשותף, את העורק הראשי החיצוני ואת העורק הראשי הפנימי. עבודה תחת המיקרוסקופ, השתמש 8-0 תפרים כדי לקשור את העורק הראשי המשותף עם קשר קשה, עורק חיצוני רחוק מקצה הלב עם קשר קשה, עורק פנימי עם קשר רופף ולאחר מכן כדי קו העורק הראשי החיצוני ליד קצה הלב. בעזרת מיקרו מספריים, חותכים פתח קטן לעורק הראשי החיצוני ומכניסים בעדינות בורג חוט.Ligate התפר של העורק הראשי החיצוני כי הוא קשר דק רופף לחתוך את העורק הראשי החיצוני. שחררו את הקשר הרופף של העורק הראשי הפנימי והמשיכו להכניס את בורג החוט לתחילת העורק המוחי האמצעי המסומן בתפר וחתכו את בורג החוט החשוף. לאחר שהזמן האיסכמי מגיע לאחר שעתיים עד שלוש שעות, לתקן את השבר של העורק הראשי החיצוני באמצעות מטלות מיקרו בעדינות לשלוף את בורג החוט עם מדפים מיקרו אחרים.לאחר משיכת לחלוטין את הקצה הקדמי של בורג החוט מהעורק הראשי הפנימי, ligate העורק הראשי החיצוני כי כבר מרופד עם 8-0 תפר ולאחר מכן להסיר את הבורג חוט לחלוטין. לאחר שחרור העורק הראשי המשותף, טבול כ 50, 000 יחידות של אבקת נתרן פניצילין על פני השטח של הפצע כדי למנוע זיהום. השתמש בארבע תפרים לתפור שרירים תת עוריים ועור.לאחר הנחת החולדה בחזרה לכלוב, השתמש במזרק מיליליטר אחד כדי לתת כ 0.2 מיליליטר של מים לחולדה דרך הפה כדי למנוע התייבשות לאחר הניתוח. בחר את בעלי החיים על פי הציון הארוך ביותר עבור כתמי TTC או מחקרים מוטוריים חושיים. לאחר הדגירה המוח מבודד עבור כתמים TTC במינוס 20 מעלות צלזיוס של 30 דקות, למקם אותו בתבנית פרוסת מוח עכברוש מקורר מראש.בעזרת להב מקורר מראש, חותכים את המוח לשישה חלקים רצופים בעובי שני מילימטרים. מכתימים את החלקים ב-2%TTC בצלחת תרבות בת שש בארות ודגירה במשך 30 עד 60 דקות ב-37 מעלות צלזיוס תוך כדי רעידות. כל 10 דקות, להפוך את החלקים עד קשה במוח ואת האזורים שאינם מושפעים הם לבנים ואדומים בעליל.מרווים את פרוסות המוח אנכית על הקרטון השחור לפי הסדר מהגב לחזית המוח באמצעות סרגל כדי להבטיח שהאורך הכולל של כל שורה יהיה זהה ויצלם. יבא את התמונה ובחר את פרוסות המוח. בחר קידמה שחורה והקלד Alt Delete כדי למלא את צבע הרקע ולאחר מכן שלוט D כדי לבטל את הבחירה.לבסוף, שמור את התמונה בשולחן העבודה. כדי לנתח את אמצעי האחסון האוטם, פתח תחילה את התוכנה וייבא את התמונה. כדי לערוק משינוי, התאם את הבהירות באמצעות הכלי לשיפור הניגודיות כך שהרקע יהיה שחור.במסנן, השתמש בכלי החציון כדי להסיר את אזורי האור. כדי לחשב את אזור המוח הנורמלי השמאלי, בחר צבע באמצעות פילוח והתאם את הערך של H, S ואני כדי להפריד את פרוסות המוח מהרקע השחור. חזור לגודל הספירה ולחץ על הספירה.לחץ על אובייקטים מפוצלים בעריכה כדי להפריד את המוח מהקו האמצע אשר יבחין באופן אוטומטי באזורי המוח השמאליים והימין. כדי לחשב את אזור המוח האוטם הנכון, יבא את התמונה, התאם את הרקע והסר את אזורי האור כפי שנעשה קודם לכן. בחר גודל ספירה ולחץ על הכלי ציור אובייקטי מיזוג בעריכה.בחר ידנית את האזור האיסכמי ולחץ על ספירה כדי לחשב את האזור האיסכמי. כדי לחשב את אזור המוח הבריא הנכון, ייבא תחילה את התמונה, התאם את הרקע והסר את אזורי האור כפי שנעשה קודם לכן. בחר צבע באמצעות פילוח והתאם את הערך של H, S ואני כדי להפריד את פרוסות המוח הבריאות מהרקע השחור.חזור לגודל הספירה ולחץ על ספירה כדי לחשב אזור זה. לחץ על אובייקטים מפוצלים בעריכה כדי להפריד את המוח מהקו האמצע אשר יבחין באופן אוטומטי באזורי המוח השמאליים והימין. קח חולדות שנבחרו למחקרים מוטוריים חושיים ולמבחן א-סימטריה דו-צדדי ועטוף סרט נייר על החלק הפתי של כל טופר קם שלוש פעמים באמצעות לחץ שווה.עבור כל חולדה, הקלט במצלמה את מספר הפעמים שכל טופר הקדמי יוצר קשר ומסיר את הקלטת תוך חמש דקות, כולל זמני כפות רגליים לא מושפעים ומושפעים. חזור על גלישה והקלטה לאחר 30 דקות ולאחר מכן חשב את הערכים. לבדיקת הליכה ברשת, מניחים את החולדה במרכז פלטפורמת משטח רשת מוגבהת עם פתחים של 2.5 ס"מ רבועים.לדחוף את הירכיים של החולדה מעט כדי לעודד אותו לנוע על פני השטח. באמצעות המצלמה, להקליט את מספר תקלות ברגל שנעשו על ידי ימין מושפע שמאלה הגפיים המושפעות ואת מספר הצעד הכולל בדקה אחת עם המצלמה. לבדיקת מוט רוטור, הגדר את מנגנון עייפות הבר המסתובב של החולדה למהירות של 13 סל"ד על פני תקופה של חמש דקות באמצעות התוכנה התומכת.הפעל את תוכנת המחשב והצב את החולדה על טבעות מוט הרוטור בו זמנית. סיים את המשפט אם החולדה נופלת מהטבעת או אחרי חמש דקות ותקליט את הזמן המסתובב. השאירו את החולדה לנוח במשך 30 דקות, ולאחר מכן לחזור על הבדיקה פעמיים נוספות ולבחור את הערך המרבי כמו הזמן המסתובב האחרון.לבדיקת חבל הרמה, מניחים את כלי חבל ההרמה על שולחן. תן לחולדה לאחוז בחבל עם צלעותיו ולתת לו להיתלות. רשום את זמן התלייה וחשב את הציונים.כאשר נחקרה פגיעה איסכמית במוח הנגרמת על ידי העורק המוחי האמצעי והתרשמות, 300 גרם משקל 3040 בורג חוט וזמן אוטם מוחי של שלוש שעות הוכיחו להיות המתאים ביותר עם אוטם מוחי הגדול ביותר, הציון הארוך ביותר, ואת יחס ההצלחה המודל הגדול ביותר. זה שופר באופן משמעותי בהשוואה לטיפול הקונבנציונלי של 275 גרם משקל, 2636 חוט בורג ותזמן אוטם מוחי של שעתיים. כדי לחקור את מצב ההחלמה של אצ'מיה במוח, התבצעה הכתמת TTC והיא חשפה את נפח אוטם וכיווץ ב 23.4% ביום הראשון לאחר העורק המוחי האמצעי ו reperfusion, 19.6% ביום ה -35, 16.1%על 60 ו 15.7% על 90.לאחר יום אחד של העורק המוחי האמצעי occlusion ו reperfusion, הטיה מוטורית חושית במבחן א-סימטריה דו-צדדית, זמני שגיאת הליכה ברשת מבחן הליכה והרמת ציון חבל במבחן חבל הרמה כל גדל בעוד מוט הרוטור זמן במבחן מוט רוטור ירד המציין את החשיבות של בדיקות אלה בחקר אצ'מיה מוחית חריפה. רק הטיה מוטורית חושית שמרה על הפרעות תפקודיות גדולות באופן תלוי זמן לאחר 35, 60 ו -90 ימים של עורק עורק מוחי באמצע והשלכות. עבור מבחן הליכה ברשת, היו הבדלים משמעותיים של זמני שגיאת הליכה ברשת במשך 35 ו 60 ימים.תוצאות אלו הצביעו על כך ששני הבדיקות הללו עשויות להתאים לבדיקת ההתאוששות בחולדות. על מנת להבטיח הצלחה, הפעולה צריכה להיות עדינה והניתוח צריך להיות יציב. בדיקות התנהגותיות אחרות כגון זיהוי הליכה עשויות להתאים גם הן למודל זה.פיתוח מודל זה יכול לסלול את הדרך לחוקרים לחקור את מכון המוח בשלבי ההתאוששות וההמשך.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

השתלה של תאי ensheathing חוש ריח להערכת החלמה תפקודית לאחר פגיעה עצבית היקפית

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

הכנת פרוסות המוח חריפה באמצעות אופטימיזציה N-מתיל-D-שיטת שחזור מגן glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Utilizing 3D Printing Technology to Merge MRI with Histology: A Protocol for Brain Sectioning

ניצול טכנולוגיית הדפסה 3D כדי מיזוג MRI עם היסטולוגיה: פרוטוקול המוח חתך

Magnetic resonance imaging (MRI) allows for the delineation between normal and abnormal tissue on a macroscopic scale, sampling an entire tissue volume ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

חיתוך חלקי עצב הראייה אצל חולדות: מודל הקים עם גישה חדשה פעיל כדי להעריך משני ניוון של תאי גנגליון

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

הערכה In Vivo של מחסום הדם - מוח שיבוש במודל של עכברים של שבץ איסכמי

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

מודל שבץ פוטוטרומבוטי מועשר בפיברין ורגיש ל-tPA

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

מודל עכברוש של זיהום מוחי EcoHIV

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

מטלות כפולות מוטוריות לניתוח והערכה של הליכה בחולים לאחר שבץ מוחי

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

גירוי דוראלי ובדיקות פריאורביטל פון פריי בעכברים כמודל פרה-קליני של כאב ראש

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

מודל לטיפול באנצפלומיוסיננגיוזיס לאחר שבץ מוחי הנגרם על ידי חסימת עורקים מוחיים באמצע בעכברים

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...