Name: a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats at JoVE.com

Este trabalho foi apoiado pela National Natural Science Foundation of China (81603315, 81603316), Key R & D plano da província de Jiangxi na China (20171ACH80001), projetos de cooperação industrial e acadêmica em faculdades e universidades da província de Fujian em China (2018Y41010011).

O procedimento e o uso de indivíduos animais foram aprovados pelo Instituto Nacional de Saúde para o cuidado e uso de animais de laboratório. Este protocolo é ajustado especificamente para os testes de oclusão/refusão da artéria cerebral média (MCAO/R) e função sensóriomotora.
1. Design experimental e agrupamento
<ol><li>Use um modelo mcao/r de rato para rastrear um método de modelo isquêmico cerebral de rato com lesão cerebral mais grave e maior relação de sucesso do modelo ...

<ol>
	<li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+chemokine-like+factor+1,+a+novel+C-C+chemokine,+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats.">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112 (2014).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1/2+and+p38+MAPK+activation.">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167 (2014).</li><li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+(STAIR)+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke:+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015.">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243 (2017).</li><li>Kumar, A., Aakriti, V., Gupta, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+An+update.">A review on animal models of stroke: An update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>Tong, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enhanced+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+nonhuman+primates+using+an+endovascular+trapping+technique.">An enhanced model of middle cerebral artery occlusion in nonhuman primates using an endovascular trapping technique.</a> AJNR Am. Journal of Neuroradiology. 36, 2354-2359 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9, 541-551 (2014).</li><li>Abrah&#225;m, H., Somogyv&#225;ri-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li><li>Sun, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coumarin+derivatives+protect+against+ischemic+brain+injury+in+rats.">Coumarin derivatives protect against ischemic brain injury in rats.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 67, 39-53 (2013).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Smith, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+site+and+lesion+topology+determine+efficacy+of+a+human+neural+stem+cell+line+in+a+rat+model+of+chronic+stroke.">Implantation site and lesion topology determine efficacy of a human neural stem cell line in a rat model of chronic stroke.</a> Stem Cell. 30, 785-796 (2012).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Forsythia+suspense+extract+with+antioxidant+and+anti-inflammatory+properties+in+a+model+of+rotenone+induced+neurotoxicity.">Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 52, 72-83 (2016).</li><li>Milani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly-arginine+peptides+reduce+infarct+volume+in+a+permanent+middle+cerebral+artery+rat+stroke+model.">Poly-arginine peptides reduce infarct volume in a permanent middle cerebral artery rat stroke model.</a> BMC Neuroscience. 17, 19 (2016).</li><li>DeGraba, T. J., Ostrow, P., Hanson, S., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+performance,+histologic+damage,+and+calcium+influx+in+rats+treated+with+NBQX+after+focal+ischemia.">Motor performance, histologic damage, and calcium influx in rats treated with NBQX after focal ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14, 262-268 (1994).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+preclinical+animal+model+to+assess+brain+recovery+after+acute+stroke.">Validation of a preclinical animal model to assess brain recovery after acute stroke.</a> European Journal of Pharmacology. 835, 75-81 (2018).</li><li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IMM-H004+prevents+toxicity+induced+by+delayed+treatment+of+tPA+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemia+involving+PKA-and+PI3K-dependent+Akt+activation.">IMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and PI3K-dependent Akt activation.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 2107-2118 (2014).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-3-n-butylphthalide+Promotes+Neurogenesis+and+Neuroplasticity+in+Cerebral+Ischemic+Rats.">L-3-n-butylphthalide Promotes Neurogenesis and Neuroplasticity in Cerebral Ischemic Rats.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 21, 733-741 (2015).</li></ol>

Muitos modelos que estabelecem métodos e indicadores comportamentais que são bem utilizados na isquemia cerebral aguda podem não ter mudanças significativas nos estágios de recuperação e sequela da isquemia cerebral16,17. No entanto, o número de pacientes com isquêmico cerebral nos estágios de recuperação e sequela é o maior. É essencial selecionar um modelo animal adequado para os estágios de recuperação e sequela do acidente vascular cerebral d...

A isquemia cerebral é dividida em três etapas com diferentes indicadores pós-AVC: o estágio agudo (dentro de 1 semana), a fase de recuperação (1 semana a 6 meses) e a fase sequelae (mais de 6 meses). Atualmente, a maioria dos estudos se concentra no estágio agudo da isquemia cerebral por causa de seu efeito significativo e modelos de pesquisa multi-relativos1,2,3. No entanto, os estágios de recuperação e sequelas da isquemia cerebral não podem ser ignorados devido à sua complicação a longo prazo das deficiências. Portanto, o objetivo deste estudo é explorar um modelo animal estável, confiável e relativamente simples para pesquisar os estágios de recuperação e sequela da isquemia cerebral.
Entre os muitos modelos experimentais de isquemia cerebral, usamos oclusão da artéria cerebral média (MCAO) via inserção de parafuso de fio na artéria cerebral média direita (MCA). Este modelo é semelhante ao acidente vascular cerebral humano, que pode produzir maiores volumes de infarto, resultar em muitos distúrbios comportamentais relacionados ao acidente vascular cerebral, e pode permitir a refusão de sangue (R), removendo o parafuso de linha4,5,6. MCAO/R também é considerado o modelo animal padrão-ouro da isquemiacerebral 7. Além disso, a gravidade da lesão cerebral depende do diâmetro e do comprimento de inserção do parafuso de linha, a duração da isquemia cerebral e o peso animal (ratos maiores têm cérebros maiores e vasos cerebrais mais grossos)8. Portanto, alterando o tipo de parafuso de linha, o tempo infarto e o peso do rato, um modelo adequado pode ser encontrado para os estágios de recuperação e sequela da isquemia cerebral em ratos MCAO/R. Para validar o modelo de rato, realizamos um estudo de 1 dia, 35 dias, 60 dias e 90 dias do modelo MCAO/R usando experimentos de coloração TTC e função sensóriomotor (um teste bilateral de assimetria, um teste de caminhada em grade, um teste de rotarod e um teste de corda de elevação).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical Microscope</td>
			<td>Leica (Germany)</td>
			<td>S8</td>
			<td>Microscopic operating instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Gellette</td>
			<td>/</td>
			<td>Cutting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Shaking Bed</td>
			<td>Taicang Experimental Equipment Factory</td>
			<td>THZ-C</td>
			<td>To keep the brain sections stained evenly and at a constant temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>700D</td>
			<td>For taking pictures of TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Shaver</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>3000#</td>
			<td>Removal of hair from the neck of rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Hamostatic</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>14 cm</td>
			<td>Using for brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Pro Plus Software</td>
			<td>Media Cybernetics Inc.</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Analyze the infarct volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>217170702</td>
			<td>Anesthetic gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microshear</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Auxiliary skin and muscle anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pphthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Using for cutting the skin of neck</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Brain Slice Mold</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>400 g</td>
			<td>For standard, uniform cutting of brain tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Rotating Bar Fatigue Apparatus</td>
			<td>Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>ZH-300B</td>
			<td>To test the sensorimotor function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anaesthesia Machine</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>ABM3000</td>
			<td>A gas anesthetic machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Thermostat</td>
			<td>Beijing Damida Technology Co., Ltd.</td>
			<td>DM.7-YLS-20A</td>
			<td>To maintain animal body temperature constant during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>16 cm</td>
			<td>Using for decapitate and brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>4-0 / 5-0</td>
			<td>Using for skin and muscle sutures / Using for vascular ligations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Bolt</td>
			<td>Beijing Cinontech Co. Ltd.</td>
			<td>2636/2838/3040/3043-A4</td>
			<td>Blockage of the middle cerebral artery in rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>LOT#BCBP3272V</td>
			<td>Brain section staining reagent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats

O objetivo deste estudo foi estabelecer e validar um modelo de isquemia cerebral animal nos estágios de recuperação e sequela. Um modelo de oclusão/refusão da artéria cerebral média (MCAO/R) em ratos machos sprague-dawley foi escolhido. Ao alterar o peso do rato (260-330 g), o tipo de parafuso de linha (2636/2838/3040/3043) e o tempo de infarto cerebral (2-3 h), uma pontuação maior de Longa, um volume maior de infarto e uma maior relação de sucesso do modelo foram rastreados usando a pontuação da Longa e manchas ttc. A condição ideal do modelo (300 g, 3040 parafuso de linha, 3 h tempo de infarto cerebral) foi adquirida e utilizada em um período de observação de 1-90 dias após a refusão através da avaliação das funções sensório-motoras e volume infarto. Nestas condições, o teste bilateral da assimetria teve uma diferença significativa de 1 a 90 dias, e o teste grid-walking teve uma diferença significativa de 1 a 60 dias; ambas as diferenças podem ser um teste funcional sensorimotor adequado. Assim, a condição mais adequada de um novo modelo de rato nos estágios de recuperação e sequela da isquemia cerebral foi encontrada: 300 g de ratos que se submeteram ao MCAO com um parafuso de linha 3040 para um infarto cerebral de 3 h e depois reperfundido. Os testes funcionais sensorimotores apropriados foram um teste bilateral de assimetria e um teste de caminhada em grade.

Usando o procedimento acima mencionado para um modelo MCAO/R com escore de Longa e coloração TTC, diferentes tratamentos de peso médio (275/300/320 g), tipos de parafuso (2636/2838/3040/3043; Tabela 1) e os tempos isquêmicos (2-3 h) e a refusão de 1 dia foram usados para selecionar para o modelo óptimo da isquemia do cérebro nos ratos. Parâmetros de modelo de 300 g de peso, 3040 parafuso de linha e 3 h de tempo de infarto cerebral foram os mais adequados para o ma...

Watch this Scientific Journal Video about A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats at JoVE.com

A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

O objetivo deste estudo é estabelecer e validar um modelo animal para pesquisa nos estágios de recuperação e sequela da isquemia cerebral testando infarto cerebral e função sensóriomotor após oclusão/refusão da artéria cerebral média (MCAO/R) após 1-90 dias em ratos.

Um modelo pré-clínico para avaliar a recuperação do cérebro após acidente vascular cerebral agudo em ratos

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

Este estudo utiliza um modelo animal estabelecido para pesquisar a recuperação e os estágios de sequelas da isquemia cerebral. As principais vantagens desta técnica são que ela é estável, confiável e relativamente simples. Comece colocando um rato anestesiado em uma mesa de fixação cirúrgica.Durante toda a cirurgia, mantenha a temperatura corporal do rato a 37 graus Celsius em um termostato animal pequeno. Conecte a boca à máscara da máquina de anestesia e confirme anestesia profunda por falta de tensão na extremidade, reflexos da córnea e dor. Fixar os membros do rato na mesa de operação usando ataduras de papel.Com uma máquina de barbear elétrica, retire o casaco do pescoço e esterilize o pescoço com 75% de álcool. Use uma tesoura oftálmica para cortar de dois a três centímetros ao longo da forma longitudinal central do pescoço. E então com fórceps oftálmicos, separe o músculo subcutâneo.Use retrátil caseiro para expor totalmente o campo de visão. Deve-se tomar cuidado para apresentar técnica asséptica adequada para todos os procedimentos cirúrgicos de sobrevivência. A técnica ilustrada posteriormente no vídeo deve ser praticada através de todo o procedimento.Use os micro fórceps para isolar a artéria carótida comum, a artéria carótida externa e a artéria carótida interna. Trabalhando sob o microscópio, use 8-0 suturas para ligadurar a artéria carótida comum com nó duro, artéria carótida externa longe da extremidade do coração com nó duro, artéria carótida interna com nó solto e, em seguida, para forrar a artéria carótida externa perto da extremidade do coração. Usando micro tesoura, corte uma pequena abertura na artéria carótida externa e insira suavemente um parafuso de rosca.Ligate a sutura da artéria carótida externa que é nó fino e solto e corte a artéria carótida externa. Solte o nó solto da artéria carótida interna e continue inserindo o parafuso do rosca até o início da artéria cerebral média marcada com a sutura e corte o parafuso de rosca exposto. Após o tempo isquêmico ser atingido após duas a três horas, fixe a fratura da artéria carótida externa usando micro fórceps e puxe suavemente o parafuso do rosca com outro micro fórceps.Depois de retirar completamente a extremidade dianteira do parafuso da artéria carótida interna, ligar a artéria carótida externa que foi forrada com 8-0 sutura e, em seguida, remova o parafuso de rosca completamente. Depois de afrouxar a artéria carótida comum, dab aproximadamente 50.000 unidades de penicilina em pó de sódio na superfície da ferida para evitar infecções. Use quatro suturas para suturar músculos subcutâneos e pele.Depois de colocar o rato de volta à gaiola, use uma seringa de um mililitro para dar aproximadamente 0,2 mililitros de água ao rato oralmente para evitar a desidratação pós-operatória. Escolha os animais de acordo com a pontuação mais longa para coloração TTC ou estudos motores sensoriais. Depois de incubar o cérebro isolado para coloração TTC a menos 20 graus Celsius de 30 minutos, coloque-o em um molde de fatia cerebral de rato pré-resfriado.Usando uma lâmina pré-resfriada, corte o cérebro em seis seções consecutivas de dois milímetros de espessura. Colorique as seções com 2%TTC em uma placa de cultura de seis poços e incubar por 30 a 60 minutos a 37 graus Celsius enquanto treme. A cada 10 minutos, gire as seções até que a isquemia cerebral e as áreas não afetadas estejam visivelmente brancas e vermelhas.Forrar o cérebro corta verticalmente o papelão preto para que de trás até a frente do cérebro usando uma régua para garantir que o comprimento total de cada linha seja o mesmo e tire fotos. Importe a foto e selecione as fatias cerebrais. Selecione o primeiro plano preto e digite Alt Delete para preencher a cor de fundo e, em seguida, controle D para desmarcar.Finalmente, salve a imagem na área de trabalho. Para analisar o volume de infarto, primeiro abra o software e importe a foto. Para desertar a modificação, ajuste o brilho com a ferramenta de aprimoramento de contraste para que o fundo fique preto.No filtro, use a ferramenta mediana para remover os destaques. Para calcular a área normal do cérebro esquerdo, selecione a cor usando segmentação e ajuste o valor de H, S e eu para separar as fatias cerebrais do fundo preto. Retorne ao tamanho da contagem e clique na contagem.Clique em objetos divididos em edição para separar o cérebro da linha média que irá distinguir automaticamente as áreas cerebrais esquerda e direita. Para calcular a área cerebral infarto certa, importe a imagem, ajuste o plano de fundo e remova os destaques como feito anteriormente. Selecione o tamanho da contagem e clique na ferramenta desenhar objetos de mesclagem na edição.Selecione manualmente a área isquêmica e clique na contagem para calcular a área isquêmica. Para calcular a área cerebral saudável certa, primeiro importe a imagem, ajuste o fundo e remova os destaques como feito anteriormente. Selecione a cor usando segmentação e ajuste o valor de H, S e eu para separar as fatias cerebrais saudáveis do fundo preto.Retorne ao tamanho da contagem e clique na contagem para calcular esta área. Clique em objetos divididos em edição para separar o cérebro da linha média que irá distinguir automaticamente as áreas cerebrais esquerda e direita. Leve os ratos escolhidos para estudos motores sensoriais e para teste bilateral de assimemetria e enrole fita de papel na parte safena de cada garra frontal três vezes usando pressão igual.Para cada rato, grave com a câmera o número de vezes que cada arranhão dianteira entra em contato e remove a fita dentro de cinco minutos, incluindo tempos de patas não afetados e afetados. Repita o embrulho e a gravação após 30 minutos e, em seguida, calcule os valores. Para o teste de caminhada na grade, coloque o rato no centro de uma plataforma de superfície de grade elevada com aberturas de 2,5 centímetros quadrados.Empurre levemente os quadris do rato para incentivá-lo a se mover pela superfície. Usando a câmera, regise o número de falhas nos pés feitas pela direita não afetada e membros afetados e o número total do passo em um minuto com a câmera. Para o teste da haste do rotor, configure o aparelho de fadiga da barra giratória de rato a uma velocidade de 13 RPM durante um período de cinco minutos usando o software de suporte.Inicie o programa de computador e coloque o rato nos anéis da haste do rotor ao mesmo tempo. Termine o teste se o rato cair do ringue ou depois de cinco minutos e registrar o tempo de rotação. Deixe o rato descansar por 30 minutos, depois repita o teste mais duas vezes e escolha o valor máximo como o último tempo de rotação.Para o teste da corda de elevação, coloque o instrumento de corda de elevação sobre uma mesa. Que o rato segure a corda com seus membros dianteiros e deixe-a pendurada. Regissei o tempo de enforcamento e calcule as pontuações.Quando foi estudada lesão isquêmica cerebral induzida pela oclusão e reperfusão da artéria cerebral média, 300 gramas de parafuso de linha de 3040 e tempo de infarto cerebral de três horas provou ser o mais adequado com o maior infarto cerebral, maior pontuação mais longa e maior razão de sucesso do modelo. Isso foi significativamente melhorado em comparação com o tratamento convencional de 275 gramas de peso, parafuso de 2636 fios e tempo de infarto cerebral de duas horas. Para estudar o estado de recuperação da isquemia cerebral, foi realizada a coloração TTC e revelou o volume de infarto e redução em 23,4% no primeiro dia após a oclusão e reperfusão da artéria cerebral média, 19,6% no 35º dia, 16,1% no dia 60 e 15,7% no dia 90.Após um dia de oclusão e reperfusão da artéria cerebral média, viés motor sensorial no teste bilateral de assymetria, tempos de erro de caminhada na grade no teste de caminhada da grade e escore de corda de elevação no teste de corda de elevação são todos aumentados enquanto o tempo da haste do rotor no teste da haste do rotor diminuiu indicando a importância desses testes no estudo da isquemia cerebral aguda. Apenas o viés motor sensorial manteve grandes distúrbios funcionais com uma forma dependente do tempo após 35, 60 e 90 dias de oclusão e reperfusão da artéria cerebral média. Para o teste de caminhada na grade, houve diferenças significativas dos tempos de erro de caminhada na grade durante 35 e 60 dias.Esses resultados indicaram que esses dois testes poderiam ser adequados para testar a recuperação em ratos. Para garantir o sucesso, a ação deve ser suave e a operação deve ser constante. Outros testes comportamentais, como a detecção de marcha, também podem ser adequados para este modelo.O desenvolvimento desse modelo poderia abrir caminho para os pesquisadores explorarem a isquemia cerebral nos estágios de recuperação e sequelas.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Transplantation of Olfactory Ensheathing Cells to Evaluate Functional Recovery after Peripheral Nerve Injury

Transplante de células olfativas Ensheathing para avaliar a recuperação funcional após a lesão do nervo periférico

Olfactory ensheathing cells (OECs) are neural crest cells which allow growth and regrowth of the primary olfactory neurons. Indeed, the primary olfactory ...

Neurociência

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparation of Acute Brain Slices Using an Optimized N-Methyl-D-glucamine Protective Recovery Method

Preparação de fatias de cérebro aguda usando um otimizado N-metil-D-método de proteção de recuperação glucamine

This protocol is a practical guide to the N-methyl-D-glucamine (NMDG) protective recovery method of brain slice preparation. Numerous recent studies have ...

Utilizing 3D Printing Technology to Merge MRI with Histology: A Protocol for Brain Sectioning

Utilizando tecnologia de impressão 3D para mesclar MRI com Histologia: Um protocolo para o Cérebro Seccionamento

Magnetic resonance imaging (MRI) allows for the delineation between normal and abnormal tissue on a macroscopic scale, sampling an entire tissue volume ...

Partial Optic Nerve Transection in Rats: A Model Established with a New Operative Approach to Assess Secondary Degeneration of Retinal Ganglion Cells

Transecção parcial nervo óptico em ratos: um modelo estabelecido com uma nova abordagem operativa para avaliar secundária degeneração das células ganglionares da retina

Previous studies have shown that the secondary degeneration of retinal ganglion cells (RGCs) occurs commonly in glaucoma. Partial optic nerve transection ...

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

An In Vivo Assessment of Blood-Brain Barrier Disruption in a Rat Model of Ischemic Stroke

Uma avaliação In Vivo do rompimento da barreira hemato - encefálica em um modelo do rato de acidente vascular cerebral isquêmico

Ischemic stroke leads to vasogenic cerebral edema and subsequent primary brain injury, which is mediated through destruction of the blood-brain barrier ...

A Fibrin-Enriched and tPA-Sensitive Photothrombotic Stroke Model

Modelo de AVC fototrombótico enriquecido com fibrina e sensível ao tPA

An ideal thromboembolic stroke model requires certain properties, including relatively simple surgical procedures with low mortality, a consistent ...

A Rat Model of EcoHIV Brain Infection

Um modelo de rato de infecção cerebral ecohiv

It has been well studied that the EcoHIV infected mouse model is of significant utility in investigating HIV associated neurological complications. ...

Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Dupla tarefa motora para análise e avaliação da marcha em pacientes pós-AVE

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Estimulação dural e teste periorbital von Frey em camundongos como um modelo pré-clínico de dor de cabeça

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

Um modelo para o tratamento da encefalomiossinangiose após acidente vascular cerebral induzido pela oclusão da artéria cerebral média em camundongos

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...