Name: a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats
Uploaded: 2019-11-06T13:00:00
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Este trabajo fue apoyado por la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (81603315, 81603316), Plan clave de I+D de la provincia de Jiangxi en China (20171ACH80001), proyectos de cooperación industrial y académica en colegios y universidades de la provincia de Fujian en China (2018Y41010011).

El procedimiento y el uso de sujetos animales han sido aprobados por el Instituto Nacional de Salud para el cuidado y uso de animales de laboratorio. Este protocolo se ajusta específicamente para las pruebas de oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media (MCAO/R) y la función sensorimotor.
1. Diseño experimental y agrupación
<ol><li>Utilice un modelo MCAO/R de rata para analizar un método de modelo isquémico de cerebro de rata con lesión cerebral más grave y una mayor relaci?...

<ol>
	<li>Kong, L. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neutralization+of+chemokine-like+factor+1,+a+novel+C-C+chemokine,+protects+against+focal+cerebral+ischemia+by+inhibiting+neutrophil+infiltration+via+MAPK+pathways+in+rats.">Neutralization of chemokine-like factor 1, a novel C-C chemokine, protects against focal cerebral ischemia by inhibiting neutrophil infiltration via MAPK pathways in rats.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 112 (2014).</li><li>Jiang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effects+of+bilobalide+on+cerebral+ischemia+and+reperfusion+injury+are+associated+with+inhibition+of+pro-inflammatory+mediator+production+and+down-regulation+of+JNK1/2+and+p38+MAPK+activation.">Neuroprotective effects of bilobalide on cerebral ischemia and reperfusion injury are associated with inhibition of pro-inflammatory mediator production and down-regulation of JNK1/2 and p38 MAPK activation.</a> Journal of Neuroinflammation. 11, 167 (2014).</li><li>Thomas, A., Detilleux, J., Flecknell, P., Sandersen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+Stroke+Therapy+Academic+Industry+Roundtable+(STAIR)+Guidelines+on+Peri-Anesthesia+Care+for+Rat+Models+of+Stroke:+A+Meta-Analysis+Comparing+the+Years+2005+and+2015.">Impact of Stroke Therapy Academic Industry Roundtable (STAIR) Guidelines on Peri-Anesthesia Care for Rat Models of Stroke: A Meta-Analysis Comparing the Years 2005 and 2015.</a> PLoS One. 12, e0170243 (2017).</li><li>Kumar, A., Aakriti, V., Gupta, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+animal+models+of+stroke:+An+update.">A review on animal models of stroke: An update.</a> Brain Research Bulletin. 122, 35-44 (2016).</li><li>Tong, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+enhanced+model+of+middle+cerebral+artery+occlusion+in+nonhuman+primates+using+an+endovascular+trapping+technique.">An enhanced model of middle cerebral artery occlusion in nonhuman primates using an endovascular trapping technique.</a> AJNR Am. Journal of Neuroradiology. 36, 2354-2359 (2015).</li><li>Li, F., Omae, T., Fisher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+hyperthermia+and+its+mechanism+in+the+intraluminal+suture+middle+cerebral+artery+occlusion+model+of+rats.">Spontaneous hyperthermia and its mechanism in the intraluminal suture middle cerebral artery occlusion model of rats.</a> Stroke. 30, 2464-2470 (1999).</li><li>Herson, P. S., Traystman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+stroke:+translational+potential+at+present+and+in+2050.">Animal models of stroke: translational potential at present and in 2050.</a> Future Neurology. 9, 541-551 (2014).</li><li>Abrah&#225;m, H., Somogyv&#225;ri-Vigh, A., Maderdrut, J. L., Vigh, S., Arimura, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filament+size+influences+temperature+changes+and+brain+damage+following+middle+cerebral+artery+occlusion+in+rats.">Filament size influences temperature changes and brain damage following middle cerebral artery occlusion in rats.</a> Exp. Brain Res. 142, 131-138 (2002).</li><li>Sun, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coumarin+derivatives+protect+against+ischemic+brain+injury+in+rats.">Coumarin derivatives protect against ischemic brain injury in rats.</a> European Journal of Medicinal Chemistry. 67, 39-53 (2013).</li><li>Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Smith, E. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+site+and+lesion+topology+determine+efficacy+of+a+human+neural+stem+cell+line+in+a+rat+model+of+chronic+stroke.">Implantation site and lesion topology determine efficacy of a human neural stem cell line in a rat model of chronic stroke.</a> Stem Cell. 30, 785-796 (2012).</li><li>Zhang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+Forsythia+suspense+extract+with+antioxidant+and+anti-inflammatory+properties+in+a+model+of+rotenone+induced+neurotoxicity.">Protective effects of Forsythia suspense extract with antioxidant and anti-inflammatory properties in a model of rotenone induced neurotoxicity.</a> Neurotoxicology. 52, 72-83 (2016).</li><li>Milani, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly-arginine+peptides+reduce+infarct+volume+in+a+permanent+middle+cerebral+artery+rat+stroke+model.">Poly-arginine peptides reduce infarct volume in a permanent middle cerebral artery rat stroke model.</a> BMC Neuroscience. 17, 19 (2016).</li><li>DeGraba, T. J., Ostrow, P., Hanson, S., Grotta, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Motor+performance,+histologic+damage,+and+calcium+influx+in+rats+treated+with+NBQX+after+focal+ischemia.">Motor performance, histologic damage, and calcium influx in rats treated with NBQX after focal ischemia.</a> Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 14, 262-268 (1994).</li><li>Liu, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+a+preclinical+animal+model+to+assess+brain+recovery+after+acute+stroke.">Validation of a preclinical animal model to assess brain recovery after acute stroke.</a> European Journal of Pharmacology. 835, 75-81 (2018).</li><li>Zuo, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IMM-H004+prevents+toxicity+induced+by+delayed+treatment+of+tPA+in+a+rat+model+of+focal+cerebral+ischemia+involving+PKA-and+PI3K-dependent+Akt+activation.">IMM-H004 prevents toxicity induced by delayed treatment of tPA in a rat model of focal cerebral ischemia involving PKA-and PI3K-dependent Akt activation.</a> European Journal of Neuroscience. 39, 2107-2118 (2014).</li><li>Yang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-3-n-butylphthalide+Promotes+Neurogenesis+and+Neuroplasticity+in+Cerebral+Ischemic+Rats.">L-3-n-butylphthalide Promotes Neurogenesis and Neuroplasticity in Cerebral Ischemic Rats.</a> CNS Neuroscience &amp; Therapeutics. 21, 733-741 (2015).</li></ol>

Muchos modelos que establecen métodos e indicadores de comportamiento que se utilizan bien en la isquemia cerebral aguda pueden no tener cambios significativos en las etapas de recuperación y sequela de la isquemia cerebral16,17. Sin embargo, el número de pacientes con isquémica cerebral en las etapas de recuperación y sequela es el mayor. Es esencial seleccionar un modelo animal adecuado para las etapas de recuperación y secuencia ción del accidente cereb...

La isquemia cerebral se divide en tres etapas con diferentes indicadores post-accidente cerebrovascular: la etapa aguda (dentro de 1 semana), la etapa de recuperación (1 semana a 6 meses) y la etapa de secuencias (más de 6 meses). Actualmente, la mayoría de los estudios se centran en la etapa aguda de la isquemia cerebral debido a su efecto significativo y modelos de investigación multifamiliar1,2,3. Sin embargo, las etapas de recuperación y secuencias de la isquemia cerebral no pueden ser ignoradas debido a su complicación a largo plazo de las discapacidades. Por lo tanto, el propósito de este estudio es explorar un modelo animal estable, confiable y relativamente simple para investigar las etapas de recuperación y secuencia de la isquemia cerebral.
Entre los muchos modelos experimentales de isquemia cerebral, utilizamos oclusión de la arteria cerebral media (MCAO) a través de la inserción del perno de rosca en la arteria cerebral media derecha (MCA). Este modelo es similar al accidente cerebrovascular humano, que puede producir mayores volúmenes de infarto, dar lugar a muchos trastornos conductuales relacionados con el accidente cerebrovascular, y puede permitir la reperfusión de sangre (R) mediante la eliminación del perno de rosca4,5,6. MCAO/R también se considera el modelo animal estándar de oro de la isquemiacerebral 7. Además, la gravedad de la lesión cerebral depende del diámetro y la longitud de inserción del perno de rosca, la duración de la isquemia cerebral y el peso animal (las ratas más grandes tienen cerebros más grandes y vasos cerebrales más gruesos)8. Por lo tanto, cambiando el tipo de perno de rosca, el tiempo de infarto y el peso de la rata, se puede encontrar un modelo adecuado para las etapas de recuperación y secuencia de la isquemia cerebral en ratas MCAO/R. Para validar el modelo de rata, realizamos un estudio de 1 día, 35 días, 60 días y 90 días del modelo MCAO/R utilizando experimentos de tinción TTC y función sensorimotor (una prueba de asimetría bilateral, una prueba de caminar en la red, una prueba de rotarod y una prueba de cuerda de elevación).

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anatomical Microscope</td>
			<td>Leica (Germany)</td>
			<td>S8</td>
			<td>Microscopic operating instrument</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Blade</td>
			<td>Gellette</td>
			<td>/</td>
			<td>Cutting brain sections</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Constant Temperature Shaking Bed</td>
			<td>Taicang Experimental Equipment Factory</td>
			<td>THZ-C</td>
			<td>To keep the brain sections stained evenly and at a constant temperature</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital Camera</td>
			<td>Canon</td>
			<td>700D</td>
			<td>For taking pictures of TTC staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric Shaver</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>3000#</td>
			<td>Removal of hair from the neck of rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps Hamostatic</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>14 cm</td>
			<td>Using for brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image Pro Plus Software</td>
			<td>Media Cybernetics Inc.</td>
			<td>6.0</td>
			<td>Analyze the infarct volume</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>RWD Life Science</td>
			<td>217170702</td>
			<td>Anesthetic gas</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microshear</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Vascular micromanipulation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic Forceps</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Auxiliary skin and muscle anatomy</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pphthalmic Scissors</td>
			<td>Shanghai Jinzhong Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>10 cm</td>
			<td>Using for cutting the skin of neck</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Brain Slice Mold</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>400 g</td>
			<td>For standard, uniform cutting of brain tissue</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat Rotating Bar Fatigue Apparatus</td>
			<td>Anhui Zhenghua Biological Instrument and Equipment Co., Ltd.</td>
			<td>ZH-300B</td>
			<td>To test the sensorimotor function</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Anaesthesia Machine</td>
			<td>Shanghai Yuyan Scientific Instruments Co., Ltd.</td>
			<td>ABM3000</td>
			<td>A gas anesthetic machine</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Animal Thermostat</td>
			<td>Beijing Damida Technology Co., Ltd.</td>
			<td>DM.7-YLS-20A</td>
			<td>To maintain animal body temperature constant during operation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Scissors</td>
			<td>Shanghai Medical device Co., Ltd.</td>
			<td>16 cm</td>
			<td>Using for decapitate and brain removing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suture</td>
			<td>Shanghai Jinhuan Medical Devices Co., Ltd.</td>
			<td>4-0 / 5-0</td>
			<td>Using for skin and muscle sutures / Using for vascular ligations</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thread Bolt</td>
			<td>Beijing Cinontech Co. Ltd.</td>
			<td>2636/2838/3040/3043-A4</td>
			<td>Blockage of the middle cerebral artery in rats</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>5-triphenyl-2H-tetrazolium chloride (TTC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>LOT#BCBP3272V</td>
			<td>Brain section staining reagent</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a preclinical model to assess brain recovery after acute stroke in rats

El propósito de este estudio fue establecer y validar un modelo de isquemia cerebral animal en las etapas de recuperación y sequela. Se eligió un modelo de oclusión/reperfusión de arteria súbdito súbdito súbdeo medio (MCAO/R) en ratas macho Sprague-Dawley. Al cambiar el peso de la rata (260-330 g), el tipo de perno de rosca (2636/2838/3040/3043) y el tiempo de infarto cerebral (2-3 h), una puntuación de Longa más alta, un volumen de infarto más grande y una mayor proporción de éxito del modelo se examinaron utilizando la puntuación de Longa y la tinción TTC. La condición óptima del modelo (300 g, perno de rosca 3040, tiempo de infarto cerebral de 3 horas) se adquirió y utilizó en un período de observación de 1-90 días después de la perfusión a través de la evaluación de las funciones del sensorimotor y el volumen del infarto. En estas condiciones, la prueba de asimetría bilateral tuvo una diferencia significativa de 1 a 90 días, y la prueba de caminar en la red tuvo una diferencia significativa de 1 a 60 días; ambas diferencias podrían ser una prueba funcional sensorimotor adecuada. Así, se encontró la condición más adecuada de un modelo de rata novedoso en las etapas de recuperación y secuencia de la isquemia cerebral: 300 g de ratas que se sometieron a MCAO con un perno de hilo 3040 para un infarto cerebral de 3 horas y luego reperfused. Las pruebas funcionales sensorimotores apropiadas fueron una prueba bilateral de asimetría y una prueba de caminar en la red.

Utilizando el procedimiento antes mencionado para un modelo MCAO/R con puntuación de Longa y tinción TTC, diferentes tratamientos de peso medio (275/300/320 g), tipos de pernos (2636/2838/3040/3043; Tabla 1) y los tiempos isquémicos (2-3 h) y la reperfusión de 1 día se utilizaron para detectar el modelo óptimo de isquemia cerebral en ratas. Los parámetros del modelo de 300 g de peso, perno de rosca 3040 y tiempo de infarto cerebral de 3 horas fueron los más adecua...

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A Preclinical Model to Assess Brain Recovery After Acute Stroke in Rats

El propósito de este estudio es establecer y validar un modelo animal para la investigación en las etapas de recuperación y secuenciación de la isquemia cerebral mediante la prueba de infarto cerebral y la función sensorimotor después de la oclusión/reperfusión de la arteria cerebral media (MCAO/R) después de 1-90 días en ratas.

Un modelo preclínico para evaluar la recuperación cerebral después de un accidente cerebrovascular agudo en ratas

The purpose of this study was to establish and validate an animal brain ischemia model in the recovery and sequela stages. A middle cerebral artery ...

Este estudio utiliza un modelo animal establecido para investigar la recuperación y las etapas de las secuelas de la isquemia cerebral. Las principales ventajas de esta técnica son que es estable, fiable y relativamente simple. Comience colocando una rata anestesiada en una mesa de fijación quirúrgica.A lo largo de la cirugía, mantener la temperatura corporal de la rata a 37 grados Celsius en un pequeño termostato animal. Conecte la boca a la mascarilla de la máquina de anestesia y confirme la anestesia profunda por falta de tensión en las extremidades, reflejos corneales y dolor. Fije las extremidades de la rata a la mesa de operaciones con vendas de papel.Con una afeitadora eléctrica, retire la capa del cuello y esterilice el cuello con 75% de alcohol. Usa tijeras oftálmicas para cortar de dos a tres centímetros a lo largo de la forma longitudinal central del cuello. Y luego con fórceps oftálmicos, separa el músculo subcutáneo.Utilice retractor casero para exponer completamente el campo de visión. Se debe tener cuidado de presentar la técnica aséptica adecuada para todos los procedimientos quirúrgicos de supervivencia. La técnica ilustrada más adelante en el video debe ser practicada a través de todo el procedimiento.Utilice los micro fórceps para aislar la arteria carótida común, la arteria carótida externa y la arteria carótida interna. Trabajando bajo el microscopio, use 8-0 suturas para ligar la arteria carótida común con nudo duro, arteria carótida externa lejos del extremo del corazón con nudo duro, arteria carótida interna con nudo suelto y luego para forrar la arteria carótida externa cerca del extremo del corazón. Usando tijeras micro, corte una pequeña abertura en la arteria carótida externa e inserte suavemente un perno de rosca.Ligar la sutura de la arteria carótida externa que es nudo delgado y suelto y cortar la arteria carótida externa. Afloje el nudo suelto de la arteria carótida interna y continúe insertando el perno de rosca al principio de la arteria cerebral media marcada con la sutura y corte el perno de rosca expuesto. Después de alcanzar el tiempo isquémico después de dos a tres horas, fije la fractura de la arteria carótida externa usando micro fórceps y tire suavemente del perno del hilo con otro microppps.Después de retirar completamente el extremo frontal del perno de rosca de la arteria carótida interna, ligar la arteria carótida externa que ha sido forrada con 8-0 sutura y luego retire el perno de rosca por completo. Después de aflojar la arteria carótida común, déjelo aproximadamente 50.000 unidades de polvo de penicilina sódica en la superficie de la herida para prevenir la infección. Usa cuatro suturas para suturar los músculos subcutáneos y la piel.Después de colocar la rata de vuelta a la jaula, utilice una jeringa de un mililitro para dar aproximadamente 0,2 mililitros de agua a la rata por vía oral para evitar la deshidratación postoperatoria. Elija los animales de acuerdo con la puntuación más larga para la tinción TTC o estudios motores sensoriales. Después de incubar el cerebro aislado para la tinción TTC a menos 20 grados Celsius de 30 minutos, colóquelo en un molde pre-enfriado de la rebanada de cerebro de rata.Usando una hoja preenfriada, corta el cerebro en seis secciones consecutivas de dos milímetros de grosor. Manchar las secciones con 2%TTC en una placa de cultivo de seis pozos e incubar durante 30 a 60 minutos a 37 grados Celsius mientras agita. Cada 10 minutos, voltea las secciones hasta que la isquemia cerebral y las áreas no afectadas sean visiblemente blancas y rojas.Alinee las rebanadas cerebrales verticalmente en el cartón negro en orden desde la parte posterior hasta la parte delantera del cerebro usando una regla para asegurarse de que la longitud total de cada línea es la misma y tomar fotos. Importa la foto y selecciona las rebanadas cerebrales. Seleccione primer plano negro y escriba Alt Supr para rellenar el color de fondo y, a continuación, Control D para anular la selección.Por último, guarde la imagen en el escritorio. Para analizar el volumen de infarto, abra primero el software e importe la foto. Para modificar el defecto, ajuste el brillo con la herramienta de mejora de contraste para que el fondo sea negro.En el filtro, utilice la herramienta mediana para eliminar los resaltados. Para calcular el área normal izquierda del cerebro, seleccione el color usando la segmentación y ajuste el valor de H, S y I para separar las rebanadas cerebrales del fondo negro. Vuelva al tamaño del recuento y haga clic en el recuento.Haga clic en los objetos divididos en la edición para separar el cerebro de la línea media que distinguirá automáticamente las áreas del cerebro izquierdo y derecho. Para calcular el área cerebral de infarto derecha, importe la imagen, ajuste el fondo y elimine los resaltados como se hizo anteriormente. Seleccione el tamaño del recuento y haga clic en la herramienta Dibujar objetos de fusión en la edición.Seleccione manualmente el área isquémica y haga clic en el recuento para calcular el área isquémica. Para calcular el área del cerebro saludable correcta, primero importe la imagen, ajuste el fondo y elimine los resaltados como se hizo anteriormente. Seleccione el color usando la segmentación y ajuste el valor de H, S y I para separar las rebanadas sanas del cerebro del fondo negro.Vuelva al tamaño del conteo y haga clic en el recuento para calcular esta área. Haga clic en los objetos divididos en la edición para separar el cerebro de la línea media que distinguirá automáticamente las áreas del cerebro izquierdo y derecho. Tome ratas elegidas para estudios motores sensoriales y para la prueba de asimetría bilateral y envuelva la cinta de papel en la parte safenosa de cada garra de proa tres veces utilizando la misma presión.Para cada rata, grabe con la cámara el número de veces que cada garra delantera se pone en contacto y retira la cinta en un plazo de cinco minutos, incluidos los tiempos de pata no afectados y afectados. Repita el ajuste y la grabación después de 30 minutos y, a continuación, calcule los valores. Para la prueba de caminar por la rejilla, coloque la rata en el centro de una plataforma de superficie de rejilla elevada con aberturas de 2,5 centímetros cuadrados.Empuje ligeramente las caderas de la rata para animarla a moverse a través de la superficie. Usando la cámara, grabe el número de fallas en los pies hechas por las extremidades afectadas derechas y las izquierdas y el número de paso total en un minuto con la cámara. Para la prueba de la varilla del rotor, configure el aparato de fatiga de la barra giratoria de la rata a una velocidad de 13 RPM durante un período de cinco minutos utilizando el software de soporte.Inicie el programa informático y coloque la rata en los anillos de la varilla del rotor al mismo tiempo. Finalice el ensayo si la rata se cae del anillo o después de cinco minutos y registre el tiempo de rotación. Deje que la rata descanse durante 30 minutos, luego repita la prueba dos veces más y elija el valor máximo como el último tiempo de rotación.Para levantar la prueba de cuerda, coloque el instrumento de cuerda de elevación en un escritorio. Haga que la rata agarre la cuerda con sus extremidades delanteras y déjela colgar. Registre el tiempo de suspensión y calcule las puntuaciones.Cuando se estudió la lesión isquémica cerebral inducida por la oclusión de la arteria cerebral media y la reperfusión, el perno de hilo de 300 gramos de 3040 gramos y el tiempo de infarto cerebral de tres horas demostraron ser los más adecuados con el infarto cerebral más grande, la puntuación más larga y la mayor proporción de éxito del modelo. Esto se mejoró significativamente en comparación con el tratamiento convencional de 275 gramos de peso, 2636 perno de rosca y tiempo de infarto cerebral de dos horas. Para estudiar el estado de recuperación de la isquemia cerebral, se realizó la tinción TTC y reveló el volumen de infarto y contracción en 23,4% el primer día después de la oclusión y reperfusión de la arteria cerebral media, 19,6% en el día 35, 16,1% en el 60 y 15,7% en el 90o día.Después de un día de oclusión y reperfusión de la arteria cerebral media, el sesgo motor sensorial en la prueba de asimetría bilateral, los tiempos de error de marcha de la rejilla en la prueba de marcha de la rejilla y la puntuación de la cuerda de elevación en la prueba de cuerda de elevación se incrementan, mientras que el tiempo de la varilla del rotor en la prueba de la barra del rotor disminuyó, lo que indica la importancia de estas pruebas en el estudio de la isquemia cerebral aguda. Sólo el sesgo motoro sensorial mantuvo grandes trastornos funcionales de manera dependiente del tiempo después de 35, 60 y 90 días de oclusión y reperfusión de la arteria cerebral media. Para la prueba de caminar en la cuadrícula, hubo diferencias significativas de los tiempos de error de caminar de la cuadrícula durante 35 y 60 días.Estos resultados indicaron que estas dos pruebas podrían ser adecuadas para probar la recuperación en ratas. Con el fin de garantizar el éxito, la acción debe ser suave y la operación debe ser estable. Otras pruebas conductuales, como la detección de la marcha, también pueden ser adecuadas para este modelo.El desarrollo de este modelo podría allanar el camino para que los investigadores exploren la isquemia cerebral en las etapas de recuperación y secuelas.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

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Neurociencias

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Motor Dual-Tasks for Gait Analysis and Evaluation in Post-Stroke Patients

Tareas duales motoras para el análisis y la evaluación de la marcha en pacientes con accidente cerebrovascular

Eighteen stroke patients were recruited for this study involving the evaluation of cognition and walking ability and multitask gait analysis. Multitask ...

Dural Stimulation and Periorbital von Frey Testing in Mice As a Preclinical Model of Headache

Estimulación dural y pruebas periorbitarias de von Frey en ratones como modelo preclínico de dolor de cabeza

The cranial meninges, comprised of the dura mater, arachnoid, and pia mater, are thought to primarily serve structural functions for the nervous system.  ...

A Model for Encephalomyosynangiosis Treatment after Middle Cerebral Artery Occlusion-Induced Stroke in Mice

Un modelo para el tratamiento de la encefalomiosinangiosis después del accidente cerebrovascular inducido por la oclusión de la arteria cerebral media en ratones

There is no effective treatment available for most patients suffering with ischemic stroke, making development of novel therapeutics imperative. The ...