Name: an intestine/liver microphysiological system for drug pharmacokinetic and toxicological assessment
Uploaded: 2020-12-03T12:30:00
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우리는 크리스티 구겐 -기요루조 박사, 단위 522 INSERM에서 박사 필립 그리폰과 생물 물질의 사용을위한 단위 271 INSERM에서 박사 크리스티안 트레포에 감사하고 학술 연구를 수행하기 위해 우리를 위해 다음 사용할 수 있도록.

1. 2-OC에서 재배에 대한 조직 등가물의 생산
<ol><li>소장 장벽 동등한 생산<ol>
<li>장 등가 매체를 사용하여 Caco-2 및 HT-29 세포를 유지하십시오: DMEM은 10% FBS, 1% 페니실린 및 연쇄상 구균증으로 보충되고, 1% 비필수 아미노산, 이는 이 원고에서 "DMEM S"로 명명된다.</li>
		<li>매체를 제거하고, 1x DPBS로 두 번 세척하고 세포 배양 플라스크에서 자란 카코-2 세포를 해리하기 위해 0.25% 트립신/EDTA의 8mL을 추가?...

<ol>
	<li>Zhang, D., Luo, G., Ding, X., Lu, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+experimental+models+of+drug+metabolism+and+disposition+in+drug+discovery+and+development.">Preclinical experimental models of drug metabolism and disposition in drug discovery and development.</a> Acta Pharmaceutica Sinica B. 2 (6), 549-561 (2012).</li><li>Hynds, R. E., Giangreco, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+relevance+of+human+stem+cell-derived+organoid+models+for+epithelial+translational+medicine.">The relevance of human stem cell-derived organoid models for epithelial translational medicine.</a> Stem Cells. 31 (3), 417-422 (2013).</li><li>Sivaraman, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Microscale+In+vitro+Physiological+Model+of+the+Liver:+Predictive+Screens+for+Drug+Metabolism+and+Enzyme+Induction.">A Microscale In vitro Physiological Model of the Liver: Predictive Screens for Drug Metabolism and Enzyme Induction.</a> Current Drug Metabolism. 6 (6), 569-591 (2005).</li><li>Dehne, E. M., Hasenberg, T., Marx, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ascendance+of+microphysiological+systems+to+solve+the+drug+testing+dilemma.">The ascendance of microphysiological systems to solve the drug testing dilemma.</a> Future Science OA. 3 (2), 185 (2017).</li><li>Oleaga, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-Organ+toxicity+demonstration+in+a+functional+human+in+vitro+system+composed+of+four+organs.">Multi-Organ toxicity demonstration in a functional human in vitro system composed of four organs.</a> Scientific Reports. 6, 20030 (2016).</li><li>Maschmeyer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+four-organ-chip+for+interconnected+long-term+co-culture+of+human+intestine,+liver,+skin+and+kidney+equivalents.">A four-organ-chip for interconnected long-term co-culture of human intestine, liver, skin and kidney equivalents.</a> Lab Chip. 15 (12), 2688-2699 (2015).</li><li>Esch, M. B., Mahler, G. J., Stokol, T., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Body-on-a-chip+simulation+with+gastrointestinal+tract+and+liver+tissues+suggests+that+ingested+nanoparticles+have+the+potential+to+cause+liver+injury.">Body-on-a-chip simulation with gastrointestinal tract and liver tissues suggests that ingested nanoparticles have the potential to cause liver injury.</a> Lab Chip. 14 (16), 3081-3092 (2014).</li><li>Materne, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Multi-organ+Chip+-+A+Microfluidic+Platform+for+Long-term+Multi-tissue+Coculture.">The Multi-organ Chip - A Microfluidic Platform for Long-term Multi-tissue Coculture.</a> Journal of Visualized Experiments. , e52526 (2015).</li><li>Esch, M. B., Ueno, H., Applegate, D. R., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modular,+pumpless+body-on-a-chip+platform+for+the+co-culture+of+GI+tract+epithelium+and+3D+primary+liver+tissue.">Modular, pumpless body-on-a-chip platform for the co-culture of GI tract epithelium and 3D primary liver tissue.</a> Lab Chip. 16 (14), 2719-2729 (2016).</li><li>Sung, J. H., Kam, C., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+microfluidic+device+for+a+pharmacokinetic&#8211;pharmacodynamic+(PK-PD)+model+on+a+chip.">A microfluidic device for a pharmacokinetic&#8211;pharmacodynamic (PK-PD) model on a chip.</a> Lab on a Chip. 10 (4), 446-455 (2010).</li><li>Viravaidya, K., Sin, A., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+Microscale+Cell+Culture+Analog+to+Probe+Naphthalene+Toxicity.">Development of a Microscale Cell Culture Analog to Probe Naphthalene Toxicity.</a> Biotechnology Progress. 20 (1), 316-323 (2004).</li><li>Sin, A., Chin, K. C., Jamil, M. F., Kostov, Y., Rao, G., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Design+and+Fabrication+of+Three-Chamber+Microscale+Cell+Culture+Analog+Devices+with+Integrated+Dissolved+Oxygen+Sensors.">The Design and Fabrication of Three-Chamber Microscale Cell Culture Analog Devices with Integrated Dissolved Oxygen Sensors.</a> Biotechnology Progress. 20 (1), 338-345 (2004).</li><li>Tsamandouras, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Integrated+Gut+and+Liver+Microphysiological+Systems+for+Quantitative+In+vitro+Pharmacokinetic+Studies.">Integrated Gut and Liver Microphysiological Systems for Quantitative In vitro Pharmacokinetic Studies.</a> The AAPS Journal. 19 (5), 1499-1512 (2017).</li><li>Graham, G. G., Davies, M. J., Day, R. O., Mohamudally, A., Scott, K. 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E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Paracetamol+(acetaminophen)-induced+toxicity:+Molecular+and+biochemical+mechanisms,+analogues+and+protective+approaches.">Paracetamol (acetaminophen)-induced toxicity: Molecular and biochemical mechanisms, analogues and protective approaches.</a> Critical Reviews in Toxicology. 31 (1), 55-138 (2001).</li><li>Hirt, M. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+afterload+induces+pathological+cardiac+hypertrophy:+A+new+in+vitro+model.">Increased afterload induces pathological cardiac hypertrophy: A new in vitro model.</a> Basic Research in Cardiology. 107 (6), 307 (2012).</li><li>Fink, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+stretch+of+engineered+heart+tissue+induces+hypertrophy+and+functional+improvement.">Chronic stretch of engineered heart tissue induces hypertrophy and functional improvement.</a> The FASEB journal official publication of the Federation of American Societies for Experimental Biology. 14 (5), 669-679 (2000).</li><li>Zhang, B., Peticone, C., Murthy, S. 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A. H., Clements, J. A., Prescott, L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+Pharmacokinetics+of+Paracetamol.">Clinical Pharmacokinetics of Paracetamol.</a> Clinical Pharmacokinetics. 7 (2), 93-107 (1982).</li><li>Dollery, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Therapeutic Drugs. , (1999).</li><li>Shah, V. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioanalytical+method+validation-a+revisit+with+a+decade+of+progress.">Bioanalytical method validation-a revisit with a decade of progress.</a> Pharmaceutical research. 17 (12), 1551-1557 (2000).</li><li>Marin, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Shp2+negatively+regulates+growth+in+cardiomyocytes+by+controlling+focal+adhesion+kinase/src+and+mTOR+pathways.">Shp2 negatively regulates growth in cardiomyocytes by controlling focal adhesion kinase/src and mTOR pathways.</a> Circulation Research. 103 (8), 813-824 (2008).</li><li>Linkert, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metadata+matters:+Access+to+image+data+in+the+real+world.">Metadata matters: Access to image data in the real world.</a> Journal of Cell Biology. 189 (5), 777-782 (2010).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OECD+TG+491+-+Short+Time+Exposure+In+vitro+Test+Method+for+Identifying+i)+Chemicals+Inducing+Serious+Eye+Damage+and+ii)+Chemicals+Not+Requiring+Classification+for+Eye+Irritation+or+Serious+Eye+Damage.">OECD TG 491 - Short Time Exposure In vitro Test Method for Identifying i) Chemicals Inducing Serious Eye Damage and ii) Chemicals Not Requiring Classification for Eye Irritation or Serious Eye Damage.</a> OECD. 14, (2018).</li><li>Fernandes, M. B., Gon&#231;alves, J. E., Tavares, L. C., Storpirtis, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caco-2+cells+permeability+evaluation+of+nifuroxazide+derivatives+with+potential+activity+against+methicillin-resistant+Staphylococcus+aureus+(MRSA).">Caco-2 cells permeability evaluation of nifuroxazide derivatives with potential activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA).</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 41 (7), 1066-1072 (2015).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OECD+TG+492+-+Reconstructed+human+Cornea-like+Epithelium+(RhCE)+test+method+for+identifying+chemicals+not+requiring+classification+and+labelling+for+eye+irritation+or+serious+eye+damage.">OECD TG 492 - Reconstructed human Cornea-like Epithelium (RhCE) test method for identifying chemicals not requiring classification and labelling for eye irritation or serious eye damage.</a> OECD. 35, (2018).</li><li>OECD, O. E. C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OECD+TG+431+-+In+vitro+skin+corrosion:+reconstructed+human+epidermis+(RHE)+test+method.">OECD TG 431 - In vitro skin corrosion: reconstructed human epidermis (RHE) test method.</a> OECD. 8, (2016).</li><li>OECD. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=OECD+TG+439+-+In+vitro+Skin+Irritation:+Reconstructed+Human+Epidermis+Test+Method.">OECD TG 439 - In vitro Skin Irritation: Reconstructed Human Epidermis Test Method.</a> OECD. 21, (2015).</li><li>Marin, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acetaminophen+absorption+and+metabolism+in+an+intestine/liver+microphysiological+system.">Acetaminophen absorption and metabolism in an intestine/liver microphysiological system.</a> Chemico-Biological Interactions. 299, 59-76 (2019).</li><li>Maass, C., Stokes, C. L., Griffith, L. G., Cirit, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-functional+scaling+methodology+for+translational+pharmacokinetic+and+pharmacodynamic+applications+using+integrated+microphysiological+systems+(MPS).">Multi-functional scaling methodology for translational pharmacokinetic and pharmacodynamic applications using integrated microphysiological systems (MPS).</a> Integrative Biology (United Kingdom). 9 (4), 290-302 (2017).</li><li>Sung, J. H., Wang, Y., Shuler, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+for+using+mathematical+modeling+approaches+to+design+and+interpret+multi-organ+microphysiological+systems+(MPS).">Strategies for using mathematical modeling approaches to design and interpret multi-organ microphysiological systems (MPS).</a> APL Bioengineering. 3 (2), 021501 (2019).</li></ol>

조사 신약의 약리학적 특성에 대한 정확하고 신뢰할 수 있는 평가는 다음 개발 단계의 위험을 줄이는 데 중요합니다. MPS는 예측 능력을 개선하고 전임상 테스트에 소요되는 비용과 시간을 줄이는 것을 목표로 하는 비교적 새로운 기술입니다. 우리 그룹은 납 최적화에 주로 필요한 약동및 독성 특성의 평가에 발전하고 있습니다. 우리는 두 개의 챔버가있는 2-OC 미세 유체 장치와 협력하여 두 개의 ?...

유전체학 및 프로테오믹 차이로 인해 동물 모델은 여러 인간의 결과에 대한 예측 가치가 제한적입니다. 또한, 그들은 시간이 많이 소요, 비싸고 윤리적으로 의심1. MPS는 예측 능력을 개선하고 임상 전 테스트에 소요되는 비용과 시간을 줄이는 것을 목표로 하는 비교적 새로운 기술입니다. 그들은 오르가노이드 오르가노이드 통신을 촉진하는 미디어 흐름하에서 오르가노이드 (장기의 인공 마메틱 기능 단위)를 육성하는 미세 유체 장치입니다. 인간 세포로 만든 오르가노이드는 번역 관련성2,3,4를증가시다. MPS는 유전적으로 인간이며 조직 간의 상호 작용을 재구성하기 때문에 동물 실험보다 더 잘 수행 될 것으로 예상됩니다. 완벽하게 작동하면 MPS는 더 높은 속도로 더 의미 있는 결과를 제공하고 비용과 위험을4로낮출 것입니다. 많은 그룹은 여러 목적을 위해 MPS를 개발하고 있다, 특히 질병의 모델은 약물의 효능을 테스트.
노출 수준은 약물 효능 및 독성5,6,7,8,9,10,11,12를평가하기 위한 가장 중요한 매개변수 중 하나입니다. MPS는 전신 노출을 에뮬레이트하는 오르간성 통합을 허용하고 전통적인 2D 인간 조직 배양보다 더 잘 수행 될 것으로 예상된다. 이 기술은 화합물 장 흡수 및 간 대사4의예측을 크게 향상시킬 수 있습니다.
장과 간의 인간 동등한 모델을 통합하는 MPS는 약물 생체 이용률 및 전신 노출13,14,15에서이 두 기관의 중심 역할을 고려하여 좋은 출발점이다. APAP는 신장과 동등한 신장이 없는 MPS를 연구하기 위한 매력적인 약물로, 대사화는 주로 간16,17에의해 수행된다.
상기 2-OC는마이크로채널(16)에의해 상호 연결된 두 개의 상이한 인간 동등한 조직/오르가노이드의 배양에 적합한 2챔버 미세유체 장치이다. 약물의 체외 인간 구두/정맥 투여를 모방하고 APAP 약동학에 대한 장과 간 등가물의 교차 이야기의 효과를 평가하기 위해, 오르가노이드 기능성 및 생존가능성 외에도, 3개의 다른 MPS 어셈블리가 수행되었다: (1) Caco-2 + HT-29 세포 공동 배양을 포함하는 배양 삽입에 기초한 장 등가물로 구성된 "내장 2-OC MPS", 2-OC 장치에 통합; (2) 2-OC 장치에 통합된 HepaRG + HHSteC(인간 간 Stellate 세포)로 구성된 간 스페로이드로 구성된 "간 2-OC MPS"; 및 (3) "내장/간 2-OC MPS"는 마이크로 유체 채널을 통해 매체흐름에 의해 다른 장치 구획과 동등한 간구획으로 구성된다.
모든 아세이는 기계적 자극(압축, 스트레칭 및 전단)의 충격으로 인해 정적(유동 없음) 및 동적(흐름 없음) 조건하에서 수행되었다(압축, 스트레칭 및 전단) 세포 생존능력 및기능성(18,19,20). 본 기사는 인간 장 및 간 등가 모델을 포함하는 2-OC MPS에서 APAP 경구/정맥 투여 에뮬레이션 및 각각의 흡수/물질 대사 및 독성 분석을 위한 프로토콜을 설명합니다.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1x DPBS</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>14190235</td>
			<td>No calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2-OC</td>
			<td>TissUse GmbH</td>
			<td></td>
			<td>Two-organ chip</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>384-well Spheroid Microplate</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3830</td>
			<td>Black/Clear, Round Bottom, Ultra-Low Attachment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Use to fix cell</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetaminophen</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A7085</td>
			<td>Use to MPS assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Tedia</td>
			<td></td>
			<td>Used to perform HPLC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alexa Fluor 647 phalloidin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>confocal experiment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium acetate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td>Used to perform HPLC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caco-2 cells</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>86010202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cacodylate buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture flasks</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal Fluorescence microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMI6000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryostat</td>
			<td>Leica</td>
			<td>CM1950</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM high glucose</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12800017</td>
			<td>Add supplements: 10% fetal bovine serum, 100 units per mL penicillin, 100 &#181;g/mL streptomycin, and 1% non-essential amino acids</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D4540</td>
			<td>Add 2% to HepaRG media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Synth</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12657029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing medium OCT</td>
			<td>Tissue-Tek</td>
			<td></td>
			<td>Tissue-Tek&#174; O.C.T.&#8482; Compound is a formulation of watersoluble glycols and resins, providing a convenient specimen matrix for cryostat sectioning at temperatures of -10&#176;C and below.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hematoxylin &#38; Eosin</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HepaRG cells</td>
			<td>Biopredic International</td>
			<td>HPR101</td>
			<td>Undifferentiated cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HHSTeC</td>
			<td>ScienCell Research Laboratories</td>
			<td>5300</td>
			<td>Cells and all culture supplements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HCA experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HT-29 cells</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>85061109</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human Insulin</td>
			<td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>12585014</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrocortisone</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H0888</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isopropanol</td>
			<td>Merck</td>
			<td>278475</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Karnovsky&#8217;s fixative</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>A2916801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luna C18 guard column SS</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td></td>
			<td>Used to perform HPLC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>DMi4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtome</td>
			<td>Leica</td>
			<td>RM2245</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell 0.4 &#181;m pore size inserts</td>
			<td>Merck</td>
			<td>PIHP01250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Millicell ERS-2 meter</td>
			<td>Merck</td>
			<td>MERS00002</td>
			<td>Used to TEER measurement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTracker Deep Red</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>HCA experiments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTT</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>M6494</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MX3000P system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neubauer chamber</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Counting cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operetta High Content Imaging System</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>Used to perform HCA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P450-Glo CYP3A4 Assay with Luciferin-IPA</td>
			<td>Promega</td>
			<td>Cat.# V9001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15070063</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Permount</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Histology</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primers</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>RT-qPCR</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF membrane</td>
			<td>BioRad</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PVDF Syringe filter</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>0.22 &#956;m pore size</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reversed-phase Luna C18 column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td></td>
			<td>Used to perform HPLC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker (IKA VXR Basic Vibrax)</td>
			<td>IKA Works GmbH &#38; Co</td>
			<td>2819000</td>
			<td>Used for spheroids to improve MTT assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stellate Cell Media (STeC CM)</td>
			<td>ScienCell</td>
			<td>5301</td>
			<td>Add STeC CM supplements</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SuperScriptIITM Reverse Transcriptase</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SYBR Green PCR Master Mix</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRizol TM reagent</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td>Trizol is a monophasic solution of phenol and guanidine isothiocyanate.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA solution</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>R001100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-low-attachment plates</td>
			<td>Corning</td>
			<td>CLS3471-24EA</td>
			<td>6 wells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vectashield plus DAPI mounting media</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>White Opaque 96-well Microplate</td>
			<td>PerkinHelmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wide-bore tips</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Williams E</td>
			<td>Pan Biotech</td>
			<td>P04-29510</td>
			<td>Add supplements: 10% fetal bovine serum, 2 mM L-glutamine, 100 units per ml penicillin, 100 &#181;g/mL streptomycin and 5 &#181;g/mL human insulin</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an intestine/liver microphysiological system for drug pharmacokinetic and toxicological assessment

최근에 도입된 미생물시스템(MPS)은 인간 유기체를 육성하는 것이 유전적으로 인간적이고 조직 간의 상호 작용을 재구성하기 때문에 약물 개발 과정의 전임상 시험 단계에서 동물보다 더 나은 성능을 발휘할 것으로 예상된다. 본 연구에서, 인간 장 장벽(Caco-2 및 HT-29 세포의 공동 배양에 의해 에뮬레이트됨) 및 간 등가(분화된 HepaRG 세포 및 인간 간 석래 세포로 만든 스페로이드에 의해 에뮬레이트됨)는 일부 아세트아핀(Pcoinophen)을 평가하기 위해 2기관 칩(2-OC) 미세 유체 장치로 통합되었다. MPS는 세 개의 어셈블리를 했다: 장 만 2-OC, 간 만 2-OC, 그리고 내장/간 2-OC 두 오르가노이드를 perfusing 동일한 미디어와. PK 평가를 위해, 우리는 12 μM및 2 μM에서 장 장벽 (경구 경로를 에뮬레이션) 또는 매체 (정맥 경로를 에뮬레이션)를 통해 그것을 관리 한 후 사전 설정 된 시점에서 미디어에 APAP를 투여했습니다. 미디어 샘플은 반전 단계 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC)에 의해 분석되었다. 오르가노이드는 유전자 발현, TEER 값, 단백질 발현 및 활성을 위해 분석한 다음 형태학적 평가 집합에 수집, 고정 및 제출하였다. MTT 기술은 오르가노이드 생존가능성을 평가하는 데 잘 수행되었지만, 높은 함량 분석(HCA)은 APAP 처리에 응하여 매우 초기 독성 이벤트를 감지할 수 있었습니다. 우리는 미디어 흐름이 APAP 흡수에 크게 영향을 미치지 않는 반면 간 동등한 기능을 크게 향상시키는지 확인했습니다. APAP 인간 장 흡수 및 간 물질 대사 MPS에 에뮬레이트 될 수 있습니다. MPS 데이터와 실리코 모델링 의 연관성은 체외 방법의 예측 가능성을 개선하고 약동 및 독성 연구에서 동물 모델보다 더 나은 정확도를 제공 할 수있는 큰 잠재력을 가지고 있습니다.

2-OC MPS에서 PK APAP 테스트를 수행하기 위해, 첫 번째 단계는 인간 장 및 간 등가물(organoids)을 제조하는 것이다. PK APAP 분석기 시작 전에 2-OC 미세유체장치(도 1A)24h에 통합된다. 다음 날, 매체가 변경되고 모델이 APAP에 노출됩니다. 도 1은 2-OC장치(도 1B)및 APAP PK 실험 시간과정(도 1C)에내장 및 간 등가물을 도시한?...

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An Intestine/Liver Microphysiological System for Drug Pharmacokinetic and Toxicological Assessment

우리는 아세트아미노펜 (APAP)에 장과 간 오르가노이드를 가진 미생물 계통 (MPS)를 드러나. 이 문서에서는 MPS의 오르가노이드 생산 및 APAP 약동 및 독성 특성 평가를 위한 방법을 설명합니다. 또한 결과를 검증하는 데 필요한 조직 기능 분석을 설명합니다.

약물 약동 및 독성 평가를 위한 장/간 미생물학 시스템

The recently introduced microphysiological systems (MPS) cultivating human organoids are expected to perform better than animals in the preclinical tests ...

미생물 학적 시스템은 약동학 및 관심사의 특정 치료에 인체의 독성 반응을 모방 할 수있는 능력을 가지고있다. 미생물 학적 시스템은 생체 외 방법의 예측 능력을 개선하고 약리학 및 독성 연구의 비용과 시간을 줄일 수 있기 때문에 동물 실험을 대체 할 수있는 잠재력을 가지고 있습니다. 시험 물질 투여 24시간 전에, 윌리엄 ES 배지의 800 마이크로리터 알리쿼트를 두 장기 칩의 크고 작은 구획 사이에 분할하고, 제조된 24웰 플레이트에서 각 장 장벽에서 바소포탈 및 정량 배지를 흡인한다.멸균 집게를 사용하여 두 개의 오르간 칩 회로당 하나의 인서트를 더 큰 구획에 통합하고 200 마이크로리터의 DMEMS를 apical 측에 추가합니다. 넓은 보어 팁을 사용하여 회로당 20개의 간 등가물을 두 장기 칩의 작은 구획에 통합하고 시스템을 제어 장치에 연결합니다. 그런 다음 제어 장치를 가압 된 공기 공급에 연결하고 압력을 약 플러스 또는 마이너스 300 막대와 0.3 Hertz의 펌핑 주파수로 설정합니다.다음 날 주식 아세트아미노펜 용액을 12 마이크로몰라 농도로 희석합니다. 시스템의 배지를 교체하기 위해, 두 개의 오르간 칩에 상응하는 장 장벽으로부터 바소포탈 및 정량성 배지를 흡습하고 500 마이크로리터를 오가노이드 바소라탈 측의 대형 구획에 추가하고 300 마이크로리터를 작은 구획에 첨가한다. 거품을 확인한 후, 장 배양의 액면에 12 마이크로몰러 아세트아미노펜 용액의 200 마이크로리터를 첨가하여 경구 투여를 에뮬레이트하고 미생물 시스템을 제어부에 연결한다.장 어형 및 바소포측양과 표시된 시점의 삼중구의 작은 구획에서 총 부피를 수집합니다. 모든 시료가 수집되면, 표에 표시된 대로 HPLC 분석을 위한 모든 관련 파라미터를 설정하고 진공 하에서 0.4 미크론 멤브레인 필터를 통해 이동국을 필터링한다. 그런 다음 0.22 미크론 모공 크기 PVDF 주사기 필터를 통해 샘플을 필터링하고 HPLC UV 측정을 시작하기 전에 유리병에 샘플을 저장합니다.오르가노이드 생존가능성을 평가하기 위해, 각 복제판에서 96웰 플레이트의 개별 우물로 모든 20개의 스페로이드를 옮기고 세포 배양 인서트를 24웰 플레이트의 개별 우물로 이송한다. 세척당 신선한 DPBS로 조직 등가물을 세 번 세척하고 각 실험에 밀리리터 MTT 용액 당 1 밀리그램의 300 마이크로리터를 추가합니다. 세포 배양 인큐베이터에서 3시간 동안 배양한 후, MTT 용액을 4도에서 하룻밤 동안 양해비하기 위해 잘 당 200 마이크로리터의 이소프로파놀로 대체하여 장 및 간 등가물에서 MTT 포르마잔을 추출한다.다음 날 아침, 각 수퍼나티200마이크로리터를 96웰 플레이트에서 적절한 우물로 옮기고 570나노미터의 플레이트 판독기에서 포르마잔을 판독하여 음극에 비해 각 시점의 평균 광학 밀도를 이용하여 MTT를 감소시키는 세포의 상대적 능력을 계산할 수 있다. 시료의 세포화학 및 조직학적 분석을 위해, 먼저 실온에서 25분 동안 0.1 대구PBS에서 4%파라포름알데히드에서 장및 간 등가물을 수정한다. 인큐베이션이 끝나면 PBS에서 시간당 10분 동안 오가노이드를 5회 세척한 후, 장및 간 등가물을 테트라메틸뢰다민 이소티오카네이트 폰로이드인 알렉사 플루오르 647 phalloidin로 실온에서 1시간 동안 염색합니다.인큐베이션이 끝나면 액체 질소에서 조직을 동결하기 전에 샘플을 몇 분 동안 동결 매체로 옮기습니다. 다음으로, 저온증을 사용하여 10~12개의 미크론 두께의 간 스페로이드 저온 단면을 획득하고 공초점 형광 현미경 검사법에 의한 이미징을 위해 DAPI를 장착하는 배지에 조직 섹션을 장착한다. 미토콘드리아 및 핵 염색의 경우, 5%의 이산화탄소를 가진 가습된 대기에서 섭씨 37도에서 15~45분 동안 미토콘드리아 염색 용액으로 샘플을 완전히 덮습니다.인큐베이션이 끝나면 실온에서 15분 동안 PBS에서 2~4%의 파라포름알데히드로 염색 용액을 조심스럽게 교체하십시오. 고정 후, 부드럽게 실온에서 10 분 동안 핵산 염색 작업 용액으로 샘플을 표시하기 전에 세척 당 5 분 동안 신선한 PBS로 세포를 두 번 헹구십시오. 인큐베이션의 끝에서, 빛으로부터 보호되는 PBS에서 3, 5분 세척으로 샘플을 세척하고, 핵산 얼룩을 사용하여 적절한 필터 세트로 형광 현미경으로 세포를 발현하는 미토콘드리아 얼룩의 수의 정량화를 용이하게 한다.인간 장 장벽과 간을 두 개의 장기 칩 미세 유체 장치에 통합하면 관심있는 치료의 약동적 및 독성 특성을 평가 할 수 있습니다. 치료 후, 미디어 샘플은 HPLC에 의해 분석될 수 있다. 오르가노이드는 유전자 발현, 전형 전기 저항 값, 단백질 발현 및 활동뿐만 아니라 형태학적 특성을 위해 분석될 수 있다.MTT 분석은 아세트아미노펜 치료에 반응하여 매우 초기 독성 이벤트를 감지할 뿐만 아니라 오르가노이드 생존가능성을 평가하기 위해 수행될 수 있다. 미디어 흐름은 아세트아미노펜 흡수에 크게 영향을 미치지 않지만 간 동등한 기능을 크게 향상시키는 반면, 인간 장 아세트아미노펜 흡수및 간 대사가 이 미생물 계통에 에뮬레이트될 수 있음을 나타냅니다. 미생물 계통은 인간 생리학을 더 잘 모방하고 위험과 복잡성에 더 높은 속도와 낮은 비용으로 약물 개발을 촉진하는 데 사용할 수 있기 때문에 약물 개발 및 발견에서 동물 모델을 대체 할 수있는 잠재력을 가지고 있습니다.

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Preparation and Characterization of SDF-1&#945;-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

Preparation and Characterization of SDF-1ÃƒÅ½Ã‚Â±-Chitosan-Dextran Sulfate Nanoparticles

SDF-1α-키토산 덱스 트란 황산 나노 입자의 제조 및 특성

Chitosan (CS) and dextran sulfate (DS) are charged polysaccharides (glycans), which form polyelectrolyte complex-based nanoparticles when mixed under ...

연구

화학

Preparation and Characterization of Individual and Multi-drug Loaded Physically Entrapped Polymeric Micelles

준비 및 개인의 특성과 다중 약물은 물리적으로 고분자 미셀을 포획로드

Amphiphilic block copolymers like polyethyleneglycol-block-polylactic acid (PEG-b-PLA) can self-assemble into micelles above their critical micellar ...

Protocol for the Synthesis of Ortho-trifluoromethoxylated Aniline Derivatives

Protocol for the Synthesis of Ortho-trifluoromethoxylated Aniline Derivatives

의 합성을위한 프로토콜<em&gt; 직교</em&gt; -trifluoromethoxylated 아닐린 파생 상품

Molecules bearing trifluoromethoxy (OCF3) group often show desired pharmacological and biological properties. However, facile synthesis of ...

PTR-ToF-MS Coupled with an Automated Sampling System and Tailored Data Analysis for Food Studies: Bioprocess Monitoring, Screening and Nose-space Analysis

자동 샘플링 시스템과 결합 된 PTR-ToF-MS 및 식품 연구를위한 맞춤형 데이터 분석 : 바이오 프로세스 모니터링, 스크리닝 및 코 공간 분석

Proton Transfer Reaction (PTR), combined with a Time-of-Flight (ToF) Mass Spectrometer (MS) is an analytical approach based on chemical ionization that ...

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Unchelated 가돌리늄위한 앱 타머 기반 센서 (III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

고 분해능 질량 분석을 결합 하는 보조 Nanoelectrospray 이온화를 사용 하 여 실시간 호흡 분석

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

An Engineered Split-TET2 Enzyme for Chemical-inducible DNA Hydroxymethylation and Epigenetic Remodeling

화학을 유도할 수 있는 DNA Hydroxymethylation 및 후 리 모델링 설계 분할-TET2 효소

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control ...

Generation of Electronic Cigarette Aerosol by a Third-Generation Machine-Vaping Device: Application to Toxicological Studies

3 세대 기계 Vaping 장치에서 전자 담배에 어로 졸의 생성: 독물학 연구 응용 프로그램

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High-throughput and Comprehensive Drug Surveillance Using Multisegment Injection-Capillary Electrophoresis-Mass Spectrometry

멀티 주입-모 세관 전기 이동 법 질량 분석을 사용 하 여 높은 처리량 및 포괄적인 약물 감시

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