Name: targeting drugs to larval zebrafish macrophages by injecting drug-loaded liposomes
Uploaded: 2020-02-18T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Targeting Drugs to Larval Zebrafish Macrophages by Injecting Drug-Loaded Liposomes at JoVE.com

Эта работа была поддержана грантами, присужденными C.J.H. (Совет по исследованиям в области здравоохранения Новой Зеландии и Фондмарса, Королевское общество Новой Зеландии) и З.В. (Фонд развития исследований факультета Оклендского университета). Авторы благодарят Алхада Махагаонкара за экспертное управление объектом зебры, Отделом исследований биомедицинских изображений, Школой Медицинских Наук, Оклендским университетом за помощь в разработке конфокальной визуализации и Грэмом Лишешке за то, что он подарил линию репортеров Tg (mpeg1:EGFP).

1. Подготовка наркотиков загружены Марина сине-маркированные липосомы
ПРИМЕЧАНИЕ: Липосомы, несущие синий флуоресцентный краситель, Марина Синий и препарат готовятся с помощью тонкой пленки гидратации метод с пост вставки полоксамера 188. Все процедуры выполняются при ко?...

<ol>
	<li>Chow, A., Brown, B. D., Merad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studying+the+mononuclear+phagocyte+system+in+the+molecular+age.">Studying the mononuclear phagocyte system in the molecular age.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (11), 788-798 (2011).</li><li>Li, Q., Barres, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+and+macrophages+in+brain+homeostasis+and+disease.">Microglia and macrophages in brain homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 18 (4), 225-242 (2018).</li><li>Krenkel, O., Tacke, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+macrophages+in+tissue+homeostasis+and+disease.">Liver macrophages in tissue homeostasis and disease.</a> Nature Reviews Immunology. 17 (5), 306-321 (2017).</li><li>Alderton, G. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+immunology:+turning+macrophages+on,+off+and+on+again.">Tumour immunology: turning macrophages on, off and on again.</a> Nature Reviews Immunology. 14 (3), 136-137 (2014).</li><li>Moore, K. J., Sheedy, F. J., Fisher, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages+in+atherosclerosis:+a+dynamic+balance.">Macrophages in atherosclerosis: a dynamic balance.</a> Nature Reviews Immunology. 13 (10), 709-721 (2013).</li><li>Lawrence, T., Natoli, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+regulation+of+macrophage+polarization:+enabling+diversity+with+identity.">Transcriptional regulation of macrophage polarization: enabling diversity with identity.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (11), 750-761 (2011).</li><li>Chawla, A., Nguyen, K. D., Goh, Y. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage-mediated+inflammation+in+metabolic+disease.">Macrophage-mediated inflammation in metabolic disease.</a> Nature Reviews Immunology. 11 (11), 738-749 (2011).</li><li>Renshaw, S. A., Trede, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+450+million+years+in+the+making:+zebrafish+and+vertebrate+immunity.">A model 450 million years in the making: zebrafish and vertebrate immunity.</a> Disease models and mechanisms. 5 (1), 38-47 (2012).</li><li>Hall, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoresponsive+gene+1+augments+bactericidal+activity+of+macrophage-lineage+cells+by+regulating+beta-oxidation-dependent+mitochondrial+ROS+production.">Immunoresponsive gene 1 augments bactericidal activity of macrophage-lineage cells by regulating beta-oxidation-dependent mitochondrial ROS production.</a> Cell Metabolism. 18 (2), 265-278 (2013).</li><li>Hall, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blocking+fatty+acid-fueled+mROS+production+within+macrophages+alleviates+acute+gouty+inflammation.">Blocking fatty acid-fueled mROS production within macrophages alleviates acute gouty inflammation.</a> Journal of Clinical Investigation. 125 (5), 1752-1771 (2018).</li><li>Cambier, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mycobacteria+manipulate+macrophage+recruitment+through+coordinated+use+of+membrane+lipids.">Mycobacteria manipulate macrophage recruitment through coordinated use of membrane lipids.</a> Nature. 505 (7482), 218-222 (2014).</li><li>Davis, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time+visualization+of+mycobacterium-macrophage+interactions+leading+to+initiation+of+granuloma+formation+in+zebrafish+embryos.">Real-time visualization of mycobacterium-macrophage interactions leading to initiation of granuloma formation in zebrafish embryos.</a> Immunity. 17 (6), 693-702 (2002).</li><li>Madigan, C. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Macrophage+Response+to+Mycobacterium+leprae+Phenolic+Glycolipid+Initiates+Nerve+Damage+in+Leprosy.">A Macrophage Response to Mycobacterium leprae Phenolic Glycolipid Initiates Nerve Damage in Leprosy.</a> Cell. 170 (5), 973-985 (2017).</li><li>Tobin, D. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+lta4h+locus+modulates+susceptibility+to+mycobacterial+infection+in+zebrafish+and+humans.">The lta4h locus modulates susceptibility to mycobacterial infection in zebrafish and humans.</a> Cell. 140 (5), 717-730 (2010).</li><li>Volkman, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tuberculous+granuloma+induction+via+interaction+of+a+bacterial+secreted+protein+with+host+epithelium.">Tuberculous granuloma induction via interaction of a bacterial secreted protein with host epithelium.</a> Science. 327 (5964), 466-469 (2010).</li><li>Bowman, T. V., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Swimming+into+the+future+of+drug+discovery:+in+vivo+chemical+screens+in+zebrafish.">Swimming into the future of drug discovery: in vivo chemical screens in zebrafish.</a> ACS Chemical Biology. 5 (2), 159-161 (2010).</li><li>Kaufman, C. K., White, R. M., Zon, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemical+genetic+screening+in+the+zebrafish+embryo.">Chemical genetic screening in the zebrafish embryo.</a> Nature Protocols. 4 (10), 1422-1432 (2009).</li><li>Zon, L. I., Peterson, R. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+drug+discovery+in+the+zebrafish.">In vivo drug discovery in the zebrafish.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4 (1), 35-44 (2005).</li><li>Malam, Y., Loizidou, M., Seifalian, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposomes+and+nanoparticles:+nanosized+vehicles+for+drug+delivery+in+cancer.">Liposomes and nanoparticles: nanosized vehicles for drug delivery in cancer.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 30 (11), 592-599 (2009).</li><li>Torchilin, V. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+with+liposomes+as+pharmaceutical+carriers.">Recent advances with liposomes as pharmaceutical carriers.</a> Nature Reviews Drug Discovery. 4 (2), 145-160 (2005).</li><li>Immordino, M. L., Dosio, F., Cattel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stealth+liposomes:+review+of+the+basic+science,+rationale,+and+clinical+applications,+existing+and+potential.">Stealth liposomes: review of the basic science, rationale, and clinical applications, existing and potential.</a> International Journal of Nanomedicine. 1 (3), 297-315 (2006).</li><li>Astin, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immune+cells+and+bacterial+infection+in+zebrafish.">Innate immune cells and bacterial infection in zebrafish.</a> Methods in Cell Biology. 138, 31-60 (2017).</li><li>Zhang, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Post-insertion+of+poloxamer+188+strengthened+liposomal+membrane+and+reduced+drug+irritancy+and+in+vivo+precipitation,+superior+to+PEGylation.">Post-insertion of poloxamer 188 strengthened liposomal membrane and reduced drug irritancy and in vivo precipitation, superior to PEGylation.</a> Journal of Controlled Release. 203, 161-169 (2015).</li><li>Wu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liposome-Mediated+Drug+Delivery+in+Larval+Zebrafish+to+Manipulate+Macrophage+Function.">Liposome-Mediated Drug Delivery in Larval Zebrafish to Manipulate Macrophage Function.</a> Zebrafish. 16 (2), 171-181 (2019).</li><li>Cader, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C13orf31+(FAMIN)+is+a+central+regulator+of+immunometabolic+function.">C13orf31 (FAMIN) is a central regulator of immunometabolic function.</a> Nature Immunology. 17 (9), 1046-1056 (2016).</li><li>Chono, S., Tanino, T., Seki, T., Morimoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+on+drug+delivery+to+rat+alveolar+macrophages+following+pulmonary+administration+of+ciprofloxacin+incorporated+into+liposomes.">Influence of particle size on drug delivery to rat alveolar macrophages following pulmonary administration of ciprofloxacin incorporated into liposomes.</a> Journal of Drug Targeting. 14 (8), 557-566 (2006).</li><li>Chono, S., Tanino, T., Seki, T., Morimoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uptake+characteristics+of+liposomes+by+rat+alveolar+macrophages:+influence+of+particle+size+and+surface+mannose+modification.">Uptake characteristics of liposomes by rat alveolar macrophages: influence of particle size and surface mannose modification.</a> Journal of Pharmact and Pharmacology. 59 (1), 75-80 (2007).</li><li>Chono, S., Tauchi, Y., Morimoto, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+particle+size+on+the+distributions+of+liposomes+to+atherosclerotic+lesions+in+mice.">Influence of particle size on the distributions of liposomes to atherosclerotic lesions in mice.</a> Drug Development and Industrial Pharmacy. 32 (1), 125-135 (2006).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+zebrafish+embryos+to+analyze+gene+function.">Microinjection of zebrafish embryos to analyze gene function.</a> Journal of Visualized Experiments. (25), (2009).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+cell+imaging+of+zebrafish+leukocytes.">Live cell imaging of zebrafish leukocytes.</a> Methods in Molecular Biology. 546, 255-271 (2009).</li><li>Kapellos, T. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+real+time+imaging+platform+to+quantify+macrophage+phagocytosis.">A novel real time imaging platform to quantify macrophage phagocytosis.</a> Biochemical Pharmacology. 116, 107-119 (2016).</li><li>Shen, K., Sidik, H., Talbot, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Rag-Ragulator+Complex+Regulates+Lysosome+Function+and+Phagocytic+Flux+in+Microglia.">The Rag-Ragulator Complex Regulates Lysosome Function and Phagocytic Flux in Microglia.</a> Cell Reports. 14 (3), 547-559 (2016).</li><li>Ellett, F., Pase, L., Hayman, J. W., Andrianopoulos, A., Lieschke, G. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mpeg1+promoter+transgenes+direct+macrophage-lineage+expression+in+zebrafish.">mpeg1 promoter transgenes direct macrophage-lineage expression in zebrafish.</a> Blood. 117 (4), 49-56 (2011).</li><li>Hall, C., Flores, M. V., Storm, T., Crosier, K., Crosier, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+zebrafish+lysozyme+C+promoter+drives+myeloid-specific+expression+in+transgenic+fish.">The zebrafish lysozyme C promoter drives myeloid-specific expression in transgenic fish.</a> BMC Developmental Biology. 7, 42 (2007).</li><li>Ahsan, F., Rivas, I. P., Khan, M. A., Torres Suarez, A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+to+macrophages:+role+of+physicochemical+properties+of+particulate+carriers--liposomes+and+microspheres--on+the+phagocytosis+by+macrophages.">Targeting to macrophages: role of physicochemical properties of particulate carriers--liposomes and microspheres--on the phagocytosis by macrophages.</a> Journal of Controlled Release. 79 (1-3), 29-40 (2002).</li><li>Martin, W. J., Walton, M., Harper, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Resident+macrophages+initiating+and+driving+inflammation+in+a+monosodium+urate+monohydrate+crystal-induced+murine+peritoneal+model+of+acute+gout.">Resident macrophages initiating and driving inflammation in a monosodium urate monohydrate crystal-induced murine peritoneal model of acute gout.</a> Arthritis and Rheumatology. 60 (1), 281-289 (2009).</li><li>Faires, J. S., McCarty, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+arthritis+in+man+and+dog+after+intrasynovial+injection+of+sodium+urate+crystals.">Acute arthritis in man and dog after intrasynovial injection of sodium urate crystals.</a> Lancet. 280, 682-685 (1962).</li><li>Martin, W. J., Harper, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+inflammation+and+resolution+in+acute+gout.">Innate inflammation and resolution in acute gout.</a> Immunology and Cell Biology. 88 (1), 15-19 (2010).</li><li>Fenaroli, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+as+drug+delivery+system+against+tuberculosis+in+zebrafish+embryos:+direct+visualization+and+treatment.">Nanoparticles as drug delivery system against tuberculosis in zebrafish embryos: direct visualization and treatment.</a> ACS Nano. 8 (7), 7014-7026 (2014).</li><li>Robertson, J. D., Ward, J. R., Avila-Olias, M., Battaglia, G., Renshaw, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeting+Neutrophilic+Inflammation+Using+Polymersome-Mediated+Cellular+Delivery.">Targeting Neutrophilic Inflammation Using Polymersome-Mediated Cellular Delivery.</a> Journal of Immunology. 198 (9), 3596-3604 (2017).</li><li>Le Guellec, D., Morvan-Dubois, G., Sire, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+development+in+bony+fish+with+particular+emphasis+on+collagen+deposition+in+the+dermis+of+the+zebrafish+(Danio+rerio).">Skin development in bony fish with particular emphasis on collagen deposition in the dermis of the zebrafish (Danio rerio).</a> International Journal of Developmental Biology. 48 (2-3), 217-231 (2004).</li><li>Kelly, C., Jefferies, C., Cryan, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+liposomal+drug+delivery+to+monocytes+and+macrophages.">Targeted liposomal drug delivery to monocytes and macrophages.</a> Journal of Drug Delivery. 2011, 727241 (2011).</li><li>Fidler, I. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+liposomes+to+improve+delivery+of+macrophage-augmenting+agents+to+alveolar+macrophages.">Design of liposomes to improve delivery of macrophage-augmenting agents to alveolar macrophages.</a> Cancer Research. 40 (12), 4460-4466 (1980).</li><li>Ng, A. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formation+of+the+digestive+system+in+zebrafish:+III.+Intestinal+epithelium+morphogenesis.">Formation of the digestive system in zebrafish: III. Intestinal epithelium morphogenesis.</a> Developmenal Biology. 286 (1), 114-135 (2005).</li></ol>

Здесь мы предоставили подробный протокол для формулирования нагруженных наркотиками липосом специально для макрофагов в личинок зебры. Этот метод может быть использован для вскрытия роли макрофагов в некоторых моделях заболеваний путем обеспечения прямой целенаправленной доставки...

Моноядерная фагоцитовая система обеспечивает первую линию защиты от вторжения патогенов. Эта система состоит из моноцитов, моноцитов дендритных клеток и макрофагов, которые активно фагоцитируют чужеродные патогены, тем самым ограничивая распространение патогенов. В дополнение к этим функциям фагоцитарного и микробицидного эффектора, дендритные клетки и макрофаги также способны к производству цитокинов и антиген-презентации для активации адаптивной иммунной системы1. Из этих клеток макрофаги получили особое внимание благодаря своей разнообразной функциональной неоднородности и вовлеченности в множественные воспалительные заболевания, от аутоиммунных и инфекционных заболеваний до рака2,3,4,5,7. Пластичность макрофагов и их способность функционально адаптироваться к потребностям их тканей окружающей среды требует экспериментальных подходов непосредственно наблюдать и допрашивать эти клетки in vivo.
Larval зебрафиш являются идеальной моделью организма, с помощью которого для изучения функции и пластичности макрофагов in vivo8. Оптическая прозрачность личиночных зебры обеспечивает окно для непосредственного наблюдения за поведением макрофагов, особенно в сочетании с макрофагой маркировки трансгенных репортер линий. Использование живой потенциал изображения и экспериментальной уступчивости личинки зебры привело к много значительных понимание функции макрофага, которые имеют прямое отношение к болезни человека9,10,11,12,13,14,15. Многие из этих исследований также воспользовались высоким сохранением активности наркотиков у зебры (атрибут, который лежит в основе их использования в целом животных наркотиков открытие платформы16,17,18), используя химические вмешательства для фармакологически манипулировать макрофагов функции. На сегодняшний день эти фармакологические процедуры в основном доставляются либо через погружение, которое требует, чтобы препарат был водорастворимым, либо путем прямой микроинъекции свободного препарата(рисунок 1А). Ограничения этих стратегий пассивной доставки включают всебяи эффекты вне цели и общую токсичность, которые могут исключать оценку любого воздействия на функцию макрофагов. Кроме того, при исследовании воздействия препарата на макрофаги неизвестно, действуют ли препараты на сами макрофаги или через более косвенные механизмы. При выполнении аналогичных исследований химического вмешательства для изучения функции макрофагов, мы признали, что существует неудовлетворенная необходимость разработки недорогого и простого метода доставки для целевых препаратов специально для макрофагов.
Липосомы микроскопические, биосовместимые, липидные двухслойные пузырьки, которые могут инкапсулировать белки, нуклеотиды и лекарственныегрузы 19. Unilamellar или multilamellar липидный двухслойная структура липосом образует водный просвет, где водорастворимые препараты могут быть включены в то время как гидрофобные препараты могут быть интегрированы в липидные мембраны. Кроме того, физико-химические свойства липосом, включая размер, заряд и изменения поверхности, можно манипулировать, чтобы адаптировать их таргетинг к конкретным клеткам20,21. Эти особенности липосомы сделали их привлекательным средством для доставки лекарств и повышения точности текущих схем лечения20. Как липосомы, естественно, phagocytozed макрофагов (функция, используемая их регулярного использования в доставке клодроната специально для макрофагов для абляции экспериментов22), они представляют в качестве привлекательного варианта для макрофага конкретных доставки наркотиков (Рисунок 1B).
Этот протокол описывает формулировку препаратов в синие флуоресцентные липосомы, покрытые гидрофильных полимерных полоксамер 188, который образует защитный слой на поверхности липосомы и было показано, для повышения удержания наркотиков и имеют превосходную биосовместимость23. Poloxamer был выбран для покрытия поверхностного покрытия липосом, как наши предыдущие исследования показали, что, по сравнению с полиэтиленгликоль модифицированных липосом, полоксамер модифицированных липосом показал лучшую биосометность после подкожной инъекции крысиных лап и аналогичных фармакокинетических у кроликов после внутривенного вливания23. Протоколы также описаны для их микроинъекции в личиночных зебры и живой визуализации для оценки их макрофафаг-таргетирования способности и локализации внутриклеточных отсеков, необходимых для липосомного деградации и цитоплазматной доставки наркотиков. В качестве доказательства концепции мы ранее использовали этот метод для целевой два препарата макрофагов для подавления их активации в личинок зебры модель острого подагры воспаление24. Этот метод доставки наркотиков расширяет химический "инструментарий", доступный для исследователей зебры, желающих обеспечить макрофаг-таргетинга своих препаратов, представляющих интерес.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1,2-dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DPPC)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>850355P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1,2-diseteroyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DSPE)</td>
			<td>Avanti Polar Lipids, Inc.</td>
			<td>850367P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.0 &#181;m Whatman Nuclepore Track-Etched polycarbonate membranes</td>
			<td>GE Healthcare Life Sciences</td>
			<td>110610</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL round-bottom flask</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z278262</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm culture dish</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>150460</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34998</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 Infinity Diode Array Detector</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G4212B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1260 Infinity Quaternary Pump</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G1311B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 1290 Infinity Series Thermostat</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G1330B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Avanti mini-extruder Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td>Avanti Polar Lipids Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>borosilicate microinjection needles</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>203-776-0664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C4901-100G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cholesterol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C8667</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont No.5 fine tip forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11251-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Microloader pipette tip</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5242956003</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf SmartBlock 1.5 mL, thermoblock for 24 reaction vessels</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>4053-6038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>eyelash manipulator</td>
			<td>Ted Pella Inc.</td>
			<td>113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hemocytometer</td>
			<td>Hawksley</td>
			<td>BS.748</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>BDH Chemicals</td>
			<td>441474J</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HPLC system</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>1260 series HPLC system</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P9541-1KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>low melting point agarose</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>16520-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoTracker Deep Red</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>L12492</td>
			<td>1 mM stock solution in DMSO, keep at -20 &#176;C and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LysoTracker Deep Red</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>L12492</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>magnetic stand</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>GJ-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Marina Blue 1,2-dihexadecanoyl-sn-glycero-phosphoethanolamine (Marina Blue DHPE)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>M12652</td>
			<td>Keep at -20 &#176;C and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>34860</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methyl cellulose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M0387-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>methylene blue</td>
			<td>Alfa Aesar</td>
			<td>42771</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>230391-500G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>micromanipulator</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>M-152</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>mineral oil</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M-3516</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitochondria-targeting antioxidant MitoTEMPO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0737</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>M36008</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MitoTEMPO</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>SML0737</td>
			<td>Keep at -20 &#176;C and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-Phenylthiourea (PTU)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7629-10G</td>
			<td>Take care when handling, toxic.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>BDH Chemicals</td>
			<td>27810.295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS (pH 7.4)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish (100 mm x 20 mm)</td>
			<td>Corning Inc.</td>
			<td>430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenomenex C18 Gemini-NZ 3 mm 250 mm x 4.6 mm column</td>
			<td>Phenomenex</td>
			<td>00G-4439-E0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pHrodo Red Escherichia coli BioParticles Conjugate</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>P35361</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pHrodo Red Escherichia coli BioParticles Conjugate</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>P35361</td>
			<td>Keep at -20 &#176;C and protect from light. Make 1 mg/mL stock solution by dissolving 2 mg lyophilized product in 2 mL of PBS supplemented with 20 mM HEPES, pH 7.4.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic transfer pipette</td>
			<td>Medi&#39;Ray</td>
			<td>RL200C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>poloxamer 188</td>
			<td>BASF Corporation</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>pressure injector</td>
			<td>Applied Scientific Instruments</td>
			<td>MPPI-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>rotary evaporator</td>
			<td>B&#252;chi, Flawil, Switzerland</td>
			<td>B&#252;chi R-215 Rotavapor</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scanning confocal microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td>Olympus FV1000 FluoView</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sorvall WX+ Ultracentrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75000090</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>stereomicroscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>MZ12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A5040-25G</td>
			<td>Make 4 mg/mL stock solution (in deionzed H2O) and keep at -20 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>triton-X100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>X100-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasonic bath</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>FB-11205</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Volocity Image Analysis Software</td>
			<td>PerkinElmer</td>
			<td>version 6.3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>water bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zetasizer Nano</td>
			<td>Malvern Instruments Ltd</td>
			<td>Zetasizer Nano ZS ZEN 3600</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

targeting drugs to larval zebrafish macrophages by injecting drug-loaded liposomes

Зебрафиш (Danio rerio) личинки превратились в популярную модель для исследования принимающих патогенных взаимодействий и вклад врожденных иммунных клеток к воспалительным заболеваниям из-за их функционально сохраненной врожденной иммунной системы. Они также широко используются для изучения того, как врожденные иммунные клетки помогают направлять процессы развития. Воспользовавшись оптической прозрачностью и генетической усвоcargo личинок зебры, эти исследования часто сосредоточены на живых подходов к визуализации, чтобы функционально охарактеризовать флуоресцентно отмеченные макрофаги и нейтрофилы внутри нетронутых животных. Благодаря своей разнообразной функциональной неоднородности и постоянно расширяющейся роли в патогенезах болезней, макрофагу уделяется значительное внимание. В дополнение к генетическим манипуляциям, химические вмешательства в настоящее время регулярно используются для манипулирования и изучения поведения макрофагов у личинок зебры. Доставка этих препаратов, как правило, ограничивается пассивным таргетингом свободных лекарств путем прямого погружения или микроинъекции. Эти подходы опираются на предположение, что любые изменения в поведении макрофагов являются результатом прямого воздействия препарата на сами макрофаги, а не следствием прямого воздействия на другой тип клеток. Здесь мы представляем наши протоколы для ориентации наркотиков специально для личинки зебры макрофагов микроинъекционных наркотиков загруженных флуоресцентных липосом. Мы показываем, что полоксамер 188-модифицированные снижаемые синюю флуоресцентную липосомы легко подхвачены макрофагами, а не нейтрофиловами. Мы также предоставляем доказательства того, что лекарства, поставляемые таким образом, могут влиять на активность макрофагов в соответствии с механизмом действия препарата. Этот метод будет иметь значение для исследователей, желающих обеспечить ориентации наркотиков на макрофаги и когда наркотики слишком токсичны, чтобы быть доставлены традиционными методами, как погружение.

Описанный здесь подход тонкой пленочной гидратации для подготовки флуоресцентных липосом, охватывающих препараты, является простым и экономически эффективным методом. С протоколом, используемым в этом исследовании, липосомы, как ожидается, будет unilamellar23,24...

Watch this Scientific Journal Video about Targeting Drugs to Larval Zebrafish Macrophages by Injecting Drug-Loaded Liposomes at JoVE.com

Targeting Drugs to Larval Zebrafish Macrophages by Injecting Drug-Loaded Liposomes

Здесь мы описываем синтез нагруженных наркотиками липосом и их микроинъекцию в личинок зебры с целью таргетинга доставки лекарств в клетки макрофаговой.

Ориентация наркотиков на Larval Зебрафиш Макрофагс путем инъекций наркотиков загруженных липосом

Zebrafish (Danio rerio) larvae have developed into a popular model to investigate host-pathogen interactions and the contribution of innate immune cells ...

В этом протоколе описывается методика таргетинга препаратов, представляющих интерес для личинородных макрофагов зебры, для манипулирования и оценки функции макрофага. Этот метод имеет преимущества по сравнению с традиционными стратегиями доставки наркотиков, такими как погружение, гарантируя, что препараты специально ориентированы на макрофаги через липосомную инкапсуляцию. При применении к зебрафиш модели болезни с воспалительным компонентом, этот метод имеет потенциал, чтобы решить, как макрофаги способствуют патологических процессов.Здесь мы демонстрируем полезность этого метода, ориентируясь на митохондриальной реакции кислорода видов ингибирования наркотиков макрофагов для подавления активации. Микроинъекция нагруженных наркотиками липосом в личинки может быть сложной задачей, так как следует позаботиться о том, чтобы не вызвать чрезмерного эпителиального повреждения, потенциально влияющих на иммунологические исследования. Визуальная демонстрация этого протокола имеет важное значение, поскольку она включает в себя фармакологические и целые методы живых клеток животных, которые не могут регулярно выполняться в одной лаборатории.Чтобы подготовить 10 миллиграммов липосом в 25-миллилитровой колбе круглого дна, добавьте в колбу 31 наномоляр морского синего и 300 наномоляр митохондриальных кислородных видов. Sonicate кратко полностью растворить, и удалить растворитель медленно на роторный испаритель установлен на 45-градусной водяной бане по Цельсию на 75 вращений в минуту под вакуумным давлением. Когда сухая липидная тонкая пленка образуется в стеклянных стенках колбы, далее высушите пленку в течение 45 минут под азотом, чтобы облегчить полное удаление органического растворителя.Затем увлажнять пленку одним миллилитром PBS и запечатать колбу парафиновой пленкой, прежде чем агитировать колбу вручную над 60-градусной водяной баней по Цельсию в течение 20 минут. После семи циклов замораживания и оттаивания используйте мини-экструдер и одномимберные травленые поликарбонатные мембраны для экструдирования липосом в течение двух-шести циклов. Когда большие unilamellar пузырьки были получены, конденсировать свежие липосомы в гранулы ультрацентрифугации.Инкубировать гранулы с одним миллилитр 1%poloxamer 188 раствор в течение 30 минут при 45 градусов по Цельсию и 750 оборотов в минуту в ThermoMixer с двухми миллилитров микроцентрифуг трубки крепления. Во время после вставки полоксамера 188 в липосомы, правильная концентрация полоксамера, время инкубации и температура имеют важное значение для достижения оптимальных физикохимических характеристик полученных липосом. В конце инкубации, ультрацентрифуг смеси снова в тех же условиях центрифуги, и удалить супернатант, содержащий любой несъеверхающий полимер или препарат.Затем храните липосомные гранулы при четырех градусах Цельсия, защищенные от света. Чтобы определить размер и потенциал зеты липосом, разбавить липосомную формулировку ультрапурной водой в соотношении один к 100. Используйте динамический свет рассеяния анализатор для измерения размера частиц, индекс полидисперсности, и зета потенциал в тройной при 25 градусов по Цельсию.Чтобы рассчитать эффективность захвата и нагрузку препарата липосом, растворите липосомы в Triton X-100. Ввените 20 микролитров растворенного липосомного образца в систему жидкой хроматографии высокого давления с четвертичных насосов, детектор диодного массива, установленный на 230 нанометров, и трехмиллиметровую, 250-4,6-миллиметровую колонку. Для подготовки трансгенных личинок зебры к инъекциям используйте миппы тонкой наконечника для ручного дехорионата 30 часов после оплодотворения эмбрионов, а также позволяют эмбрионам развиваться при 28,5 градусах Цельсия до двух дней после оплодотворения.Когда эмбрионы достигли соответствующей стадии, разбавить свежеприготовленную липосомную формулировку в соотношении один к одному в стерильном PBS, и смешать раствор в течение двух-трех секунд вихрем. Налейте достаточно 3%метил-целлюлозы в E3 среды в крышку небольшой, 35-миллиметровой культуры блюдо крышкой, чтобы сформировать тонкую пленку, покрывающую всю поверхность. Используйте пластиковую трубу для переноса, чтобы собрать пул из примерно 20-25 анестезированные личинки.Позвольте эмбрионам сконцентрироваться на кончике пипетки под действием силы тяжести и тщательно перенести личинки в середину 35-миллиметровой крышки тарелки культуры с минимальным раствором. Используйте микрокапильярный погрузчик, чтобы организовать личинки с передними к верхней части пластины инъекции с спинной поверхности, обращенной к микроинъекции иглы для инъекции в желудочек заднего мозгины или с их передней части пластины инъекций с брюшной поверхности, обращенной к микроинъекции иглы для инъекции в пазуху веноз. Используйте микрокапильярный погрузчик для заполнения иглы инъекций примерно пятью микролитров липосомной инъекционной смеси.Намонтировать иглу в микроманипулятор, подключенный к магнитной подставе и инжектору давления, и распоставить установку под стерео микроскопом. Используйте чистые, тонкие типсы, чтобы сократить кончик микроинъекции иглы для создания открытия около пяти микрометров в диаметре. Установите инжектор на пульс продолжительность около 50 миллисекунд и давление инъекции около 40 фунтов на квадратный дюйм.Введать болюс в каплю минерального масла, расположенного над сеткой линий гемоцитометра для калибровки объема, который будет введен. Затем отрегулируйте продолжительность пульса и/или давление впрыска до тех пор, пока диаметр болуса не покрывет 2 1/2 самых маленьких линий сетки. Аккуратно ввилите один нанолитер липосомной инъекционной смеси в желудочек заднего мозги каждой личинки.Сразу же после инъекций, добавить E3 среды для инъекционной пластины, и использовать пластиковые трубы передачи мягко агитировать личинок из метил-целлюлозы. Чтобы изображение спинной поверхности заднего сала на конфокальный микроскоп оснащен объективом погружения в воду, сначала заполнить 35-миллиметровую культуру блюдо на глубину до пяти миллиметров с монтажной среды, и пусть средний полимеризации. Раскопки небольшой траншеи в агарозе достаточной площади для размещения желточного мешка экспериментального эмбриона, и использовать пластиковые трубы передачи заполнены расплавленной монтажной среды для сбора анестезированные личинки.Немедленно снизите личинку в блюдо культуры, и используйте микрокапильярный погрузчик, чтобы сориентировать желток сакральной стороны вниз в раскопки отверстия. Поддерживайте эмбрион в этом положении до тех пор, пока агароза не полимеризируется. Наложить эмбрион со средой Е3, дополненной 200 микрограммами на миллилитр tricaine.Чтобы жить изображение желудочка заднего мира, выберите цель 20x, и установить конфокальный микроскоп до 512 на 512 пикселей и 2,5x зум. Когда параметры микроскопа были установлены, приобрести 40 на три микрометра - стеки, простирающиеся от спинной самой поверхности заднего мозга с помощью двухканальной визуализации для изображения синих флуоресцентных липосом и зеленых флуоресцентных макрофагов. Когда все изображения были получены, загрузите файлы в соответствующую программу анализа 3D-изображений.Под вкладкой Измерения перетащите протокол «Найти объекты» в задачи перетаскивания здесь, чтобы сделать измерения пространством. Выберите канал DAPI, чтобы выделить липосомы, и перетащите инструмент Inspect через секции для обнаружения липосомных макрофагов. Для количественной оценки интенсивности флуоресценции липосом в отдельных клетках перетащите протокол Clip To Regions Of Interest в пространство Drag Tasks Here To Make Measurements и используйте инструмент Rectangle, чтобы нарисовать коробку вокруг ячейки, заинтересованной в измерениях X, Y и q.Затем выберите Make Measurement Item из меню высадки измерений для создания файла измерения в окне библиотеки. В этой таблице суммируются размеры, потенциал зеты, загрузка лекарств и эффективность захвата производимых липосом. Как было отмечено, размер частиц липосомы похож с и без нагрузки наркотиков, хотя поверхностный заряд наркотиков загруженных липосом немного более нейтральным, чем контроль липосомы с морской синий только.Микроинъекция морских голубых липосом в желудочек заднего бора, как попродемонстрировано, приводит к быстрому поглощению резидентами макрофагов, которые могут быть легко количественно конфокальные микроскопии на три часа после инъекции. Нейтрофилов, однако, редко наблюдается содержать внутриклеточные липосомы. В отдельных липосомных макрофагах липосомы накапливаются в фаголизомальных отсеках, что необходимо для деградации липосомы и последующего высвобождения содержания препарата в цитоплазму.Доставка в синус venosus может доставить липосомы в каудальные гематопоэтические ткани резидентов макрофагов через циркуляцию. Микроинъекция липосом, нагруженных митохондриальной реакцией кислорода видов ингибирования наркотиков в желудочек заднего бора может значительно подавить мононатрия урат кристалла инициативе митохондриальной реакции кислорода производства в липосомы груженых задних ординаторов макрофагов. Дальнейшая проверка подавляющих эффектов препаратов, представляющих интерес для состояний активации макрофагов, может быть выполнена путем изучения провоспламеняющей экспрессии генов цитокинов путем гибридизации всего крепления на месте и временного набора нейтрофилов.Используя этот метод, мы смогли нацелить препараты на макрофаги, чтобы подтвердить, что иммунометаболический механизм приводит к их активации в личинородной модели зебры при остром подагрическом воспалении. Будущие адаптации этого протокола могут включать в себя выполнение поверхностной модификации липосомы для повышения макрофаг ориентации или содействовать ориентации на другие иммунные клетки, такие как нейтрофилов.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Humanized Mouse Model to Study Bacterial Infections Targeting the Microvasculature

Humanized мышь моделью для изучения Бактериальные инфекции Ориентация микрососудов

Neisseria meningitidis causes a severe, frequently fatal sepsis when it enters the human blood stream. Infection leads to extensive damage of the blood ...

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Use of Shigella flexneri to Study Autophagy-Cytoskeleton Interactions

Использование<em&gt; Shigella flexneri</em&gt; Для изучения аутофагии-Цитоскелет взаимодействий

Shigella flexneri is an intracellular pathogen that can escape from phagosomes to reach the cytosol, and polymerize the host actin cytoskeleton to promote ...

Assessing Anti-fungal Activity of Isolated Alveolar Macrophages by Confocal Microscopy

Оценка противогрибковое действие изолированных альвеолярных макрофагов с помощью конфокальной микроскопии

The lung is an interface where host cells are routinely exposed to microbes and microbial products. Alveolar macrophages are the first-line phagocytic ...

Highly Efficient Transfection of Human THP-1 Macrophages by Nucleofection

Высокоэффективная Трансфекцию человека THP-1 макрофагов по Nucleofection

Macrophages, as key players of the innate immune response, are at the focus of research dealing with tissue homeostasis or various pathologies. ...

Modeling Mucosal Candidiasis in Larval Zebrafish by Swimbladder Injection

Моделирование слизистой оболочки кандидоз мальков данио рерио по плавательного пузыря инъекций

Early defense against mucosal pathogens consists of both an epithelial barrier and innate immune cells. The immunocompetency of both, and their ...

Proteomic Profiling of Macrophages by 2D Electrophoresis

Протеомный профилирования макрофагов 2D электрофореза

The goal of the two-dimensional (2D) electrophoresis protocol described here is to show how to analyse the phenotype of human cultured macrophages. The ...

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Non-invasive Imaging of the Innate Immune Response in a Zebrafish Larval Model of Streptococcus iniae Infection

Неинвазивная Визуализация врожденного иммунного ответа в данио рерио личинок модели<em&gt; Streptococcus iniae</em&gt; Инфекция

The aquatic pathogen, Streptococcus iniae, is responsible for over 100 million dollars in annual losses for the aquaculture industry and is capable of ...

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Quantification of Cytosolic vs. Vacuolar Salmonella in Primary Macrophages by Differential Permeabilization

Количественное Цитозольные против вакуолярной<em&gt; Сальмонелла</em&gt; В первичных макрофагах дифференциальной проницаемости

Intracellular bacterial pathogens can replicate in the cytosol or in specialized pathogen-containing vacuoles (PCVs). To reach the cytosol, bacteria like ...

Phenotypic Characterization of Macrophages from Rat Kidney by Flow Cytometry

Фенотипическая Характеристика макрофаги почек крыс с помощью проточной цитометрии

There is increasing evidence suggesting the important role of inflammation and, subsequently, macrophages in the development and progression of renal ...

Using Zebrafish Models of Human Influenza A Virus Infections to Screen Antiviral Drugs and Characterize Host Immune Cell Responses

Использование данио рерио модели человеческого вируса гриппа А инфекций экрана противовирусных препаратов и характеризации иммунных клеток-хозяев ответов

Each year, seasonal influenza outbreaks profoundly affect societies worldwide. In spite of global efforts, influenza remains an intractable healthcare ...