Name: characterization of sickling during controlled automated deoxygenation with oxygen gradient ektacytometry
Uploaded: 2019-11-05T14:30:00
Duration: 8 min 23 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Sickling During Controlled Automated Deoxygenation with Oxygen Gradient Ektacytometry at JoVE.com

Эта работа была частично поддержана грантом Eurostars estar18105 и неограниченным грантом, предоставленным RR Mechatronics. Авторы благодарят Систо Хендрикса и Яна де Зоэтена за техническую поддержку.

Все процедуры были одобрены этическим комитетом Университетского медицинского центра Утрехта (UMCU) и в соответствии с Хельсинкской декларацией. Пациенты, зачисленные в Техасский детский гематологический центр (TCHC), были одобрены местным IRB и в соответствии с Хельсинкской декларацией.
1. Общие соображения
<ol><li>Начните с выполнения тестового измерения для разогрева боба и чашки. Убедитесь, что температура боба и чашки составляет 37 градусов по Цельсию. Это важно для хорошей воспроизводимости.</li>
	<li>Убедитесь, что вязкий поливинилпирролидон (PVP) раствор подпадает под строгие пределы для осмоляритности (282-286 мОзм/кг), рН (7,35-7,45) и вязкости (27,5-32,5 МПа) при комнатной температуре (22 градуса по Цельсию). ПРИМЕЧАНИЕ: PVP должны быть использованы при комнатной температуре. При хранении при более низкой температуре убедитесь, что он прогрелся до комнатной температуры до проведения каких-либо измерений.</li>
</ol>2. Запуск эктацитометра
<ol><li>Включите компьютер и эктакитометр со спины. Запустите программу (Таблица материалов) на компьютере.</li>
	<li>Убедитесь, что азот доступен для дезоксигенатного образца, открыв азотный цилиндр.</li>
	<li>Опустите боб в чашку и убедитесь, что чашка может повернуть свободно. Очистите чашку внутри и снаружи мягкой тканью и дистиллированной водой, потому что мусор может препятствовать измерениям EI.</li>
	<li>Когда программа работает, проверьте следующее сообщение на экране:"Убедитесь, что газовый клапан открыт" и нажмите OK.</li>
	<li>Убедитесь, что эктакитометр запускает процесс самопроверки pO2, который появится на экране. Выберите Начало (введите). Если это не удается, повторно проверить себя, нажав аппаратных проверить pO2 Самопроверка. ПРИМЕЧАНИЕ: Если самопроверка снова не удается,рассмотреть вопрос о замене O 2-пятно. O2-пятнозаменяется мягко нажав пятно из внутренней части чашки с кончиком пальца. Новое место помещается, мягко толкая пятно снаружи в чашку.</li>
	<li>Выберите сканирование pO2 из различных тестов, перечисленных слева. Выберите настройки справа от экрана и убедитесь, что они установлены в рамках параметров, перечисленных в таблице 1. Сохраняйте одинаковые настройки для каждого измерения.</li>
	<li>Чтобы сохранить эти настройки, нажмите OK OK. ПРИМЕЧАНИЕ: Предпочтительные настройки перечислены в таблице 1, но могут быть скорректированы в соответствии с предпочтениями пользователя и целями исследования. Например, для более широкого изучения серповидного поведения можно изменить скорость и продолжительность дезоксигенации.</li>
</ol>3. Сбор и подготовка образцов
ПРИМЕЧАНИЕ: Для проверки метода, этиленедиамин тетраацетической кислоты (ЭДТА) обработанные крови от 38 пациентов SCD и 5 здоровых элементов управления, включенных в Университетский медицинский центр Утрехт или Техас Детский гематологический центр, в различных клинических исследованиях ( Использовался идентификатор Нидерландского пробного регистра « NTR», NTR 6779 и NTR 6462, а также анонимизированные образцы оставшейся крови у пациентов, которые посещали амбулаторную клинику или были госпитализированы.
<ol><li>Сбор образцов крови путем венипунктуры (минимум 300 л/образец) в трубке, содержащей ЭДТА. Убедитесь, что кровь хранилась не менее 30 минут при 4 градусах Цельсия, но не более 24 ч. ПРИМЕЧАНИЕ: Цитрат фосфат декстроза аденин (CPDA) или гепарин также может быть использован, но влияние этих реагентов на сохранение образца в отношении кислорода градиент эктацитометрии не очень хорошо известны.</li>
	<li>Смешайте образец осторожно инверсией для гомогенизации. Не встряхните образец. Пусть образец прогреется до комнатной температуры на роликовой скамейке перед измерением. ПРИМЕЧАНИЕ: Образец трубки (9-10 мл), которая хранится более 1 ч при 4 градусах Цельсия, должна прогреться в течение 15 мин. При хранении менее 1 ч при 4 градусах Цельсия он должен прогреться в течение 10 мин. Образец трубки (2-6 мл), который хранится более 1 ч при 4 градусах Цельсия, должен прогреться в течение 10 мин. При хранении менее 1 ч при 4 градусах Цельсия он должен прогреться в течение 5 мин.</li>
	<li>Измерьте полный анализатор крови на гематологическом анализаторе. Для этого возьмите 20-200 л цельной крови в трубке, содержащей ЭДТА. Поместите иглу аспирации в трубку и нажмите на кнопку за иглой гематологического анализатора, чтобы начать измерение. ПРИМЕЧАНИЕ: При полном анализе крови измеряется число РБК, что является важным фактором для стандартизации измерений градиента кислорода. Подсчет РБК рассчитывается из переднего и бокового рассеяния по цитометрии потока. Нормальный подсчет РБК в здоровых элементах управления составляет 3,7-5,0 х 1012/л для женщин и 4,2-5,5 х 1012/лдля мужчин. Количество РБК у пациентов с СКД, как правило, снижается. Некоторые гематология анализаторы будут также измерять процент плотных красных кровяных телец (% DRBC), которые могут иметь дополнительную ценность в интерпретации отдельных кривых градиента кислорода эктацитометрии.</li>
	<li>Стандартизуйте весь образец крови до 200 х 106 РБК в 5 мл PVP (200 x 106 RBCs/vial) путем корректировки объема образца, который будет добавлен. Если общее количество РБК меньше 200 х 106,то это повлияет на дифракционный узор и EI.<ol>
<li>Используйте уравнение ниже для выполнения подсчета. 4.0/xx (x 1012/L) x 50 yy qL целая кровь/флаал PVP где хх является рассчитанным количеством РБК, полученным от шага 3.3 и yy является количество цельной крови, которая необходима для фактического измерения. В зависимости от степени анемии и других факторов, влияющих на количество РБК, количество необходимой цельной крови составляет 40-90 л.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. Измерение градиента эктацитометрии кислорода
<ol><li>Pipette вычислень том образца (yy l крови) в PVP для того чтобы получить общий том 5 mL. Prewet кончик, осторожно resuspending крови 3x. Используйте наконечник пипетки с широким отверстием, чтобы избежать дополнительной нагрузки на RBCs. Аккуратно смешивайте образец вручную путем инверсии, пока он не станет однородным. ПРИМЕЧАНИЕ: Откройте флакон PVP как можно меньше времени, чтобы избежать воздушного контакта.</li>
	<li>Медленно нарисуйте 2,0 мл смеси крови/PVP в 3 мл шприца без иглы. Нажмите поршень, чтобы удалить любые видимые пузырьки воздуха и чрезмерного решения образца до 1,5-1,8 мл остается в шприц (в зависимости от объема чашки).</li>
	<li>Впрысните общий объем образца медленно и равномерно в боб через разъем. Убедитесь, что уровень образца выше датчика кислорода (розовое пятно) и выше небольшого всасывающего отверстия. Не оставляйте в шприцах образец решения.</li>
	<li>Нажмите Новый и заполните образец идентификатора, замечания, дата пожертвования, и вязкость PVP. Нажмите OK (ru) Аспират. После 60 с, чашка будет вращаться и аспирировать образец в течение 15 с. Нажмите OK, когда вращение останавливается. Закройте крышку машины. Нажмите Продолжить (ru) Начните сейчас,как кислородный градиент эктачитометрии делается с фиксированным усилением. Измерение займет около 28 минут.</li>
	<li>После измерения распечатайте отчет, отображающие кривую и параметры, автоматически вычисляемые программным обеспечением. Убедитесь, что исходные данные автоматически хранятся в указанной папке в настройках. Максимальный EI (EImax),минимальный EI (EImin),pO295%EI (PoS), а область (область под кривой) автоматически рассчитывается и добавляется в печатный отчет и необработанные данные.</li>
	<li>Вручную получить ЗЭИ, вычислив разницу междуEI макс и EIмин. Рассчитайте процентное восстановление, взяв разницу в среднем EI до дезоксигенации (pO2 100-120 мм рт. э.г.) и средние значения EI при реоксигенации на уровне 100-120 мм рт. мг.</li>
</ol>5. Очистка эктакитометра
<ol><li>Удалите образец шприца и замените его шприцем, наполненным дистиллированной водой или деионизированной водой.</li>
	<li>Нажмите чистый,медленно промывка разъема во время промывки. Убедитесь в том, чтобы промыть в обоих направлениях.</li>
	<li>Снимите шприц и поднимите боб. Высушите боб, чашку и разъем тщательно с мягкой тканью.</li>
	<li>Используйте большой шприц (10-50 мл) для промывки разъема, чтобы удалить любую воду, оставшуюся в трубах и бобе. Блок нижней входе / розетке Боб, чтобы получить обратно давление в трубах, тем самым удаляя оставшуюся воду.</li>
	<li>Опустите боб в чашку. Машина готова к следующему измерению.</li>
</ol>6. Выключение машины
<ol><li>Убедитесь, что машина правильно промыта после последнего измерения, как описано выше. Убедитесь, что надлежащие трубки относятся к очистке раствора.</li>
	<li>Закройте программное обеспечение, нажмите Закрыть, и нажмите Начало, чтобы начать конец дня программы очистки.</li>
	<li>После завершения всей программы очистки, удалить шприц и поднять боб. Промыть разъем большим шприцем.</li>
	<li>Очистите бутылку отходов и высушите боб и чашку мягкой тканью. Промыть разъем для того, чтобы удалить воду, оставшуюся в трубах и Боб. Блок нижней входе / розетке Боб, чтобы получить обратно давление в трубах, тем самым удаляя все оставшиеся воды.</li>
	<li>Закройте крышку машины. Закройте азотный цилиндр. Выключите компьютер и машину.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Clark, M. R., Mohandas, N., Shohet, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deformability+of+oxygenated+irreversibly+sickled+cells.">Deformability of oxygenated irreversibly sickled cells.</a> Journal of Clinical Investigation. 65 (1), 189-196 (1980).</li><li>Smith, C., Kuettner, J., Tukey, D., White, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Variable+Deformability+of+Irreversibly+Sickled+Erythrocytes.">Variable Deformability of Irreversibly Sickled Erythrocytes.</a> Blood. 58 (1), 71-78 (1981).</li><li>Clark, M., Mohandas, N., Embury, S., Lubin, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+laboratory+alternative+to+irreversibly+sickled+(ISC)+counts.">A simple laboratory alternative to irreversibly sickled (ISC) counts.</a> Blood. 60 (3), 659-663 (1982).</li><li>DaCosta, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnostic+tool+for+red+blood+cell+membrane+disorders+Assessment+of+a+new+generation+ektacytometer.">Diagnostic tool for red blood cell membrane disorders Assessment of a new generation ektacytometer.</a> Blood Cells, Molecules, and Diseases. 56 (1), 9-22 (2016).</li><li>Rabai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deformability+analysis+of+sickle+blood+using+ektacytometry.">Deformability analysis of sickle blood using ektacytometry.</a> Biorheology. 51 (2-3), 159-170 (2014).</li><li>Ballas, S. K., Mohandas, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sickle+red+cell+microrheology+and+sickle+blood+rheology.">Sickle red cell microrheology and sickle blood rheology.</a> Microcirculation. 11 (2), 209-225 (2004).</li><li>Connes, P., Alexy, T., Detterich, J., Romana, M., Hardy-Dessources, M. D., Ballas, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+blood+rheology+in+sickle+cell+disease.">The role of blood rheology in sickle cell disease.</a> Blood Reviews. 30 (2), 111-118 (2015).</li><li>Hierso, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+oxidative+stress+on+red+blood+cell+rheology+in+sickle+cell+patients.">Effects of oxidative stress on red blood cell rheology in sickle cell patients.</a> British Journal of Haematology. 166 (4), 601-606 (2014).</li><li>Mozar, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+blood+cell+nitric+oxide+synthase+modulates+red+blood+cell+deformabilityin+sickle+cell+anemia.">Red blood cell nitric oxide synthase modulates red blood cell deformabilityin sickle cell anemia.</a> Clinical Hemorheology and Microcirculation. 64 (1), 47-53 (2016).</li><li>Clark, M. R., Mohandas, N., Shohet, S. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Osmotic+Gradient+Ektacytometry:+Comprehensive+Characterization+of+Red+Cell+Volume+and+Surface+Maintenance.">Osmotic Gradient Ektacytometry: Comprehensive Characterization of Red Cell Volume and Surface Maintenance.</a> Blood. 61 (5), 899-911 (1983).</li><li>Parrow, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+red+cell+deformability+and+hydration+reflect+HbF+and+HbA2in+blood+from+patients+with+sickle+cell+anemia.">Measurements of red cell deformability and hydration reflect HbF and HbA2in blood from patients with sickle cell anemia.</a> Blood Cells, Molecules, and Diseases. 65, 41-50 (2017).</li><li>Steinberg, M. H., Chui, D. H. K., Dover, G. J., Sebastiani, P., Alsultan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fetal+hemoglobin+in+sickle+cell+anemia:+A+glass+half+full.">Fetal hemoglobin in sickle cell anemia: A glass half full.</a> Blood. 123 (4), 481-485 (2014).</li><li>Ballas, S. K., Larner, J., Smith, E. D., Surrey, S., Schwartz, E., Rappaport, E. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheologic+predictors+of+the+severity+of+the+painful+sickle+cell+crisis.">Rheologic predictors of the severity of the painful sickle cell crisis.</a> Blood. 72 (4), 1216-1223 (1988).</li><li>Lande, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Incidence+of+Painful+Crisis+in+Homozygous+Sickle+Cell+Disease:+Correlation+with+Red+Cell+Deformability.">The Incidence of Painful Crisis in Homozygous Sickle Cell Disease: Correlation with Red Cell Deformability.</a> Blood. 72 (6), 2056-2059 (1988).</li><li>Lemonne, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+increased+red+blood+cell+deformability+raise+the+risk+for+osteonecrosis+in+sickle+cell+anemia.">Does increased red blood cell deformability raise the risk for osteonecrosis in sickle cell anemia.</a> Blood. 121 (15), 3054-3057 (2013).</li><li>Ballas, S. K., Smith, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Red+blood+cell+changes+during+the+evolution+of+the+sickle+cell+painful+crisis.">Red blood cell changes during the evolution of the sickle cell painful crisis.</a> Blood. 79 (8), 2154-2163 (1992).</li><li>Telen, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+adhesion+and+the+endothelium:+E-selectin,+L-selectin,+and+pan-selectin+inhibitors.">Cellular adhesion and the endothelium: E-selectin, L-selectin, and pan-selectin inhibitors.</a> Hematology/Oncology Clinics of North America. 28 (2), 341-354 (2014).</li><li>Papageorgiou, D. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+polymerization+and+adhesion+under+hypoxia+in+sickle+cell+disease.">Simultaneous polymerization and adhesion under hypoxia in sickle cell disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 115 (38), 201807405 (2018).</li><li>Liu, J., Qiang, Y., Alvarez, O., Du, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+impedance+microflow+cytometry+with+oxygen+control+for+detection+of+sickle+cells.">Electrical impedance microflow cytometry with oxygen control for detection of sickle cells.</a> Sensors and Actuators, B: Chemical. 255, 2392-2398 (2018).</li><li>Du, E., Diez-Silva, M., Kato, G. J., Dao, M., Suresh, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+sickle+cell+biorheology+and+implications+for+painful+vasoocclusive+crisis.">Kinetics of sickle cell biorheology and implications for painful vasoocclusive crisis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 112 (5), 1422-1427 (2015).</li><li>Li, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetic+assay+shows+that+increasing+red+cell+volume+could+be+a+treatment+for+sickle+cell+disease.">Kinetic assay shows that increasing red cell volume could be a treatment for sickle cell disease.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (5), 689-696 (2017).</li><li>Rab, M. A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+and+reproducible+characterization+of+sickling+during+automated+deoxygenation+in+sickle+cell+disease+patients.">Rapid and reproducible characterization of sickling during automated deoxygenation in sickle cell disease patients.</a> American Journal of Hematology. 94, 575-584 (2019).</li><li>Renoux, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Importance+of+methodological+standardization+of+ektacytometric+measures+of+red+blood+cell+deformability+in+sickle+cell+anemia.">Importance of methodological standardization of ektacytometric measures of red blood cell deformability in sickle cell anemia.</a> Clinical Hemorheology and Microcirculation. 62 (2), 173-179 (2016).</li><li>Parrow, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+Deformability+and+Red+Cell+Heterogeneity+in+Blood+by+Ektacytometry.">Measuring Deformability and Red Cell Heterogeneity in Blood by Ektacytometry.</a> Journal of Visualized Experiments. (131), (2018).</li><li>Bessis, M., Feo, C., Jones, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitation+of+red+cell+deformability+during+progressive+deoxygenation+and+oxygenation+in+sickling+disorders+(the+use+of+an+automated+Ektacytometer).">Quantitation of red cell deformability during progressive deoxygenation and oxygenation in sickling disorders (the use of an automated Ektacytometer).</a> Blood Cells. 8 (1), 17-28 (1982).</li><li>Sorette, M. P., Lavenant, M. G., Clark, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ektacytometric+measurement+of+sickle+cell+deformability+as+a+continuous+function+of+oxygen+tension.">Ektacytometric measurement of sickle cell deformability as a continuous function of oxygen tension.</a> Blood. 67 (6), 1600-1606 (1987).</li><li>Huang, Z., Hearne, L., Irby, C. E., King, S. B., Ballas, S. K., Kim-Shapiro, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+increased+deformability+of+deoxygenated+sickle+cells+upon+oxygenation.">Kinetics of increased deformability of deoxygenated sickle cells upon oxygenation.</a> Biophysical journal. 85 (4), 2374-2383 (2003).</li><li>Antoniani, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+fetal+hemoglobin+synthesis+by+CRISPR/Cas9-mediated+editing+of+the+human+&#946;-globin+locus.">Induction of fetal hemoglobin synthesis by CRISPR/Cas9-mediated editing of the human &#946;-globin locus.</a> Blood. 131 (17), 1960-1973 (2018).</li><li>Abdulmalik, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Crystallographic+analysis+of+human+hemoglobin+elucidates+the+structural+basis+of+the+potent+and+dual+antisickling+activity+of+pyridyl+derivatives+of+vanillin.">Crystallographic analysis of human hemoglobin elucidates the structural basis of the potent and dual antisickling activity of pyridyl derivatives of vanillin.</a> Acta Crystallographica Section D: Biological Crystallography. 67 (12), 1076 (2011).</li><li>Oder, E., Safo, M. K., Abdulmalik, O., Kato, G. J., Discovery, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Developments+in+Anti-Sickling+Agents:+Can+Drugs+Directly+Prevent+the+Polymerization+of+Sickle+Haemoglobin+In+Vivo.">New Developments in Anti-Sickling Agents: Can Drugs Directly Prevent the Polymerization of Sickle Haemoglobin In Vivo.</a> British Journal of Haematology. 175 (1), 24-30 (2016).</li><li>Oksenberg, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GBT440+increases+haemoglobin+oxygen+affinity,+reduces+sickling+and+prolongs+RBC+half-life+in+a+murine+model+of+sickle+cell+disease.">GBT440 increases haemoglobin oxygen affinity, reduces sickling and prolongs RBC half-life in a murine model of sickle cell disease.</a> British Journal of Haematology. 175 (1), 141-153 (2016).</li><li>Xu, G. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis,+and+Biological+Evaluation+of+Ester+and+Ether+Derivatives+of+Antisickling+Agent+5-HMF+for+the+Treatment+of+Sickle+Cell+Disease.">Synthesis, and Biological Evaluation of Ester and Ether Derivatives of Antisickling Agent 5-HMF for the Treatment of Sickle Cell Disease.</a> Molecular Pharmaceutics. 14 (10), 3499-3511 (2017).</li></ol>

Авторы не заявляют о каких-либо конкурирующих финансовых интересах.

Здесь мы описываем кислородный градиент эктачитометрии, метод, который может быть использован для изучения серповидного поведения красных кровяных телец от пациентов SCD в диапазоне концентраций кислорода(Рисунок 4 и Рисунок 5). Для того, чтобы получить воспроизводимые результаты, важно определить факторы, которые влияют на результаты. Например, температура оказывает большое влияние на деформацию РБК, в основном из-за ее влияния на толщину вязкой раствора (PVP). Мы рекомендуем проводить тестовые измерения в начале дня, чтобы тщательно нагреть машину до 37 градусов по Цельсию. Это позволит повысить воспроизводимость результатов. Осмолялярность вязкого раствора должна находиться в узком диапазоне (282-286 мОзм/кг для PVP), так как осмоляритность влияет на состояние гидратации, что, в свою очередь, влияет на деформацию РБК. рН и вязкость PVP также должны быть жестко регламентированы. Различия в рН и температуре могут сильно влиять на кривые22. Кроме того, оставшаяся вода в чашке, боб, и трубки, может вызвать лиза РБК, что приводит к неверным данным, потому что меньше нетронутыми РБК, присутствующих в чашке будет измеряться.
Настройки для выполнения кислородного градиента эктачитометрии могут быть скорректированы для решения конкретных исследуемых вопросов. Предпочтительные настройки перечислены в таблице 1. Время дезоксигенации 1300 с было выбрано на основе наблюдений, показывающих, что расширение дезоксигенации не привело к снижениюEI мин для большинства пациентов. В отличие от этого, сокращение времени дезоксигенации будет препятствовать дискриминационной мощности кислородного градиента эктацитометрии. Время реоксигенации было установлено до 280 с из-за быстроразрешающих полимеров HbS во время реоксигенации, и сопутствующей восстановления EI к значениям, измеренным до дезоксигенации. Сдвига стресс был установлен на 30 Па, который аналогично осмотического градиента эктазитометрии. Снижение этого параметра может затруднить дискриминационную мощность. Контроль дезоксигенации может быть использован, если набор скорости дезоксигенации применяется к каждому образцу пациента. В наших предпочтительных настройках, эта опция была выключена, потому что скорость дезоксигенации пациента специфична из-за уникальной кривой диссоциации гемоглобина. Таким образом, включение контроля дезоксигенации исключило бы эту характеристику из асссе. Тем не менее, эта особенность кислородного градиента эктачитометрии все еще расследуется.
Несколько известных факторов влияют на параметры градиента кислорода ektacytometry, а именно рН, температуру и осмолярность. Эктачитометрия, особенно PoS, находится под влиянием 2,3-дифоспоглицерат (2,3-DPG)22. Кроме того, существует четкая корреляция между %HbF и EIмин, и в меньшей степени PoS(рисунок 5-D). EImax связан с серповидно-клеток на normoxia, что может объяснить наблюдение, что вскоре после ЛОС, РБК деформации на normoxia (EIмакс), выше. Последнее вызвано разрушением самых серповых клеток, а значит, и менее деформируемых РБК во время VOC16. Как показано на рисунке 5F, более высокий %плотный РБК (определяется как РБК с концентрацией гемоглобина Это указывает на то, что плотные клетки являются важным фактором деформации РБК в normoxia, аналогичные ранее сообщалось результаты1.
Стандартизация образцов очень важна для получения воспроизводимых результатов и для разграничения между различными генотипами и методами лечения. Корректировка подсчета ГОЛОСОВ РБК важна, так как количество РБК влияет на интенсивность дифракционного шаблона. Если в зазоре между бобом и чашкой присутствуют более низкие цифры РБК, кривая сместится вверх и влево. Кроме того, кривая будет колебаться, препятствуя точному расчету параметров, особенно PoS.
Ограничение этого метода заключается в том, что значение EI представляет собой среднее значение всех клеток, включая различные субпопуляции. Интенсивно изучалась гетерогенность популяций РБК у пациентов СКД и ее влияние на измерение эктацитометрии. Это привело к стандартизации, при которой размер дифракционного шаблона корректируется на фиксированное значение вместо исправленного для подсчета РБК23,24. В настоящее время изучается вопрос о том, следует ли применять этот способ стандартизации к измерениям оксигенного градиента эктацитометрии.
Несколько методов измерения деформации РБК в гипоксических условиях были разработаны на основе шага дезоксигенации, который проходил за пределами эктацитометра25,26,27. В этих условиях, различия в клеточном поведении не наблюдались между пациентами с hbS черты и здоровый контроль при физиологических рН25. Кислородградиент эктачитометрии, однако, ясно показывает низкий, но очевидный PoS у людей с hbS черты(Рисунок 4A). На сегодняшний день, в обычной клинической практике, только альтернативные методы для измерения склонности отдельных РБК пациента к серпу в пробирке включают морфологии основе серпового анализа: РБК инкубируются в условиях, способствующих полимеризации HbS, таких как низкое кислородное напряжение или низкий рН. Фиксатор добавляется после инкубации, и процент серповых клеток подсчитывается вручную или цифрово с помощью световой микроскопии. Многие доклинические и ранние фармакологические испытания фазы используют анализ серпового для создания вторичной переменной исхода, чтобы быть в состоянии предсказать клиническую эффективность в SCD28,29,30,31 ,32. Однако это отнимает много времени, вариативность высока, а чувствительность низкая, техника не автоматизирована и, следовательно, трудоемкая. Кроме того, морфологические изменения из-за серпа могут не коррелировать хорошо с физиологическими параметрами, такими как деформация РБК, потому что это 2-мерный статический самописец2.
Кислородный градиент эктацитометрии обеспечивает функциональный анализ серпового, который является быстрым и воспроизводимым. Это тест in vitro, который не учитывает эндотелиальную поверхность. Тем не менее, он обеспечивает функциональные аспекты серповидного поведения и характеристики РБК, что делает его перспективным методом для исследования серповидно-клеточных клеток. Будущие применения метода включают мониторинг эффективности лечения у пациентов SCD, выступающей в качестве биомаркера для новых стратегий лечения, изучение серповидного поведения, и мониторинг химеризма после трансплантации стволовых клеток в SCD.

В SCD, одна точка мутации приводит к производству HbS, которые могут полимеризации при дезоксигенации. Полимеризация HbS вызывает серп РБК и снижает деформацию РБК. Сочетание серпа РБК и приверженности РБК эндотелии приводит к различным осложнениям SCD, включая вазо-окклюзионные кризисы (ЛОС), инсульт, повреждение органов и хроническую гемолитическую анемию. Даже при нормокиси, деформация РБК скомпрометирована у пациентов с SCD. Унижаемость еще больше снижается при низких концентрациях кислорода. Ключевыми игроками, определяющими деформацию в normoxia являются плотные клетки, необратимо серотистые клетки (ISC), и обезвоженные клетки, все из которых имеют снижение поверхностного к объему соотношение1,2,3.
Эктачитометрия является устоявшимся методом измерения деформации РБК, широко используемым для диагностики наследственных гимолитических анемий, в частности мембранопатий4. Он также может быть использован для изучения геморхеологии5,6,7,8,9. Осмотический градиент эктацитометрии, в котором РБК деформации измеряется во время непрерывного изменения осмолальности, был использован для изучения SCD на протяжении более десяти лет10,11. Процент гемоглобина плода (HbF) является одним из сильнейших ингибиторов полимеризации HbS, потому что ни HbF, ни его смешанный гибридный тетрамер (No2'S) не могут войти в полимерную фазу deoxyHbS12. Недавние исследования показывают, что повышение уровня HbF у пациентов СКЗ приводит к лучшему соотношению поверхности к объему, тем самым улучшая состояние гидратации и, таким образом, умышленность у нетрансграниченных пациентов11.
Деформация РБК изучалась в прошлом как биомаркер для осложнений SCD, но с противоречивыми результатами. В исследованиях, проведенных поперечным и в стабильном состоянии, лиц с более высоким уровнем деформации РБК было установлено, что более высокая частота остеонекроза и более боли кризисов13,14,15. В отличие от этих выводов, по сравнению с устойчивыми значениями состояния во время острого ЛОС, деформация РБК была снижена в продольных исследованиях в рамках тех же лиц16. Это несоответствие может быть результатом изучения деформации РБК в различных условиях (т.е. при стабильном состоянии против ЛОС). Процент серсовых клеток высок в начале ЛОС, и клетки быстро разрушаются по мере развития кризиса, что может объяснить разницу между устойчивыми данными о поперечном сечении состояния и продольными данными, полученными во время ЛОС. Однако другие факторы, такие как присоединение субпопуляций РБК к эндотелиальной поверхности, также могут иметь важное значение для возникновения ЛОС. В SCD, это более клинически актуальной для измерения деформации во время дезоксигенации, потому что вазо-окклюзия обычно происходит в гипоксических postcapillary венулей, а не в менее гипоксической микрокапиллярной сети17. Кроме того, наличие МСЦ может изменить способность эктацитометра измерять деформацию при нормоксии. Искажение дифракционного шаблона вызвано МСК, что является результатом невыравнивания во время потока1,2,3.
Альтернативные подходы к изучению патофизиологии ЛОС включают измерения прилипания РБК к искусственной поверхности18, одноклеточной электрической импеданс микропотокции19, микрофлюидные модели, сочетающие количественные измерения серпа клетки и unsickling с одноклеточной реологией20,и лазер-индуцированной полимеризации21. Хотя эти методы являются перспективными, трудоемкими и требуют обширной подготовки операторов. Кроме того, анализы, основанные на морфологии, не обладают способностью изучать клеточное поведение, например, деформацию, как функцию градиента кислорода.
В этом исследовании мы описываем быстрый и воспроизводимый функциональный ассс, выполненный с помощью эктакитометра. Это следующее поколение эктацитометрии измерения, которое измеряет различные качественные аспекты деформации РБК, выраженные как EI во время дезоксигенации (1300 с) и быстрой реоксигенации (280 с). Эти временные интервалы позволяют hbS полимерного образования, и, таким образом, возникновение морфологических изменений, а затем восстановления. Дезоксигенация происходит путем введения азотного газа, который медленно снижает кислородное напряжение в образце крови в зазоре между бобом и чашкой эктакитометра. Деформация РБК постоянно измеряется, в то время как кислородноенапряжение измеряется каждые 20 с с помощью небольшого O 2-пятна, присутствуют в стене чашки. Во время теста, около 80 pO2 измерений связаны с EI измеряется в этот момент. При дезоксигенации давление кислорода падает ниже 20 мм рт. мг, а реоксигенации способствует пассивная диффузия окружающего воздуха. Экспериментальная установка эктацитометра и кислородного градиента эктацитометрии описана на рисунке 1 и рисунке 2. Принцип эктацитометрии основан на индуцированном РБК рассеянии света от лазерного луча. Это приводит к эллиптической дифракции картины, когда сдвига стресс применяется в то же время (Рисунок 1).

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:667px;" width="667">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">ADVIA 120 Hematology Analyzer</td>
			<td style="width:159px;">Siemens</td>
			<td style="width:119px;">067-A004-14</td>
			<td style="width:167px;">Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Cell-Dyn Sapphire Hematology Analyzer</td>
			<td style="width:159px;">Abbott</td>
			<td style="width:119px;">8H00-01</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:223px;">Lorrca</td>
			<td style="width:159px;">RR Mechatronics</td>
			<td style="width:119px;">LORC109230 or LORC109110</td>
			<td>Instrument</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Lorrca Software version V5.08</td>
			<td style="width:159px;">RR Mechatronics</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Nitrogen gas 4.8 or 5.0</td>
			<td style="width:159px;">Local</td>
			<td style="width:119px;">-</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">O2-spot</td>
			<td style="width:159px;">RR Mechatronics</td>
			<td>PO2S020153</td>
			<td>O2 measurement</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Oxygenscan module (pO2scan)</td>
			<td style="width:159px;">RR Mechatronics</td>
			<td>PO2S109000</td>
			<td>Add-on</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">Oxy-ISO</td>
			<td style="width:159px;">RR Mechatronics</td>
			<td>QRR 030905</td>
			<td>Viscous solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:223px;">X-Clean</td>
			<td style="width:159px;">RR Mechatronics</td>
			<td>QRR 010946</td>
			<td>Cleaning solution Lorrca</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

characterization of sickling during controlled automated deoxygenation with oxygen gradient ektacytometry

При серповидно-клеточной болезни (SCD) одноточечная мутация в кодировании генов для бета-глобина вызывает выработку аномального гемоглобина S (HbS). При дезоксигенировании, HbS может полимеризировать, образуя жесткие стержни гемоглобина, в результате чего серп красных кровяных телец (РБК). Эти серповые РБК значительно снизили уродственность, вызывая вазо-окклюзию, что приводит к многочисленным клиническим осложнениям, связанным с SCD, включая боль, инсульт и повреждение органов. Деформация РБК также снижается за счет обезвоживания РБК, что приводит к плотным эритроцитам, которые с большей вероятностью серповые. На сегодняшний день не существует ни одного широко доступного, быстрого и воспроизводимого лабораторного анализа, способного предсказывать тяжесть заболевания или непосредственно контролировать последствия лечения новых, нефетальных гемоглобинов, вызывающих терапию. В этом исследовании мы описываем протокол для измерения деформации РБК как функции PO2, что позволяет количественно ймеповидного поведения у пациентов SCD. Градиент кислорода эктацитометрия измеряет рбк деформацию, выраженную в виде индекса удлинения (EI), как функция pO2. РБК подвергаются фиксированному стрессу сдвига 30 Pa во время одного раунда дезоксигенации и реоксигенации. Производится шесть параметров считываемого. Из них точка серпового (PoS), определяется как PO2, при котором максимальный EI (EImax) показывает снижение на 5%, а минимальный EI во время дезоксигенации (EIмин)являются наиболее информативными, отражающими PO2 отдельного пациента, при котором серпотые начинается и минимальная деформация красных кровяных телец пациента, соответственно. PoS связано с гемоглобина сродство отдельных пациентов к кислороду, в то время как EIмин показывает сильную корреляцию с уровнями гемоглобина плода. Мы заключаем, что градиент кислорода эктачитометрия является перспективным методом для мониторинга лечения пациентов с SCD, как биомаркер для противобольных агентов в клинических и доклинических испытаниях, и важным инструментом для изучения серповидного поведения РБК от лиц с SCD и серповидно-клеточной черты.

Watch this Scientific Journal Video about Characterization of Sickling During Controlled Automated Deoxygenation with Oxygen Gradient Ektacytometry at JoVE.com

Characterization of Sickling During Controlled Automated Deoxygenation with Oxygen Gradient Ektacytometry

Здесь мы представляем оксигенный градиент эктацитометрии, быстрый и воспроизводимый метод измерения деформации красных кровяных телец в образцах у пациентов с серповидно-клеточной болезнью под контролируемой дезоксигенацией и реоксигенциацией. Этот метод обеспечивает способ изучения красных кровяных клеток серпового и для мониторинга эффективности лечения серповидно-клеточных заболеваний.

Характеристика серпового во время контролируемой автоматизированной дезоксигенации с кислородным градиентом Эктацитометрия

In sickle cell disease (SCD), a single point mutation in the gene coding for beta-globin causes the production of abnormal hemoglobin S (HbS). When ...

Кислород градиент эктацитометрия является функциональным анализом, который оценивает индивидуальную серповидную тенденцию. На сегодняшний день никаких других функциональных анализов не имеется и не используется. Кислород градиент эктацитометрия способна определить кислородное напряжение, при котором клетки крови пациента с серповидно-клеточной болезнью начинают серпить.Это кислородное напряжение зависит от пациента, и он может служить в качестве биомаркера для тяжести заболевания. При серповидно-клеточной болезни, этот метод может быть использован для мониторинга эффективности лечения и он может быть использован для разработки новых методов лечения. Визуальная демонстрация этой техники важна, потому что она очень чувствительна.Есть множество факторов, которые будут влиять на измерение, которое вы не знаете, когда вы начинаете работать с этой техникой. Тот, кто пытается это в первый раз может возникнуть, что техника очень чувствительна для подготовки образца и обработки образцов. Мой совет заключается в том, чтобы работать как можно более стандартизированным и разработать рутину.Чтобы начать эту процедуру, включите компьютер и эктацитометр и откройте программное обеспечение на компьютере. Откройте азотный баллон, чтобы убедиться, что азот доступен для дезоксигената образца. Нижняя Боб в чашку и убедитесь, что чашка может повернуть свободно.Когда программное обеспечение работает, проверьте сообщение убедитесь, что газовый клапан открыт и нажмите OK. Убедитесь, что эктацитометр запускает процесс само проверки и выберите начало. Если само проверка не удается, повторно запустите его, нажав аппаратную проверку, pO2, самоуправку. Выберите сканирование pO2 из различных тестов, перечисленных слева.Выберите настройки справа от экрана и убедитесь, что они установлены в соответствии с параметрами, перечисленными в таблице одного из текстовых протоколов, убедившись, что держать те же настройки для каждого измерения. Сохраните эти настройки, нажав OK, а затем нажав OK снова. Во-первых, собирать образцы крови путем venepuncture в трубке, содержащей ЭДТА и хранить кровь при четырех градусах по Цельсию в течение как минимум 30 минут, но не более 24 часов.После этого аккуратно смешайте образцы путем инверсии для гомогенизации. Пусть образцы прогреются до комнатной температуры на роликовой скамейке перед измерением. Используйте гематологический анализатор для измерения полного количества крови, поместив аспирации иглы в трубку и нажав кнопку за иглой гематологии анализатор, чтобы начать измерение и анализатор будет использовать от 20 до 200 микролитров всей крови.Затем стандартизируйте весь образец крови до подсчета РБК 200 миллионов красных кровяных телец в пяти миллилитров PVP путем расчета объема образца, который будет добавлен. Для начала вырежьте наконечник пипетки и предварительно промокнете его, трижды перерасходуя кровь. Затем пипетка расчетный объем образца в флакон PVP.Аккуратно смешайте образец вручную инверсией, пока он не станет однородным. Медленно нарисуйте два миллилитров крови и смесь PVP в три миллилитровых шприца без иглы. Нажмите поршень, чтобы удалить любые видимые пузырьки воздуха и избыток раствора образца до тех пор, пока между 1,5 и 1,8 миллилитров остаются в шприце.Введать общий объем образца медленно и равномерно в Боб через разъем. Убедитесь, что уровень образца выше датчика кислорода и небольшого всасывающего отверстия. В программном обеспечении щелкните новый и заполните идентификатор выборки, замечания, дату пожертвования и вязкость PVP.Нажмите OK и аспирировать. После 60 секунд аспирации, чашка поворачивается и аспирировать снова в течение 15 секунд. Когда вращение остановится, нажмите OK. Закройте крышку машины.Нажмите продолжить и начать сейчас, как кислород градиент эктацитометрия делается с фиксированной выгоды. После измерения распечатайте отчет, который показывает кривую и параметры, которые автоматически рассчитываются программным обеспечением. Убедитесь, что необработанные данные автоматически хранятся в назначенной папке в настройках.Во-первых, удалите образец шприца и замените его шприцем, наполненным дистиллированной водой или деионизированной водой. Нажмите чистой и медленно промыть разъем во время полоскания убедившись, что флеш в обоих направлениях. Затем снимите шприц и поднимите боб.Используйте мягкую ткань, чтобы тщательно высушить боб и разъем. Затем используйте большой шприц, чтобы промыть разъем для того, чтобы удалить любую воду, оставшуюся в трубке и Боб. Держите шприц на входе и блокировать розетку Боб, чтобы вернуть давление в трубах тем самым удаляя оставшуюся воду.Затем высушите чашку, избегая при этом прикосновения к кислороду месте. Опустите боб и чашку, готовя машину к следующему измерению. После обеспечения того, чтобы машина была правильно промыта, проверьте, чтобы убедиться, что надлежащие трубки относятся к решению очистки.Закройте программное обеспечение, нажмите близко, и нажмите начать в конце дня очистки программы. Затем опорожните бутылку отходов и использовать мягкую ткань, чтобы высушить боб и чашку. Закройте крышку машины.Закройте азотный баллон и выключите компьютер и машину. Кислород градиент эктацитометрия может быть использована для изучения серповидного поведения красных кровяных телец в диапазоне концентраций кислорода. В кислородной градиентной эктацитометрии за непрерывной дезоксигенацией образца азотным газом следует быстрая реоксигенация окружающим воздухом.В этих условиях серп красных кровяных телец можно наблюдать при дезоксигенации. Это вызовет искажение дифракции картины, потому что серп красные клетки не будут выравниваться должным образом под применяется стресс стрижки. Серп красные кровяные тельца показывают изменение формы во время дезоксигенации, которая имитирует условия во время кислородной градиентной эктацитометрии, но не показывают никаких изменений в форме при насыщении кислородом.Этот процесс приводит к искажению структуры дифракции во время кислородной градиентной эктацитометрии и, таким образом, к снижению индекса удлинивания. Репрезентативная кривая, полученная эктацитометром, показывает шесть параметров, отражающих различные характеристики серповидного поведения: максимальный индекс удлинивания, минимальный индекс удлинения, дельта EI, точка серпа, область под кривой и восстановление. Здесь показаны репрезентативные кривые эритроцитов от здорового контроля, пациенты с признаками HbS и однородный больной серповидно-клеточной болезнью.Явные различия в репрезентативных кривых гомозиготных больных серповидно-клеточной терапии гидроксиловой мочевиной и переливанием подчеркивают полезность этого анализа. Есть множество факторов, которые влияют на кислород градиент эктацитометрии, такие как температура, рН, и осмоляность PVP, но и остатки воды и степень смешивания раствора образца крови может повлиять на измерения. Поэтому важное значение имеет стандартизированная обработка образцов.Результат кислородной градиентной эктацитометрии может быть непосредственно реализован в клинической практике, тем самым способствуя персонализированной медицине. Этот метод позволяет изучать серповидное поведение, чтобы исследовать потенциал новых методов лечения серповидно-клеточной болезни и может служить клинически актуальным биомаркером для тяжести заболевания.

Research

JoVE Journal

Medicine

Production and Detection of Reactive Oxygen Species (ROS) in Cancers

Production and Detection of Reactive Oxygen Species ROS in Cancers

Производство и обнаружения активных форм кислорода (АФК) в Раки

Reactive oxygen species include a number of molecules that damage DNA and RNA and oxidize proteins and lipids (lipid peroxydation). These reactive ...

Controlled Cervical Laceration Injury in Mice

Контролируемые травма шейного Laceration у мышей

Use of genetically modified mice enhances our  understanding of molecular mechanisms underlying several neurological disorders  such as a spinal cord ...

Controlled Cortical Impact Model for Traumatic Brain Injury

Контролируемая Кортикальная Модель воздействия для черепно-мозговой травмой

Every year over a million Americans suffer a traumatic brain injury (TBI).  Combined with the incidence of TBIs worldwide, the physical, emotional, ...

Characterization of Metabolic Status in Nonhuman Primates with the Intravenous Glucose Tolerance Test

Характеристика метаболического статуса в приматах с тест на толерантность к глюкозе Внутривенное

The intravenous glucose tolerance test (IVGTT) plays a key role in the characterization of glucose homeostasis. When taken together with serum biochemical ...

Drug-Induced Sleep Endoscopy (DISE) with Target Controlled Infusion (TCI) and Bispectral Analysis in Obstructive Sleep Apnea

Drug-Induced Sleep Endoscopy DISE with Target Controlled Infusion TCI and Bispectral Analysis in Obstructive Sleep Apnea

Индуцированное лекарственным средством сна эндоскопии (DiSE) с Target Controlled Infusion (TCI) и биспектрального анализа в обструктивного апноэ сна

The aim of this study was to establish a standardized protocol for drug-induced sleep endoscopy (DISE) to differentiate obstruction patterns in ...

Topical Airway Anesthesia for Awake-endoscopic Intubation Using the Spray-as-you-go Technique with High Oxygen Flow

Актуальное в дыхательных путях Анестезия для Awake-эндоскопической интубации использования спрей-как-вы-го Техника с высоким потоком кислорода

A patient&#39;s willingness to cooperate is an absolute precondition for successful awake intubation of the trachea. Whilst drug-sedation of patients can ...

Contractions of Human-iPSC-derived Cardiomyocyte Syncytia Measured with a Ca-sensitive Fluorescent Dye in Temperature-controlled 384-well Plates

Схватки Syncytia человека iPSC производные Cardiomyocyte измеряется с Ca чувствительных Люминесцентную краску в контролируемой температурой 384-ну пластины

Spontaneously contracting syncytia of cardiomyocytes derived from human-induced pluripotent stem cells (hiPSC-CM) are a useful model of human cardiac ...

Measurement of the Hepatic Venous Pressure Gradient and Transjugular Liver Biopsy

Измерение градиента печеночной венозной давления и трансъюгулярной биопсии печени

Here we provide a detailed protocol describing the clinical procedure of hepatic venous pressure gradient (HVPG) measurement in patients with advanced ...

A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application

Крыса сонной артерии Давление контролируемых сегментальных воздушный шар травмы с Периавентициального терапевтического применения

Cardiovascular disease remains the leading cause of death and disability worldwide, in part due to atherosclerosis. Atherosclerotic plaque narrows the ...

Quality-Controlled Sputum Analysis by Flow Cytometry

Анализ мокроты с контролем качества с помощью проточной цитометрии

Sputum, widely used to study the cellular content and other microenvironmental features to understand the health of the lung, is traditionally analyzed ...