Name: use of magnetic resonance imaging and biopsy data to guide sampling procedures for prostate cancer biobanking
Uploaded: 2019-10-10T13:00:00
Duration: 5 min 49 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Use of Magnetic Resonance Imaging and Biopsy Data to Guide Sampling Procedures for Prostate Cancer Biobanking at JoVE.com

המחברים רוצים להכיר סרטן הערמונית בריטניה עבור מימון SH תחת סרטן הערמונית מרכז בבריטניה של מצוינות ומלגת פרס הנסיעה (TLD-PF16-004) ו-HP תחת חדשנות (PG14-018-TR2). עבודה זו נתמכת על ידי חוקרים במכון הלאומי לחקר הבריאות באוניברסיטת מכללת בלונדון בתי חולים מחקר ביורפואי מרכז.

הפרוטוקול מתייחס להנחיות המקומיות ומאושר על ידי ועדת האתיקה של מחקר UCL/UCLC YH/0311).
הערה: כאשר שיטה זו כרוכה בדגימת רקמה אנושית, כל ההליכים המקומיים לגבי אתיקה והסכמה חייבים להיות מראש בתחילת הפרוטוקול. מקרי הניתוח הרדיקלי ניתן לכלול אם שני הנתונים MRI ו ביופסיה זמינים מראש של ניתוח, עם קוטר הגידול ≥ 5 מ"מ. המקרים צריך להיות נשלל אם הנגע המדד אינו מוגדר היטב, כלומר, רק שינויים מפוזר גלויים על ידי MRI.
1. מנגנון לחלוקת הערמונית
<ol><li>לרכוש את מנגנון הערמונית (לוח חומרים). לחלופין, הדפס נקודת אחיזה ללהב באמצעות מדפסת תלת-ממד כאשר פורסמה בעבר10. הערה: המכשיר ולהבי חד פעמיות המשמשים כאן נרכשו תחת הסכם העברת חומר מן המכון לחקר הסרטן, לונדון, בריטניה.</li>
</ol>2. מיקוד הגידול
<ol><li>סקירת הערות קליניות כדי לזהות את הנגע המדד כפי שצוין על ידי ביופסיה אבחון, למשל, האחורי השמאלי.</li>
	<li>סקירת תמונות MRI כדי למדוד את המיקום של הגידול לעיל.<ol>
<li>מצא את הרצף שבו הגידול הוא הנראה ביותר במישור צירית, למשל, T2-משוקלל.</li>
		<li>גלול בתמונות צירית כדי למצוא את התמונה שבה הגידול הוא הגדול ביותר והדפס תמונה לצורך התייחסות.</li>
		<li>בתמונה המקבילה המתאימה, למדוד את המרחק מהבסיס של הערמונית לתנוחת צירית נבחר, ואת אורך מלא של הערמונית מן הפיסגה לבסיס (mm), ולהדפיס עבור התייחסות.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. אוסף של pProstate
<ol><li>בדוק הערות המטופל כדי להבטיח הסכמה מושכלת מידע התקבל עבור הליך זה וכל יישומי מחקר מטה.</li>
	<li>לאחר כריתת הערמונית רדיקלי, לאסוף את הפרוסטטה בסיר יבש. ודא לא פורמלין או קבע אחרת נוספה הערמונית.</li>
	<li>העברה למיקום סטרילי ומתאים לדיגום, לדוגמא, כיסוי למינארי במעבדת פתולוגיה.</li>
	<li>המשך לדיגום בהקדם האפשרי אם יש צורך ברקמה טרייה. הערה: עבור יישומים מסוימים (למשל, הערכה של DNA אשר לא צריך לבזות מהר כמו RNA), זה עשוי להיות מתאים להכניס למקרר את הדגימה ולקחת דגימות למחרת.</li>
</ol>4. הכנה לדגימה
<ol><li>הכינו מנגנון זרימה למינארי ומכשיר לחיתוך הערמונית על פי נוהלי טיהור מקומיים, תוך שימוש בטכניקה סטרילית. כאן, ריסוס 70% אתנול ולנגב על פני כל המשטחים. השתמש במחטים ומחטים. חד-שימוש סטריליים השתמש בלהבים מבצעה עד שלוש פעמים; לשטוף לאחר כל שימוש במי סבון חם, ואז לרסס ולנגב עם 70% אתנול.</li>
	<li>שוקלים את הערמונית (g) באמצעות קנה מידה סטנדרטי.</li>
	<li>. דיו על הערמונית צבעו את הצד השמאלי בדיו כחול ומצד ימין עם דיו שחור. כסו את הקפסולה המלאה ואת שלפוחית הזרע עם דיו כדי לציין מאוחר יותר את השוליים הכירורגית. הערה: הליכי סימון בדיו עשויים להשתנות באופן מקומי וניתן לשנותם בהתאם.</li>
</ol>5. פרוסות בלוטת הערמונית
<ol><li>הכנס את מנגנון הפריסה על ידי החדרת הקירות ניצב לבסיס המעמד (איור 1א).</li>
	<li>מניחים את הערמונית כך שהבסיס והקודקוד ניצבים מול קירות הפנים, כאשר הצד האחורי למטה והקדמי למעלה. מניחים סיכות זהב סביב הערמונית. דחוף פנימה הערמונית מעט במידת הצורך כדי לקבל התאמה חמימה, אשר יתמוך הערמונית במהלך חיתוך.</li>
	<li>מדידת אורך הערמונית מהבסיס לפיסגה, באמצעות סרגל, ולהשוות עם אורך הערמונית כפי שנמדד על ידי MRI. אם הערמונית התכווץ, להחיל תיקון אד הוק על המרחק הצפוי מהבסיס לפלח רוחבי היעד. לדוגמה, אם אורכו המלא של הערמונית בתמונת ה-MRI הוא 50 מ"מ, אך כאשר נמדד עם סרגל בנקודה זו הוא התכווץ ל 45 מ"מ, להקטין את מיקום החיתוך הצפוי ב -10%.</li>
	<li>מדידה מהבסיס לפרוסה הרוחבי הרצויה. בחר את הסיכה שיושבת הקרובה ביותר למדידה זו כדי לחתוך מסביב.</li>
	<li>לבישת כפפות הדואר האלקטרוני כדי למנוע פציעה, להחזיק לחתוך את המכשיר (איור 1B), במקום להבים משני צדי הפין המזוהה ולהשתמש מרווח כדי לשמור על להבים 5 מ"מ בנפרד. קחו את הפרוסה באיטיות ובחוזקה הזזת הלהבים כלפי מטה, קדימה ואחורה במשיחות ארוכות (איור 1ג). ודא שפרוסה מלאה הופרזה לפני הפרדת המנגנון.</li>
	<li>להסיר קירות וסיכות ובזהירות לקחת את הפרוסה אל סדין סטרילי של לוח שעם באמצעות כפפות.</li>
</ol>6. דגימת רקמה
<ol><li>בדקו חזותית את הפרוסה הרוחבי והשוו עם תמונת ה-MRI הצירית. במקרים מסוימים, אזור הגידול עשוי להיראות חיוור יותר מאשר הרקמה הסובבת.</li>
	<li>משוך את הפרוסה הרוחבי בעדינות. במקרים מסוימים, הגידול עשוי להרגיש תקיף יותר מאשר הרקמה הסובבת.</li>
	<li>באמצעות תמונת ה-MRI הצירית כמדריך, בחר אזור אחד או יותר לדגימה.</li>
	<li>
לקחת אגרופים ביופסיה של האזור הרצוי של רקמות.
	<ol>
<li>באמצעות אגרוף 6 מ"מ, לדחוף למטה על האזור הרצוי של רקמות.</li>
		<li>סובבו את הניקוב הרקמות על הנקודה ולמטה כנגד הפקק כדי להבטיח הפרדה מלאה ולהשתמש באזמל חד כדי להפריד במידת הצורך.</li>
		<li>להסיר את האגרוף ואת המקום צינורות/תבניות לפי הצורך על ידי הוצאת באמצעות הבוכנה.</li>
		<li>חזור על הגידול ודגימות שפירים כנדרש, עם אגרופים נפרדים ביופסיה סטרילית. דיו על החורים שבהם. האגרופים נלקחו באדום</li>
		<li>שים לב למיקום של כל אגרוף יחד עם המשקל של הערמונית וכל התצפיות על צבע רקמה/מוצקות.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. הגשת הערמונית לאבחון מקומי
<ol><li>הצמד את הערמונית לשעם מחטים סטרילי לשימוש יחיד לפני קיבעון על מנת למנוע הצטמקות רקמות ועיוות, אשר יכול לשנות את המראה של השוליים הכירורגית.</li>
	<li>בעקבות הצמדה לשעם, לשלוח את הערמונית למחלקה histopathology עבור אבחון קליני סטנדרטי.</li>
</ol>8. טיהור מכשירים
<ol><li>השמט את כל הציוד החד בנחלים ומיכלי השרפ הרפואיים המיועדים לשימוש מקומי.</li>
	<li>טהרים מנגנון הזרימה הבינארי ומנגנוני הערמונית בהתאם להערכות הסיכון המקומיות המתאימות לרקמה האנושית (למשל, בריסוס עם 70% אטוח וניגוב).</li>
</ol>

<ol>
	<li>Sooriakumaran, P., Henderson, A., Denham, P., Langley, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+of+obtaining+prostate+tissue+for+gene+expression+profiling.">A novel method of obtaining prostate tissue for gene expression profiling.</a> International Journal of Surgical Pathology. 17 (3), 238-243 (2009).</li><li>Jhavar, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+of+radical+prostatectomy+specimens+for+correlation+of+data+from+histopathological,+molecular+biological,+and+radiological+studies:+a+new+whole+organ+technique.">Processing of radical prostatectomy specimens for correlation of data from histopathological, molecular biological, and radiological studies: a new whole organ technique.</a> Journal of Clinical Pathology. 58 (5), 504-508 (2005).</li><li>Wheeler, T. M., Lebovitz, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fresh+tissue+harvest+for+research+from+prostatectomy+specimens.">Fresh tissue harvest for research from prostatectomy specimens.</a> The Prostate. 25 (5), 274-279 (1994).</li><li>Esgueva, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Next-generation+prostate+cancer+biobanking:+toward+a+processing+protocol+amenable+for+the+International+Cancer+Genome+Consortium.">Next-generation prostate cancer biobanking: toward a processing protocol amenable for the International Cancer Genome Consortium.</a> Diagnostic Molecular Pathology. 21 (2), 61-68 (2012).</li><li>Dev, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biobanking+after+robotic-assisted+radical+prostatectomy:+a+quality+assessment+of+providing+prostate+tissue+for+RNA+studies.">Biobanking after robotic-assisted radical prostatectomy: a quality assessment of providing prostate tissue for RNA studies.</a> Journal of Translational Medicine. 9, 121 (2011).</li><li>Tolkach, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Blind+Biobanking+of+the+Prostatectomy+Specimen:+Critical+Evaluation+of+the+Existing+Techniques+and+Development+of+the+New+4-Level+Tissue+Extraction+Model+With+High+Sampling+Efficacy.">Blind Biobanking of the Prostatectomy Specimen: Critical Evaluation of the Existing Techniques and Development of the New 4-Level Tissue Extraction Model With High Sampling Efficacy.</a> The Prostate. 77 (4), 396-405 (2017).</li><li>Warren, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+for+sampling+tissue+for+research+which+preserves+pathological+data+in+radical+prostatectomy.">Method for sampling tissue for research which preserves pathological data in radical prostatectomy.</a> The Prostate. 73 (2), 194-202 (2013).</li><li>Heavey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PatiEnt+prOstate+samPLes+for+rEsearch,+a+tissue+collection+pathway+utilizing+magnetic+resonance+imaging+data+to+target+tumor+and+benign+tissue+in+fresh+radical+prostatectomy+specimens.">PatiEnt prOstate samPLes for rEsearch, a tissue collection pathway utilizing magnetic resonance imaging data to target tumor and benign tissue in fresh radical prostatectomy specimens.</a> The Prostate. 79 (7), 768-777 (2019).</li><li>Bailey, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=VERDICT+MRI+validation+in+fresh+and+fixed+prostate+specimens+using+patient-specific+moulds+for+histological+and+MR+alignment.">VERDICT MRI validation in fresh and fixed prostate specimens using patient-specific moulds for histological and MR alignment.</a> NMR in Biomedicine. 32 (5), 4073 (2019).</li><li>Bourne, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apparatus+for+Histological+Validation+of+In+Vivo+and+Ex+Vivo+Magnetic+Resonance+Imaging+of+the+Human+Prostate.">Apparatus for Histological Validation of In Vivo and Ex Vivo Magnetic Resonance Imaging of the Human Prostate.</a> Frontiers in Oncology. 7, 47 (2017).</li></ol>

. למחברים אין מה לגלות

צעדים קריטיים בתוך פרוטוקול זה כוללים זיהוי של אזור הגידול לדיגום, מדידה של הערמונית, ודגימת רקמות. ראשית, מדידה של ה-MRI כדי לזהות את האזור הנכון של הדגימה הוא המפתח. אנו מדגימים שיטה זו בווידאו הנלווה; עם זאת, אנו ממליצים גם על המאשרת מדידות ברדיולוג בערכאה הראשונה. ברור הערות קליניות אשר מצביעים על החוקר לכיוון השטח של תמונות ה-MRI המכיל את הנגע המדד הם אידיאליים. שנית, מדידה של הערמונית צריך להתבצע בזהירות, להבטיח כי השליט מוחזק בזווית כדי למדוד את האורך המלא מהבסיס לקודקוד, במקביל הקדמי של הערמונית. שלישית, אזורי הגידול יש לאשר לפני הדגימה על ידי בדיקה חזותית את פרוסת הרקמה ביחס לתמונת ה-MRI המקורי, palpating הרקמה (במקרים מסוימים אזור הגידול יכול להרגיש צפוף יותר), ויזואלית להעריך את הצבע של הרקמה (כמה מקרים הגידול ייראה חיוור יותר מאשר הרקמה השפיר הסביבה).
פרוטוקול זה בוצע במלואו ב UCL/UCLH על ידי חוקרים שאינם קליניים קלינית, ברנש פתולוגיה, לפתולוגיה יועצים, וטכנאים מחקר. בניסיון שלנו ניתן ללמוד את כל הצעדים של הפרוטוקול בפחות מעשרה מקרים ללא קשר לרקע הטכני. עם זאת, אנו ממליצים על הדרכה מרדיולוג לגבי מדידת MRI והדרכה של הפתולוג לגבי חיתוך במקרה הראשון. ניתן לשנות את הפרוטוקול באמצעות נקודת אחיזה לחיתוך מודפס תלת-ממדי, כפי שפורסמה בעבר10.
מגבלות פוטנציאליות של הטכניקה כוללות את הסיכון לסכל את האבחנה. חיתוך הערמונית הוא צעד מפתח, אשר יכול לעכב את הדירוג או שיעורי שוליים חיוביים אם נעשה באופן שגוי. . יש כאן שני בעיות פוטנציאליות ראשית, אם כל הנגע המדד מוסר ומשמש ניסויים רקמות טרי מיד, אבחון קליני שגרתי לא יבוצע עבור הנגע הזה והחולה עשוי להיות מאובחן בטעות כבעל סרטן בכיתה נמוכה. כדי למנוע זאת, החוקר צריך לדון בתוכנית הדגימה עם הפתולוג יועץ אשר באופן שגרתי לסקור את המקרה, לפני הדגימה, ולהסכים על מספר, ומיקום, של דגימות להילקח. גידולים קטנים ניתן לכלול באופן מקומי מסיבה זו. שנית, אם קפסולת הערמונית אינה מוצמדת כראוי ללוח שעם לפני קיבעון, זה יכול לאפשר את הרקמה הפנימית לבליטה החוצה במהלך הקיבעון, שינוי השוליים כירורגי. זה יכול להוביל שוליים חיוביים שווא, שבו הגידול הנותרים נראה לשכון הקפסולה גרידא בשל העיוות רקמות.
המשמעות של טכניקה זו ביחס לשיטות הקיימות טמונה בעיקר עם מיקוד הגידול. מגוון של שיטות לדגימה של דגימות קיצוניות של ניתוח רדיקלים פורסמו עד היום; עם זאת, כל אלה להסתמך על גישה דגימה מלאה או אקראית חלקית1,2,3,4,5,6,7. השימוש בביופסיה ובנתונים MRI מסוימים כאן יש יעילות משופרת, המאפשר דגימה מופחתת עם ביטחון מוגבר של קבלת רקמת הגידול8.
יישומים עתידיים של שיטה זו מאפשרים אימוץ של מגוון רחב יותר של טכניקות במורד הזרם מאשר עם שיטות דגימה קודמות. לדוגמה, הזמינות של רקמה טרייה כי יש סבירות גבוהה להיות גידול פירושו כי יקר יותר/או עבודה אינטנסיבית רקמות טריות יכול להיות מנוצל, כמו דגימות רבות אינן נדרשות כדי להבטיח נוכחות של גידול. זה יכול לכלול ואינו מוגבל, לשעבר תרבות vivo, MRI vivo ex, הדמיה מתקדמת ו transcript.

גישה לרקמת סרטן הערמונית באיכות גבוהה האדם היא דרישה מפתח לנהיגה במחקר אפקטיבי בתחום. ישנן מספר שיטות קיימות לדוגמה רקמת הערמונית לאחר ניתוח רדיקלי למחקר. בדרך כלל אלה כרוכות באמצעות ביופסיות אגרוף לקחת דגימות אקראיות מתוך פרוסה טרייה, קפואה או קבועה של רקמת הערמונית, ו כפוף מאשרת אם הגידול קיים בכל מדגם על ידי המטאוקסילין & אאוזין (H & E) כפי שמוערך על ידי ,מדבר2,3,4,5 סקירה שנערכה לאחרונה הפכה סקירה של שיטות קיימות אלה6. שיטות אלה שימושיות עבור יישומים מסוימים במורד הזרם, שבו רקמות ניתן לאחסן והעריכו עבור תוכן הגידול במועד מאוחר יותר, כגון בקנה מידה גדול מנתח גנומית כמו סרטן הגנום הבינלאומי (ICGC) וסרטן הגנום אטלס (TCGA) 4,7. עם זאת, ניתן לשפר שיטות אלה אם היינו להשתמש בדימות תהודה מגנטית (MRI) ו/או נתונים ביופסיה כדי למקד את האזורים הספציפיים של הערמונית לדיגום. זה ישפר את המתודולוגיה בשתי דרכים; ראשית, על ידי הפחתת מספר דגימות רקמות שנאספו, הגדלת יעילות והפחתת הלחץ על מחלקות פתולוגיה ועלות אחסון, ושנית, על ידי מתן אפשרות רקמות טריות לשמש מיד ללא צורך באישור מיידי של תוכן הגידול, עבור מדינה חדשה של האמנות במורד טכנולוגיות כגון הדמיה רקמה חיה, הדור אורגנואיד או תרבות vivo ex. הצורך מחקר זה הוביל את הפיתוח של העם (דגימות הערמונית החולה למחקר) שיטה, ואת התוצאות של 84 הראשונים המקרים biobanked קוטע באמצעות אנשים פורסמו לאחרונה8. וריאציה של שיטה זו גם פורסמה עם תלת מימדי (3d) מנגנון הפריסה מודפס ועובש ספציפי לחולה, כדי להקל על vivo MRI ex על לפני ושלאחר קיבוע רקמות9,10.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1040px;" width="1039">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">6 mm biopsy punch</td>
			<td style="width:247px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:115px;">13404607</td>
			<td style="width:471px;">Disposable biopsy punches for removing 6 mm tissue samples</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">Black Ink</td>
			<td style="width:247px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:115px;">3801753</td>
			<td>Tissue marking &#38; margin dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">Blue Ink</td>
			<td style="width:247px;">Leica Biosystems</td>
			<td style="width:115px;">3801751</td>
			<td>Tissue marking &#38; margin dye</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">Chainmail hand glove</td>
			<td style="width:247px;">Arco</td>
			<td>1456803</td>
			<td>Chainmail gloves to protect hand during slicing</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">Cork board</td>
			<td style="width:247px;">Fisher Scientific</td>
			<td>12396447</td>
			<td>Cork board for pinning prostate to following sampling procedure</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:208px;">Needles</td>
			<td style="width:247px;">SLS (Scientific Laboratory supplies)</td>
			<td>SYR6112</td>
			<td>Sterile needles to use to pin tissue to cork board following sampling</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:208px;">Prostate slicing aparatus</td>
			<td style="width:247px;">Insitute of Cancer Research, London</td>
			<td style="width:115px;">NA - must be obtained under MTA</td>
			<td>A kit containing the slicer handle, blades, spacer, base, walls and pins</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

use of magnetic resonance imaging and biopsy data to guide sampling procedures for prostate cancer biobanking

השיטות הקודמות רקמת הערמונית biobanking, בעקבות כריתת רדיקלים קיצוניים, בדרך כלל מעורב דגימה אקראית. כדי להגביר את היעילות, ולאפשר מגוון רחב יותר של יישומים במורד הזרם, פותחה שיטה ממוקדת יותר של דגימת רקמת הערמונית. כאן אנו משתמשים שני דימות תהודה מגנטית (MRI) ונתוני ביופסיה כדי למקד אזורים ספציפיים של האיבר לדיגום. השיטה כוללת שימוש במכשיר הערמונית שפורסם בעבר, אשר מסיר פרוסה רוחבי 5 מ"מ מאזור מוגדר מראש של הערמונית, ואחריו הסרת 6 מ"מ פונץ ביופסיות מאזורים קבועים מראש של פרוסה זו. דגימות אלה ניתן לאחסן קפוא או קבוע עבור biobanking מטרות, או בשימוש טרי מיד עם 70% ביטחון של תוכן הגידול, לעומת 10% ביטחון מהגישה דגימה אקראית. זה מאפשר את השימוש של כל טכניקות סטנדרטיות במורד הזרם כגון גנומיקה, פרוטאוומיקס או עבודה היסטולוגית, אבל גם עבודה הדורשת רקמה טרייה כגון הדמיית רקמה חיה או תרבות vivo ex.

רקמת הערמונית טרי שנדגמו באמצעות שיטת העם ניתן להשתמש עבור מגוון של טכניקות במורד הזרם, כולל רצף גנומית ותרבות vivo ex. 59 המקרים הראשונים שנדגמו בשיטה זו פורסמו בעבר בהשוואה לגירסה קודמת של השיטה, יחד עם נתוני הזרם הראשוניים8. הזמן החל תחילה לחתוך את הערמונית כדי להקפיא/תיקון ביופסיות אגרוף כאן היה כ 1 דקות, אשר נשמר למינימום כדי למנוע השפלה של RNA. זמן מהסרת הערמונית כדי לחתוך הערמונית צריך גם להישמר למינימום, למרות כאן זה לקח כ 20 דקות בשל התיאטרון שלנו מעבדות פתולוגיה להיות במיקומים שונים.
בהתאם ליישום במורד הזרם, בדרך כלל לפחות שתי דגימות נלקחים: אחד מאזור של רקמת הגידול צפוי ואחד מאזור של רקמה שפיר צפוי. המדד העיקרי של ההצלחה עבור שיטת הדגימה עצמה היא להעריך את תוכן הגידול במדגם נתון.
עבור כניסה לתוך הפרויקט 100,000 גנום, H & E ויטראז מקטע חייב להיות מוערך על ידי הפתולוג, והמדגם חייב להכיל לפחות 40% תאים סרטניים. דוגמאות המכילות פחות מ-40% הגידול עדיין עשויות להיכלל בפרוייקט אם הן מאקרו בהצלחה. מתוך 92 המקרים הראשונים שנדגמו באופן זה, 64% הכיל לפחות 40% הגידול הוגשו לפרויקט הגנום ה100,000 ללא מאקרוקרע. ה-DNA הופק והיה מספיק תשואה ואיכות בכל המקרים (שולחן 1). קבוצת משנה ראשונית של 59 מדגמים אלה פורסמה בעבר בהשוואה לשיטה מוקדמת יותר של8.
עבור תרבות vivo ex, גידול בהתאמה ורקמות שפיר חייב להיות באיכות מספקת לעמוד 72 h תרבות ללא השפלה משמעותית. דגימות רקמות מרובות מסכום כולל של שלושה חולים היו מתורבתים בהצלחה8.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60216/60216fig1.jpg"> איור 1: מנגנון לחלוקת הערמונית. מנגנון זה הושג תחת הסכם העברת חומר מהמכון לחקר הסרטן. (א) הקירות מוכנסים בניצב לבסיס, וסיכות זהב מוכנסים לבסיס המקיף את הערמונית (הערמונית לא בתמונה). (ב) הלהבים המקבילים הניתנים להחלפה מוכנסים לידית הלהב. (ג) הלהבים עוברים בין סיכות זהב כדי לחתוך קטע 5 מ"מ של הערמונית. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60216/60216fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td>n (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>מכה (> 40% הגידול)</td>
			<td>59% (64%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>כניסות חלקיות (5-30% הגידול)</td>
			<td>6 (7%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>מיס (0% גידול)</td>
			<td>27 (29%)</td>
		</tr>
<tr>
<td>כולל</td>
			<td>92% (100%)</td>
		</tr>
</tbody></table>טבלה 1: שיעור הפגיעה בגידול. שיעור הפגיעה בגידול נקבע על ידי הפתולוג יועץ המתמחה בסרטן הערמונית, בעקבות סקירה של הרקמה הצבעונית של H & E. תאים סרטניים תוכן של > 40% נקבע להיות מתאים להכללה ב-100,000 Genomes פרוייקט, כמו לכל הנחיות גנומיקה אנגליה.

Watch this Scientific Journal Video about Use of Magnetic Resonance Imaging and Biopsy Data to Guide Sampling Procedures for Prostate Cancer Biobanking at JoVE.com

Use of Magnetic Resonance Imaging and Biopsy Data to Guide Sampling Procedures for Prostate Cancer Biobanking

שיטה זו כוללת ניצול של נתוני אבחון קליני עבור חולי סרטן הערמונית על מנת להנחות את הליכי הדגימה, כאשר רקמת biobanking בעקבות כריתת רדיקלים קיצוניים. זה מתגבר על בעיות עם שיטות שפורסמו בעבר סביב יעילות וזמינות של רקמות טריות עבור מגוון רחב יותר של יישומי במטה.

שימוש של תהודה מגנטית הדמיה נתונים ביופסיה כדי להנחות הליכי דגימה עבור סרטן הערמונית ביאובאנקינג

Previous methods for biobanking prostate tissue, following radical prostatectomy, generally involved random sampling. In order to increase efficiency, and ...

המשמעות של פרוטוקול זה על שיטות דגימת הערמונית הקודמות היא שזה נותן לנו ביטחון גבוה יותר של מיקוד רקמת גידול טרי למחקר. לכן, אנחנו יכולים לקחת את הרקמה הטרייה ישר בחזרה למעבדה ולהשתמש בו לתרבות או הדמיה כי יש לנו ביטחון גבוה של אילו דגימות הם גידול אשר שפירים. העצה העיקרית שלי כאשר לומדים את הטכניקה היא לעבוד עם הפתולוג המקומי שלך, כך אבחון רקמות סופי הדו"ח אינם בסכנה.כדי למקד את מיקום הגידול, סקור את תמונות ה- MRI כדי למדוד את המיקום שמעל הגידול ולמצוא את הרצף שבו הגידול נראה ביותר במישור האקסיאלי. גלול בין התמונות האקסיאליות כדי לזהות את התמונה שבה הגידול הוא הגדול ביותר והדפס את התמונה לעיון. בתדמית הקורונה המתאימה, למדוד את המרחק מבסיס הערמונית למיקום ביתר שנבחר ולמדוד את מלוא אורך הערמונית מן העל לבסיס במילימטרים.לאחר מכן להדפיס מדידות אלה ולסמן את המיקומים של הגידול לעיון. לאחר הדגימה נאסף, לעקר את מכסה המנוע לזרימה למינארית ומתקן חיתוך הערמונית עם 70% אתנול ולשקול את הערמונית בקנה מידה סטנדרטי בגרמים. ואז לצבוע את הצד הימני עם דיו כחול בצד שמאל של הדגימה עם דיו שחור מכסה את הקפסולה המלאה וריסקים הזרע עם דיו כדי לאפשר אפליה של השוליים הכירורגיים.כדי לחתוך את הערמונית, מניחים את הרקמה עם הבסיס ואת apex מול קירות מנוגדים של המנגנון עם הצד האחורי למטה ואת הצד הקדמי למעלה. מניחים סיכות זהב סביב דגימת הרקמה דוחפים את הערמונית פנימה מעט במידת הצורך כדי להשיג התאמה נוחה ולמדוד את אורך הערמונית מהבסיס לשיא כדי להשוות מדידה זו לאורך הערמונית הנמדד על ידי MRI. אם הערמונית התכווצה, התאימו את תנוחת ההפחתה הצפויה באחוז המתאים של ההפחתה.לאחר מכן, מדוד מהבסיס לפרוסה הרוחבית הרצויה ובחר את הסיכה הקרובה ביותר למדידה זו כדי לחתוך מסביב. לובש כפפות שרשרת כדי למנוע פציעה, מניחים את הלהבים של מכשיר הסכין משני צדי הסיכה שזוהתה ולהשתמש במרחב כדי לשמור על הלהבים חמישה מילימטרים זה מזה. כדי לרכוש את הפרוסה, השתמש במשיחות ארוכות כדי להזיז את הלהבים לאט אך בתקיפות כלפי מטה, קדימה ואחורה כדי לאשר על ידי תחושה שפרוסה מלאה הופרדה לפני פירוק המנגנון.לאחר מכן להסיר את הקירות ואת הפינים ולהשתמש כפפות כדי להעביר בזהירות את הפרוסה על חתיכה סטרילית של הפקק. לאחר רכישת הדגימה, בדוק חזותית את הפרוסה הרוחבית לשם השוואה עם תמונת ה- MRI של ביתר-הבית. במקרים מסוימים, אזור הגידול עשוי להיראות חיוור יותר מהרקמה שמסביב.יש לתפוך בעדינות את הפרוסה הרוח-רוחבית. הגידול עשוי להרגיש מוצק יותר מהרקמה שמסביב. באמצעות תמונת ה- MRI השרירית כמדריך, בחר אזור אחד או יותר לדגימה ולהשתמש בניקוב של שישה מילימטרים כדי לדחוף כלפי מטה את אזור הרקמות המעניין.סובב את אגרוף הרקמה במקום ומטה כנגד הפקק כדי להבטיח הפרדה מלאה באמצעות אזמל חד כדי להפריד את דגימת הביופסיה מהדגימה לפי הצורך. כאשר המדגם נרכש, להסיר את האגרוף ולהשתמש בוכנה כדי להוציא את המדגם לתוך המיכל המתאים לניתוח במורד הזרם הבאים. ואז דיו החורים שבהם האגרופים נלקחו באדום ושים לב למיקום של כל אגרוף יחד עם המשקל של הערמונית וכל תצפיות על צבע רקמות ומוצקות.הצמד את כמוסת הערמונית ל הפקק כדי למנוע bilging במהלך הקיבעון. להטביע את הערמונית ואת הפקק לתוך תיקון להבטיח את המדגם שקוע לחלוטין. בניתוח מייצג זה, מתוך 92 המקרים הראשונים שנדגמו כפי שהודגם, 64% מהדגימות הכילו לפחות 40% גידול והוגשו לפרויקט 100,000 הגנומים ללא מיקרו-דיסקציה.הדנ"א חולץ והיה מספיק תשואה ואיכות בכל המקרים ותת-קבוצה ראשונית של 59 דגימות אלה פורסמה להשוואה לשיטת דגימה מוקדמת יותר. בעקבות הליך זה, ניתן להשתמש בדגימות הגידול הטריות להדמיה חיה או לתרבות המאפשרת לנו לבדוק סמנים ביולוגיים חדשים, תרופות, ולגלות עוד על ביולוגיה של הגידול. עכשיו שאנחנו משתמשים בשיטה זו באופן שגרתי, הצלחתי לקדם פרויקט באמצעות רקמה זו לתרבות אקס ויוו להסתכל על שילובים חדשים של טיפולים פרה-קליניים לסרטן הערמונית.

Research

JoVE Journal

Medicine

Magnetic Resonance Derived Myocardial Strain Assessment Using Feature Tracking

תהודה מגנטית נגזר מסננים הערכה שריר הלב באמצעות מעקב אחר תכונות

Purpose: An accurate and practical method to measure parameters like strain in myocardial tissue is of great clinical value, since it has been shown, that ...

Multi-modal Imaging of Angiogenesis in a Nude Rat Model of Breast Cancer Bone Metastasis Using Magnetic Resonance Imaging, Volumetric Computed Tomography and Ultrasound

רב מודלי הדמיה של אנגיוגנזה מודל עכברים עירום של גרורות סרטן השד עצם באמצעות דימות תהודה מגנטית, טומוגרפיה ממוחשבת נפחית ו אולטראסאונד

Angiogenesis is an essential feature of cancer growth and metastasis formation. In bone metastasis, angiogenic factors are pivotal for tumor cell ...

Microarray-based Identification of Individual HERV Loci Expression: Application to Biomarker Discovery in Prostate Cancer

זיהוי מבוסס microarray של פרט HERV לוקוסים ביטוי: בקשה לגילוי סמן ביולוגי בסרטן הערמונית

The prostate-specific antigen (PSA) is the main diagnostic biomarker for prostate cancer in clinical use, but it lacks specificity and sensitivity, ...

Tracking the Mammary Architectural Features and Detecting Breast Cancer with Magnetic Resonance Diffusion Tensor Imaging

סרטן שד מעקב מאפיינים אדריכליים החלב וזיהוי עם דימות מותחת דיפוזי תהודה מגנטית

Breast cancer is the most common cause of cancer among women worldwide. Early detection of breast cancer has a critical role in improving the quality of ...

Quantitative Magnetic Resonance Imaging of Skeletal Muscle Disease

דימות תהודה מגנטית כמותי של מחלת שריר שלד

Quantitative magnetic resonance imaging (qMRI) describes the development and use of MRI to quantify physical, chemical, and/or biological properties of ...

Dynamic Contrast Enhanced Magnetic Resonance Imaging of an Orthotopic Pancreatic Cancer Mouse Model

הדמיית תהודה מגנטית משופרת ניגודיות דינמית של דגם orthotopic סרטן לבלב עכבר

Dynamic contrast enhanced magnetic resonance imaging (DCE-MRI) has been limitedly used for orthotopic pancreatic tumor xenografts due to severe ...

Simultaneous PET/MRI Imaging During Mouse Cerebral Hypoxia-ischemia

ההדמיה PET / MRI בו זמנית בעכבר מוחין היפוקסיה-איסכמיה

Dynamic changes in tissue water diffusion and glucose metabolism occur during and after hypoxia in cerebral hypoxia-ischemia reflecting a bioenergetics ...

Cardiac Magnetic Resonance Imaging at 7 Tesla

דימות תהודה מגנטית לב בטסלה 7

CMR at an ultra-high field (magnetic field strength B0&#160;&#8805; 7 Tesla) benefits from the signal-to-noise ratio (SNR) advantage inherent at higher ...

Phase Contrast Magnetic Resonance Imaging in the Rat Common Carotid Artery

שלב ניגודיות תהודה מגנטית בעורק החולדה נפוצים

Phase contrast magnetic resonance imaging (PC-MRI) is a noninvasive approach that can quantify flow-related parameters such as blood flow. Previous ...

Quantification of Levator Ani Hiatus Enlargement by Magnetic Resonance Imaging in Males and Females with Pelvic Organ Prolapse

כימות של מרים Ani היאטוס הגדלה על ידי תהודה מגנטית של זכרים ונקבות עם צניחת אברי האגן

Here we present a protocol to examine the levator ani hiatus in males and females with pelvic organ prolapse, during the Valsalva maneuver and while ...