Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

Forfatterne vil gerne takke Edith Janssen for den kritiske gennemgang af manuskriptet og Navin Rao og Jennifer Towne for deres støtte til udgivelsen af dette manuskript.

Alle dyreforsøg blev gennemført i overensstemmelse med de politikker, der er foretaget af det institutionelle udvalg for dyrepasning og-anvendelse (IACUC) af Janssen R & D.
1. kryogen fryse mølle-baserede Pulverization metode
<ol><li>Ved afslutningen af CIA-studiet, ofrer mus med 1,5% isofluran efterfulgt af livmoderhals dislokation.</li>
	<li>På dagen for vævs behandling, pre-chill alle instrumenter (spatler, slibning hætteglas, etc.) på tøris i mindst 10 min. bær termiske handsker...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

Selv om der er stærke videnskabelige rationale til at evaluere molekylære veje i synovialvæv, mange rapporter om immun profilering af murine CIA model var fokuseret på perifert blod, mens protein og RNA analysedata af betonede poter er temmelig begrænset. Der er flere mulige årsager til denne skævhed: murine ankel leddene er ikke større end ~ 2 cm; de berørte områder består af hud, knogler og bindevæv, som ofte er svære at homogenisere ved hjælp af traditionelle metoder som vævs slibemaskiner, Pestle og m?...

Reumatoid arthritis (RA) er en kronisk systemisk inflammatorisk sygdom med persisterende symmetrisk synovitis i leddene og ekstra artikulær involvering af organer som hud, hjerte, lunger og øjne1. Selv om de systemiske manifestationer af immunresponset er tydelige hos mennesker, er et af kendetegnene ved RA-patologi infiltration af immunceller i vævet i synovialvæv og proliferation af synovial fibroblast celler2.
Svarende til human RA, mus kollagen induceret arthritis (CIA) model fremkalder stærk vævs betændelse med aktive immunrespons i synovialvæv og systemiske rum. Følsomheden af forskellige muse stammer til CIA model links til større histocompatibility Complex (MHC) haplotype og antigen specifikke T celle og B celle interaktioner3,4. Desuden, mange patogene veje i human RA, herunder autoantistof produktion, immunkompleks deposition, myeloid celle aktivering, polyartikulære manifestationer og pannus dannelse med synovial immun infiltration, er også tydeligt i denne model 5,6. Efterforskere har anvendt denne veletablerede CIA-model til at undersøge virkningerne af antiinflammatoriske cytokinbehandlinger7. Mange biologiske lægemidler godkendt til autoimmune eller inflammatoriske sygdomme, såsom anti-tnfα og anti-Il-6, er fundet at være effektive i CIA model8,9.
Profilering interaktioner af immunsystemet i synovialvæv er afgørende for at belyse molekylære mekanismer forbundet med patogenesen af RA. I den humane kliniske indstilling, en almindelig praksis er at udføre nåle synovial biopsier under vejledning af ultralyd Imaging. I de prækliniske indstillinger, den mindre arkitektur af murine leddene gør biopsi procedurer meget vanskeligere, hvis ikke umuligt. For nylig demonstrerede vi udnyttelsen af murine CIA-modellen for at evaluere kombinationer af lægemidler til at påvirke forskellige slutpunkter og løse sygdomme i en kombinatorisk tilgang10. En kryogen fryse mølle-baseret pulverisering metode blev anvendt til at behandle bettet murine poter i homogene fine pulvere og etablerede downstream processer til at udtrække RNA og proteiner. Denne metode beskytter RNA og protein fra enzymatiske og kemiske degrative processer og gør det muligt for os at anvende flere analytiske metoder til en enkelt homogeniseret prøve kilde.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

Profilering af molekylære ændringer i lokalt væv er afgørende for at forstå virkningsmekanismen for terapeutiske kandidater in vivo. Inden for gigt forskning, mange undersøgelser er fokuseret på betænd leddene, der er sammensat af en kompleks blanding af knogler, brusk, muskel, stromale celler og immunceller. Her etablerede vi en pålidelig og robust mekanisk metode til at forstyrre inflammeret muse poter i homogene pulveriserede prøver i et kryogenisk kontrolleret miljø. Protein-og RNA-lysater blev behandlet for at muliggøre proteomiske og transkriptionelle endepunkter og molekylær karakterisering af relevante sygdoms veje i lokalt væv.

Her viser vi en repræsentativ gel billede visualisering af RNA udvundet fra forreste poter af CIA-mus i figur 2a. 28S rRNA og 18S rRNA-båndet indikerer, at alle prøver har tilstrækkelig mængde intakt RNA. Dernæst viser vi en repræsentativ scatter plot af samlede proteinkoncentrationer baseret på protein BCA analyse i figur 2B. Totale proteinkoncentrationer fra naive mus, CIA-mus eller CIA...

Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

En kryogen pulverisering metode til at behandle murine poter ved hjælp af en flydende kvælstof fryser mølle blev udviklet for at forbedre udbyttet og kvaliteten af RNA eller protein udvundet fra væv og gøre det muligt at analysere molekylære profiler forbundet med inflammatoriske Svar.

En Cryo-pulverization protokol til behandling af muse poter til at evaluere molekylære veje af vævs betændelse i en kollagen induceret arthritis model

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

Evalueringen af molekylære profiler i lokale væv er et afgørende skridt i retning af at forstå aktivmedicinernes virkningsmekanisme, da de evalueres i sygdomsrelevante prækliniske modeller. Inden for arthritis forskning, det lokale væv miljø af interesse er de små vægtbærende led, som er sammensat af en kompleks blanding af knogle, brusk, muskel, og immunceller. Her beskriver vi en pålidelig robust metode til mekanisk afbrydelse og/eller pulverisering af dette komplekse vævsmiljø i et kryogent kontrolleret miljø.Denne metode kan derefter bruges til at generere downstream proteomic og transskriptionelle profilering indsats for at etablere molekylære signaturer af sygdom fra en enkelt ensartet prøve kilde. Denne metode genererer en homogen pulver i modsætning til mange andre gamle teknikker. Derudover giver den gamle temperaturisolering procedure mulighed for isolering af høj kvalitet RNA.Denne metode kan derefter bruges til at generere downstream proteomic og transskriptionel profilering muliggør molekylær karakterisering af relevante sygdomsveje af interesse. Denne metode kan give indsigt i ethvert forskningsområde, der følger molekylære signaturer fra væv. Metoden kan udvides til ethvert komplekst vævssystem, der har tætte og vanskelige at adskille bestanddele.Selv om vi ikke har evalueret til dette punkt, kunne vi se potentielle anvendelse på tætte brusk væv som ører eller knogler. Den tidskritiske karakter af at overføre pulveret til rør til vejning er noget, der tager praksis. Hvis der tages for lang tid, vil pulveret begynde at tø op og blive amorf.Det er vigtigt at begrænse antallet af prøver til 10 til 15, indtil du er fortrolig med proceduren. På dagen for vævsbehandling, prechill alle nødvendige instrumenter på tøris i mindst 10 minutter. Brug termiske handsker for at undgå at blive skadet af ekstrem kulde.Dernæst overføre hver af de forberedte mus pote i en separat 1,5 milliliter mikrocentrifuge rør og straks snap fryse i flydende nitrogen. Opbevar de frosne poter ved negative 80 grader Celsius. Når du er klar til at fortsætte, fyldes en frysemølle med flydende nitrogen, og den skal ligevægte i mindst 10 minutter.Anbevæg den uforarbejdede prøve på tøris og hold den der for at undgå fryse-/optøningscyklusser. Derefter overføres en bagpote til et forkølet stort polycarbonatslibeglas med et bundstål. Sæt den forkølede stålslagat indslagskraft i, og luk polycarbonatslibeglasset med det forkølede topstålprop.De store polycarbonatslibeglas med prøverne overføres til den fyldte frysemølle, og låget lukkes med den gummilås, der findes foran instrumentet. Lad prøverne køle af i det flydende kvælstof i et minut. Dernæst indstille fryseren møllen til det ene minut program med 10 cyklusser per sekund.Tryk på kørselsknappen, og vent på, at frysemøllen fuldfører sin cyklus. Derefter åbnes låget på frysemøllen, og det store polycarbonatslibeglas skal ud. Sæt slibehætten i en emhætte, og fjern det øverste stålstik ved at lægge nedadgående tryk på det sorte håndtag, indtil stålproppen glider ud af polycarbonatrøret.Overfør det åbnede slibehætteglas på tøris, og brug forkølede kraftbefædre til at fjerne stålslagkraften. Det frosne pulver overføres til et forkølet konisk rør på 50 milliliter. Mellem 30 og 50 mg frossen pulver vejes i et differentieret 1,5 milliliter mikrocentrifugerør til RNA-ekstraktion og mellem 100 og 200 mg for proteinekstraktion.De pulveriserede prøver opbevares ved negative 80 grader Celsius og videre til RNA og proteinisolationer inden for 24 timer. Først tilsættes 10 mikroliter beta-mercaptoethanol for hver milliliter RLT buffer. RLT-bufferen beregnes, der svarer til et forhold på 23,3 milliliter pr. milligram væv, og der tilsættes et passende volumen af RLT-buffer med beta-mercaptoethanol til røret med frosset pulver.Vortex prøven på 3,000 RPM i 10 sekunder. Brug en milliliter pipetter til at pipette op og ned kraftigt 10 gange og vortex prøven igen ved 3,000 RPM i 20 sekunder. Centrifuge ved 13,000 gange g i to minutter og overføre 700 mikroliter af supernatanten til et frisk rør.Der tilsættes 700 mikroliter 70 % ethanol til dette rør, og der indlæss 700 mikroliter af prøven på en RNA-rensekolonne. Centrifuge røret med en hastighed på mindst 10,000 gange g i 30 sekunder. Gennemstrømningen kasseres, og den resterende del af prøven indbelæsses på RNeasy-kolonnen, og røret centrifugeres igen med en hastighed på mindst 10.000 gange g i 30 sekunder.Gennemstrømningen kasseres, og kolonnen vaskes ved at tilsætte 700 mikroliter RW1-buffer og centrifugere med en hastighed på mindst 10.000 gange g i 30 sekunder. Hvis du udfører mulighed DNAse-fordøjelsen, tilsættes 350 mikroliter RW1 før behandling med DNAse. Og efter DNAse behandling, yderligere 350 mikroliter af RW1 er tilføjet.Derefter vaskes kolonnen to gange ved at tilføje 500 mikroliter RPE-buffer og centrifuge med en hastighed på mindst 10.000 gange g i 30 sekunder, og sørg for at kassere flow-through hver gang. Derefter tørres kolonnen ved at centrifugere den med en hastighed på mindst 10.000 gange g i to minutter. Eluter RNA ved at tilføje 50 mikroliter vand og centrifugering med en hastighed på mindst 10,000 gange g i to minutter.Opsaml gennemstrømningen og overfør den til et nyt 1,5 milliliterrør. Bestem mængden af RNA ved hjælp af forskerens foretrukne metode og opbevares ved negative 80 grader Celsius før yderligere analyse. Fortynd 10X celle lysis lager opløsning til 1X celle lysis bestand løsning med celle kultur grade vand.Rekonstituere proteasehæmmer cocktail sæt en med en milliliter vand til at gøre en 100X protease hæmmer lager. Der tilsættes 100 milliliter proteasehæmmer til 9,9 milliliter 1X cellelysis-buffer for at opnå en 1X endelig stamopløsning. Tilføj fire mikroliter af iskold celle lysis buffer for hver milligram væv pulver og tilsæt en fem millimeter rustfrit stål perle til røret.Vortex røret på 3,000 RPM i 60 sekunder. Overfør røret til våd is og fortsæt til den næste prøve. Derudover, forskere kan opleve, at placere boksen lodret kan lette bedre blanding med perlen.Efter en time centrifuger rørene ved 10.000 gange g og ved fire grader Celsius i 15 minutter. Overfør supernatanterne i et frisk rør og sørg for at undgå fedtlaget på toppen. Den samlede proteinkoncentration bestemmes.Aliquot hver prøve i 1,5 milliliter mikrocentrifuge rør og gemme dem på negative 80 grader Celsius indtil klar til at udføre yderligere analyse. I denne undersøgelse, en kryogen pulverisering metode bruges til at behandle murine poter for at forbedre udbyttet og kvaliteten af RNA eller protein udvundet af væv og muliggøre analyse af molekylære profiler forbundet med inflammatoriske reaktioner. En repræsentativ gel billede visualisering viser RNA udvundet fra forreste poter af CIA mus.28S rRNA- og 18S rRNA-båndene indikerer, at alle prøverne har tilstrækkelig mængde intakt RNA. Her vises et repræsentativt spredningsplot af de samlede proteinkoncentrationer baseret på protein BCA-analyse. Samlede proteinkoncentrationer fra naive mus, CIA-mus eller CIA-mus under forskellige behandlinger er sammenlignelige på tværs af grupper.Luminex analyser udføres derefter for at bestemme koncentrationerne af inflammatoriske cytokiner og chemokines i proteinekstraktet. En repræsentativ scatter plot af koncentrationerne af normaliserede cytokiner og chemokines afslører, at sammenlignet med naive mus, flere cytokiner er forhøjet i CIA mus og behandling med anti-IL17A antistof betydeligt hæmmer produktionen af flere cytokiner. Microarray analyse udføres for at evaluere transcriptome ændringer i CIA og behandlingsrelaterede virkninger.En repræsentativ varme kort plot af gener væsentligt steget i CIA mus i forhold til naive mus er vist her. Når du udfører denne procedure, er det afgørende for forskere at minimere den tid, røret og pulveret holdes ude af tøris. Dette hjælper med at forhindre optøning af pulveret og efterfølgende problemer med det nedbrudte RNA og protein.Den høje kvalitet af de molekylære signaturer genereret af denne teknik giver forskerne mulighed for at afhøre den unikke profil en terapeutisk vil give og yderligere giver mulighed for differentiering af mekanismer, der kan bruges til behandling af gigtsygdomme. Denne teknik kan bruges til at udtrække en række tætte væv som ører og knogler til yderligere at evaluere molekylære signaturer i disse væv af interesse. Forstå, hvordan terapeutiske modulere de molekylære signaturer af sygdom gør os i stand til bedre at vurdere, hvilke specifikke signalering veje er moduleret.Og måske endnu vigtigere, hvilke veje er ikke reguleret med den terapeutiske mekanisme, der evalueres. Når du arbejder med flydende nitrogen og tøris, er det bydende nødvendigt at bruge personlige værnemidler, herunder korrekt nominelle handsker og ansigtsskærme. Eksponering af huden i mere end et par sekunder kan forårsage alvorlige forbrændinger.Når der arbejdes med store mængder tøris, er det vigtigt at arbejde i et godt ventileret område, da tøris frigiver kuldioxid.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Anvendelse af en mus Ligated Peyer er Patch Intestinal Loop Assay at evaluere Bakteriel Optagelse ved M celler

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Scanning af HIV-1 Envelope-induceret Virologisk Synapse og signaler på syntetiske lipiddobbeltlagenes

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Undersøge, hvilken rolle svælg-associeret lymforetikulære Tissue (NALT) i mus Responses til vacciner

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En mus Model for Patogen-induceret kronisk inflammation på lokale og systemiske websteder

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

Co-immunoudfældning af musen Mx1 Protein med influenza A-virus nukleoprotein

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimeret fremgangsmåde til isolering og udvidelse Invariant Natural Killer T-celler fra musemilt

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intratrakeal administration<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; I musemodeller at studere Airway Inflammation

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

Visualisering af IL-22-udtrykkende Lymfocytter Brug Reporter Mus

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In vitro differentiering af humane CD4 + Foxp3 + Induced Regulatory T-celler (iTregs) fra naive CD4 + T-celler under anvendelse et TGF-β-holdige protokol

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metode til måling af spytkirtel funktion i mus

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...