Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
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著者たちは、原稿とナヴィン・ラオとジェニファー・タウンの批判的なレビューに対するエディス・ヤンセンの評価を賜ります。

すべての動物実験は、ヤンセンR&Dの制度動物ケア利用委員会(IACUC)の方針に従って行われました。
1. 極低温冷凍ミルベースの粉砕法
<ol><li>CIAの研究の終了時に、1.5%のイソフルランでマウスを犠牲にし、続いて子宮頸部脱臼を行った。</li>
	<li>組織処理の日には、すべての器具(スパチュラ、粉砕バイアルなど)をドライアイスで10分間冷やし、凍結損傷を避けるためにサー?...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

経卵組織の分子経路を評価する科学的根拠は強いが、マウスCIAモデルの免疫プロファイリングに関する多くの報告は末梢血に焦点を当て、炎症を起こした足のタンパク質およびRNA分析データはかなり限られている。このバイアスのいくつかの考えられる理由があります: マウス足首関節は〜2 cm以下です。患部は、組織グラインダー、害虫やモルタル、シリカビーズ破壊、トリチュレーション?...

関節リウマチ(RA)は、関節に持続性対称性腺炎を有し、皮膚、心臓、肺、眼1などの器官の余分な関節関与を有する慢性全身性炎症性疾患である。免疫応答の全身症状はヒト患者において明らかであるが、RA病理の特徴の1つは、静脈組織における免疫細胞の浸潤およびスイノビアル線維芽細胞の増殖である2である。
ヒトRAと同様に、マウスコラーゲン誘発関節炎(CIA)モデルは、滑膜組織および全身コンパートメントにおける活性免疫応答を有する強い組織炎症を引き起こす。CIAモデルに対する異なるマウス株の感受性は、主要組織適合性複合体(MHC)ハプロタイプおよび抗原特異的T細胞およびB細胞相互作用3、4にリンクする。さらに、自己抗体産生、免疫複合体沈着、骨髄細胞活性化、多関節状症状および眼窩免疫浸潤を伴うパンヌス形成を含むヒトRAにおける多くの病原性経路も、このモデルで明らかである。5、6.研究者は、抗炎症サイトカイン治療の効果を調査するために、この確立されたCIAモデルを採用しています7.抗TNFαおよび抗IL-6のような自己免疫または炎症性疾患に対して承認された多くの生物学的製剤は、CIAモデル8、9において有効であることが見出される。
静脈組織における免疫系の相互作用をプロファイリングすることは、RAの病因に関連する分子機構を解明するために重要である。人間の臨床環境では、超音波画像診断の指導の下で針の静脈生検を行うことが一般的です。前臨床の設定では、マウス関節の小さなアーキテクチャは、不可能でない場合、生検手順がはるかに困難になります。最近、異なる終点に影響を与える薬物の組み合わせを評価し、組み合わせアプローチ10で疾患を解決するために、マウスCIAモデルの利用を実証した。炎症を起こしたマウスの足を均質な微粉末に処理し、RNAとタンパク質を抽出する下流プロセスを確立するために、極低温冷凍ミルベースの粉砕法が採用されました。この方法は、RNAとタンパク質を酵素的および化学的な分解プロセスから保護し、単一の均質化されたサンプルソースに複数の分析方法を適用することを可能にします。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

局所組織における分子変化のプロファイリングは、生体内における治療候補の作用のメカニズムを理解するために重要である。関節炎の研究の分野では、多くの研究は、骨、軟骨、筋肉、間質細胞および免疫細胞の複雑な混合物で構成される炎症性関節に焦点を当てています。ここでは、炎症を起こしたマウスの足を極低温で制御された環境で均質な粉砕サンプルに破壊する信頼性と堅牢な機械的方法を確立しました。タンパク質およびRNAリサートは、局所組織におけるプロテオミクスおよび転写エンドポイントおよび関連する疾患経路の分子特性評価を可能にするために処理された。

ここで、図2AにCIAマウスの前足から抽出したRNAの代表的なゲル画像可視化を示す。28S rRNAおよび18S rRNAバンドは、すべてのサンプルが十分な量の無傷のRNAを有しっていることを示す。次に、図2Bにタンパク質BCA分析に基づく総タンパク質濃度の代表的な散乱プロットを示す。ナイーブマウス、CIAマウ?...

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A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

液体窒素冷凍庫ミルを用いてマウス足を処理する極低温粉砕法を開発し、組織から抽出されたRNAまたはタンパク質の収率と品質を向上させ、炎症に関連する分子プロファイルの解析を可能にした。応答。

コラーゲン誘発性関節炎モデルにおける組織炎症の分子経路を評価するためのマウス足処理のためのクライオ粉砕プロトコル

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

局所組織における分子プロファイルの評価は、疾患関連の前臨床モデルで評価される活性医薬品の作用機序を理解するための重要なステップである。関節炎研究の分野では、関心のある局所組織環境は、骨、軟骨、筋肉、免疫細胞の複雑な混合物で構成される小さな体重負荷関節です。ここでは、極低温制御環境におけるこの複雑な組織環境の機械的破壊および/または粉砕のための信頼性の高い堅牢な方法について説明します。この方法は、下流のプロテオームおよび転写プロファイリングの取り組みを生成し、単一の均一なサンプル源から疾患の分子シグネチャを確立するために使用することができます。この方法は、他の多くの古い技術とは異なり、均質な粉末を生成します。さらに、古い温度分離手順は、高品質のRNAの分離を可能にします。この方法は、その後、対象となる関連疾患経路の分子特性を可能にする下流プロテオームおよび転写プロファイリングを生成するために使用することができる。この方法は、組織から分子シグネチャを導き出しているあらゆる研究分野に関する洞察を提供することができます。この方法は、構成成分を解化するのが密で困難な複雑な組織システムに拡張することができます。ここまでは評価されていませんが、耳や骨のような密な軟骨組織への応用が見込まれます。計量のために粉末をチューブに移す時間的に重要な性質は、練習を要するものです。時間がかかりすぎると、粉末が解凍し始め、アモルファスになります。手順に慣れるまで、サンプルの数を 10 ~ 15 に制限することが重要です。組織処理の日には、最低10分間ドライアイスに必要なすべての器具をプレチルします。極端な寒さによって被害を受けないように、熱手袋を着用してください。次に、準備した各マウス足を別々の1.5ミリリットルマイクロ遠心分離チューブに移し、すぐに液体窒素で凍結します。凍った足をマイナス80°Cで保存します。続行する準備ができたら、冷凍工場に液体窒素を充填し、少なくとも10分間平衡させます。未処理のサンプルをドライアイスの上に置き、凍結/解凍サイクルを避けるためにそこに保管してください。その後、1つの後ろ足を底のスチールプラグで冷やした大きなポリカーボネート研削バイアルに移します。事前に冷やしたスチールインコンサーを挿入し、ポリカーボネート研削バイアルを、冷蔵トップスチールプラグで閉じます。サンプルと一緒に大きなポリカーボネート研削バイアルをプレフィルドフリーザーミルに移し、器具の前面にあるゴム製留めで蓋を閉じます。液体窒素中でサンプルを1分間冷まします。次に、1秒あたり10サイクルの1分間のプログラムに冷凍工場を設定します。実行ボタンを押して、冷凍工場がサイクルを完了するのを待ちます。この後、冷凍工場の蓋を開け、大きなポリカーボネート粉砕バイアルを取り出します。粉砕バイアルを抽出器に入れ、スチールプラグがポリカーボネートチューブから滑り落ちるまで黒いハンドルに下向きの圧力をかけ、上部のスチールプラグを取り外します。開いた研削バイアルをドライアイスに移し、あらかじめ冷やされた鉗子を使用してスチールインコンプレクターを取り外します。冷凍粉末を冷やした50ミリリットルの円錐管に移します。冷凍粉末の30〜50ミリグラムをRNA抽出用に階層化された1.5ミリリットルマイクロ遠心分離チューブに、タンパク質抽出のために100〜200ミリグラムの間で計量します。粉砕したサンプルをマイナス80°Cで保存し、24時間以内にRNAとタンパク質の分離に進みます。まず、RLTバッファーのミリリットルごとにβ-メルカプトエタノールを10マイクロリットル添加する。組織のミリグラム当たり23.3ミリリットルの割合に対応するRLTバッファの体積を計算し、凍結粉末でチューブにβ-メルカプトエタノールを有するRLTバッファーの適切な量を追加します。3,000 RPMで10秒間、試料を渦出させる。1ミリリットルのピペッタを使用して10回激しく上下にピペットを作り、サンプルを3,000 RPMで20秒間再び渦巻きます。遠心分離機を13,000回gで2分間、上清の700マイクロリットルを新鮮なチューブに移す。70%エタノール700マイクロリットルをこのチューブに加え、700マイクロリットルのサンプルをRNA精製カラムに積み込みます。30秒間少なくとも10,000回gの速度でチューブを遠心分離する。フロースルーを破棄し、サンプルの残りの部分をRNeasyカラムにロードし、チューブを少なくとも10,000倍gの速度で30秒間遠心します。フロースルーを廃棄し、700マイクロリットルのRW1バッファーを加え、少なくとも10,000倍gの速度を30秒間遠心してカラムを洗浄します。オプションのDNAse消化を行う場合、350マイクロリットルのRW1が、DNAse処理の前に添加される。そして、DNAse処理後、RW1の追加350マイクロリットルが添加される。その後、500マイクロリットルのRPEバッファーと遠心分離機を少なくとも10,000回gの速度で30秒間加えて、毎回フロースルーを廃棄するようにして、カラムを2回洗浄します。この後、少なくとも10,000倍gの速度で2分間遠心してカラムを乾燥させます。50マイクロリットルの水を加え、2分間少なくとも10,000倍の速度で遠心分離機を加えてRNAを溶出する。フロースルーを収集し、新しい1.5ミリリットルチューブに転送します。研究者の選択方法を使用してRNAの量を決定し、さらに分析する前にマイナス80°Cで保存します。10X細胞溶解ストック溶液を細胞培養グレードの水で1X細胞溶解ストック溶液に希釈します。1ミリリットルの水でセットしたプロテアーゼ阻害剤を再構成し、100Xプロテアーゼ阻害剤ストックを作ります。1X細胞溶解バッファーの9.9ミリリットルにプロテアーゼ阻害剤の100ミリリットルを加え、1X最終ストック溶液を得る。ティッシュパウダーのミリグラムごとに氷冷細胞溶菌バッファーを4マイクロリットル加え、チューブに5ミリメートルのステンレスビーズを1つ加えます。3,000 RPMで60秒間、チューブを渦出させる。チューブを湿った氷に移し、次のサンプルに進みます。さらに、研究者は、ボックスを垂直に置くことで、ビーズとのより良い混合を容易にすることができることを発見するかもしれません。1時間後、チューブを10,000倍g、摂氏4度で15分間遠心分離します。上層を新鮮なチューブに移し、上部の脂肪層を避けるようにします。タンパク質の総濃度を決定します。アリコート各サンプルを1.5ミリリットルマイクロ遠心分離チューブに入れ、さらに分析を行う準備ができるまで80°Cの負の80度で保存します。本研究では、組織から抽出されたRNAまたはタンパク質の収量と品質を改善し、炎症反応に関連する分子プロファイルの分析を可能にするために、マウスの足を処理するために極低温化法が使用されます。代表的なゲル画像の可視化は、CIAマウスの前足から抽出されたRNAを示す。28S rRNAおよび18S rRNAバンドは、すべてのサンプルに十分な量の無傷RNAがあることを示している。タンパク質BCA分析に基づく全タンパク質濃度の代表的な散布図をここに示す。ナイーブマウス、CIAマウス、または様々な治療下のCIAマウスからの総タンパク質濃度は、グループ間で比較可能である。その後、ルミネックス分析を行い、タンパク質抽出物中の炎症性サイトカインおよびケモカインの濃度を決定します。正規化されたサイトカインおよびケモカインの濃度の代表的な散布図は、ナイーブマウスと比較すると、いくつかのサイトカインがCIAマウスで上昇し、抗IL17A抗体による治療がいくつかのサイトカインの産生を有意に阻害することを明らかにした。マイクロアレイ解析は、CIAの転写法変化および治療関連の効果を評価するために行われる。CIAマウスの遺伝子の代表的なヒートマッププロットは、ナイーブマウスと比較して有意に増加した。この手順を実行する場合、研究者はチューブと粉末がドライアイスから締め出される時間を最小限に抑えることが重要です。これは、分解されたRNAおよびタンパク質に対する粉末の解凍とその後の問題を防ぐのに役立ちます。この技術によって生成される分子シグネチャの高品質は、研究者が治療が与えるユニークなプロファイルを尋問することを可能にし、さらに関節炎の状態を治療するために使用できるメカニズムの分化を可能にする。この技術は、耳や骨のような多くの密な組織を抽出して、関心のあるこれらの組織の分子シグネチャをさらに評価するために使用することができます。治療が疾患の分子シグネチャをどのように調節するかを理解することで、どのような特定のシグナル経路が変調されているかをよりよく評価できます。そしておそらくさらに重要なことは、評価されている治療メカニズムでどのような経路が調節されていないか。液体窒素やドライアイスを使用する場合、適切に評価された手袋やフェイスシールドなどの個人用保護具を使用することが不可欠です。数秒以上皮膚の暴露は重度の火傷を引き起こす可能性があります。大量のドライアイスを扱う場合、ドライアイスが二酸化炭素を放出するので、換気の良い場所で作業することが重要です。

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

M細胞による細菌の取り込みを評価するパイエル板腸管ループアッセイを連結したマウスのアプリケーション

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

合成脂質二重膜上でHIV-1エンベロープ誘発性ウイルス学的シナプスとシグナリングのイメージング

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

ワクチンには、マウスの応答における鼻咽頭関連リンパ網内系組織（NALT）の役割を調べる

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

局所および全身所における病原体により誘導される慢性炎症のためのマウスモデル

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

インフルエンザAウイルス核を持つマウスMx1のタンパク質の共免疫沈降

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

マウスの脾臓から不変ナチュラルキラーT細胞を単離および拡張するための最適化方法

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

の気管内の管理<em&gt;インフルエンザ菌</em&gt;マウスモデルにおいて気道炎症を研究します

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

レポーターマウスを用いたIL-22を発現するリンパ球の可視化

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

TGF-βを含むプロトコルを使用したナイーブCD4 + T細胞からのヒトCD4 + FOXP3 +誘導された調節性T細胞（iTregs）のインビトロ分化における

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

マウスの唾液腺機能の測定法

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...