Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
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저자는 이 원고의 출판을 지지해 준 에디스 얀센과 나빈 라오와 제니퍼 타운에 대한 비판적 검토에 감사를 표하고자 한다.

모든 동물 실험은 얀센 R&D의 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 정책에 따라 수행되었습니다.
1. 극저온 냉동고 밀 기반 분쇄 방법
<ol><li>CIA 연구의 종료에, 희생 마우스와 함께 1.5% 이소플루란 다음 자궁 경부 탈구.</li>
	<li>티슈 처리 당일, 모든 기구(주걱, 갈기 바이알 등)를 드라이 아이스에 최소 10분 동안 식히십시오.</li>
	<li>그림 1A에...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

활액 조직에서 분자 경로를 평가하는 강력한 과학적 근거가 있지만, 뮤린 CIA 모델의 면역 프로파일링에 대한 많은 보고서는 말초 혈액에 초점을 맞춘 반면 염증이있는 발의 단백질 및 RNA 분석 데이터는 다소 제한적입니다. 이 편견에 대한 몇 가지 가능한 이유가 있습니다 : 뮤린 발목 관절은 ~ 2cm보다 크지 않습니다. 영향 받은 지역은 조직 분쇄기, 유봉 및 박격포, 실리카 비드 중단, trituration 또는 ...

류마치스성 관절염 (RA)는 피부, 심혼, 폐 및 눈과 같은 기관의 합동 그리고 추가 관절 에 있는 지속적인 대칭 활막염을 가진 만성 조직 선동적인 질병1. 면역 반응의 전신 발현은 인간 환자에서 분명하지만, RA 병리학의 특징 중 하나는 활액 상 조직내 면역 세포의 침투및 활액 섬유 아세포의증식2.
인간 RA와 유사하게, 마우스 콜라겐 유도 관절염 (CIA) 모델은 활액 조직 및 전신 구획에 있는 활성 면역 반응으로 강한 조직 염증을 이끌어 냅니다. CIA 모델에 대한 상이한 마우스 균주의 감수성은 주요 조직 적합성 복합체(MHC) haplotype 및 항원 특이적 T 세포 및 B 세포 상호작용3,4로연결된다. 또한, 자가 항체 생산, 면역 복합체 침착, 골수성 세포 활성화, 활액 면역 침윤을 통한 다관절 증상 및 판누스 형성을 포함한 인간 RA의 많은 병원성 경로도 이 모델에서 분명하게 드러납니다. 5,6. 수사관은 항 염증 성 사이토 카인 치료의 효과를 조사하기 위해이 잘 설립 된 CIA 모델을채택7. 항-TNFα 및 항-IL-6과 같은 자가면역 또는 염증성 질환에 대해 승인된 많은 생물학적 제제는 CIA 모델8,9에서효과적인 것으로 밝혀졌다.
활액 조직에서 면역 계통의 상호 작용을 프로파일링은 RA의 병인과 관련되었던 분자 기계장치를 해명하기 위하여 결정적이다. 인간 임상 환경에서, 일반적인 관행은 초음파 화상 진찰의 지도의 밑에 바늘 활액 생검을 능력을 발휘하는 것입니다. 전임상 환경에서, 뮤린 관절의 작은 구조는 불가능하지 않을 경우 생검 절차를 훨씬 더 어렵게 만듭니다. 최근에는 이질적인 종점에 영향을 미치고 질병을 해결하는 약물의 조합을 평가하기 위해 뮤린 CIA 모델의 활용도를10으로입증했다. 극저온 냉동고 밀 기반 분쇄 방법은 염증이 있는 뮤린 발을 균일한 미세 분말로 처리하고 RNA와 단백질을 추출하기 위해 하류 공정을 확립하는 데 사용되었습니다. 이 방법은 효소 및 화학 적 탈지 공정으로부터 RNA 및 단백질을 보호하고 단일 균질화 된 샘플 소스에 여러 분석 방법을 적용 할 수 있게합니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

국소 조직에서 의 분자 변화를 프로파일링은 생체 내에서 치료 후보의 작용의 메커니즘(들)을 이해하는 데 매우 중요하다. 관절염 연구 분야에서, 많은 연구는 뼈의 복잡한 혼합물로 구성된 염증 관절에 초점을 맞추고, 연골, 근육, 기질 세포와 면역 세포. 여기에서, 우리는 극저온 통제된 환경에서 균일한 분쇄된 견본으로 불을 붙인 마우스 발을 중단하는 믿을 수 있고 강력한 기계적인 방법을 설치했습니다. 단백질 및 RNA 분해제는 국소 조직에서 관련 질병 경로의 단백질 및 전사 종점 및 분자 특성을 가능하게 하기 위해 처리되었습니다.

여기서, 우리는 도 2A에서CIA 마우스의 앞발에서 추출된 RNA의 대표적인 겔 이미지 시각화를 보여준다. 28S rRNA 및 18S rRNA 대역은 모든 샘플이 충분한 양의 손상되지 않은 RNA를 가지고 있음을 나타냅니다. 다음으로, 도 2B에서단백질 BCA 분석을 기반으로 총 단백질 농도의 대표적인 산산도를 보여 준다. 순진?...

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A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

액체 질소 냉동고 밀을 사용하여 뮤린 발을 처리하는 극저온 분쇄 방법은 조직에서 추출 된 RNA 또는 단백질의 수율과 품질을 개선하고 염증과 관련된 분자 프로파일의 분석을 가능하게하기 위해 개발되었습니다. 응답.

콜라겐 유도 관절염 모델에서 조직 염증의 분자 경로를 평가하기 위한 마우스 발 처리를 위한 저온 분쇄 프로토콜

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

국소 조직에서 분자 프로파일의 평가는 질병 관련 전임상 모델에서 평가되는 활성 의약품의 작용 메커니즘을 이해하는 중요한 단계입니다. 관절염 연구의 분야에서, 관심의 국소 조직 환경은 뼈, 연골, 근육 및 면역 세포의 복잡한 혼합물로 구성된 작은 무게 베어링 관절이다. 여기서 우리는 극저온 으로 통제 된 환경에서이 복잡한 조직 환경의 기계적 중단 및 / 또는 분쇄를위한 신뢰할 수있는 견고한 방법을 설명합니다.이 방법은 단일 균일한 샘플 소스에서 질병의 분자 서명을 확립하기위한 다운스트림 프로테오믹 및 전사 프로파일링 노력을 생성하는 데 사용할 수 있습니다. 이 방법은 다른 많은 오래된 기술과 달리 균일 한 분말을 생성합니다. 또한, 기존의 온도 격리 절차는 고품질 RNA의 격리를 허용한다.이 방법은 그 때 관심있는 관련 질병 통로의 분자 특성화를 가능하게 하는 다운스트림 proteomic 및 전사 프로파일링을 생성하는 데 이용될 수 있습니다. 이 방법은 조직에서 분자 서명을 유도하는 모든 연구 분야에 통찰력을 제공 할 수 있습니다. 이 방법은 성분을 해리하기 어렵고 조밀하고 어려운 복잡한 조직 시스템으로 확장 될 수 있습니다.우리는 이 시점에서 평가하지 않았지만 귀나 뼈와 같은 조밀한 연골 조직에 대한 잠재적 인 응용 프로그램을 볼 수 있었습니다. 계량을 위해 분말을 튜브로 옮기는 데 중요한 특성은 연습하는 것입니다. 너무 많은 시간이 걸린다면 분말이 해동되기 시작하고 무정형이 됩니다.시술에 익숙할 때까지 샘플 수를 10에서 15로 제한하는 것이 중요합니다. 조직 처리 당일, 드라이 아이스에 필요한 모든 기기를 최소 10분 동안 미리 식힙니다. 극심한 추위에 의해 피해를 입지 않도록 열 장갑을 착용하십시오.다음으로, 준비된 마우스 발을 각각 별도의 1.5 밀리리터 미세원심분리기 튜브로 옮기고 즉시 액체 질소로 동결합니다. 냉동 된 발을 음의 섭씨 80도에 저장합니다. 계속 할 준비가되면 냉동고 밀에 액체 질소를 채우고 적어도 10 분 동안 평형하게하십시오.가공되지 않은 샘플을 드라이 아이스에 놓고 동결/해동 주기를 피하기 위해 보관하십시오. 그런 다음 한 힌드 발을 바닥 강철 플러그로 미리 냉각된 대형 폴리카보네이트 연삭 바이알로 옮춥니다. 미리 냉각된 강철 임펙터를 삽입하고 폴리카보네이트 연삭 바이알을 미리 냉각된 상단 스틸 플러그로 닫습니다.시료와 함께 대형 폴리카보네이트 연삭 바이알을 미리 채워진 냉동고 공장으로 옮기고 기기 의 전면에 있는 고무 걸쇠로 뚜껑을 닫습니다. 샘플을 액체 질소에서 1분 동안 식힙니다. 다음으로, 냉동고 밀을 초당 10 사이클로 1분 프로그램으로 설정합니다.실행 버튼을 누르고 냉동실 공장이 주기를 완료할 때까지 기다립니다. 그 후, 냉동고 공장의 뚜껑을 열고 큰 폴리 카보네이트 연삭 유리병을 꺼내. 연삭 바이알을 추출기에 넣고 강철 플러그가 폴리 카보네이트 튜브에서 미끄러질 때까지 검은 손잡이에 하방 압력을 가하여 상단 스틸 플러그를 제거합니다.열린 연삭 바이알을 드라이 아이스에 옮기고 미리 냉각된 포셉을 사용하여 강철 임펙터를 제거합니다. 냉동 분말을 미리 냉각된 50 밀리리터 원추형 튜브로 옮춥니다. 냉동 분말의 30~50밀리그램을 RNA 추출을 위한 1.5 밀리리터 미세센심분리기 튜브와 단백질 추출을 위한 100~200밀리그램 사이의 미세센심분리기 튜브로 계량합니다.분쇄된 샘플을 음의 섭씨 80도에 저장하고 24시간 이내에 RNA 및 단백질 격리로 진행합니다. 먼저 RLT 버퍼의 각 밀리리터에 베타-메르카토에탄올 10마이크로리터를 추가합니다. 조직의 밀리그램 당 23.3 밀리리터의 비율에 해당하는 RLT 버퍼의 부피를 계산하고 냉동 분말을 가진 튜브에 베타-mercaptoethanol을 사용하여 RLT 버퍼의 적절한 부피를 추가합니다.샘플을 3, 000 RPM에서 10초 동안 소용돌이시다. 1밀리리터 파이퍼를 사용하여 10번 위아래로 파이펫을 하고 샘플을 3, 000 RPM에서 20초 동안 다시 소용돌이시다. 원심분리기는 13, 000배 g에서 2분간, 700마이크로리터의 마이크로리터를 신선한 튜브로 옮긴다.이 튜브에 70%에탄올의 700 마이크로리터를 추가하고 RNA 정화 열에 샘플의 700 마이크로리터를 적재한다. 30초 동안 튜브를 최소 10, 000배 의 속도로 원심분리합니다. 흐름을 버리고 샘플의 나머지 부분을 RNeasy 컬럼에 로드하고 30초 동안 최소 10, 000배 의 속도로 튜브를 다시 원심분리합니다.RW1 버퍼 700 마이크로리터를 추가하고 30초 동안 10, 000배 이상의 속도로 원심분리를 추가하여 흐름을 버리고 컬럼을 세척합니다. DNAse 소화를 수행하는 경우 DNAse 치료 전에 RW1의 350 마이크로리터가 추가됩니다. 그리고 DNAse 처리 후에, RW1의 추가 350 마이크로리터가 추가됩니다.그런 다음 RPE 버퍼와 원심분리기 500마이크로리터를 30초 동안 최소 10, 000배 의 속도로 추가하여 매번 흐름을 폐기하여 컬럼을 두 번 세척합니다. 그런 다음 2분 동안 적어도 10, 000배의 속도로 원심분리하여 컬럼을 건조시킵니다. RNA를 10마이크로리터의 물과 원심분리기를 2분 동안 최소 10, 000배의 속도로 첨가하여 RNA를 엘테.흐름을 수집하고 새로운 1.5 밀리리터 튜브로 전송합니다. 연구원의 선택 방법을 사용하여 RNA의 양을 결정하고 추가 분석 전에 부정적인 섭씨 80도에 저장합니다. 10X 셀 리시스 스톡 용액을 세포 배양 등급물로 1X 셀 리시스 스톡 솔루션으로 희석합니다.프로테아제 억제제 칵테일 세트를 1밀리리터의 물로 재구성하여 100배 프로테아제 억제제 스톡을 만듭니다. 1X 세포 용해 버퍼의 9.9 밀리리터에 프로테아제 억제제 100밀리리터를 추가하여 1X 최종 스톡 솔루션을 얻습니다. 티슈 파우더 의 각 밀리그램에 4 개의 마이크로 리터를 추가하고 튜브에 5 밀리미터 스테인레스 스틸 비드 하나를 추가합니다.튜브를 3, 000 RPM에서 60초 동안 소용돌이시다. 튜브를 젖은 얼음으로 옮기고 다음 샘플로 계속 이동합니다. 또한, 연구원은 상자를 수직으로 두면 비드와 더 잘 혼합할 수 있다는 것을 발견 할 수 있습니다.1시간 후, 10, 000배, 섭씨 4도에서 15분간 원심분리합니다. 상부를 신선한 튜브로 옮기면 상단의 지방 층을 피하십시오. 총 단백질 농도를 결정합니다.Aliquot 각 샘플을 1.5 밀리리터 미세 원심 분리기 튜브로 넣고 추가 분석을 수행 할 준비가 될 때까지 음의 80도섭에 저장합니다. 본 연구에서는, 극저온 분쇄 방법은 조직에서 추출된 RNA 또는 단백질의 수율 과 품질을 개선하고 염증 반응과 관련된 분자 프로파일의 분석을 가능하게 하기 위해 뮤린 발을 처리하는 데 사용된다. 대표적인 젤 영상 시각화는 CIA 마우스의 앞발으로부터 추출된 RNA를 나타낸다.28S rRNA 및 18S rRNA 대역은 모든 시료가 충분한 양의 그대로 RNA를 가지고 있음을 나타냅니다. 단백질 BCA 분석을 기반으로 한 총 단백질 농도의 대표적인 산란 플롯이 여기에 나와 있다. 순진한 마우스에서 총 단백질 농도, CIA 마우스, 또는 다양 한 치료 에서 CIA 마우스 는 그룹 전반에 걸쳐 비교.루미넥스 분석은 단백질 추출물에서 염증성 사이토카인과 케모킨의 농도를 결정하기 위해 실시된다. 정규화된 사이토카인 및 케모킨 농도의 대표적인 산란 줄거리는 순진한 마우스와 비교했을 때, 여러 사이토카인이 CIA 마우스에서 상승하고 항IL17A 항체를 가진 치료가 여러 사이토카인의 생산을 현저히 억제한다는 것을 밝힙니다. 마이크로어레이 분석은 CIA 및 치료 관련 효과의 전사적 변화를 평가하기 위해 수행됩니다.유전자의 대표적인 열지도 플롯은 NAïve 마우스에 비해 CIA 마우스에서 현저하게 증가하여 여기에 도시된다. 이 절차를 수행할 때, 연구원은 튜브와 분말이 드라이 아이스에서 보관되는 시간을 최소화하는 것이 중요합니다. 이것은 저하된 RNA 및 단백질에 분말 및 후속 문제의 해동을 방지하는 것을 돕습니다.이 기술에 의해 생성 된 분자 서명의 높은 품질은 연구원이 치료가 부여 할 독특한 프로필을 심문하고 관절염 조건을 치료하는 데 사용할 수있는 메커니즘의 분화를 더 허용 할 수 있습니다. 이 기술은 관심있는 이 조직에 있는 분자 서명을 추가 평가하기 위하여 귀와 뼈 같이 조밀한 조직의 수를 추출하기 위하여 이용될 수 있었습니다. 치료법이 질병의 분자 서명을 조절하는 방법을 이해하면 특정 신호 경로가 변조되는 것을 더 잘 평가할 수 있습니다.그리고 아마도 더 중요한 것은, 어떤 통로가 평가되는 치료 기계장치로 규제되지 않습니다. 액체 질소와 드라이 아이스로 작업할 때는 제대로 정격된 장갑과 얼굴 방패를 포함한 개인 보호 장비를 사용해야 합니다. 몇 초 이상 피부노출로 인해 심한 화상을 입을 수 있습니다.다량의 드라이 아이스와 함께 작업할 때, 드라이 아이스가 이산화탄소를 방출함에 따라 통풍이 잘 되는 지역에서 일하는 것이 중요합니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

마우스의 응용은 M 세포에 의해 박테리아 이해를 평가하는 Peyer의 패치 장 루프 분석 출혈도 잡았

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

연구

면역학 및 감염병학

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

의 이미징 HIV-1 봉투 유발 Virological 시냅스와 합성 지질 Bilayers에 신호

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

백신에 마우스 응답 Nasopharyngeal - 관련 Lymphoreticular 조직 (NALT)의 역할을 검토

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

로컬 및 전신 사이트에서 병원체에 의한 만성 염증을위한 마우스 모델

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

인플루엔자 A 바이러스의 핵 단백질과 마우스 MX1 단백질의 공동 면역 침전

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

마우스 비장에서 불변 자연 살해 T 세포를 분리하고 확장을위한 최적화 방법

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

의 내부 기관 관리<em&gt; 헤모필루스 인플루엔자</em&gt; 마우스 모델에서기도 염증을 연구하는

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

기자 마우스를 사용하여 IL-22 발현 림프구의 시각화

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

TGF-β 함유 프로토콜을 사용하여 나이브 CD4 + T 세포에서 인간의 CD4 + Foxp3의 + 유도 규제 T 세포 (iTregs)의 체외 분화

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

쥐에 있는 침 샘 기능의 측정 하는 방법

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...