Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

Forfatterne ønsker å takke Edith Janssen for den kritiske gjennomgangen av manuskriptet og Navin Rao og Jennifer Towne for deres støtte til utgivelsen av dette manuskriptet.

Alle dyre eksperimenter ble utført i henhold til retningslinjene for den institusjonelle dyre omsorgen og bruks komitéen (IACUC) til Janssen R & D.
1. kryogene fryser Mill-basert pulverisering metode
<ol><li>Ved opphør av CIA-studien, offer mus med 1,5% isoflurane etterfulgt av cervical forvridning.</li>
	<li>På dagen for vev behandling, pre-chill alle instrumenter (spatler, sliping hetteglass, etc.) på tørr is i minst 10 min. Bruk termiske hansker for å unngå Frostskade.</li>
	<li>S...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

Selv om det er sterk vitenskapelig begrunnelse for å evaluere molekylære trasé i synovial vev, mange rapporter om immun profilering av murine CIA-modellen var fokusert på perifert blod, mens protein og RNA analysedata av betente poter er ganske begrenset. Det er flere mulige årsaker til denne bias: murine ankel leddene er ikke større enn ~ 2 cm; de berørte områdene består av hud, bein og bindevev som ofte er vanskelig å homogenisere ved hjelp av tradisjonelle metoder som vev kverner, morter og mørtel, silica p...

Revmatoid artritt (RA) er en kronisk systemisk inflammatorisk sykdom med vedvarende symmetrisk synovitt i ledd og ekstra ledd involvering av organer som hud, hjerte, lunger og øyne1. Selv om de systemiske manifestasjoner av immunresponsen er tydelig i menneskelige pasienter, en av kjennetegnene til RA patologi er infiltrasjon av immunceller i synovial vev og spredning av synovial Fibroblast celler2.
I likhet med menneskelig RA, mus kollagen indusert artritt (CIA) modell utløser sterk vev betennelse med aktive immunresponser i synovial vev og systemiske avdelinger. Mottakelighet av ulike mus stammer til CIA-modellen lenker til store histocompatibility kompleks (MHC) haplotype og antigen spesifikke T celle og B celle interaksjoner3,4. I tillegg er mange patogene veier i menneskets RA, inkludert autoantistoff produksjon, immun komplekse deponering, myelogen celle aktivering, polyartikulær manifestasjoner og pannus dannelse med synovial immun infiltrasjon, også tydelig i denne modellen 5,6. Etterforskerne har brukt denne veletablerte CIA-modellen for å undersøke virkningene av anti-inflammatorisk cytokin behandlinger7. Mange biologiske medisiner godkjent for autoimmune eller inflammatoriske sykdommer, slik som anti-TNFα og anti-Il-6, er funnet å være effektiv i CIA modell8,9.
Profilering av interaksjoner i immunsystemet i synovial vev er avgjørende for å belyse molekylære mekanismer knyttet til patogenesen av RA. I den menneskelige kliniske innstillingen, er en vanlig praksis å utføre nål synovial biopsier under veiledning av Ultralyd Imaging. I prekliniske innstillingene, gjør den mindre arkitekturen i murine leddene biopsi prosedyrer mye vanskeligere om ikke umulig. Nylig demonstrerte vi utnyttelsen av murine CIA-modell for å evaluere kombinasjoner av medikamenter for å påvirke ulike sluttpunkter og løse sykdom i en Kombinatorisk tilnærming10. En kryogene fryseboks Mill-basert pulverisering metode ble brukt til å behandle betent murine poter i homogen fint pulver og etablerte nedstrøms prosesser for å trekke ut RNA og proteiner. Denne metoden beskytter RNA og protein fra enzymatisk og kjemiske degrative prosesser og gjør det mulig for oss å anvende flere analytiske metoder til en enkelt homogenisert prøvekilde.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

Profilering av molekylære endringer i lokalt vev er avgjørende for å forstå mekanismen (e) av terapeutiske kandidater i vivo. Innen leddgikt forskning, er mange studier fokusert på betente ledd som består av en kompleks blanding av bein, brusk, muskel, stromal celler og immunceller. Her etablerte vi en pålitelig og robust mekanisk metode for å forstyrre betent mus poter i homogene pulverisert prøver i et cryogenically kontrollert miljø. Protein og RNA lysater ble behandlet for å muliggjøre Proteomikk og transcriptional endepunkter og molekylær karakterisering av relevante sykdoms baner i lokalt vev.

Her viser vi en representativ gel bilde visualisering av RNA utvunnet fra fronten poter av CIA-mus i figur 2a. 28S rRNA og 18S rRNA-båndet viser at alle prøvene har tilstrekkelig mengde intakt RNA. Deretter viser vi en representativ scatter plott av totale protein konsentrasjoner basert på protein BCA analyse i figur 2B. Totale protein konsentrasjoner fra naive mus, CIA-mus eller CIA-mus under...

Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

En kryogene pulverisering metode for å behandle murine poter ved hjelp av en flytende nitrogen fryser Mill ble utviklet for å forbedre utbyttet og kvaliteten på RNA eller protein utvunnet fra vev og muliggjøre analyse av molekylære profiler forbundet med inflammatoriske Svar.

En pulverisering protokoll for behandling mus paws å evaluere molekylær trasé av vev betennelse i en kollagen indusert artritt modell

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

Evalueringen av molekylære profiler i lokalt vev er et kritisk skritt for å forstå virkningsmekanismen til aktive legemidler når de evalueres i sykdomsrelevante prekliniske modeller. Innen leddgikt forskning, det lokale vev miljøet av interesse er de små vektbærende leddene som består av en kompleks blanding av bein, brusk, muskel, og immunceller. Her beskriver vi en pålitelig robust metode for mekanisk forstyrrelse og/eller pulverisering av dette komplekse vevsmiljøet i et kryogenisk kontrollert miljø.Denne metoden kan deretter brukes til å generere nedstrøms proteomiske og transkripsjonelle profilering innsats for å etablere molekylære signaturer av sykdom fra en enkelt ensartet prøvekilde. Denne metoden genererer et homogent pulver i motsetning til mange andre gamle teknikker. I tillegg gjør den gamle temperaturisolasjonsprosedyren det mulig å isoleringen av RNA av høy kvalitet.Denne metoden kan deretter brukes til å generere nedstrøms proteomisk og transkripsjonsprofilering som muliggjør molekylær karakterisering av relevante sykdomsveier av interesse. Denne metoden kan gi innsikt til ethvert forskningsfelt som utleder molekylære signaturer fra vev. Metoden kan utvides til ethvert komplekst vevssystem som har tett og vanskelig å ta avstand fra bestanddeler.Selv om vi ikke har evaluert til dette punktet, kan vi se potensiell anvendelse for tett bruskvev som ører eller bein. Den tidskritiske karakteren av å overføre pulveret til rør for veiing er noe som tar praksis. Hvis det tas for mye tid, vil pulveret begynne å tine og bli amorfe.Det er viktig å begrense antall prøver til 10 til 15 til du er komfortabel med prosedyren. På dagen for vevsbehandling, prechill alle nødvendige instrumenter på tørris i minst 10 minutter. Bruk termiske hansker for å unngå å bli skadet av ekstrem kulde.Deretter overfører du hver av den tilberedte musepoten til et separat 1,5 milliliter mikrocentrifugerør og umiddelbart klikker fryse i flytende nitrogen. Oppbevar de frosne potene ved negative 80 grader Celsius. Når du er klar til å fortsette, fyll en frysemølle med flytende nitrogen og la den likevekt i minst 10 minutter.Plasser den ubehandlede prøven på tørris og hold den der for å unngå fryse-/tinesykluser. Deretter overfører du en bakpote til et forkjølet stort polykarbonatslipings hetteglass med en bunnstålplugg. Sett inn den forkjølte stålstøtoren og lukk polykarbonatslipingsoppleggingen med den forkjølte toppstålpluggen.Overfør de store polykarbonatslipehetskulene med prøvene inn i den ferdigfylte frysemøllen og lukk lokket med gummilåsen som finnes foran på instrumentet. La prøvene avkjøles i flytende nitrogen i ett minutt. Deretter setter du frysemøllen til ett minutts programmet med 10 sykluser per sekund.Trykk på løpeknappen og vent til frysemøllen fullfører syklusen. Etter dette åpner du lokket på frysemøllen og tar ut det store polykarbonatslipings hetteglasset. Plasser slipeglasset i en avtrekksvim og fjern den øverste stålpluggen ved å legge nedtrykket på det svarte håndtaket til stålpluggen glir ut av polykarbonatrøret.Overfør det åpne slipeopplegget til tørris og bruk forkjølte tang for å fjerne stålstøtmaskinen. Overfør det frosne pulveret til et forhåndskjølt 50 milliliter konisk rør. Vei ut mellom 30 og 50 milligram av det frosne pulveret til et lagdelt 1,5 milliliter mikrocentrifugerør for RNA-ekstraksjon og mellom 100 og 200 milligram for proteinekstraksjon.Oppbevar de pulveriserte prøvene ved negative 80 grader Celsius og fortsett til RNA og proteinisolasjoner innen 24 timer. Først legger du til 10 mikroliter beta-merkaptoetanol for hver milliliter RLT-buffer. Beregn volumet av RLT buffer som tilsvarer et forhold på 23,3 milliliter per mg vev og tilsett riktig volum av RLT buffer med beta-mercaptoetanol til røret med frosset pulver.Vortex prøven ved 3, 000 RPM i 10 sekunder. Bruk en en milliliter pipetter til å pipette opp og ned kraftig 10 ganger og virvle prøven igjen på 3, 000 RPM i 20 sekunder. Sentrifuge ved 13 000 ganger g i to minutter og overfør 700 mikroliter av supernatanten til et friskt rør.Legg til 700 mikroliter med 70 % etanol i dette røret og legg 700 mikroliter av prøven på en RNA-rensekolonne. Sentrifuger røret med en hastighet på minst 10 000 ganger g i 30 sekunder. Kast gjennomstrømningen og last den gjenværende delen av prøven på RNeasy-kolonnen og sentrifuger røret igjen med en hastighet på minst 10 000 ganger g i 30 sekunder.Kast gjennomstrømningen og vask kolonnen ved å legge til 700 mikroliter RW1-buffer og sentrifugering minst hastigheten på 10 000 ganger g i 30 sekunder. Hvis du utfører alternativ DNAse fordøyelsen, 350 mikroliter rw1 tilsettes før DnAse behandling. Og etter DNAse behandling, legges ytterligere 350 mikroliter av RW1 til.Vask deretter kolonnen to ganger ved å legge til 500 mikroliter RPE-buffer og sentrifuge med en hastighet på minst 10 000 ganger g i 30 sekunder, og sørg for å kaste gjennomstrømningen hver gang. Etter dette tørker du kolonnen ved å sentrifugere den med en hastighet på minst 10 000 ganger g i to minutter. Elute RNA ved å legge til 50 mikroliter vann og sentrifuging med en hastighet på minst 10 000 ganger g i to minutter.Samle gjennomstrømningen og overfør den til et nytt 1,5 milliliter rør. Bestem mengden RNA ved hjelp av forskerens metode for valg og lagre på negative 80 grader Celsius før videre analyse. Fortynn 10X cellelysis lagerløsningen til 1X cellelysis lagerløsning med cellekultur grade vann.Rekonstituer proteasehemmeren cocktail sett en med en milliliter vann for å lage en 100X protease inhibitor lager. Tilsett 100 milliliter proteasehemmer til 9,9 milliliter 1X cellelysbuffer for å få en 1X endelig lagerløsning. Tilsett fire mikroliter iskald celle lysis buffer for hvert mg vev pulver og tilsett en fem millimeter rustfritt stål perle til røret.Vortex røret ved 3, 000 RPM i 60 sekunder. Overfør røret til våt is og fortsett til neste prøve. I tillegg kan forskere finne at å plassere boksen vertikal kan lette bedre blanding med perlen.Etter en time sentrifuger rørene på 10 000 ganger g og ved fire grader Celsius i 15 minutter. Overfør supernativa til et friskt rør og sørg for å unngå fettlaget på toppen. Bestem den totale proteinkonsentrasjonen.Aliquot hver prøve i 1,5 milliliter mikrocentrifuge rør og lagre dem på negative 80 grader Celsius til klar til å utføre videre analyse. I denne studien brukes en kryogen pulveriseringsmetode til å behandle murine poter for å forbedre utbyttet og kvaliteten på RNA eller protein ekstrahert fra vevet og muliggjøre analyse av molekylære profiler forbundet med inflammatoriske responser. En representativ gelbildevisualisering viser RNA ekstrahert fra fremre poter av CIA-mus.28S rRNA og 18S rRNA-båndene indikerer at alle prøvene har tilstrekkelig mengde intakt RNA. En representativ spredningsplott av de totale proteinkonsentrasjonene basert på protein BCA-analyse er vist her. Totale proteinkonsentrasjoner fra naive mus, CIA-mus eller CIA-mus under ulike behandlinger kan sammenlignes på tvers av grupper.Luminexanalyser utføres deretter for å bestemme konsentrasjonene av inflammatoriske cytokiner og kjemokiner i proteinekstraktet. En representativ spredning av konsentrasjonene av normaliserte cytokiner og chemokiner avslører at sammenlignet med naive mus, er flere cytokiner forhøyet i CIA-mus og behandling med anti-IL17A antistoff hemmer produksjonen av flere cytokiner betydelig. Mikroarrayanalyse utføres for å evaluere transkripsjonsendringer i CIA og behandlingsrelaterte effekter.Et representativt varmekartplott av gener som økes betydelig hos CIA-mus sammenlignet med naive mus, vises her. Når du utfører denne prosedyren, er det avgjørende for forskere å minimere tiden at røret og pulveret holdes ute av tørris. Dette bidrar til å forhindre tining av pulveret og påfølgende problemer til degradert RNA og protein.Den høye kvaliteten på molekylære signaturer generert av denne teknikken gjør det mulig for forskere å avhøre den unike profilen en terapeutisk vil formidle og ytterligere muliggjør differensiering av mekanismer som kan brukes til å behandle leddgikt. Denne teknikken kan brukes til å trekke ut en rekke tette vev som ører og bein for å evaluere molekylære signaturer i disse vev av interesse. Å forstå hvordan terapeutiske midler modulerer de molekylære signaturene av sykdommen gjør oss i stand til å bedre vurdere hvilke spesifikke signalveier som moduleres.Og kanskje enda viktigere, hvilke veier er ikke regulert med den terapeutiske mekanismen som evalueres. Når du arbeider med flytende nitrogen og tørris, er det viktig å bruke personlig verneutstyr, inkludert riktig vurderte hansker og ansiktsskjold. Eksponering av hud i mer enn noen få sekunder kan forårsake alvorlige brannskader.Når du arbeider med store mengder tørris, er det viktig å arbeide i et godt ventilert område som tørris frigjør karbondioksid.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Anvendelse av en Mouse Ligated Peyer er Patch Intestinal Loop Assay å evaluere Bakteriell Opptak av M celler

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Imaging av HIV-1-konvolutt-indusert virologisk Synapse og signaliserer på Syntetiske Lipid bilayers

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Undersøke rolle Nasofaryngeal-assosiert lymforetikulært vev (NALT) i Mus Responses til Vaksiner

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

A Mouse Modell for Patogen Utløst kronisk betennelse på lokale og systemiske nettsteder

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

Co-immunoprecipitation av musen Mx1 Protein med influensa A virus nucleoprotein

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimalisert metode for å isolere og utvide Invariant Natural Killer T-celler fra mus Spleen

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administrasjon av<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; I musemodeller for å studere Airway betennelse

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

Visualisering av IL-22-uttrykke lymfocytter Bruke Reporter Mus

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In vitro Differensiering av Menneskelig CD4 + foxp3 + Induced regulatoriske T-celler (iTregs) fra naive CD4 + T-celler under anvendelse av et TGF-β holdige Protocol

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metode for måling av Salivary kjortelen funksjon i mus

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...