Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

Os autores desejam agradecer a Edith Janssen pela revisão crítica do manuscrito e Navin Rao e Jennifer Towne por seu apoio à publicação deste manuscrito.

Todos os experimentos com animais foram realizados de acordo com as políticas do Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) da Janssen R&D.
1. Método de Pulverização baseado em fábrica de freezer criogênico
<ol><li>Na terminação do estudo do CIA, os ratos do sacrifício com isoflurane de 1.5% seguidos pela deslocação cervical.</li>
	<li>No dia do processamento de tecidos, pré-chill todos os instrumentos (espátulas, frascos de moagem, etc) em gelo seco por um mínimo de 1...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

Embora haja uma forte lógica científica para avaliar as vias moleculares nos tecidos sinoviais, muitos relatórios sobre o perfil imunológico do modelo da CIA murine foram focados no sangue periférico, enquanto os dados de análise de proteínas e RNA de patas inflamadas são bastante limitados. Existem várias razões possíveis para este viés: as articulações do tornozelo murine não são maiores do que ~ 2 cm; as áreas afetadas consistem em tecidos de pele, osso e conjuntivo, que muitas vezes são difíceis de...

A artrite reumatóide (AR) é uma doença inflamatória sistêmica crônica com sinofite simétrica persistente nas articulações e envolvimento articular extra de órgãos como a pele, coração, pulmões e olhos1. Embora as manifestações sistêmicas da resposta imune sejam evidentes em pacientes humanos, uma das características da patologia da RA é a infiltração de células imunes no tecido sinovial e a proliferação de células fibroblastas sinoviais2.
Semelhante ao AR humano, o modelo de artrite induzida por colágeno do rato (CIA) provoca forte inflamação do tecido com respostas imunes ativas em tecidos sinoviais e compartimentos sistêmicos. A susceptibilidade de diferentes cepas de camundongos para links modelo da CIA para Major Histocompatibilidade Complexo (MHC) haplótipo e antígeno específico célula T e interações celulares B3,4. Além disso, muitas vias patogênicas na AR humana, incluindo a produção de autoanticorpos, deposição de complexo imune, ativação de células mieloides, manifestações poliarticulares e formação de pannus com infiltração imune sinovial, também são evidentes neste modelo 5,6. Os investigadores empregaram este modelo bem estabelecido do CIA para investigar efeitos de tratamentos anti-inflamatórios da citocina7. Muitos produtos biológicos aprovados para doenças auto-imunes ou inflamatórias, como anti-TNFα e anti-IL-6, são encontrados para ser eficaz no modelo da CIA8,9.
O perfil das interações do sistema imunológico no tecido sinovial é crucial para elucidar os mecanismos moleculares associados à patogênese da AR. No ambiente clínico humano, uma prática comum é realizar biópsias sinoviais de agulha a orientação de imagens de ultrassom. Nas configurações pré-clínicas, a arquitetura menor das articulações de urina torna os procedimentos de biópsia muito mais difíceis, se não impossíveis. Recentemente, demonstramos a utilização do modelo murine CIA para avaliar combinações de drogas para impactar pontos finais díspares e resolver a doença em uma abordagem combinatória10. Um método criogênico de pulverização à base de uma fábrica de freezer foi empregado para processar patas de urina inflamadas em pós finos homogêneos e estabeleceu processos a jusante para extrair RNA e proteínas. Este método protege o RNA e a proteína dos processos degralísticos enzimáticos e químicos e permite-nos aplicar múltiplos métodos analíticos a uma única fonte homogênea da amostra.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

O perfil de alterações moleculares nos tecidos locais é crucial para entender o mecanismo de ação dos candidatos terapêuticos in vivo. No campo da pesquisa da artrite, muitos estudos são focalizados nas junções inflamadas que são compostas de uma mistura complexa do osso, da cartilagem, do músculo, das pilhas estromais e das pilhas imunes. Aqui, estabelecemos um método mecânico confiável e robusto para interromper as patas inflamadas do rato em amostras pulverizadas homogêneas em um ambiente criogenicamente controlado. As lisatas proteicas e rna foram processadas para permitir desfechos proteômicos e transcricionais e caracterização molecular de vias de doenças relevantes no tecido local.

Aqui, nós mostramos uma visualização representativa da imagem do gel do RNA extraído das patas dianteiras de ratos do CIA na figura 2A. O rRNA 28S e a banda rRNA 18S indicam que todas as amostras têm quantidade suficiente de RNA intacto. Em seguida, mostramos um gráfico representativo de dispersão de concentrações totais de proteínas com base na análise de proteína BCA na Figura 2B. A...

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A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

Um método criogênico de pulverização para processar patas de urina usando um moinho congelador de nitrogênio líquido foi desenvolvido para melhorar o rendimento e a qualidade do RNA ou proteína extraído dos tecidos e permitir a análise de perfis moleculares associados a inflamatórios Respostas.

Um protocolo de crio-pulverização para processar patas do rato para avaliar caminhos moleculares da inflamação do tecido em um modelo induzido da artrite do colágeno

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

A avaliação dos perfis moleculares nos tecidos locais é um passo crítico para a compreensão do mecanismo de ação dos fármacos ativos, pois são avaliados em modelos pré-clínicos relevantes para a doença. No campo da pesquisa da artrite, o ambiente de interesse do tecido local são as pequenas articulações de peso que são compostas por uma mistura complexa de células ósseas, cartilagem, muscular e imune. Aqui descrevemos um método robusto confiável para a interrupção mecânica e/ou pulverização deste complexo ambiente tecidual em um ambiente criogenicamente controlado.Este método pode então ser usado para gerar esforços de perfil proteômico e transcricional a jusante para estabelecer assinaturas moleculares da doença a partir de uma única fonte de amostra uniforme. Este método gera um pó homogêneo ao contrário de muitas outras técnicas antigas. Além disso, o antigo procedimento de isolamento de temperatura permite o isolamento do RNA de alta qualidade.Este método pode então ser usado para gerar perfis proteômicos e transcricionais a jusante, permitindo a caracterização molecular de caminhos de interesse relevantes da doença. Este método pode fornecer insights para qualquer campo de pesquisa que esteja derivando assinaturas moleculares de tecidos. O método poderia ser estendido a qualquer sistema tecidual complexo que tenha densos e difíceis de dissociar constituintes.Embora não tenhamos avaliado até agora, pudemos ver a aplicação potencial de tecidos de cartilagem densas como orelhas ou ossos. A natureza crítica do tempo de transferir o pó para tubos para pesagem é algo que requer prática. Se muito tempo for levado, o pó começará a descongelar e se tornar amorfo.É importante limitar o número de amostras para 10 a 15 até que você esteja confortável com o procedimento. No dia do processamento tecidual, todos os instrumentos necessários em gelo seco durante o mínimo de 10 minutos. Use luvas térmicas para evitar ser prejudicado pelo frio extremo.Em seguida, transfira cada uma das patas de rato preparadas para um tubo de microcentrífuga separado de 1,5 mililitro e imediatamente encaixe o congelamento em nitrogênio líquido. Guarde as patas congeladas a 80 graus Celsius negativos. Quando estiver pronto para continuar, encha um moinho de congelador com nitrogênio líquido e deixe equilibrar por pelo menos 10 minutos.Coloque a amostra não processada em gelo seco e mantenha-a lá para evitar ciclos de congelamento/degelo. Em seguida, transfira uma pata traseira em um frasco de moagem de policarbonato grande pré-refrigerado com um plugue de aço inferior. Insira o impactor de aço pré-refrigerado e feche o frasco de moagem de policarbonato com o plugue de aço superior pré-refrigerado.Transfira os frascos de moagem de policarbonato grandes com as amostras para o moinho de congelador pré-preenchido e feche a tampa com o fecho de borracha encontrado na frente do instrumento. Deixe as amostras esfriarem no nitrogênio líquido por um minuto. Em seguida, coloque o moinho de congelador no programa de um minuto com 10 ciclos por segundo.Pressione o botão de execução e aguarde que o moinho de congelador complete seu ciclo. Depois disso, abra a tampa do moinho de congelador e tire o frasco de moagem de policarbonato grande. Coloque o frasco de moagem em um extrator e remova o plugue de aço superior colocando pressão para baixo na alça preta até que o plugue de aço deslize para fora do tubo de policarbonato.Transfira o frasco de moagem aberto para gelo seco e use fórceps pré-refrigerados para remover o impactor de aço. Transfira o pó congelado para um tubo cônico pré-refrigerado de 50 mililitros. Pesar entre 30 e 50 miligramas do pó congelado em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro hierárquico para extração de RNA e entre 100 e 200 miligramas para extração de proteínas.Armazene as amostras pulverizadas a 80 graus Celsius negativos e prossiga para isolamentos de RNA e proteínas dentro de 24 horas. Primeiro, adicione 10 microliters de beta-mercaptoetanol para cada mililitro de buffer RLT. Calcule o volume do tampão RLT correspondente a uma razão de 23,3 mililitros por miligrama de tecido e adicione o volume apropriado de tampão RLT com beta-mercaptoetanol ao tubo com pó congelado.Vórtice a amostra a 3.000 RPM por 10 segundos. Use uma pipetter de um mililitro para pipeta para cima e para baixo vigorosamente 10 vezes e vórtice da amostra novamente a 3.000 RPM por 20 segundos. Centrifugar a 13.000 vezes g por dois minutos e transferir 700 microliters do supernante para um tubo fresco.Adicione 700 microliters de 70% de etanol a este tubo e carregue 700 microliters da amostra em uma coluna de purificação de RNA. Centrifugar o tubo a uma velocidade de pelo menos 10.000 vezes g durante 30 segundos. Descarte o fluxo e carregue a parte restante da amostra na coluna RNeasy e centrifugar o tubo novamente a uma velocidade de pelo menos 10.000 vezes g durante 30 segundos.Descarte o fluxo e lave a coluna adicionando 700 microliters de tampão RW1 e centrifugando pelo menos a velocidade de 10.000 vezes g por 30 segundos. Se realizar a digestão DNAse opção, 350 microliters de RW1 são adicionados antes do tratamento DNAse. E após o tratamento DNAse, mais 350 microliters de RW1 são adicionados.Em seguida, lave a coluna duas vezes adicionando 500 microliters de tampão RPE e centrífuga a uma velocidade de pelo menos 10.000 vezes g por 30 segundos certificando-se de descartar o fluxo de cada vez. Depois disso, seque a coluna centrifugando-a a uma velocidade de pelo menos 10.000 vezes g por dois minutos. Elute o RNA adicionando 50 microliters de água e centrifugando a uma velocidade de pelo menos 10.000 vezes g por dois minutos.Colete o fluxo e transfira-o para um novo tubo de 1,5 mililitro. Determine a quantidade de RNA usando o método de escolha do pesquisador e armazene a 80 graus Celsius negativos antes de uma análise mais aprofundada. Diluir a solução de estoque de lise celular 10X para a solução de estoque de lise celular 1X com água de grau de cultura celular.Reconstituir o coquetel inibidor de protease definir um com um mililitro de água para fazer um estoque inibidor de protease 100X. Adicione 100 mililitros de inibidor de protease a 9,9 mililitros de tampão de lise celular 1X para obter uma solução de estoque final 1X. Adicione quatro microliters de tampão de lise celular fria para cada miligrama de pó de tecido e adicione uma conta de aço inoxidável de cinco milímetros ao tubo.Vórtice o tubo a 3.000 RPM por 60 segundos. Transfira o tubo para o gelo molhado e continue para a próxima amostra. Além disso, os pesquisadores podem descobrir que colocar a caixa vertical pode facilitar uma melhor mistura com a conta.Após uma hora, centrifufique os tubos a 10.000 vezes g e a 4 graus Celsius por 15 minutos. Transfira os supernantes para um tubo fresco, certificando-se de evitar a camada de gordura na parte superior. Determine a concentração total de proteínas.Alíquotar cada amostra em tubos de microcentrifuuge de 1,5 mililitro e armazená-los a 80 graus Celsius negativos até que estejam prontos para realizar uma análise mais aprofundada. Neste estudo, um método de pulverização criogênica é usado para processar patas murinas, a fim de melhorar o rendimento e a qualidade do RNA ou proteína extraído dos tecidos e permitir a análise de perfis moleculares associados a respostas inflamatórias. Uma visualização representativa de imagem em gel mostra o RNA extraído das patas dianteiras dos ratos da CIA.As bandas de rRNA 28S e 18S indicam que todas as amostras têm quantidade suficiente de RNA intacto. Um gráfico representativo das concentrações totais de proteínas baseadas na análise de BCA proteica é mostrado aqui. Concentrações totais de proteínas de camundongos ingênuos, camundongos da CIA ou camundongos da CIA sob vários tratamentos são comparáveis entre grupos.As análises luminex são então conduzidas para determinar as concentrações de citocinas inflamatórias e quimiocinas no extrato de proteínas. Um gráfico representativo das concentrações de citocinas e quimioterapias normalizadas revela que, quando comparados com camundongos ingênuos, várias citocinas são elevadas em camundongos da CIA e o tratamento com anticorpo anti-IL17A inibe significativamente a produção de várias citocinas. A análise da microarray é realizada para avaliar as alterações de transcriptome na CIA e efeitos relacionados ao tratamento.Um gráfico representativo do mapa de calor de genes aumentou significativamente em camundongos da CIA em comparação com ratos ingênuos é mostrado aqui. Ao realizar esse procedimento, é fundamental que os pesquisadores minimizem o tempo em que o tubo e o pó são mantidos fora do gelo seco. Isso ajuda a evitar o descongelamento do pó e problemas subsequentes ao RNA degradado e à proteína.A alta qualidade das assinaturas moleculares geradas por essa técnica permite aos pesquisadores interrogar o perfil único que um terapêutico irá transmitir e ainda permite a diferenciação de mecanismos que podem ser utilizados para tratar condições artríticas. Esta técnica poderia ser usada para extrair uma série de tecidos densos como orelhas e ossos para avaliar ainda mais assinaturas moleculares nesses tecidos de interesse. Entender como a terapêutica modula as assinaturas moleculares da doença nos permite avaliar melhor quais caminhos específicos de sinalização são modulados.E talvez ainda mais importante, quais caminhos não são regulados com o mecanismo terapêutico sendo avaliado. Ao trabalhar com nitrogênio líquido e gelo seco, é imprescindível usar equipamentos de proteção individual, incluindo luvas devidamente avaliadas e escudos faciais. A exposição da pele por mais de alguns segundos pode causar queimaduras graves.Ao trabalhar com grandes quantidades de gelo seco, é importante trabalhar em uma área bem ventilada, pois o gelo seco libera dióxido de carbono.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Aplicação de um rato ligado patch Peyer Assay alça intestinal para avaliar absorção pelas células bacterianas M

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Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Imagem do HIV-1 Synapse Envelope induzida virológica e Sinalização em bicamadas lipídicas sintéticas

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