Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

Авторы хотели бы поблагодарить Эдит Янссен за критический обзор рукописи и Навин Рао и Дженнифер Таун за поддержку публикации этой рукописи.

Все эксперименты на животных проводились в соответствии с политикой Институционального комитета по уходу и использованию животных (IACUC) компании «Янссен» НИОКР.
1. Криогенный морозильник мельница основе пульверизации Метод
<ol><li>При прекращении исследования ЦРУ, жертво...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

Хотя есть сильное научное обоснование для оценки молекулярных путей в синовиальных тканях, многие доклады об иммунном профилировании модели ЦРУ были сосредоточены на периферической крови, в то время как данные анализа белка и РНК воспаленных лап довольно ограничены. Есть несколько во...

Ревматоидный артрит (РА) является хроническим системным воспалительным заболеванием с стойким симметричным синовитом в суставах и дополнительным суставным участием органов, таких как кожа, сердце, легкие и глаза1. Хотя системные проявления иммунного ответа очевидны у пациентов, одной из отличительных черт патологии РА является проникновение иммунных клеток в синовиальную ткань и пролиферация синовиальных фибробластных клеток2.
Как и в человеческой РА, мышь коллагена индуцированных артрита (ЦРУ) модель вызывает сильное воспаление тканей с активными иммунными реакциями в синовиальных тканей и системных отсеков. Восприимчивость различных штаммов мыши к модели ЦРУ ссылки на основные гистосовместимости комплекса (MHC) гаплотип и антиген конкретных Т-клеток и B-клеточных взаимодействий3,4. Кроме того, многие патогенные пути в организме человека, в том числе производство аутоантител, иммунный комплекс осаждения, активация миелоидных клеток, полиартикулярные проявления и формирование паннуса с синовиальной иммунной инфильтрацией, также проявляются в этой модели 5,6. Следователи использовали эту устоявшуюся модель ЦРУ для расследования последствий противовоспалительных цитокинов лечения7. Многие биопрепараты, одобренные для аутоиммунных или воспалительных заболеваний, таких как анти-ТНФЗ и анти-IL-6, оказались эффективными в модели ЦРУ8,9.
Профилирование взаимодействий иммунной системы в синовиальной ткани имеет решающее значение для выяснения молекулярных механизмов, связанных с патогенезом РА. В клинических условиях человека, распространенная практика заключается в выполнении иглы синовиальной биопсии под руководством ультразвуковой визуализации. В доклинических условиях меньшая архитектура муринских суставов делает процедуры биопсии гораздо более сложными, если не невозможными. Недавно мы продемонстрировали использование модели murine ЦРУ для оценки комбинаций препаратов для воздействия разрозненных конечных точек и разрешения болезни в комбинаторном подходе10. Для обработки воспаленные муринные лапы в однородные мелкие порошки был использован криогенный морозильный метод мельницы на основе мельницы. Этот метод защищает РНК и белок от ферментативных и химических дегративных процессов и позволяет нам применять несколько аналитических методов к одному гомогенизированному источнику образца.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

Профилирование молекулярных изменений в местных тканях имеет решающее значение для понимания механизма (ы) действия терапевтических кандидатов in vivo. В области исследований артрита, многие исследования сосредоточены на воспаление суставов, которые состоят из сложной смеси костей, хряща, мышц, стромальных клеток и иммунных клеток. Здесь мы создали надежный и надежный механический метод для разрушения воспаленных мышей лап в однородные распыленные образцы в криогенно контролируемой среде. Белки и РНК-лизаты были обработаны для обеспечения протеомных и транскрипционных конечных точек и молекулярной характеристики соответствующих путей заболевания в местной ткани.

Здесь мы показываем репрезентативную визуализацию изображения геля РНК, извлеченную из передних лап мышей ЦРУ на рисунке 2A. 28S rRNA и диапазон 18S rRNA указывают на то, что все образцы имеют достаточное количество нетронутой РНК. Далее мы показываем...

Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

Криогенный метод распыления для обработки мурин лап с помощью жидкого азота морозильной мельницы был разработан для улучшения урожайности и качества РНК или белка, извлеченного из тканей и позволяют анализ молекулярных профилей, связанных с воспалительными Ответы.

Крио-распыления Протокол для обработки мышь лапы для оценки молекулярных путей воспаления тканей в коллагениндовой модели артрита

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

Оценка молекулярных профилей в местных тканях является критическим шагом к пониманию механизма действия активных фармацевтических препаратов, поскольку они оцениваются в соответствующих заболеваниям доклинтических моделях. В области исследований артрита, местная среда ткани интерес малых несущих суставов, которые состоят из сложной смеси костей, хрящей, мышц и иммунных клеток. Здесь мы описываем надежный надежный метод механического нарушения и/или распыления этой сложной среды тканей в криогенно контролируемой среде.Этот метод может быть использован для генерации ниже по течению протеомных и транскрипционных усилий профилирования для создания молекулярных подписей болезни из единого источника образца. Этот метод генерирует однородный порошок в отличие от многих других старых методов. Кроме того, старая процедура изоляции температуры позволяет изоляции высококачественной РНК.Этот метод может быть использован для генерации ниже по течению протеомного и транскрипционные профилирования позволяет молекулярной характеристики соответствующих путей заболевания интерес. Этот метод может дать представление о любой области исследований, которая является производным молекулярных подписей из тканей. Метод может быть распространен на любую сложную систему тканей, которая имеет плотные и трудно отмежеваться от компонентов.Хотя мы не оценивали до этого момента, мы могли видеть потенциальное применение к плотным хрящевым тканям, таким как уши или кости. Критический характер переноса порошка в трубки для взвешивания является то, что требует практики. Если слишком много времени будет отнято, порошок начнет оттаивать и становиться аморфным.Важно ограничить количество образцов от 10 до 15, пока вы не будете комфортно с процедурой. В день обработки тканей, prechill все необходимые инструменты на сухом льду в течение как минимум 10 минут. Носите тепловые перчатки, чтобы избежать вреда от сильного холода.Затем перенесите каждую подготовленную лапу мыши в отдельную микроцентрифугную трубку на 1,5 миллилитров и немедленно захватьте замораживание жидкого азота. Храните замороженные лапы при отрицательных 80 градусах по Цельсию. Когда вы будете готовы к продолжению, заполните морозильную мельницу жидким азотом и дайте ей равноденствия, по крайней мере 10 минут.Поместите необработанный образец на сухой лед и держите его там, чтобы избежать циклов замораживания/оттепели. Затем перенесите одну заднюю лапу в предварительно охлажденный большой поликарбонатный шлифовальный флакон с нижней стальной вилкой. Вставьте предварительно охлажденный стальной ударник и закройте поликарбонатным шлифовальным флаконом с предварительно охлажденной верхней стальной вилкой.Перенесите большие поликарбонатные шлифовальные флаконы с образцами в предварительно заполненную морозильную фабрику и закройте крышку резиновой застежкой, найденной в передней части инструмента. Дайте образцам остыть в жидком азоте в течение одной минуты. Затем установите морозильную мельницу на одну минуту программы с 10 циклов в секунду.Нажмите кнопку запуска и ждать морозильной мельницы, чтобы завершить свой цикл. После этого откройте крышку морозильной камеры и вывихуте большой поликарбонатный шлифовальный флакон. Поместите шлифовальный флакон в экстрактор и удалите верхнюю стальную вилку, поставив понижательное давление на черную ручку до тех пор, пока стальная вилка не выскальзывает из поликарбонатной трубки.Перенесите открытый шлифовальный флакон на сухой лед и используйте предварительно охлажденные типсы для удаления стального ударного. Перенесите замороженный порошок в предварительно охлажденную 50 миллилитровую коническую трубку. Взвешивание от 30 до 50 миллиграммов замороженного порошка в многоуровневую 1,5 миллилитровую микроцентрифугную трубку для экстракции РНК и от 100 до 200 миллиграммов для извлечения белка.Храните распыленные образцы при отрицательных 80 градусах по Цельсию и приступайте к изоляции РНК и белка в течение 24 часов. Во-первых, добавьте 10 микролитров бета-меркаптоэтанола на каждый миллилитр буфера RLT. Рассчитайте объем буфера RLT, соответствующий соотношению 23,3 миллилитров на миллиграмм ткани, и добавьте соответствующий объем буфера RLT с бета-меркаптоэтаноном в трубку с замороженным порошком.Вихрь образца при 3000 об/мин в течение 10 секунд. Используйте один миллилитр пипетки для пипетки вверх и вниз энергично 10 раз и вихрем образца снова на 3000 об /мин в течение 20 секунд. Центрифуга при 13 000 г в течение двух минут и передача 700 микролитров супернатанта в свежую трубку.Добавьте 700 микролитров 70% этанола в эту трубку и загрузите 700 микролитров образца на колонку очистки РНК. Центрифуга трубки со скоростью не менее 10 000 раз г в течение 30 секунд. Отбросьте протечку и загрузите оставшуюся часть образца на колонку RNeasy и снова центрифугу трубки со скоростью не менее 10 000 раз г в течение 30 секунд.Отбросьте протеку и помойте столбец, добавив 700 микролитров буфера RW1 и центрифугировать по крайней мере скорость 10 000 раз г в течение 30 секунд. При выполнении опции пищеварения DNAse, 350 микролитров RW1 добавляется до лечения DNAse. И после лечения DNAse, дополнительные 350 микролитров RW1 добавляется.Затем мыть столбец дважды, добавив 500 микролитров буфера RPE и центрифуги со скоростью не менее 10 000 раз г в течение 30 секунд убедившись, что отказаться от потока через каждый раз. После этого высушите столбец, центрифугировать его со скоростью не менее 10 000 раз г в течение двух минут. Утолите РНК, добавив 50 микролитров воды и центрифугирования со скоростью не менее 10 000 раз г в течение двух минут.Соберите протечку и перенесите ее в новую 1,5 миллилитровую трубку. Определите количество РНК, используя метод исследователя выбора и хранить при отрицательных 80 градусов по Цельсию до дальнейшего анализа. Разбавить 10X ячейки лиза фондовый раствор 1X ячейки лиза фондовый раствор с клеточной культуры класса воды.Восстановить ингибитор протеазы коктейль установить один с одним миллилитр воды, чтобы сделать 100X протеазы ингибитор фонда. Добавьте 100 миллилитров ингибитора протеазы в 9,9 миллилитров буфера лиза 1X-клеток, чтобы получить решение для конечного запаса 1X. Добавьте четыре микролитров буфера лиза холодных клеток на каждый миллиграмм порошка ткани и добавьте в трубку один пятимиллиметровый шарик из нержавеющей стали.Вихрь трубки при 3000 об/мин в течение 60 секунд. Перенесите трубку на мокрый лед и продолжайте следующий образец. Кроме того, исследователи могут обнаружить, что размещение коробки вертикальной может способствовать лучшему смешиванию с бисером.Через час центрифугировать трубки 10 000 раз г и при четырех градусах по Цельсию в течение 15 минут. Перенесите супернатанты в свежую трубку, чтобы избежать жирового слоя сверху. Определите общую концентрацию белка.Aliquot каждый образец в 1,5 миллилитров микроцентрифуг трубки и хранить их при отрицательном 80 градусов по Цельсию до готовности к проведению дальнейшего анализа. В этом исследовании используется криогенный метод распыления для обработки муриных лап, чтобы улучшить урожайность и качество РНК или белка, извлеченного из тканей, и дать возможность анализа молекулярных профилей, связанных с воспалительными реакциями. Репрезентативная визуализация изображения геля показывает РНК, извлеченную из передних лап мышей ЦРУ.Диапазоны 28S rRNA и 18S rRNA указывают на то, что все образцы имеют достаточное количество нетронутой РНК. Здесь показан репрезентативный участок рассеяния общих концентраций белка на основе анализа белка BCA. Общие концентрации белка от наивных мышей, мышей ЦРУ или мышей ЦРУ под различными методами лечения сопоставимы по группам.Затем проводятся анализы Luminex для определения концентраций воспалительных цитокинов и хемокиных в белковом экстракте. Репрезентативный участок рассеяния концентраций нормализованных цитокинов и хемокиных показывает, что по сравнению с наивными мышами, несколько цитокиных возвышенных у мышей ЦРУ и лечение анти-IL17A антитела значительно подавляет производство нескольких цитокинов. Microarray анализ проводится для оценки транскрипционных изменений в ЦРУ и связанных с лечением эффектов.Здесь показан репрезентативный участок тепловой карты генов, значительно увеличенный у мышей ЦРУ по сравнению с наивными мышами. При выполнении этой процедуры, крайне важно для исследователей, чтобы свести к минимуму время, что трубка и порошок хранятся из сухого льда. Это помогает предотвратить оттаивание порошка и последующие проблемы с деградированной РНК и белка.Высокое качество молекулярных подписей, генерируемых этой техникой позволяет исследователям допрашивать уникальный профиль терапевтических будет распространять и далее позволяет дифференциации механизмов, которые могут быть использованы для лечения артрита условиях. Этот метод может быть использован для извлечения ряда плотных тканей, таких как уши и кости для дальнейшей оценки молекулярных подписей в этих тканях, представляющих интерес. Понимание того, как терапия модулирует молекулярные сигнаты болезни, позволяет нам лучше оценить, какие конкретные сигнальные пути модулируются.И, возможно, что еще более важно, какие пути не регулируются с терапевтическим механизмом оценивается. При работе с жидким азотом и сухим льдом необходимо использовать средства индивидуальной защиты, включая перчатки с надлежащей оценкой и щиты для лица. Воздействие кожи в течение более нескольких секунд может привести к серьезным ожогам.При работе с большим количеством сухого льда важно работать в хорошо проветриваемой зоне, так как сухой лед высвобождает углекислый газ.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Применение Мышь лигируют Патч Пейера Кишечные Пробирной Loop для оценки бактериальной поглощение М клетки

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Изображений ВИЧ-1 Envelope-индуцированной Вирусологические Synapse и сигнализации на синтетической Бислои липидов

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Рассматривая роль носоглотки связанных лимфоретикулярных тканей (NALT) в мышь Ответы на вакцины

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

Мышь Модель для патогенных микроорганизмов, вызванной хроническим воспалением на локальном и системном сайтов

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

Co-иммунопреципитации белка мыши MX1 с вирусом гриппа А нуклеопротеидную

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

Оптимизированная метод выделения и расширение Инвариантные естественных киллеров Т-клеток из селезенки мыши

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-трахеи Администрация<em&gt; Гемофильной</em&gt; В мышиные модели для изучения Воспаление дыхательных путей

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

Визуализация IL-22-экспрессирующих Лимфоциты Использование Reporter Мыши

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In Vitro Дифференциация человеческого CD4 + FOXP3 + Индуцированные регуляторных Т - клеток (iTregs) от наивных CD4 + Т - клеток с использованием TGF-β-содержащего протокол

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

Метод для измерения функции слюнной железы у мышей

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...