Name: a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model
Uploaded: 2019-10-30T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

Författarna vill tacka Edith Janssen för den kritiska granskningen av manuskriptet och Navin Rao och Jennifer Towne för deras stöd för publiceringen av detta manuskript.

Alla djurförsök utfördes i enlighet med den politik som bedrivs av den institutionella djur omsorgs-och användnings kommittén (IACUC) i Janssen R & D.
1. kryogen Fryskvarn-baserad Pulveriseringsmetod
<ol><li>Vid uppsägning av CIA-studien, offra möss med 1,5% isofluran följt av cervikal dislokation.</li>
	<li>På dagen för vävnads behandling, pre-Chill alla instrument (spatlar, slipning flaskor, etc.) på torris i minst 10 min. Använd Termohandskar för att undvika frysskador.</li>...

<ol>
	<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> Journal of Clinical Rheumatology. 11, S39-S44 (2005).</li><li>McInnes, I. B., Schett, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis.">The pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> New England Journal of Medicine. 365, 2205-2219 (2011).</li><li>Ahlqvist, E., Hultqvist, M., Holmdahl, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+animal+models+in+predicting+genetic+susceptibility+to+complex+diseases+such+as+rheumatoid+arthritis.">The value of animal models in predicting genetic susceptibility to complex diseases such as rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Research and Therapy. 11, 226 (2009).</li><li>David, C. S., Taneja, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+major+histocompatibility+complex+genes+in+murine+collagen-induced+arthritis:+a+model+for+human+rheumatoid+arthritis.">Role of major histocompatibility complex genes in murine collagen-induced arthritis: a model for human rheumatoid arthritis.</a> American Journal of the Medical Sciences. 327, 180-187 (2004).</li><li>Tarkowski, A., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rheumatoid+factors+in+mice.">Rheumatoid factors in mice.</a> Monographs in Allergy. 26, 214-229 (1989).</li><li>Schurgers, E., Billiau, A., Matthys, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+an+animal+model+for+rheumatoid+arthritis:+focus+on+interferon-gamma.">Collagen-induced arthritis as an animal model for rheumatoid arthritis: focus on interferon-gamma.</a> Journal of Interferon &amp; Cytokine Research. 31, 917-926 (2011).</li><li>Joosten, L. A., Helsen, M. M., van de Loo, F. A., van den Berg, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anticytokine+treatment+of+established+type+II+collagen-induced+arthritis+in+DBA/1+mice.+A+comparative+study+using+anti-TNF+alpha+anti-IL-1+alpha/beta,+and+IL-1Ra.">Anticytokine treatment of established type II collagen-induced arthritis in DBA/1 mice. A comparative study using anti-TNF alpha anti-IL-1 alpha/beta, and IL-1Ra.</a> Arthritis &amp; Rheumatology. 39, 797-809 (1996).</li><li>Asquith, D. L., Miller, A. M., McInnes, I. B., Liew, F. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+rheumatoid+arthritis.">Animal models of rheumatoid arthritis.</a> European Journal of Immunology. 39, 2040-2044 (2009).</li><li>Williams, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Collagen-induced+arthritis+as+a+model+for+rheumatoid+arthritis.">Collagen-induced arthritis as a model for rheumatoid arthritis.</a> Methods in Molecular Medicine. 98, 207-216 (2004).</li><li>Shen, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+Blockade+of+TNF-alpha+and+IL-17A+Alleviates+Progression+of+Collagen-Induced+Arthritis+without+Causing+Serious+Infections+in+Mice.">Combined Blockade of TNF-alpha and IL-17A Alleviates Progression of Collagen-Induced Arthritis without Causing Serious Infections in Mice.</a> Journal of Immunology. 202, 2017-2026 (2019).</li></ol>

Även om det finns starka vetenskapliga motiv för att utvärdera molekylära vägar i led vävnader, många rapporter om immun profilering av murina CIA-modellen var inriktad på perifert blod, medan protein och RNA analysdata av inflammerade tassar är ganska begränsade. Det finns flera möjliga orsaker till denna bias: murina vristfogar är inte större än ~ 2 cm; de drabbade områdena består av hud, ben och bindväv som ofta är svåra att homogenisera med traditionella metoder som Tissue slipmaskiner, mortelstöt...

Reumatoid artrit (RA) är en kronisk systemisk inflammatorisk sjukdom med ihållande symmetrisk synovit i lederna och extra artikulär inblandning av organ såsom hud, hjärta, lungor och ögon1. Även om de systemiska manifestationerna av immunförsvaret är uppenbara hos mänskliga patienter, en av kännetecknen för ra patologi är infiltration av immunceller i led vävnad och spridning av LED fibroblast celler2.
Liknar Human ra, mus kollagen inducerad artrit (CIA) modell framkallar stark vävnad inflammation med aktiva immunsvar i led vävnader och systemiska fack. Känsligheten hos olika mus stammar till CIA-modell länkar till större histocompatibility complex (MHC) haplotyp och antigen specifik T-cell och B-cellinteraktioner3,4. Dessutom, många patogena vägar i human ra, inklusive autoantikropp produktion, immunkomplex deposition, myeloisk cell aktivering, polyartikulär manifestationer och pannus formation med LED immun infiltration, är också tydligt i denna modell 5,6. Utredare har anställt denna väletablerade CIA-modell för att undersöka effekterna av anti-inflammatoriska cytokin behandlingar7. Många biologiska läkemedel som godkänts för autoimmuna eller inflammatoriska sjukdomar, såsom anti-TNFα och anti-Il-6, befinns vara effektiva i CIA-modellen8,9.
Profilering av samspelet mellan immunsystemet i led vävnad är avgörande för att belysa molekylära mekanismer i samband med patogenesen av ra. I den humana kliniska inställningen, en vanlig metod är att utföra nål LED biopsier under ledning av ultraljud Imaging. I de prekliniska inställningarna, den mindre arkitekturen i murina lederna gör biopsi förfaranden mycket svårare om inte omöjligt. Nyligen visade vi utnyttjandet av murina CIA-modellen för att utvärdera kombinationer av läkemedel för att påverka olika slutpunkter och lösa sjukdomen i en kombinatorisk strategi10. En kryogen fryskvarn-baserad pulverisering metod användes för att bearbeta inflammerade murina tassar i homogena fina pulver och etablerade nedströms processer för att extrahera RNA och proteiner. Denna metod skyddar RNA och protein från enzymatiska och kemiska degrativa processer och gör det möjligt för oss att tillämpa flera analytiska metoder på en enda homogeniserad provkälla.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>5 mm stainless steel bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>beta-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td>Sample reducing agent that inhibits RNASE enzymes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bioanalyzer Kit</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5067-1511</td>
			<td>RNA qualification kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>b-mercaptoethanol</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M6250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Grade Water</td>
			<td>Corning</td>
			<td>25-055-CI</td>
			<td>Water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell lysis stock solution</td>
			<td>Cell Signaling</td>
			<td>9803</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Tube</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22363204</td>
			<td>Microfuge tubes</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf tube centrifuge box</td>
			<td>Nalgene</td>
			<td>5055</td>
			<td>Box for holding eppendorf tubes in horizontal tube arrangement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Everlast 247 Variable Speed Rocker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezer Mill</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6875</td>
			<td>Freezer/Mill for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grinding Vial</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6801</td>
			<td>Polycarbonate vial for processing paws into pulverized powder</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pierce BCA kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td>Kit for Total Protein Quantification</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protease Inhibitor Cocktail set 1</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>539131</td>
			<td>Protease Inhibitors</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein BCA Kit</td>
			<td>Pierce</td>
			<td>23225</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Quantigene Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>QP1013</td>
			<td>bDNA analysis Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated microcentrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5417R</td>
			<td>Centrifugation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RLT Buffer</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>79216</td>
			<td>RNA extraction buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNeasy mini kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>74104</td>
			<td>including RNeasy column, RLT Buffer and RW1 Buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shaker</td>
			<td>Benchmark Scientific</td>
			<td>BR5000</td>
			<td>Rocker/Shaker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10806-412</td>
			<td>Spatula for powder transfer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Bead</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>69989</td>
			<td>Bead for mixing during protein extraction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube Extractor</td>
			<td>Spex Sample Prep</td>
			<td>6884</td>
			<td>Extractor for removing the top of grinding vial</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortexer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10153-838</td>
			<td>Sample mixing</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a cryo-pulverization protocol for processing mouse paws to evaluate molecular pathways of tissue inflammation in a collagen induced arthritis model

Profilering molekylära förändringar i lokala vävnader är avgörande för att förstå mekanismen (s) åtgärder av terapeutiska kandidater in vivo. Inom området artrit forskning, många studier är inriktade på inflammerade leder som består av en komplex blandning av ben, brosk, muskler, stromaceller och immunceller. Här har vi etablerat en pålitlig och robust mekanisk metod för att störa inflammerade mus tassar i homogena pulveriserade prover i en kryogeniskt kontrollerad miljö. Protein och RNA-lysater bearbetades för att möjliggöra proteomiska och transkriptionella endpoints och molekylär karakterisering av relevanta sjukdoms vägar i lokal vävnad.

Här visar vi en representativ gel bild visualisering av RNA som utvinns från främre tassar av CIA-möss i figur 2a. Den 28S rRNA och 18S rRNA bandet indikerar alla prover har tillräcklig mängd intakt RNA. Därefter visar vi ett representativt spridningsdiagram av totala proteinkoncentrationer baserade på PROTEINBCA-analys i figur 2B. Totala proteinkoncentrationer från naiva möss, CIA-mös...

Watch this Scientific Journal Video about A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model at JoVE.co

A Cryo-pulverization Protocol for Processing Mouse Paws to Evaluate Molecular Pathways of Tissue Inflammation in a Collagen Induced Arthritis Model

En kryogen pulveriseringsmetod för att bearbeta murina tassar med hjälp av ett flytande kväve frys kvarn utvecklades för att förbättra avkastningen och kvaliteten på RNA eller protein som utvinns ur vävnaderna och möjliggöra analys av molekylära profiler i samband med inflammatoriska Svaren.

En Cryo-pulverisering protokoll för bearbetning mus tassar att utvärdera molekylära vägar av vävnad inflammation i en kollagen inducerad artrit modell

Profiling molecular changes in local tissues is crucial to understand the mechanism(s) of action of therapeutic candidates in vivo. In the field of ...

Utvärderingen av molekylära profiler i lokala vävnader är ett kritiskt steg för att förstå aktiv läkemedels verkningsmekanism då de utvärderas i sjukdomsrelevanta prekliniska modeller. Inom artrit forskning, den lokala vävnaden miljö av intresse är de små viktbärande leder som består av en komplex blandning av ben, brosk, muskler, och immunceller. Här beskriver vi en tillförlitlig robust metod för den mekaniska störningar och/eller pulverisering av denna komplexa vävnad miljö i en cryogenically kontrollerad miljö.Denna metod kan sedan användas för att generera nedströms proteomiska och transkriptionella profilering insatser för att fastställa molekylära signaturer av sjukdom från en enda enhetlig provkälla. Denna metod genererar ett homogent pulver till skillnad från många andra gamla tekniker. Dessutom möjliggör den gamla temperaturisoleringsproceduren isolering av högkvalitativt RNA.Denna metod kan sedan användas för att generera nedströms proteomiska och transkriptionella profilering möjliggör molekylär karakterisering av relevanta sjukdomsvägar av intresse. Denna metod kan ge insikter till alla forskningsområden som härleder molekylära signaturer från vävnader. Metoden skulle kunna utvidgas till alla komplexa vävnadssystem som har täta och svåra att skilja beståndsdelar.Även om vi inte har utvärderats till denna punkt, kunde vi se potentiella ansökan till täta brosk vävnader som öron eller ben. Den tidskritiska karaktären av att överföra pulvret till rör för vägning är något som tar övning. Om det tas för mycket tid börjar pulvret tina och bli amorft.Det är viktigt att begränsa antalet prover till 10 till 15 tills du är bekväm med förfarandet. På dagen för vävnadsbearbetning, prechill alla nödvändiga instrument på torris i minst 10 minuter. Använd termiska handskar för att undvika att skadas av den extrema kylan.Därefter överför var och en av den förberedda mustassen till ett separat 1,5 milliliter mikrocentrifugrör och snapar omedelbart frys i flytande kväve. Förvara de frysta tassarna vid negativt 80 grader Celsius. När du är redo att fortsätta fyller du en fryskvarn med flytande kväve och låter den ekvillibrera i minst 10 minuter.Placera det obearbetade provet på torris och förvara det där för att undvika frys-/töcykler. Överför sedan en baktass till en förkyld stor polykarbonatslipningsflaska med en bottenstålsplugg. Sätt i den förkylda stålsliparen och stäng polykarbonatslipningsflaskan med den förkylda toppstålpluggen.Överför de stora polykarbonatslipnings injektionsflaskan med proverna till den förfyllda fryskvarnen och stäng locket med det gummilås som finns framtill på instrumentet. Låt proverna svalna i det flytande kvävet i en minut. Ställ därefter frysverket på en minuts program med 10 cykler per sekund.Tryck på löpknappen och vänta tills frysverket har slutfört sin cykel. Efter detta öppnar du locket på frysverket och tar ut den stora polykarbonatslipningsflaskan. Placera slipflaskan i en extraktor och ta bort den övre stålpluggen genom att placera nedåttryck på det svarta handtaget tills stålpluggen glider ut ur polykarbonatröret.Överför den öppnade slipflaskan på torris och använd förkylda forceps för att avlägsna stålslagaren. Överför det frysta pulvret till ett förkylt koniskt rör på 50 milliliter. Väg ut mellan 30 och 50 milligram av det frysta pulvret i ett differentierat 1,5 milliliter mikrocentrifugrör för RNA-extraktion och mellan 100 och 200 milligram för proteinutvinning.Förvara de pulveriserade proverna vid negativa 80 grader Celsius och fortsätt till RNA och proteinisolering inom 24 timmar. Lägg först till 10 mikroliter beta-merkaptoetanol för varje milliliter RLT-buffert. Beräkna volymen av RLT-buffert motsvarande ett förhållande på 23,3 milliliter per milligram vävnad och tillsätt lämplig volym RLT-buffert med beta-merkaptoetanol till röret med fryst pulver.Vortexa provet vid 3, 000 RPM i 10 sekunder. Använd en en milliliter pipetter för att pipettera upp och ner kraftigt 10 gånger och virvel provet igen vid 3, 000 RPM i 20 sekunder. Centrifugera vid 13, 000 gånger g i två minuter och överför 700 mikroliter av supernatanten till ett nytt rör.Tillsätt 700 mikroliter av 70%etanol till detta rör och ladda 700 mikroliter av provet på en RNA-reningskolumn. Centrifugera röret med en hastighet av minst 10, 000 gånger g i 30 sekunder. Kassera genomströmningen och belasta den återstående delen av provet på RNeasy-kolonnen och centrifugera röret igen med en hastighet av minst 10, 000 gånger g i 30 sekunder.Kassera genomströmningen och tvätta kolonnen genom att tillsätta 700 mikroliter RW1-buffert och centrifugera minst hastigheten på 10, 000 gånger g i 30 sekunder. Om du utför alternativ DNAse matsmältning, 350 mikroliter RW1 läggs före DNAse behandling. Och efter DNAse-behandling tillsätts ytterligare 350 mikroliter rw1.Tvätta sedan kolonnen två gånger genom att tillsätta 500 mikroliter RPE-buffert och centrifug med en hastighet av minst 10, 000 gånger g i 30 sekunder se till att kassera genomflödet varje gång. Efter detta torkar kolonnen genom att centrifugera den med en hastighet av minst 10, 000 gånger g i två minuter. Elera RNA genom att tillsätta 50 mikroliter vatten och centrifugera med en hastighet av minst 10, 000 gånger g i två minuter.Samla in genomströmningen och överför det till ett nytt 1,5 milliliterrör. Bestäm mängden RNA med hjälp av forskarens metod för val och lagra vid negativa 80 grader Celsius innan vidare analys. Späd ut 10X cell lys stamlösning till 1X cell lys stamlösning med cellkultur grade vatten.Rekonstruera proteashämmare cocktail set en med en milliliter vatten för att göra en 100X proteashämmare lager. Tillsätt 100 milliliter proteashämmare till 9,9 milliliter 1X celllysbuffert för att få en 1X slutlig stamlösning. Tillsätt fyra mikroliter iskall cell lysbuffert för varje milligram av vävnadspulver och tillsätt en fem millimeter rostfritt stål pärla till röret.Vortexa röret vid 3, 000 RPM i 60 sekunder. Överför röret till våtis och fortsätt till nästa prov. Dessutom kan forskare finna att placera rutan vertikala kan underlätta bättre blandning med pärlan.Efter en timme centrifugera rören vid 10, 000 gånger g och vid fyra grader Celsius i 15 minuter. Överför supernatanterna till ett nytt rör och ser till att undvika fettlagret på ovansidan. Bestäm den totala proteinkoncentrationen.Aliquot varje prov i 1,5 milliliter mikrocentrifugrör och lagra dem på negativa 80 grader Celsius tills redo att utföra ytterligare analys. I denna studie används en kryogen pulveriseringsmetod för att bearbeta murintassar i syfte att förbättra avkastningen och kvaliteten på RNA eller protein som extraheras från vävnaderna och möjliggöra analys av molekylära profiler som är associerade med inflammatoriska reaktioner. En representativ gel bild visualisering visar RNA extraheras från främre tassar av CIA möss.28S rRNA och 18S rRNA-banden indikerar att alla proverna har tillräcklig mängd intakt RNA. Här visas en representativ spridningstomt av de totala proteinkoncentrationerna baserade på protein BCA-analys. Totala proteinkoncentrationer från naiva möss, CIA-möss eller CIA-möss under olika behandlingar är jämförbara mellan olika grupper.Luminex-analyser genomförs sedan för att bestämma koncentrationerna av inflammatoriska cytokiner och kemokiner i proteinextraktet. En representativ spridningstomt av koncentrationerna av normaliserade cytokiner och kemokiner avslöjar att när man jämför med naiva möss, är flera cytokiner förhöjda hos CIA-möss och behandling med anti-IL17A-antikropp hämmar produktionen av flera cytokiner avsevärt. Microarray analys utförs för att utvärdera transkriptom förändringar i CIA och behandlingsrelaterade effekter.En representativ värmekarta tomt av gener avsevärt ökat i CIA möss jämfört med naiva möss visas här. När du utför detta förfarande, Det är viktigt för forskare att minimera den tid som röret och pulvret hålls borta från torris. Detta hjälper till att förhindra upptining av pulvret och efterföljande problem till det försämrade RNA och proteinet.Den höga kvaliteten på de molekylära signaturer som genereras av denna teknik gör det möjligt för forskare att förhöra den unika profil en terapeutisk kommer att förmedla och ytterligare möjliggör differentiering av mekanismer som kan användas för att behandla artros villkor. Denna teknik skulle kunna användas för att extrahera ett antal täta vävnader som öron och ben för att ytterligare utvärdera molekylära signaturer i dessa vävnader av intresse. Att förstå hur terapier modulerar de molekylära signaturerna av sjukdom gör det möjligt för oss att bättre utvärdera vilka specifika signalvägar som moduleras.Och kanske ännu viktigare, vilka vägar som inte regleras med den terapeutiska mekanismen utvärderas. Vid arbete med flytande kväve och torris är det absolut nödvändigt att använda personlig skyddsutrustning inklusive korrekt klassade handskar och ansiktssköldar. Exponering av hud i mer än några sekunder kan orsaka svåra brännskador.Vid arbete med stora mängder torris är det viktigt att arbeta i ett väl ventilerat område som torris släpper ut koldioxid.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Application of a Mouse Ligated Peyer&#x2019;s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Application of a Mouse Ligated PeyerÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â€žÂ¢s Patch Intestinal Loop Assay to Evaluate Bacterial Uptake by M cells

Tillämpning av en mus knyts ihop Peyer s Patch Intestinal Loop-analys för att utvärdera Bakteriell Upptag av M celler

The inside of our gut is inhabited with enormous number of commensal bacteria. The mucosal surface of the gastrointestinal tract is continuously exposed ...

Imaging of HIV-1 Envelope-induced Virological Synapse and Signaling on Synthetic Lipid Bilayers

Avbildning av HIV-1 kuvert-inducerad Virologiskt Synapse och signalering av syntetiska lipiddubbelskikt

Human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) infection occurs most efficiently via cell to cell transmission2,10,11. This cell to cell transfer between ...

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue (NALT) in Mouse Responses to Vaccines

Examining the Role of Nasopharyngeal-associated Lymphoreticular Tissue NALT in Mouse Responses to Vaccines

Undersöka roll Nasofaryngeal-associerad lymfretikulärvävnad (NALT) i Mus Responses to Vaccines

The nasopharyngeal-associated lymphoreticular tissues (NALT) found in humans, rodents, and other mammals, contribute to immunity in the nasal sinuses1-3. ...

A Mouse Model for Pathogen-induced Chronic Inflammation at Local and Systemic Sites

En musmodell för patogen-inducerad Kronisk inflammation vid lokala och system webbplatser

Chronic inflammation is a major driver of pathological tissue damage and a unifying characteristic of many chronic diseases in humans including ...

Co-immunoprecipitation of the Mouse Mx1 Protein with the Influenza A Virus Nucleoprotein

Co-immunoprecipitation av Mouse Mx1 Protein med influensa A-virus nukleoprotein

Studying the interaction between proteins is key in understanding their function(s). A very powerful method that is frequently used to study interactions ...

An Optimized Method for Isolating and Expanding Invariant Natural Killer T Cells from Mouse Spleen

En optimerad metod för att isolera och utöka Invariant Natural Killer T-celler från musmjälte

The ability to rapidly secrete cytokines upon stimulation is a functional characteristic of the invariant natural killer T (iNKT) cell lineage. iNKT cells ...

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intra-tracheal Administration of Haemophilus influenzae in Mouse Models to Study Airway Inflammation

Intratrakeal administration<em&gt; Haemophilus influenzae</em&gt; I musmodeller för att studera Airway Inflammation

Here, we describe a detailed procedure to efficiently and directly deliver Haemophilus influenzae into the lower respiratory tracts of mice. We ...

Visualization of IL-22-expressing Lymphocytes Using Reporter Mice

Visualisering av IL-22-uttryckande lymfocyter med hjälp av Reporter Möss

Reporter mice have been widely used to observe the localization of expression of targeted genes. This protocol focuses on a strategy to establish a new ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In vitro-differentiering av humana CD4 + Foxp3 + Induced regulatoriska T-celler (iTregs) från naiva CD4 + -T-celler med ett TGF-β-innehållande protokoll

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...

A Method for the Measurement of Salivary Gland Function in Mice

En metod för mätning av Saliv-körtel funktion hos möss

Patients with Sj&#246;gren&#39;s syndrome, an autoimmune disease affecting the exocrine glands, develop salivary gland inflammation and have reduced ...