Name: light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis
Uploaded: 2019-09-27T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

ويدعم هذا العمل مؤسسه العلوم الطبيعية في الصين (31671074) وصناديق البحوث الاساسيه لجامعات مقاطعه تشجيانغ (2019XZZX003-12).

1. اعداد يرقات دروفيا
<ol><li>اعداد المتوسطة القياسية تتكون من وجبه الذرة المسلوقة (73 غرام) ، أجار (5.6 غرام) ، فول الصويا وجبه (10 غرام) ، الخميرة (17.3 g) ، شراب (76 mL) والماء (1000 mL).</li>
	<li>رفع جميع الذباب في 25 درجه مئوية علي المتوسطة القياسية في غرفه مع 12 ساعة/12 ساعة الضوء/الظلام دوره.</li>
</ol><p class="jove_tit...

<ol>
	<li>Grossfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geographic+distribution+and+light-dependent+behavior+in+Drosophila.">Geographic distribution and light-dependent behavior in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68, 2669 (1971).</li><li>Godoy-Herrera, R. C. L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+of+Drosophila+melanogaster+larvae+during+pupation.">The behaviour of Drosophila melanogaster larvae during pupation.</a> Animal Behaviour. 37, (1989).</li><li>Busto, M., Iyengar, B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+behavior:+modulation+of+locomotion+by+light+in+the+Drosophila+melanogaster+larva+requires+genetically+distinct+visual+system+functions.">Genetic dissection of behavior: modulation of locomotion by light in the Drosophila melanogaster larva requires genetically distinct visual system functions.</a> Journal of Neuroscience. 19, 3337 (1999).</li><li>Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+pacemaker+neurons+transmit+and+modulate+visual+information+to+control+a+rapid+behavioral+response.">Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response.</a> Neuron. 45, 293 (2005).</li><li>Keene, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+visual+pathways+mediate+Drosophila+larval+light+avoidance+and+circadian+clock+entrainment.">Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment.</a> Journal of Neuroscience. 31, 6527 (2011).</li><li>Keene, A. C., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+the+light:+photobehavior+in+fruit+fly+larvae.">Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae.</a> Trends in Neurosciences. 35, (2012).</li><li>Kane, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+structure+of+Drosophila+larva+phototaxis.">Sensorimotor structure of Drosophila larva phototaxis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, E3868 (2013).</li><li>Humberg, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dedicated+photoreceptor+pathways+in+Drosophila+larvae+mediate+navigation+by+processing+either+spatial+or+temporal+cues.">Dedicated photoreceptor pathways in Drosophila larvae mediate navigation by processing either spatial or temporal cues.</a> Nature Communications. 9. 1260, (2018).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+pairs+of+neurons+in+the+central+brain+control+Drosophila+innate+light+preference.">Two pairs of neurons in the central brain control Drosophila innate light preference.</a> Science. 330, (2010).</li><li>Yamanaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+Control+of+Drosophila+Larval+Light+Preference.">Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference.</a> Science. 341, 1113 (2013).</li><li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disinhibitory+mechanism+biases+Drosophila+innate+light+preference.">A disinhibitory mechanism biases Drosophila innate light preference.</a> Nature Communications. 10, (2019).</li><li>Gong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neuronal+Pathway+that+Commands+Deceleration+in+Drosophila+Larval+Light-Avoidance.">A Neuronal Pathway that Commands Deceleration in Drosophila Larval Light-Avoidance.</a> Neuroscience Bulletin. Feb. 27, (2019).</li><li>Larderet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+larval+visual+circuit.">Organization of the Drosophila larval visual circuit.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+genetic+analysis+of+Drosophila+melanogaster+photobehavior+during+larval+development.">Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development.</a> Journal of Neurogenetics. 10, (1995).</li><li>Farca, L. A., von Essen, A. M., Widmer, Y. F., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+preference+assay+to+study+innate+and+circadian+regulated+photobehavior+in+Drosophila+larvae.">Light preference assay to study innate and circadian regulated photobehavior in Drosophila larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. 74 (74), e50237 (2013).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921 (2010).</li><li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors.">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, e41642 (2012).</li></ol>

يعرض هذا البروتوكول فحص البقعة الضوئية لاختبار قدره يرقات دروفيا علي الهروب من الضوء. يسمح هذا الفحص بتتبع سلوك اليرقات قبل الدخول ، واثناء المواجهة ، وبعد ترك بقعه ضوئيه. يمكن التقاط تفاصيل حركه اليرقات وتحليلها. فحص بقعه خفيفه بسيطه جدا وتمتلك المحتملة القوية. تكلفه الجهاز كله ليست...

تظهر يرقات دروفوسيلا الصباغية الضوء الواضح-تجنب السلوك اثناء مرحله الشيخوخة. وقد تم التحقيق في دروفيسيلا ليرقات الفوتواكسيس ، وخاصه في السنوات الماضية 501،2،3،4،5،6،7 ،8. في السنوات الاخيره ، علي الرغم من حقيقة ان 1) وقد تم تحديد العديد من الخلايا العصبية التوسط لتجنب ضوء يرقات4،5،9،10،11،12 و 2) وقد أنشئت للاتصال كامله من النظام البصري يرقات في القرار من الاشتباكات العصبية13، واليات العصبية الكامنة وراء phototaxis لا تزال غير واضحة إلى حد كبير.
وقد استخدم عدد من الاختبارات السلوكية في دراسة المحور الضوئي اليرقات. ويمكن تقسيمها إلى حد كبير إلى فئتين: واحده تنطوي علي تدرجات الضوء المكاني والأخرى التي تنطوي علي تدرجات الضوء الصدغي. بالنسبة لاختبارات تدرج الضوء المكاني ، تنقسم الساحة إلى عدد متساو من الأقسام في الضوء والظلام. ويمكن تقسيم الساحة إلى نصفي الضوء والظلام2،4 أو الأرباع الضوء والظلام14،15، أو يمكن حتى ان تكون مفصوله في الضوء البديل والساحات المظلمة مثل علي شطرنج7. عاده ، يتم استخدام لوحات أجار لفحص التدرج الضوء المكاني ، ولكن يمكن أيضا ان تستخدم الأنابيب التي تنقسم إلى الضوء البديل والأقسام المظلمة10،14.
في النسخة القديمة من المقايسات ، تنبع الاضاءه الخفيفة عموما من أسفل اليرقات. ومع ذلك ، الاضاءه في الإصدارات الأحدث تنبع إلى حد كبير من أعلاه ، منذ عيون اليرقات (علي سبيل المثال ، والاجهزه Bolwig التي حساسة لشده الضوء المنخفض أو المتوسط16) وترد في هيكل عظمي البلعوم الأنفي مبهمه مع فتحات نحو الجبهة العليا. وهذا يجعل اليرقات أكثر حساسية للضوء من الاتجاات الاماميه العليا من أدناه وراء الاتجاات7. النسبة لاختبارات تدرج الضوء الصدغي ، فان شده الضوء هي موحده مكانيا في الحلبة ، ولكن الكثافة تتغير مع مرور الوقت. بالاضافه إلى ضوء الموجه الزمنيه المربعة (اي ، وامض علي/قباله أو قويه/ضعيفه الضوء3،7) ، ويستخدم أيضا الضوء الزماني المتغيرة التي تتوافق مع منحدر خطي في كثافة8 لقياس حساسية اليرقات إلى تغيير وقتي التحفيز الخفيفة.
وهناك نوع ثالث من فحص الضوء الضوئي هو الملاحة الخفيفة الاتجاه سكيب ، والتي تنطوي علي الاضاءه من فوق في زاوية من 45 درجه7. قبل عمل كين وآخرون7، تم حساب المعلمات الخشنة فقط مثل عدد من اليرقات في المناطق الخفيفة والداكنة ، وتواتر تحول ، وطول درب في اختبارات فوتوتياكسيس اليرقات. منذ عمل هذه المجموعة نفسها ، مع تحليل عاليه الدقة الزمنيه سجل الفيديو لل phototaxis اليرقات ، والديناميكيات التفصيلية للحركة اليرقات خلال phototaxis (اي ، سرعات فورية من أجزاء مختلفه من الجسم اليرقات ، واتجاه الراس ، وتحول زاوية وقد تم تحليل السرعة الزاوي المقابلة)7. التالي ، تم العثور علي مزيد من التفاصيل من السلوك phototaxis اليرقات. في هذه الاختبارات ، يتم اختبار اليرقات في مجموعات بحيث لا يتم استبعاد تاثيرات المجموعة.
يقدم هذا البروتوكول فحصا موضعيا خفيفا للتحقيق في الاستجابات السلوكية الخاصة باليرقات لتحفيز الضوء الفردي. تتكون المجموعة التجريبية الرئيسية من نظام التحفيز البصري ونظام التصوير الضوئي القائم علي الاشعه تحت الحمراء. في نظام التحفيز البصري ، يقوم مصدر ضوء LED بتوليد بقعه ضوئيه مستديرة قطرها 2 سم علي لوحه أجار ، حيث يتم اختبار اليرقة. يمكن تعديل كثافة الضوء باستخدام برنامج تشغيل LED. ويشمل نظام التصوير كاميرا الاشعه تحت الحمراء التي تلتقط سلوك اليرقة بالاضافه إلى 3 850 nm الاشعه تحت الحمراء المصابيح التي توفر الاضاءه للكاميرا. يتم تغطيه عدسه الكاميرا بواسطة فلتر تمرير الفرقة 850 nm لمنع الضوء من نظام التحفيز البصري من دخول الكاميرا ، بينما يسمح للضوء بالاشعه تحت الحمراء بدخول الكاميرا. التالي ، يتم منع تدخل التحفيز البصري علي التصوير. في هذا الفحص ، يتم تسجيل وتحليل التفاصيل السلوكية للاستجابات السريعة ليرقات الفرد خلال فتره بما في ذلك قبل واثناء وبعد دخول الضوء.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>850 nm &#177; 3 nm infrared-light-generating LED</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>PM100A</td>
			<td>Compatible Sensors: Photodiode and Thermal 
			Optical Power Rangea: 100 pW to 200 W 
			Available Sensor Wavelength Rangea: 185 nm-25 &#956;m Display Refresh Rate: 20 Hz 
			Bandwidtha: DC-100 kHz 
			Photodiode Sensor Rangeb: 50 nA-5 mA 
			Thermopile Sensor Rangeb: 1 mV-1 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC to DC converter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S120VC</td>
			<td>Aperture Size: &#216;9.5 mm 
			Wavelength Range: 200-1100 nm 
			Power Range: 50 nW-50 mW 
			Detector Type: Si Photodiode (UV Extended) 
			Linearity: &#177;0.5% 
			Measurement Uncertaintyc: &#177;3% (440-980 nm), &#177;5% (280-439 nm), &#177;7% (200-279 nm, 981-1100 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>band-pass filter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>DC2100</td>
			<td>LED Current Range: 0-2 A 
			LED Current Resolution: 1 mA 
			LED Current Accuracy: &#177;20 mA 
			LED Forward Voltage: 24 V 
			Modulation Frequency Range: 0-100 kHz Sine Wave 
			Modulation: Arbitrary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimated LED blue light&#160;</td>
			<td>ELP, China</td>
			<td>USBFHD01M</td>
			<td>Max. Resolution: 1920X1080 
			F6.0 mm 
			Sensor: 1/2.7&#34; CMOS OV2710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact power meter console&#160;</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td>USB2000+(RAD)</td>
			<td>Dimensions: 89.1 mm x 63.3 mm x 34.4 mm 
			Weight: 190 g 
			Detector: Sony ILX511B (2048-element linear silicon CCD array) 
			Wavelength range: 200-850 nm 
			Integration time: 1 ms &#8211; 65 seconds (20 seconds typical) 
			Dynamic range: 8.5 x 10^7 (system); 1300:1 for a single acquisition 
			Signal-to-noise ratio: 250:1 (full signal) 
			Dark noise: 50 RMS counts 
			Grating: 2 (250 &#8211; 800 nm) 
			Slit: SLIT-50 
			Detector collection lens: L2 
			Order-sorting: OFLV-200-850 
			Optical resolution: ~2.0 nm FWHM 
			Stray light: &#60;0.05% at 600 nm; &#60;0.10% at 435 nm 
			Fiber optic connector: SMA 905 to 0.22 numerical aperture single-strand fiber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Power LED Driver</td>
			<td>Minhongshi, China</td>
			<td>MHS-48XY</td>
			<td>Working voltage: DC12V 
			Central wavelength: 850nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-resolution web camera</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>MWWHL4</td>
			<td>Color: Warm White 
			Correlated Color Temperature: 3000 K 
			Test Current for Typical LED Power: 1000 mA 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Bandwidth (FWHM): N/A 
			Electrical Power: 3000 mW 
			Viewing Angle (Full Angle): 120&#730; 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: &#62;50 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupa: RG1 &#8211; Low Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED Warm White</td>
			<td>Mega-9, China</td>
			<td>BP850/22K</td>
			<td>&#216;25.4(+0~-0.1) mm 
			Bandwidth: 22&#177;3nm 
			Peak transmittance:80% 
			Central wavelength: 850nm&#177;3nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer&#160;</td>
			<td>Noel Danjou</td>
			<td>Amcap9.22</td>
			<td>AMCap&#160;is a still and video capture application with advanced preview and recording features. It is a Desktop application designed for computers running Windows 7 SP1 or later. Most&#160;Video-for-Windowsand&#160;DirectShow-compatible devices are supported whether they are cheap webcams or advanced video capture cards.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard photodiode power sensor&#160;</td>
			<td>Super Dragon, China</td>
			<td>YGY-122000</td>
			<td>Input: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A 
			Output: DC 12V 2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>M470L3-C1</td>
			<td>Color: Blue 
			Nominal Wavelengtha: 470 nm 
			Bandwidth (FWHM): 25 nm 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Forward Voltage: 3.2 V 
			Electrical Power (Max): 3200 mW 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: 100 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupb: RG2 &#8211; Moderate Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S401C</td>
			<td>Wavelength range: 190 nm-20 &#956;m 
			Optical power range:10 &#956;W-1 W(3 Wb) 
			Input aperture size: &#216;10 mm 
			Active detector area: 10 mm x 10 mm 
			Max optical power density: 500 W/cm2 (Avg.) 
			Linearity: &#177;0.5%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis

تظهر يرقات دروفوسيلا الصباغية الضوء الواضح-تجنب السلوك اثناء مرحله الشيخوخة. يمكن استخدام الصور الضوئية كنموذج لدراسة سلوك تجنب الحيوانية. هذا البروتوكول يقدم فحص بقعه ضوء للتحقيق في السلوك الضوئي اليرقة. وتشمل المجموعة التجريبية جزاين رئيسيين: نظام التحفيز البصري الذي يولد البقعة الضوئية ، ونظام التصوير الضوئي القائم علي ضوء الاشعه تحت الحمراء الذي يسجل عمليه تجنب الضوء اليرقة. يسمح هذا الفحص بتتبع سلوك اليرقة قبل الدخول ، واثناء المواجهة ، وبعد ترك البقعة المضيءه. تفاصيل حركه يرقات بما في ذلك التباطؤ ، وقفه ، صب الراس ، وتحول يمكن التقاطها وتحليلها باستخدام هذا الأسلوب.

ووفقا للبروتوكول ، استخدم فحص البقعة الضوئية للتحقيق في سلوك تجنب الضوء ليرقه الانسار الثالثة التي أثيرت عند 25 درجه مئوية علي المستوي المتوسط في غرفه بدوره خفيفه/داكنه 12 ساعة/12 ساعة. تم اختبار اليرقة 1118 w واحد باستخدام فحص البقعة الخفيفة عند 25.5 درجه مئوية. وكان متوسط شده الضوء من...

Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

يقدم هذا البروتوكول فحصا للضوء للتحقيق في سلوك التصوير الضوئي ليرقات دروفيا لارفال. في هذا الفحص ، يتم إنشاء بقعه ضوئيه كمحفز للضوء ، ويتم تسجيل عمليه تجنب ضوء اليرقات بواسطة نظام تصوير قائم علي ضوء الاشعه تحت الحمراء.

الفحص الضوئي القائم علي الضوء لتحليل دروتواكسيس

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

باستخدام مقايسة البقعة الخفيفة ، يمكن تتبع سلوك اليرقات قبل وأثناء وبعد دخول منطقة الضوء مما يسمح بتحليل تفاصيل حركة اليرقات. هذا الفحص بسيط وسهل الأداء. يتم اختبار استجابة الضوء مرة واحدة فقط ، بحيث يمكن استبعاد أي تأثير محتمل للتكيف الخفيف.لإعداد لوحات أجار، ببطء وبشكل متكافئ تغطية الجزء السفلي من طبق بيتري 15 سنتيمترا مع طبقة سمكها حوالي أربعة ملليمترات من الساخن 1٪ أجار. السماح للطبق لتبرد في درجة حرارة الغرفة حتى agar قد توطدت. لإعداد نظام التحفيز البصري، قم بقص مصدر ضوء LED معد على إطار حديدي، مع الحرص على أن الضوء يُسقط نحو سطح المكتب.إمالة الاسطوانة قليلا حتى الزاوية بين الطائرة اسطوانة والطائرة العمودية حوالي 10 درجة. قم بتوصيل ضوء LED الأزرق 470 نانومتر إلى المكونات LED واحد من محرك التشغيل LED عالية الطاقة وتشغيل السائق. بدوره مقبض الباب في الزاوية اليمنى العليا من برنامج التشغيل لتحديد قناة 470 نانومتر وانقر على الصمام.عندما تعرض الشاشة فحصًا، ستظهر بقعة زرقاء على سطح المكتب. انقر فوق موافق وتحويل مقبض الباب لضبط شدة الضوء. نقل موقف مصدر الضوء صعودا وهبوطا لضبط قطر بقعة الضوء إلى سنتيمترين.تدوير مقبض الباب لتحديد شدة الضوء وفقا لمتطلبات التجريبية. استخدم وحدة تحكم مقياس طاقة مدمجة مع مستشعر طاقة الصمام الثنائي الضوئي القياسي لقياس أقصى حد من الطاقة الضوئية والحد الأدنى في البقعة. قوة الضوء تحتاج إلى قياس في الظلام في التجربة الفعلية.ثم سجل قوة الضوء، وقياس ثلاث مرات واستخدام متوسط القيمة. لإعداد نظام التخيل، المشبك كاميرا ويب عالية الدقة مع مقطع حديدي حوالي 10 سم فوق بقعة الضوء على سطح المكتب وضبط اتجاه عدسة الكاميرا نحو سطح المكتب. قم بتوصيل الكاميرا بجهاز كمبيوتر يعمل بنظام التشغيل Windows 7 من خلال واجهة USB ووضع لوحة agar على سطح المكتب مباشرة أسفل الكاميرا.فتح برنامج AMCap 9.22، سيتم تلقائياً عرض بقعة الضوء في إطار AMCap. حرك الكاميرا قليلاً إلى اليسار أو اليمين للتأكد من أن بقعة الضوء بالقرب من وسط النافذة. استخدم مقطعًا لإصلاح 850 زائدًا أو ناقصًا ثلاثة فلتر ة شريطية نانومتر في خمسة إلى سبعة ملليمترات أسفل الكاميرا مباشرةً.ضع ثلاثة ضوء الأشعة تحت الحمراء توليد المصابيح مع الطول الموجي المركزي من 850 نانومتر بالتساوي حول لوحة أجار حوالي خمسة سنتيمترات بعيدا عن حافة لوحة ومع عدسات LED في زاوية 70 درجة تواجه نحو لوحة. ثم قم بتوصيل المصابيح بمصدر طاقة من خلال محولات AC إلى DC. في قائمة برنامج AMCap، حدد الخيارات وجهاز الفيديو وتنسيق الالتقاط وقم بتعيين حجم البيكسل للفيديو الملتقط إلى 800 في 600 ومعدل الإطارات إلى 60 إطارًا في الثانية.قم بإزالة عامل التصفية ووضع مسطرة تحت الكاميرا. ضبط تركيز الكاميرا حتى يصبح خط المقياس واضحًا ومتوازيًا مع عرض حقل الفيديو للعرض وانقر على التقاط وإعداد والتقاط الفيديو لتحديد مسار الحفظ. ثم انقر فوق بدء التسجيل لتسجيل المسافة الفعلية المقابلة لل 600 بكسل وحساب نسبة كل بكسل إلى المسافة الفعلية.قبل إدخال اليرقة إلى إعداد التصوير ، احصل على فيديو قصير لوضع الضوء وتسمية منطقة ضوء الفيديو الخلفية غير المصفاة. ضع المرشح مرة أخرى على عدسة الكاميرا واشعل ضوءًا بعيدًا عن الجهاز التجريبي عند أقل مستوى ممكن مع السماح بملاحظة اليرقات بوضوح. استخدم ملعقة لإزالة بعض اليرقات من وسط الثقافة وحدد بلطف يرقة ثالثة.اغسل اليرقة في الماء المقطر ووضع اليرقة في وسط صفيحة أجار. إزالة بلطف أي الماء الزائد من اليرقة وإيقاف ضوء الغرفة. السماح لليرقة بالتأقلم لمدة دقيقتين في البيئة المظلمة قبل تشغيل ضوء LED بالأشعة تحت الحمراء.يجب إجراء تجربة سلوك تجنب الضوء التالية في الظلام. لراحة مظاهرة صورنا في الضوء الساطع. فرشاة بلطف يرقة إلى مركز لوحة.عندما تبدأ اليرقة في الزحف مباشرة ، قم بتدوير اللوحة لجعل رأس اليرقة نحو بقعة الضوء. انقر فوق التقاط وإعداد والتقاط الفيديو لتحديد مسار الحفظ وانقر فوق بدء التسجيل للتسجيل. اسمح لليرقة بالزحف نحو نقطة الضوء وإدخالها وتركها حتى تصبح خارج مجال الرؤية تقريبًا، وانقر على إيقاف التسجيل.حرك الفلتر بعيدًا عن الكاميرا واستحوذ على فيديو قصير عن موضع البقعة الضوئية. ثم اسم آخر فحص منطقة ضوء الفيديو غير المصفاة اثنين وقارن هذا الفيديو مع ضوء منطقة فيديو واحد لضمان عدم تغيير موضع بقعة الضوء. هنا ، يمكن ملاحظة منحنيات الوقت لسرعة الذيل ، زاوية الانحناء الجسم وسرعة الزاوي للجسم من اليرقة التمثيلية.حجم يلقي رئيس اليرقات، وبالتالي، يتم تقليل زاوية الانحناء الجسم القصوى بشكل كبير في اليرقات الثالثة مع الخلايا العصبية الأخطبوطية التي تمنعها التعبير السام الكزاز مقارنة مع الضوابط الأبوية تشير إلى أن الخلايا العصبية Tdc2-Gal4 ضرورية للاستجابة العادية للضوء اليرقات. لمعالجة الصور بنجاح، تأكد من أن الكاميرا لا تمنع الضوء وأن بقعة الضوء مستديرة وقريبة من وسط النافذة. بعد هذا الإجراء ، يمكن إجراء علم الوراثة البصرية لمراقبة كيفية تفاعل اليرقات عند تنشيط خلايا عصبية محددة.باستخدام هذا الفحص ، يمكن تحليل تفاصيل حركة اليرقات مما يسمح بدراسة التأثير البعيد للعوامل البيئية والداخلية على سلوك تجنب الضوء اليرقات.

Research

JoVE Journal

Biology

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

تشريح الجهاز العصبي المركزي اليرقات في Melanogaster ذبابة الفاكهة

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

ذبابة الفاكهة تشريح اليرقات NMJ

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

ذبابة الفاكهة اليرقات NMJ المناعية

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

والخلايا العصبية ونجمية المشارك الثقافة الفحص لتحليل محتوى عال من العصبية

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

رصد وظيفة القلب في اليرقات ذبابة الفاكهة السوداء البطن للدراسات فسيولوجية

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

إعداد ذبابة الفاكهة خلايا S2 الميكروسكوب لايت

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

تشريح وتلون ذبابة الفاكهة اليرقات المبايض

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

تحليل الجنينية واليرقات الزرد الهيكل العظمي Myofibers من الاستعدادات فصلها

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

فحص<em&gt; ذبابة الفاكهة</em&gt; اليرقات الخلايا الطرفية الرغامي بواسطة المجهر الضوئي

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...