Name: light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis
Uploaded: 2019-09-27T14:45:00
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この研究は、中国の自然科学財団(31671074)と浙江省立大学基礎研究基金(2019XZZX003-12)によって支援されています。

1.ショウジョウバエ幼虫の調製
<ol><li>ゆでたトウモロコシミール(73g)、寒天(5.6g)、大豆ミール(10g)、酵母(17.3g)、シロップ(76 mL)、水(1000mL)からなる標準的な培地を調製します。</li>
	<li>12時間/12時間の光/暗いサイクルを持つ部屋の標準的な媒体上の25 °Cですべてのハエを上げます。</li>
</ol>2. 寒天プレートの調製
<ol><li>1.0%寒天溶液を準備します。バランスのとれた500 mL...

<ol>
	<li>Grossfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geographic+distribution+and+light-dependent+behavior+in+Drosophila.">Geographic distribution and light-dependent behavior in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68, 2669 (1971).</li><li>Godoy-Herrera, R. C. L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+of+Drosophila+melanogaster+larvae+during+pupation.">The behaviour of Drosophila melanogaster larvae during pupation.</a> Animal Behaviour. 37, (1989).</li><li>Busto, M., Iyengar, B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+behavior:+modulation+of+locomotion+by+light+in+the+Drosophila+melanogaster+larva+requires+genetically+distinct+visual+system+functions.">Genetic dissection of behavior: modulation of locomotion by light in the Drosophila melanogaster larva requires genetically distinct visual system functions.</a> Journal of Neuroscience. 19, 3337 (1999).</li><li>Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+pacemaker+neurons+transmit+and+modulate+visual+information+to+control+a+rapid+behavioral+response.">Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response.</a> Neuron. 45, 293 (2005).</li><li>Keene, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+visual+pathways+mediate+Drosophila+larval+light+avoidance+and+circadian+clock+entrainment.">Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment.</a> Journal of Neuroscience. 31, 6527 (2011).</li><li>Keene, A. C., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+the+light:+photobehavior+in+fruit+fly+larvae.">Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae.</a> Trends in Neurosciences. 35, (2012).</li><li>Kane, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+structure+of+Drosophila+larva+phototaxis.">Sensorimotor structure of Drosophila larva phototaxis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, E3868 (2013).</li><li>Humberg, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dedicated+photoreceptor+pathways+in+Drosophila+larvae+mediate+navigation+by+processing+either+spatial+or+temporal+cues.">Dedicated photoreceptor pathways in Drosophila larvae mediate navigation by processing either spatial or temporal cues.</a> Nature Communications. 9. 1260, (2018).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+pairs+of+neurons+in+the+central+brain+control+Drosophila+innate+light+preference.">Two pairs of neurons in the central brain control Drosophila innate light preference.</a> Science. 330, (2010).</li><li>Yamanaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+Control+of+Drosophila+Larval+Light+Preference.">Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference.</a> Science. 341, 1113 (2013).</li><li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disinhibitory+mechanism+biases+Drosophila+innate+light+preference.">A disinhibitory mechanism biases Drosophila innate light preference.</a> Nature Communications. 10, (2019).</li><li>Gong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neuronal+Pathway+that+Commands+Deceleration+in+Drosophila+Larval+Light-Avoidance.">A Neuronal Pathway that Commands Deceleration in Drosophila Larval Light-Avoidance.</a> Neuroscience Bulletin. Feb. 27, (2019).</li><li>Larderet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+larval+visual+circuit.">Organization of the Drosophila larval visual circuit.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+genetic+analysis+of+Drosophila+melanogaster+photobehavior+during+larval+development.">Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development.</a> Journal of Neurogenetics. 10, (1995).</li><li>Farca, L. A., von Essen, A. M., Widmer, Y. F., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+preference+assay+to+study+innate+and+circadian+regulated+photobehavior+in+Drosophila+larvae.">Light preference assay to study innate and circadian regulated photobehavior in Drosophila larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. 74 (74), e50237 (2013).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921 (2010).</li><li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors.">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, e41642 (2012).</li></ol>

このプロトコルは、ショウジョウバエ幼虫が光から脱出する能力をテストする光スポットアッセイを提示する。このアッセイは、入る前、遭遇中、および光スポットを離れた後の幼虫の行動を追跡することを可能にする。幼虫の動きの詳細をキャプチャし、分析することができます。ライトスポットアッセイは非常にシンプルで、強力な実法性を有しています。デバイス全体のコスト?...

ショウジョウバエメラノガスターの幼虫は、飼育段階で明らかな光回避行動を示す。ショウジョウバエ幼虫フォトタキシスは、特に過去50年間に調査中です1,2, 3,4,5,6,7 、8.近年では、1)幼虫光回避を媒知る多くのニューロンが同定されているにもかかわらず、4、5、9、10、11、12そして2)シナプスの分解能における幼虫視覚系の完全な接続が確立されている13、幼虫光タキスの根底にある神経機構は大部分不明のままである。
幼虫フォトタキシスの研究に多くの行動アッセイが使用されています。これらは、空間光グラデーションを含むクラスと、時間的な光グラデーションを含むクラスの 2 つのクラスに大きく分けることができます。空間光グラデーションアッセイの場合、アリーナは光と暗のセクションの数に等しく分割されます。アリーナは、光と暗い半分2、4または光と暗い象限14、15に分割することができ、あるいはチェッカーボード7のような代替光と暗い正方形に分離することができます。通常、寒天プレートは空間光勾配アッセイに使用されますが、代替光と暗いセクションに分割されたチューブは、10、14も使用できます。
アッセイの古いバージョンでは、光の照明は一般的に幼虫の下から起因する。しかし、新しいバージョンのイルミネーションは、幼虫の目(例えば、低または中光強度16に敏感なボルウィッグの器官)が向かって開口部を持つ不透明なセファロファリンゲール骨格に含まれているので、主に上から起因する。上の前部。これにより、幼虫は後ろの方向7よりも上の正面方向からの光に敏感になります。時間的な光のグラデーションアッセイでは、光の強度はアリーナで空間的に均一ですが、強度は時間の経過とともに変化します。時間的な正方形波の光(すなわち、点滅するオン/オフまたは強い/弱い光3、7)に加えて、強度の線形ランプに適合する時間的に変化する光は、幼虫の感度を測定するために8も使用される一時的に変化する光刺激。
フォトタキシスアッセイの3番目のタイプは、45°7の角度で上から照明を伴う指向性光スケープナビゲーションです。Kane et al.7の研究の前に、明暗領域における幼虫の数、回転頻度、および軌跡の長さなどの粗いパラメータのみが幼虫フォトタキシスアッセイで計算された。この同じグループの仕事以来、幼虫フォトタキシスのための高時間分解能ビデオ記録の分析と、フォトタキシス中の幼虫運動の詳細なダイナミクス(すなわち、幼虫体の異なる部分のインスタント速度、方向方向、旋回角度)と対応する角速度)が7を分析されている。これにより、幼虫フォトタキス行動の詳細が発見された。これらのアッセイでは、幼虫はグループ効果が排除されないようにグループで試験されます。
このプロトコルは、個々の光刺激に対する幼虫行動応答の調査のための光スポットアッセイを導入する。主な実験セットアップは、視覚刺激システムと赤外線光ベースのイメージングシステムで構成されています。視覚刺激システムでは、LED光源は寒天プレート上に円形の2cm直径の光スポットを生成し、そこで幼虫をテストします。光の強度は、LEDドライバを使用して調整することができます。イメージングシステムには、カメラの照明を提供する3つの850 nm赤外線LEDに加えて、幼虫の挙動をキャプチャする赤外線カメラが含まれています。カメラのレンズは850nmのバンドパスフィルタで覆われ、視覚刺激システムからの光がカメラに入るのを防ぎ、赤外線がカメラに入ることを許可します。これにより、撮像に対する視覚刺激の干渉が防止される。このアッセイでは、光の前、中、および入った後を含む期間内の個々の幼虫の速い応答の行動の詳細が記録され、分析される。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>850 nm &#177; 3 nm infrared-light-generating LED</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>PM100A</td>
			<td>Compatible Sensors: Photodiode and Thermal 
			Optical Power Rangea: 100 pW to 200 W 
			Available Sensor Wavelength Rangea: 185 nm-25 &#956;m Display Refresh Rate: 20 Hz 
			Bandwidtha: DC-100 kHz 
			Photodiode Sensor Rangeb: 50 nA-5 mA 
			Thermopile Sensor Rangeb: 1 mV-1 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC to DC converter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S120VC</td>
			<td>Aperture Size: &#216;9.5 mm 
			Wavelength Range: 200-1100 nm 
			Power Range: 50 nW-50 mW 
			Detector Type: Si Photodiode (UV Extended) 
			Linearity: &#177;0.5% 
			Measurement Uncertaintyc: &#177;3% (440-980 nm), &#177;5% (280-439 nm), &#177;7% (200-279 nm, 981-1100 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>band-pass filter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>DC2100</td>
			<td>LED Current Range: 0-2 A 
			LED Current Resolution: 1 mA 
			LED Current Accuracy: &#177;20 mA 
			LED Forward Voltage: 24 V 
			Modulation Frequency Range: 0-100 kHz Sine Wave 
			Modulation: Arbitrary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimated LED blue light&#160;</td>
			<td>ELP, China</td>
			<td>USBFHD01M</td>
			<td>Max. Resolution: 1920X1080 
			F6.0 mm 
			Sensor: 1/2.7&#34; CMOS OV2710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact power meter console&#160;</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td>USB2000+(RAD)</td>
			<td>Dimensions: 89.1 mm x 63.3 mm x 34.4 mm 
			Weight: 190 g 
			Detector: Sony ILX511B (2048-element linear silicon CCD array) 
			Wavelength range: 200-850 nm 
			Integration time: 1 ms &#8211; 65 seconds (20 seconds typical) 
			Dynamic range: 8.5 x 10^7 (system); 1300:1 for a single acquisition 
			Signal-to-noise ratio: 250:1 (full signal) 
			Dark noise: 50 RMS counts 
			Grating: 2 (250 &#8211; 800 nm) 
			Slit: SLIT-50 
			Detector collection lens: L2 
			Order-sorting: OFLV-200-850 
			Optical resolution: ~2.0 nm FWHM 
			Stray light: &#60;0.05% at 600 nm; &#60;0.10% at 435 nm 
			Fiber optic connector: SMA 905 to 0.22 numerical aperture single-strand fiber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Power LED Driver</td>
			<td>Minhongshi, China</td>
			<td>MHS-48XY</td>
			<td>Working voltage: DC12V 
			Central wavelength: 850nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-resolution web camera</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>MWWHL4</td>
			<td>Color: Warm White 
			Correlated Color Temperature: 3000 K 
			Test Current for Typical LED Power: 1000 mA 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Bandwidth (FWHM): N/A 
			Electrical Power: 3000 mW 
			Viewing Angle (Full Angle): 120&#730; 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: &#62;50 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupa: RG1 &#8211; Low Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED Warm White</td>
			<td>Mega-9, China</td>
			<td>BP850/22K</td>
			<td>&#216;25.4(+0~-0.1) mm 
			Bandwidth: 22&#177;3nm 
			Peak transmittance:80% 
			Central wavelength: 850nm&#177;3nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer&#160;</td>
			<td>Noel Danjou</td>
			<td>Amcap9.22</td>
			<td>AMCap&#160;is a still and video capture application with advanced preview and recording features. It is a Desktop application designed for computers running Windows 7 SP1 or later. Most&#160;Video-for-Windowsand&#160;DirectShow-compatible devices are supported whether they are cheap webcams or advanced video capture cards.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard photodiode power sensor&#160;</td>
			<td>Super Dragon, China</td>
			<td>YGY-122000</td>
			<td>Input: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A 
			Output: DC 12V 2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>M470L3-C1</td>
			<td>Color: Blue 
			Nominal Wavelengtha: 470 nm 
			Bandwidth (FWHM): 25 nm 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Forward Voltage: 3.2 V 
			Electrical Power (Max): 3200 mW 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: 100 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupb: RG2 &#8211; Moderate Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S401C</td>
			<td>Wavelength range: 190 nm-20 &#956;m 
			Optical power range:10 &#956;W-1 W(3 Wb) 
			Input aperture size: &#216;10 mm 
			Active detector area: 10 mm x 10 mm 
			Max optical power density: 500 W/cm2 (Avg.) 
			Linearity: &#177;0.5%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis

ショウジョウバエメラノガスターの幼虫は、飼育段階で明らかな光回避行動を示す。ショウジョウバエ幼虫フォトタキシスは、動物の回避行動を研究するためのモデルとして使用することができる。このプロトコルは、幼虫の光戦術挙動を調査するための光スポットアッセイを導入する。実験のセットアップには、光スポットを生成する視覚刺激システムと、幼虫光回避のプロセスを記録する赤外線画像システムの2つの主要な部分が含まれています。このアッセイは、入る前、遭遇中、および光スポットを離れた後の幼虫の行動を追跡することを可能にする。減速、一時停止、ヘッドキャスティング、旋回などの幼虫の動きの詳細は、この方法を使用してキャプチャし、分析することができます。

プロトコルによると、光スポットアッセイは、12時間/12時間の光/暗いサイクルを持つ部屋の標準的な媒体上で25°Cで上昇した第3の星幼虫の光回避挙動を調査するために使用された。単一のw1118幼虫を25.5°Cの光点アッセイを用いて試験した。460 nm LEDによって生成された光スポットの平均光強度は0.59 μW/cm2であった。光スポットに出入りする幼虫の全体のプロセスは、SOS?...

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Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

このプロトコルは、ショウジョウバエ幼虫の光戦術挙動を調査するための光スポットアッセイを導入する。このアッセイでは、光刺激として光スポットが生成され、幼虫光回避のプロセスが赤外線光ベースのイメージングシステムによって記録される。

ショウジョウバエの幼虫フォトタキスの分析のための光スポットベースアッセイ

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

光スポットアッセイを使用して、幼虫の挙動を光領域に入る前、中、および後に追跡することができ、幼虫の動きの詳細を分析することができます。このアッセイは簡単で、実行しやすいです。光応答は1回だけテストされるため、光の適応の可能な効果を除外することができます。寒天プレートを準備するには、ゆっくりと均等に熱い1%寒天の約4ミリメートルの厚さの層で15センチメートルペトリ皿の底をカバー。寒天が固まるまでプレートを室温で冷却します。視覚刺激システムをセットアップするには、準備した LED 光源を鉄フレームにクリップし、ライトがデスクトップに向かって投影するように注意します。円柱平面と垂直面の間の角度が約 10 度になるまで、円柱を少し傾けます。470ナノメートルの青色LEDライトを、ハイパワーLEDドライバのLED 1プラグに接続し、ドライバの電源を入れます。ドライバーの右上隅にあるノブを回してチャンネル470ナノメートルを選択し、LEDをクリックします。画面にチェックが表示されると、デスクトップに青色のライトスポットが表示されます。[OK]をクリックし、ノブを回してライトの強度を調整します。光源の位置を上下に移動して、ライト スポットの直径を 2 センチに調整します。ノブを回転させて、実験要件に従って光強度を選択します。標準フォトダイオードパワーセンサー付きのコンパクトパワーメーターコンソールを使用して、その場で最大および最小限の光パワーを測定します。実際の実験では、光の電力を暗闇の中で測定する必要があります。次に、光の電力を記録し、それを3回測定し、平均値を使用します。イメージシステムを設定するには、高解像度のウェブカメラをデスクトップのライトスポットの上に約10センチメートル上の鉄クリップでクランプし、カメラレンズのデスクトップ方向を調整します。USB インターフェイスを介して Windows 7 を実行しているコンピューターにカメラを接続し、カメラのすぐ下のデスクトップに寒天プレートを配置します。AMCap 9.22 ソフトウェアを開くと、ライト スポットが AMCap ウィンドウに自動的に表示されます。カメラを少し左右に動かして、ライト スポットが窓の中心付近に位置するようにします。クリップを使用して、カメラのすぐ下5〜7ミリメートルの850プラスマイナス3ナノメートルのバンドパスフィルタを固定します。プレートの端から約5cm離れた寒天プレートの周りに、プレートに向かって70度の角度でLEDレンズを使用して、中心波長850ナノメートルの3つの赤外線光を生成するLEDを配置します。次に、ACとDCコンバータを介してLEDを電源に接続します。AMCap ソフトウェアのメニューで、オプション、ビデオ デバイス、キャプチャ形式を選択し、キャプチャしたビデオのピクセル サイズを 800 x 600、フレーム レートを毎秒 60 フレームに設定します。フィルタを外し、カメラの下にルーラーを配置します。スケールラインがビデオフィールドの幅に対して明確かつ平行になるまでカメラのフォーカスを調整し、[キャプチャ]、[設定]、[ビデオ キャプチャ]をクリックしてセーブ パスを選択します。次に、[記録開始]をクリックして600ピクセルに対応する実際の距離を記録し、各ピクセルと実際の距離の比率を計算します。幼虫をイメージング設定に導入する前に、光位置の短いビデオを取得し、フィルタリングされていないコントロール背景ビデオライト領域1に名前を付けます。カメラレンズにフィルターを戻し、実験装置から遠く離れた光をできるだけ低い設定で点灯し、幼虫をはっきりと観察できるようにします。スプーンを使って培養培地から幼虫を取り除き、3番目のインスター幼虫をそっと選びます。幼虫を蒸留水で洗い、幼虫を寒天プレートの中央に置きます。幼虫から余分な水をそっと取り除き、部屋の明かりを消します。幼虫が暗い環境で2分間順応してから、赤外線LEDライトを点灯させます。以下の光回避行動実験は、暗闇の中で行う必要があります。デモンストレーションの便宜のために、我々は明るい光の中で撮影しました。幼虫をプレートの中央にそっと磨きます。幼虫がまっすぐ這い始めると、プレートを回転させて幼虫の頭を光のスポットに向かわせてください。[キャプチャ]、[セットアップ]、および [ビデオ キャプチャ] をクリックして保存パスを選択し、[記録を開始] をクリックして録画します。幼虫が光の場所に向かってクロールできるようにし、光の場所を離れて、ほぼ視野に入るまで、[記録を停止]をクリックします。フィルターをカメラから離して移動し、ライト スポットの位置の短いビデオを取得します。次に、ポストアッセイのフィルタリングされていないビデオライトエリア2に名前を付け、このビデオをライトエリア1ビデオと比較して、ライトスポットの位置が変更されないようにします。ここで、尾速の時間曲線、代表的な幼虫の体の曲げ角度および角速度が観察できる。幼虫の頭部キャストの大きさは、したがって、Tdc2-Gal4ニューロンが正常な幼虫光応答に必要であることを示すペアレンタルコントロールと比較して、破傷風毒性発現によって阻害されるタコミン作動性ニューロンを有する第3のインスター幼虫において最大体曲げ角度が有意に減少する。画像処理を成功させるには、カメラがライトをブロックせず、ライト スポットが丸く、ウィンドウの中心付近に位置していることを確認します。この手順に従って、光遺伝学は、特定のニューロンが活性化されたときに幼虫がどのように反応するかを観察するために行うことができる。このアッセイを用いて、幼虫運動の詳細を分析し、環境および内部要因が幼虫光回避行動に及ぼす影響を研究することができます。

Research

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Biology

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