Name: light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis
Uploaded: 2019-09-27T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

이 작품은 중국의 자연 과학 재단 (31671074)과 절강 성 대학에 대한 기본 연구 기금 (2019XZZX003-12)에 의해 지원됩니다.

1. 초파리 유충의 준비
<ol><li>삶은 옥수수 식사 (73g), 한천 (5.6 g), 콩 식사 (10g), 효모 (17.3 g), 시럽 (76 mL) 및 물 (1000 mL)으로 구성된 표준 매체를 준비하십시오.</li>
	<li>12 시간 / 12 h의 빛 / 어두운 주기로 방에서 표준 매체에서 25 °C에서 모든 파리를 올립니다.</li>
</ol>2. 한천 접시 준비
<ol><li>1.0% 한천 용액을 준비하십시오. 500 mL 비커에 한천 3g의 무게를 두고 저울을 가지고 ?...

<ol>
	<li>Grossfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geographic+distribution+and+light-dependent+behavior+in+Drosophila.">Geographic distribution and light-dependent behavior in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68, 2669 (1971).</li><li>Godoy-Herrera, R. C. L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+of+Drosophila+melanogaster+larvae+during+pupation.">The behaviour of Drosophila melanogaster larvae during pupation.</a> Animal Behaviour. 37, (1989).</li><li>Busto, M., Iyengar, B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+behavior:+modulation+of+locomotion+by+light+in+the+Drosophila+melanogaster+larva+requires+genetically+distinct+visual+system+functions.">Genetic dissection of behavior: modulation of locomotion by light in the Drosophila melanogaster larva requires genetically distinct visual system functions.</a> Journal of Neuroscience. 19, 3337 (1999).</li><li>Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+pacemaker+neurons+transmit+and+modulate+visual+information+to+control+a+rapid+behavioral+response.">Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response.</a> Neuron. 45, 293 (2005).</li><li>Keene, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+visual+pathways+mediate+Drosophila+larval+light+avoidance+and+circadian+clock+entrainment.">Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment.</a> Journal of Neuroscience. 31, 6527 (2011).</li><li>Keene, A. C., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+the+light:+photobehavior+in+fruit+fly+larvae.">Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae.</a> Trends in Neurosciences. 35, (2012).</li><li>Kane, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+structure+of+Drosophila+larva+phototaxis.">Sensorimotor structure of Drosophila larva phototaxis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, E3868 (2013).</li><li>Humberg, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dedicated+photoreceptor+pathways+in+Drosophila+larvae+mediate+navigation+by+processing+either+spatial+or+temporal+cues.">Dedicated photoreceptor pathways in Drosophila larvae mediate navigation by processing either spatial or temporal cues.</a> Nature Communications. 9. 1260, (2018).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+pairs+of+neurons+in+the+central+brain+control+Drosophila+innate+light+preference.">Two pairs of neurons in the central brain control Drosophila innate light preference.</a> Science. 330, (2010).</li><li>Yamanaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+Control+of+Drosophila+Larval+Light+Preference.">Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference.</a> Science. 341, 1113 (2013).</li><li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disinhibitory+mechanism+biases+Drosophila+innate+light+preference.">A disinhibitory mechanism biases Drosophila innate light preference.</a> Nature Communications. 10, (2019).</li><li>Gong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neuronal+Pathway+that+Commands+Deceleration+in+Drosophila+Larval+Light-Avoidance.">A Neuronal Pathway that Commands Deceleration in Drosophila Larval Light-Avoidance.</a> Neuroscience Bulletin. Feb. 27, (2019).</li><li>Larderet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+larval+visual+circuit.">Organization of the Drosophila larval visual circuit.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+genetic+analysis+of+Drosophila+melanogaster+photobehavior+during+larval+development.">Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development.</a> Journal of Neurogenetics. 10, (1995).</li><li>Farca, L. A., von Essen, A. M., Widmer, Y. F., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+preference+assay+to+study+innate+and+circadian+regulated+photobehavior+in+Drosophila+larvae.">Light preference assay to study innate and circadian regulated photobehavior in Drosophila larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. 74 (74), e50237 (2013).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921 (2010).</li><li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors.">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, e41642 (2012).</li></ol>

이 프로토콜은 빛에서 탈출하는 Drosophila 애벌레의 능력을 테스트하는 빛 반점 분석실험을 제시한다. 이 분석법은 진입 전, 발생 중, 그리고 가벼운 지점을 떠난 후 유충의 행동을 추적 할 수 있습니다. 애벌레 운동의 세부 사항을 캡처하고 분석 할 수 있습니다. 가벼운 점 분석법은 매우 간단하고 강한 실용성을 가지고 있습니다. 전체 장치의 비용이 높지 않습니다. 실험에서 LED 광은 광원으?...

Drosophila melanogaster의 애벌레는 포식 단계 도중 명백한 빛 회피 행동을 보여줍니다. Drosophila 애벌레 광택시는 특히 지난 50 년 동안 조사를 받고있다1,2,3,4,5,6,7 ,8. 최근 몇 년 동안, 사실에도 불구하고 1) 애벌레 빛 회피를 중재하는 많은 뉴런이4,5,9,10,11,12로 확인되었다. 및 2) 시냅스의 해상도에서 애벌레 시각 시스템의 완전한 커넥톰이13개확립되었으며, 애벌레 광택시의 근본적인 신경 메커니즘은 크게 불분명합니다.
행동 애벌레 포토택시를 공부에 행동 애시스의 숫자가 사용되었습니다. 공간 광 그라데이션과 시간적 광 그라데이션을 포함하는 다른 클래스의 두 클래스로 크게 나눌 수 있습니다. 공간 광 그라데이션 검정의 경우, 경기장은 빛과 어둠의 동일한 수의 섹션으로 나뉩니다. 경기장은 빛과 어두운 반으로 나눌 수 있습니다2,4 또는 빛과 어두운 사분면14,15,또는 심지어 바둑판7에같은 대체 빛과 어두운 사각형으로 분리 될 수있다. 일반적으로, 한천 플레이트는 공간 광 그라데이션 분석에 사용되지만, 대체 빛과 어두운 섹션으로 분할튜브도10,14를사용할 수 있습니다.
이전 버전의 어설션에서는, 빛 조명은 일반적으로 애벌레 의 밑에 에서 유래합니다. 그러나, 최신 버전의 조명은 주로 위에서 유래, 애벌레 눈 때문에 (예를 들어, 낮은 또는 중간 빛 강도에 민감한 볼비그의 기관16)불투명 한 세팔로 파 하 인 인 균 골격을 향해 구멍 앞위쪽에 있습니다. 이것은 애벌레가 방향7뒤에서 보다 위 정면 방향에서 빛에 더 민감하게 만듭니다. 시간적 광 그라데이션 어시스의 경우 광강도는 경기장에서 공간적으로 균일하지만 시간이 지남에 따라 강도가 변경됩니다. 시간제 사각 파광(즉, 켜기/끄기 또는 강/약한 빛3,7)외에, 강도의 선형 램프에 부합하는 시간적으로 다양한 빛은8을 사용하여 애벌레의 감도를 측정하는 데 사용됩니다. 일시적으로 변화하는 빛 자극.
포토택시 분석의 세 번째 유형은 45 °7의각도로 위에서 조명을 포함하는 방향 광 스케이프 탐색입니다. Kane et al.7의작업 전에는 밝고 어두운 지역에서 유충의 수, 선회 빈도 및 트레일 길이와 같은 거친 매개 변수만 애벌레 광과대 검정법으로 계산되었습니다. 이 같은 그룹의 작업 이후, 애벌레 광택시에 대한 높은 시간 해상도 비디오 기록의 분석, 광택시 동안 애벌레 운동의 상세한 역학 (즉, 애벌레 몸의 다른 부분의 즉각적인 속도, 방향 방향, 선회 각도 및 해당 각도 속도)는7. 따라서, 애벌레 광택시 행동의 자세한 내용은 발견 될 수있다. 이 실험에서, 애벌레는 그룹 효력이 제외되지 않도록 단에서 시험됩니다.
이 프로토콜은 개별 적인 빛 자극에 애벌레 행동 반응의 조사를 위한 가벼운 반점 분석기를 소개합니다. 주요 실험 설정은 시각 자극 시스템과 적외선 기반 이미징 시스템으로 구성됩니다. 시각 자극 시스템에서 LED 광원은 한천 판에 둥근 2cm 직경의 광점을 생성하여 유충을 테스트합니다. LED 드라이버를 사용하여 조명 강도를 조정할 수 있습니다. 이미징 시스템에는 카메라에 조명을 제공하는 3개의 850nm 적외선 LED 외에 유충의 거동을 포착하는 적외선 카메라가 포함되어 있습니다. 카메라의 렌즈는 850 nm 밴드 패스 필터로 덮여 있어 시각 자극 시스템의 빛이 카메라에 들어오는 것을 차단하고 적외선은 카메라에 들어갈 수 있습니다. 따라서 이미징에 대한 시각적 자극의 간섭을 방지합니다. 이 분석에서는 빛을 입력하기 전, 도중 및 입력 한 후를 포함하여 기간 내에 개별 애벌레의 빠른 반응의 행동 세부 사항이 기록되고 분석됩니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>850 nm &#177; 3 nm infrared-light-generating LED</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>PM100A</td>
			<td>Compatible Sensors: Photodiode and Thermal 
			Optical Power Rangea: 100 pW to 200 W 
			Available Sensor Wavelength Rangea: 185 nm-25 &#956;m Display Refresh Rate: 20 Hz 
			Bandwidtha: DC-100 kHz 
			Photodiode Sensor Rangeb: 50 nA-5 mA 
			Thermopile Sensor Rangeb: 1 mV-1 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC to DC converter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S120VC</td>
			<td>Aperture Size: &#216;9.5 mm 
			Wavelength Range: 200-1100 nm 
			Power Range: 50 nW-50 mW 
			Detector Type: Si Photodiode (UV Extended) 
			Linearity: &#177;0.5% 
			Measurement Uncertaintyc: &#177;3% (440-980 nm), &#177;5% (280-439 nm), &#177;7% (200-279 nm, 981-1100 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>band-pass filter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>DC2100</td>
			<td>LED Current Range: 0-2 A 
			LED Current Resolution: 1 mA 
			LED Current Accuracy: &#177;20 mA 
			LED Forward Voltage: 24 V 
			Modulation Frequency Range: 0-100 kHz Sine Wave 
			Modulation: Arbitrary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimated LED blue light&#160;</td>
			<td>ELP, China</td>
			<td>USBFHD01M</td>
			<td>Max. Resolution: 1920X1080 
			F6.0 mm 
			Sensor: 1/2.7&#34; CMOS OV2710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact power meter console&#160;</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td>USB2000+(RAD)</td>
			<td>Dimensions: 89.1 mm x 63.3 mm x 34.4 mm 
			Weight: 190 g 
			Detector: Sony ILX511B (2048-element linear silicon CCD array) 
			Wavelength range: 200-850 nm 
			Integration time: 1 ms &#8211; 65 seconds (20 seconds typical) 
			Dynamic range: 8.5 x 10^7 (system); 1300:1 for a single acquisition 
			Signal-to-noise ratio: 250:1 (full signal) 
			Dark noise: 50 RMS counts 
			Grating: 2 (250 &#8211; 800 nm) 
			Slit: SLIT-50 
			Detector collection lens: L2 
			Order-sorting: OFLV-200-850 
			Optical resolution: ~2.0 nm FWHM 
			Stray light: &#60;0.05% at 600 nm; &#60;0.10% at 435 nm 
			Fiber optic connector: SMA 905 to 0.22 numerical aperture single-strand fiber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Power LED Driver</td>
			<td>Minhongshi, China</td>
			<td>MHS-48XY</td>
			<td>Working voltage: DC12V 
			Central wavelength: 850nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-resolution web camera</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>MWWHL4</td>
			<td>Color: Warm White 
			Correlated Color Temperature: 3000 K 
			Test Current for Typical LED Power: 1000 mA 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Bandwidth (FWHM): N/A 
			Electrical Power: 3000 mW 
			Viewing Angle (Full Angle): 120&#730; 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: &#62;50 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupa: RG1 &#8211; Low Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED Warm White</td>
			<td>Mega-9, China</td>
			<td>BP850/22K</td>
			<td>&#216;25.4(+0~-0.1) mm 
			Bandwidth: 22&#177;3nm 
			Peak transmittance:80% 
			Central wavelength: 850nm&#177;3nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer&#160;</td>
			<td>Noel Danjou</td>
			<td>Amcap9.22</td>
			<td>AMCap&#160;is a still and video capture application with advanced preview and recording features. It is a Desktop application designed for computers running Windows 7 SP1 or later. Most&#160;Video-for-Windowsand&#160;DirectShow-compatible devices are supported whether they are cheap webcams or advanced video capture cards.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard photodiode power sensor&#160;</td>
			<td>Super Dragon, China</td>
			<td>YGY-122000</td>
			<td>Input: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A 
			Output: DC 12V 2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>M470L3-C1</td>
			<td>Color: Blue 
			Nominal Wavelengtha: 470 nm 
			Bandwidth (FWHM): 25 nm 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Forward Voltage: 3.2 V 
			Electrical Power (Max): 3200 mW 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: 100 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupb: RG2 &#8211; Moderate Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S401C</td>
			<td>Wavelength range: 190 nm-20 &#956;m 
			Optical power range:10 &#956;W-1 W(3 Wb) 
			Input aperture size: &#216;10 mm 
			Active detector area: 10 mm x 10 mm 
			Max optical power density: 500 W/cm2 (Avg.) 
			Linearity: &#177;0.5%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis

Drosophila melanogaster의 애벌레는 포식 단계 도중 명백한 빛 회피 행동을 보여줍니다. Drosophila 애벌레 광택시는 동물 회피 행동을 연구하는 모형으로 이용될 수 있습니다. 이 프로토콜은 애벌레 광전술 행동을 조사하기 위해 빛 점 분석기를 소개합니다. 실험 설정에는 광 점을 생성하는 시각적 자극 시스템과 애벌레 광 회피 과정을 기록하는 적외선 기반 이미징 시스템의 두 가지 주요 부분이 포함됩니다. 이 분석법은 진입 전, 발생 중, 광등 지점을 떠난 후 유충의 행동을 추적 할 수 있습니다. 감속, 일시 정지, 헤드 캐스팅 및 선삭을 포함한 애벌레 운동의 세부 사항을 캡처하고 이 방법을 사용하여 분석할 수 있습니다.

프로토콜에 따르면, 광 점 분석기는 12 시간/12 시간 빛/어두운 주기를 가진 방에서 표준 배지에서 25°C에서 제기된 제 3 의 instar 유충의 광 회피 거동을 조사하기 위해 사용되었다. 단일 w1118 유충은 25.5°C에서 광점 분석실험을 사용하여 시험하였다. 460 nm LED에 의해 생성된 광점의 평균 광도는 0.59 μW/cm2였습니다. 애벌레의 전체 과정은 SOS 소프트웨어 및 사용자 정의 서면 스크...

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Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

이 프로토콜은 초파리 애벌레 광전술 행동을 조사하기 위해 빛 점 분석기를 소개합니다. 이 분석에서, 광 반점은 빛 자극으로 생성되고, 애벌레 광 회피의 과정은 적외선 광 기지를 둔 화상 진찰 시스템에 의해 기록됩니다.

초파리 애벌레 광택시 분석을 위한 빛 스팟 기반 분석

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

광반점 분석기를 이용하여, 유충의 동작은 유충 운동의 세부사항을 분석할 수 있도록 광영역에 들어가기 전, 도중 및 진입 한 후에 추적될 수 있다. 이 분석은 간단하고 수행하기 쉽습니다. 라이트 응답은 한 번만 테스트되므로 광 적응의 가능한 효과를 제외할 수 있습니다.한천 판을 준비하려면 15센티미터 페트리 접시의 바닥을 약 4mm 두께의 뜨거운 1% 한고로 천천히 균일하게 덮습니다. 한천이 고화될 때까지 접시를 실온에서 식힙니다. 시각적 자극 시스템을 설정하려면 준비된 LED 광원을 철프레임에 잘라 바탕 화면쪽으로 빛이 투사하는 것을 주의하십시오.실린더 평면과 수직 평면 사이의 각도가 약 10도 될 때까지 실린더를 약간 기울이게합니다. 470나노미터 블루 LED 라이트를 고출력 LED 드라이버의 LED 1플러그에 연결하고 드라이버를 켭니다. 드라이버의 오른쪽 상단 모서리에 있는 노브를 돌려 채널 470 나노미터를 선택하고 LED를 클릭합니다.화면에 검사가 표시되면 바탕 화면에 파란색 표시등이 나타납니다. 확인을 클릭하고 노브를 돌려 빛의 강도를 조정합니다. 광원의 위치를 위아래로 이동하여 광점의 직경을 2cm로 조정합니다.노브를 회전하여 실험 요구 사항에 따라 광 강도를 선택합니다. 표준 사진 다이오드 전원 센서가 있는 컴팩트한 파워 미터 콘솔을 사용하여 그 자리에서 최대출력과 최소한의 광출력을 측정할 수 있습니다. 빛 힘은 실제 실험에서 어둠 속에서 측정해야합니다.그런 다음 광전력을 기록하고 세 번 측정하고 평균 값을 사용합니다. 상상 시스템을 설정하려면 데스크탑의 라이트 스팟에서 약 10센티미터 높이의 아이언 클립으로 고해상도 웹 카메라를 고정하고 카메라 렌즈의 방향을 바탕 화면쪽으로 조정합니다. USB 인터페이스를 통해 Windows 7을 실행하는 컴퓨터에 카메라를 연결하고 카메라 바로 아래 바탕 화면에 한천 판을 놓습니다.AMCap 9.22 소프트웨어를 열면 라이트 스팟이 AMCap 창에 자동으로 표시됩니다. 카메라를 왼쪽 또는 오른쪽으로 약간 이동하여 라이트 스팟이 창 중앙 근처에 있는지 확인합니다. 클립을 사용하여 카메라 바로 아래 5~7mm에서 850 플러스 또는 마이너스 3나노미터 밴드패스 필터를 수정합니다.접시 가장자리에서 약 5센티미터 떨어진 천판 주변에 중앙 파장이 850나노미터의 중앙 파장을 가진 3개의 적외선 광 생성 LED를 놓고, LED 렌즈는 플레이트를 향하여 70도 각도로 배치합니다. 그런 다음 AC를 통해 전원에 LED를 DC 컨버터에 연결합니다. AMCap 소프트웨어 의 메뉴에서 옵션, 비디오 장치 및 캡처 형식을 선택하고 캡처된 비디오의 픽셀 크기를 800x 600으로 설정하고 프레임 속도를 초당 60프레임으로 설정합니다.필터를 제거하고 눈금자를 카메라 아래에 배치합니다. 스케일 라인이 비디오 시야의 너비와 명확하고 평행해질 때까지 카메라 포커스를 조정하고 캡처, 설정 및 비디오 캡처를 클릭하여 저장 경로를 선택합니다. 그런 다음 레코딩을 클릭하여 600픽셀에 해당하는 실제 거리를 기록하고 각 픽셀의 비율을 실제 거리와 계산합니다.이미징 설정에 애벌레를 도입하기 전에, 빛의 위치의 짧은 비디오를 획득하고 필터링되지 않은 제어 배경 비디오 광 영역의 이름을 지정합니다. 필터를 카메라 렌즈에 다시 놓고 애벌레를 명확하게 관찰할 수 있도록 가능한 한 낮은 설정으로 실험 장치에서 멀리 떨어진 빛을 켭니다. 숟가락을 사용하여 배양 배지에서 유충을 제거하고 세 번째 인스타 애벌레를 부드럽게 선택하십시오.증류수에 애벌레를 씻고 애벌레를 한천 접시 중앙에 놓습니다. 애벌레에서 여분의 물을 부드럽게 제거하고 방 빛을 끕니다. 적외선 LED 조명을 켜기 전에 어두운 환경에서 2 분 동안 애벌레가 적응하도록 허용하십시오.다음 광 회피 동작 실험은 어둠 속에서 수행되어야 합니다. 데모의 편의를 위해 우리는 밝은 빛으로 촬영했습니다. 애벌레를 접시 중앙으로 부드럽게 브러시합니다.애벌레가 똑바로 기어 다니기 시작하면 접시를 회전하여 유충이 광반쪽으로 향하게 합니다. 캡처, 설정 및 비디오 캡처를 클릭하여 저장 경로를 선택하고 녹화를 클릭하여 녹화를 시작합니다. 애벌레가 시야에서 거의 벗어날 때까지 라이트 스팟을 향해 크롤링하고 입력하고 방치하고 녹화 중지를 클릭합니다.필터를 카메라에서 멀리 이동하고 라이트 스팟의 위치의 짧은 비디오를 가져옵니다. 그런 다음 게시물 분석법 필터링되지 않은 비디오 라이트 영역 2의 이름을 지정하고 이 비디오를 라이트 영역 1비디오와 비교하여 라이트 스팟 위치가 변경되지 않도록 합니다. 여기서, 꼬리 속도, 바디 굽힘 각도 및 대표적인 애벌레의 신체 굽힘의 각도 속도를 관찰할 수 있다.애벌레 헤드 캐스트의 크기는, 따라서, 최대 체 굽힘 각도크게 Tdc2-Gal4 뉴런이 정상적인 애벌레 빛 반응에 필요하다는 것을 나타내는 부모 통제에 비해 파상풍 독성 발현에 의해 억제 옥토 파민성 뉴런제3인스타 애벌레에서 감소된다. 성공적인 이미지 처리를 위해 카메라가 빛을 차단하지 않고 라이트 스팟이 둥글고 창 중앙 근처에 있는지 확인합니다. 이 절차에 따라, 광유전학은 특정 뉴런이 활성화될 때 애벌레가 어떻게 반응하는지 관찰하기 위하여 수행될 수 있습니다.이 분석기를 사용하여, 애벌레 운동의 세부 사항은 환경과 애벌레 빛 회피 행동에 대한 내부 요인의 먼 영향을 연구 할 수 있도록 분석 할 수 있습니다.

Research

JoVE Journal

Biology

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Drosophila Melanogaster에서 애벌레 CNS의 해부

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

연구

생물학

Drosophila Larval NMJ Dissection

Drosophila 애벌레 NMJ의 해부

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Drosophila 애벌레 NMJ Immunohistochemistry

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Neurotoxicity 높은 컨텐츠 분석의 연결 및 Astrocyte 공동 문화 분석

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

애벌레의 모니터링 심장​​ 기능 Drosophila melanogaster 생리 연구

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

의 준비 Drosophila</em라이트 현미경을 위해> S2 세포

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

해부 그리고 스테 이닝 Drosophila 애벌레 난소

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

해리 된 준비에서 배아와 애벌레 Zebrafish의 골격 근섬유의 분석

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

의 검사<em&gt; 초파리</em가벼운 현미경으로&gt; 애벌레 기관 내 터미널 셀

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...