Name: light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis
Uploaded: 2019-09-27T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

Эта работа поддерживается фондом естественных наук Китая (31671074) и фондами фундаментальных исследований для провинциальных университетов Чжэцзяна (2019X-X003-12).

1. Подготовка личинок дрозофилы
<ol><li>Приготовить стандартную среду, состоящую из вареной кукурузной муки (73 г), агара (5,6 г), соевой муки (10 г), дрожжей (17,3 г), сиропа (76 мл) и воды (1000 мл).</li>
	<li>Поднимите все мухи при 25 градусах По Цельсию на стандартной среде в комнате с 12 ч/12 ч свет/темный ?...

<ol>
	<li>Grossfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geographic+distribution+and+light-dependent+behavior+in+Drosophila.">Geographic distribution and light-dependent behavior in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68, 2669 (1971).</li><li>Godoy-Herrera, R. C. L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+of+Drosophila+melanogaster+larvae+during+pupation.">The behaviour of Drosophila melanogaster larvae during pupation.</a> Animal Behaviour. 37, (1989).</li><li>Busto, M., Iyengar, B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+behavior:+modulation+of+locomotion+by+light+in+the+Drosophila+melanogaster+larva+requires+genetically+distinct+visual+system+functions.">Genetic dissection of behavior: modulation of locomotion by light in the Drosophila melanogaster larva requires genetically distinct visual system functions.</a> Journal of Neuroscience. 19, 3337 (1999).</li><li>Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+pacemaker+neurons+transmit+and+modulate+visual+information+to+control+a+rapid+behavioral+response.">Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response.</a> Neuron. 45, 293 (2005).</li><li>Keene, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+visual+pathways+mediate+Drosophila+larval+light+avoidance+and+circadian+clock+entrainment.">Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment.</a> Journal of Neuroscience. 31, 6527 (2011).</li><li>Keene, A. C., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+the+light:+photobehavior+in+fruit+fly+larvae.">Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae.</a> Trends in Neurosciences. 35, (2012).</li><li>Kane, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+structure+of+Drosophila+larva+phototaxis.">Sensorimotor structure of Drosophila larva phototaxis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, E3868 (2013).</li><li>Humberg, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dedicated+photoreceptor+pathways+in+Drosophila+larvae+mediate+navigation+by+processing+either+spatial+or+temporal+cues.">Dedicated photoreceptor pathways in Drosophila larvae mediate navigation by processing either spatial or temporal cues.</a> Nature Communications. 9. 1260, (2018).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+pairs+of+neurons+in+the+central+brain+control+Drosophila+innate+light+preference.">Two pairs of neurons in the central brain control Drosophila innate light preference.</a> Science. 330, (2010).</li><li>Yamanaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+Control+of+Drosophila+Larval+Light+Preference.">Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference.</a> Science. 341, 1113 (2013).</li><li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disinhibitory+mechanism+biases+Drosophila+innate+light+preference.">A disinhibitory mechanism biases Drosophila innate light preference.</a> Nature Communications. 10, (2019).</li><li>Gong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neuronal+Pathway+that+Commands+Deceleration+in+Drosophila+Larval+Light-Avoidance.">A Neuronal Pathway that Commands Deceleration in Drosophila Larval Light-Avoidance.</a> Neuroscience Bulletin. Feb. 27, (2019).</li><li>Larderet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+larval+visual+circuit.">Organization of the Drosophila larval visual circuit.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+genetic+analysis+of+Drosophila+melanogaster+photobehavior+during+larval+development.">Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development.</a> Journal of Neurogenetics. 10, (1995).</li><li>Farca, L. A., von Essen, A. M., Widmer, Y. F., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+preference+assay+to+study+innate+and+circadian+regulated+photobehavior+in+Drosophila+larvae.">Light preference assay to study innate and circadian regulated photobehavior in Drosophila larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. 74 (74), e50237 (2013).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921 (2010).</li><li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors.">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, e41642 (2012).</li></ol>

Этот протокол представляет световое пятно анализа, чтобы проверить способность личинок Дрозофилы, чтобы вырваться из света. Этот асссепозволяет отслеживать поведение личинок перед входом, во время встречи и после выхода из светлого пятна. Детали движения личинок могут быть захва...

Личинки Drosophila melanogaster показывают очевидное светоизбегающее поведение во время стадии кормления. Drosophila личинки фототаксис был под следствием, особенно в последние 50 лет1,2,3,4,5,6,7 ,8. В последние годы, несмотря на то, что 1) многие нейроны посредничества личинок света избегания были определены4,5,9,10,11,12 и 2) полный коннектом личиночной зрительной системы в разрешении синапсов был установлен13, нейронные механизмы, лежащие в основе личиночной фототаксиса остаются в значительной степени неясными.
Ряд поведенческих анализов были использованы в изучении личиночной фототаксиса. Они могут быть в значительной степени разделены на два класса: один с участием градиентов пространственного света, а другой с участием временных градиентов света. Для пространственных анализов градиента света арена делится на равное количество секций в светлом и темном. Арена может быть разделена на светлые и темные половинки2,4 или светлые и темные квадранты14,15,или даже могут быть разделены на альтернативные светлые и темные квадраты, как на шашной доске7. Как правило, агар пластины используются для пространственного света градиента асссеев, но трубки, которые делятся на альтернативные светлые и темные разделы также могут быть использованы10,14.
В более старой версии анализов, световое освещение обычно происходит из-под личинок. Однако, освещение в более новых версиях больш возникает от выше, в виду того что larval глаза (например, органы Bolwig которые чувствительны к низкой или средней интенсивности света16)содержатся в непрозрачном цефалофоренгеальном скелете с отверстиями к верхний фронт. Это делает личинки более чувствительными к свету с верхних передних направлений, чем снизу позади направлений7. Для анализов временного градиента света интенсивность света на арене пространственно однородна, но интенсивность меняется с течением времени. В дополнение к височной квадратной волны света (т.е., мигает/выключается или сильный / слабый свет3,7),временно меняющийся свет, который соответствует линейной рампы по интенсивности также используетсядля измерения чувствительности личинок к временно едкая световая стимул.
Третий тип фототаксис асссы является направленный свет пейзаж навигации, которая включает в себя освещение сверху под углом 45"7. До работы Kane et al.7, только грубые параметры, такие как количество личинок в светлых и темных областях, частота поворота, и длина тропы были рассчитаны в личинок фототакси анализов. Так как работа этой же группы, с анализом высокого временного разрешения видеозаписи для личиночных фототаксисов, детальной динамики движения личинок во время фототаксиса (т.е. мгновенные скорости различных частей личиночного тела, направление движения, угол поворота и соответствующая угловая скорость) были проанализированы7. Таким образом, более подробную информацию о поведении личинки фототаксиса удалось обнаружить. В этих анализах личинки тестируются в группах, так что групповые эффекты не исключаются.
Этот протокол вводит световое пятно анализа для исследования личинок поведенческих реакций на индивидуальную стимуляцию света. Основная экспериментальная установка состоит из системы визуальной стимуляции и инфракрасной световой системы визуализации. В системе визуальной стимуляции светодиодный источник света генерирует круглое световое пятно диаметром 2 см на агаровой пластине, где проверяется личинка. Интенсивность света может быть скорректирована с помощью светодиодного драйвера. Система визуализации включает в себя инфракрасную камеру, которая фиксирует поведение личинки в дополнение к трем 850 нм инфракрасные светодиоды, которые обеспечивают освещение для камеры. Объектив камеры покрыт фильтром диапазона 850 нм, чтобы блокировать свет от системы визуальной стимуляции от входа в камеру, в то время как инфракрасный свет может войти в камеру. Таким образом, предотвращается вмешательство зрительной стимуляции на визуализацию. В этом анализе, поведенческие детали быстрых реакций отдельных личинок в течение периода, включая до, во время и после входа света регистрируются и анализируются.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>850 nm &#177; 3 nm infrared-light-generating LED</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>PM100A</td>
			<td>Compatible Sensors: Photodiode and Thermal 
			Optical Power Rangea: 100 pW to 200 W 
			Available Sensor Wavelength Rangea: 185 nm-25 &#956;m Display Refresh Rate: 20 Hz 
			Bandwidtha: DC-100 kHz 
			Photodiode Sensor Rangeb: 50 nA-5 mA 
			Thermopile Sensor Rangeb: 1 mV-1 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC to DC converter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S120VC</td>
			<td>Aperture Size: &#216;9.5 mm 
			Wavelength Range: 200-1100 nm 
			Power Range: 50 nW-50 mW 
			Detector Type: Si Photodiode (UV Extended) 
			Linearity: &#177;0.5% 
			Measurement Uncertaintyc: &#177;3% (440-980 nm), &#177;5% (280-439 nm), &#177;7% (200-279 nm, 981-1100 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>band-pass filter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>DC2100</td>
			<td>LED Current Range: 0-2 A 
			LED Current Resolution: 1 mA 
			LED Current Accuracy: &#177;20 mA 
			LED Forward Voltage: 24 V 
			Modulation Frequency Range: 0-100 kHz Sine Wave 
			Modulation: Arbitrary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimated LED blue light&#160;</td>
			<td>ELP, China</td>
			<td>USBFHD01M</td>
			<td>Max. Resolution: 1920X1080 
			F6.0 mm 
			Sensor: 1/2.7&#34; CMOS OV2710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact power meter console&#160;</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td>USB2000+(RAD)</td>
			<td>Dimensions: 89.1 mm x 63.3 mm x 34.4 mm 
			Weight: 190 g 
			Detector: Sony ILX511B (2048-element linear silicon CCD array) 
			Wavelength range: 200-850 nm 
			Integration time: 1 ms &#8211; 65 seconds (20 seconds typical) 
			Dynamic range: 8.5 x 10^7 (system); 1300:1 for a single acquisition 
			Signal-to-noise ratio: 250:1 (full signal) 
			Dark noise: 50 RMS counts 
			Grating: 2 (250 &#8211; 800 nm) 
			Slit: SLIT-50 
			Detector collection lens: L2 
			Order-sorting: OFLV-200-850 
			Optical resolution: ~2.0 nm FWHM 
			Stray light: &#60;0.05% at 600 nm; &#60;0.10% at 435 nm 
			Fiber optic connector: SMA 905 to 0.22 numerical aperture single-strand fiber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Power LED Driver</td>
			<td>Minhongshi, China</td>
			<td>MHS-48XY</td>
			<td>Working voltage: DC12V 
			Central wavelength: 850nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-resolution web camera</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>MWWHL4</td>
			<td>Color: Warm White 
			Correlated Color Temperature: 3000 K 
			Test Current for Typical LED Power: 1000 mA 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Bandwidth (FWHM): N/A 
			Electrical Power: 3000 mW 
			Viewing Angle (Full Angle): 120&#730; 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: &#62;50 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupa: RG1 &#8211; Low Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED Warm White</td>
			<td>Mega-9, China</td>
			<td>BP850/22K</td>
			<td>&#216;25.4(+0~-0.1) mm 
			Bandwidth: 22&#177;3nm 
			Peak transmittance:80% 
			Central wavelength: 850nm&#177;3nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer&#160;</td>
			<td>Noel Danjou</td>
			<td>Amcap9.22</td>
			<td>AMCap&#160;is a still and video capture application with advanced preview and recording features. It is a Desktop application designed for computers running Windows 7 SP1 or later. Most&#160;Video-for-Windowsand&#160;DirectShow-compatible devices are supported whether they are cheap webcams or advanced video capture cards.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard photodiode power sensor&#160;</td>
			<td>Super Dragon, China</td>
			<td>YGY-122000</td>
			<td>Input: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A 
			Output: DC 12V 2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>M470L3-C1</td>
			<td>Color: Blue 
			Nominal Wavelengtha: 470 nm 
			Bandwidth (FWHM): 25 nm 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Forward Voltage: 3.2 V 
			Electrical Power (Max): 3200 mW 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: 100 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupb: RG2 &#8211; Moderate Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S401C</td>
			<td>Wavelength range: 190 nm-20 &#956;m 
			Optical power range:10 &#956;W-1 W(3 Wb) 
			Input aperture size: &#216;10 mm 
			Active detector area: 10 mm x 10 mm 
			Max optical power density: 500 W/cm2 (Avg.) 
			Linearity: &#177;0.5%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis

Личинки Drosophila melanogaster показывают очевидное светоизбегающее поведение во время стадии кормления. Дрозофилы личинки фототаксис может быть использован в качестве модели для изучения поведения животных избегания. Этот протокол вводит свет-пятно анализа для расследования личинки фототаксиповедения. Экспериментальная настройка включает в себя две основные части: систему визуальной стимуляции, которая генерирует световое пятно, и инфракрасную световую систему визуализации, которая фиксирует процесс избегания личинок света. Этот асссепозволяет отслеживать поведение личинок перед входом, во время встречи и после выхода из светлого пятна. Детали движения личинок, включая замедление, паузу, отливку головы и поворот, можно уфиксировать и проанализировать с помощью этого метода.

Согласно протоколу, исследование светового пятна было использовано для исследования поведения избегания света третьей личинки instar, которые были подняты при 25 градусах По Цельсию на стандартной среде в комнате с 12 ч/12 ч свет/темный цикл. Одна личинка w1118 была протестирована с...

Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Этот протокол вводит световое пятно анализа для расследования Drosophila личинки фототаксического поведения. В этом анализе, световое пятно генерируется как свет стимуляции, и процесс избегания личинок света регистрируется инфракрасной световой системы визуализации.

Свет пятно основе анализа для анализа Drosophila Larval Фототаксис

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Используя анализ светового пятна, поведение личинок можно отслеживать до, во время и после входа в светлую область, позволяя анализировать детали движения личинок. Этот анализ прост и прост в работе. Реакция света тестируется только один раз, так что любой возможный эффект световой адаптации может быть исключен.Чтобы подготовить агар пластины, медленно и равномерно покрыть дно 15 сантиметров Петри блюдо с примерно четыре миллиметра толщиной слой горячей 1%agar. Дайте пластине остыть при комнатной температуре до тех пор, пока агар не затверденет. Чтобы настроить систему визуальной стимуляции, клип подготовленный светодиодный источник света на железный каркас, заботясь о том, что свет проектов вниз к рабочему столу.Наклоните цилиндр немного, пока угол между плоскости цилиндра и вертикальной плоскости составляет около 10 градусов. Подключите 470 нанометровый синий светодиодный свет к светодиодной штепсельной вилке светодиода высокой мощности и включите драйвер. Поверните ручку в правом верхнем углу водителя, чтобы выбрать канал 470 нанометров и нажмите светодиод.Когда экран отображает чек, на рабочем столе появится синее светлое пятно. Нажмите OK и поверните ручку, чтобы настроить интенсивность света. Перемести положение источника света вверх и вниз, чтобы скорректировать диаметр светового пятна до двух сантиметров.Поверните ручку, чтобы выбрать интенсивность света в соответствии с экспериментальными требованиями. Используйте компактную консоль счетчика мощности со стандартным датчиком мощности диода фото для измерения максимальной и минимальной мощности света в месте. Световая сила должна измеряться в темноте в самом эксперименте.Затем заместить световую силу, измерить ее в три раза и использовать среднее значение. Чтобы настроить воображая систему, зажим высокого разрешения веб-камеры с железным клипом около 10 сантиметров над светлым пятном на рабочем столе и настроить ориентацию объектива камеры к рабочему столу. Подключите камеру к компьютеру под управлением Windows 7 через интерфейс USB и поместите агар-пластину на рабочий стол прямо под камерой.Откройте программное обеспечение AMCap 9.22, световое пятно будет автоматически показано в окне AMCap. Перемести камеру немного влево или вправо, чтобы убедиться, что световое пятно находится вблизи центра окна. Используйте клип, чтобы исправить 850 плюс-минус три нанометровый фильтр bandpass на пять-семь миллиметров непосредственно под камерой.Поместите три инфракрасных света генерации светодиодов с центральной длиной волны 850 нанометров равномерно вокруг агар пластины около пяти сантиметров от края пластины и со светодиодными линзами под углом 70 градусов, обращенных к пластине. Затем подключите светодиоды к источнику питания через их кондиционер к преобразователи постоянного тока. В меню программного обеспечения AMCap выберите опции, видео-устройство и формат захвата и установите размер пикселя захваченного видео до 800 на 600, а частоту кадров до 60 кадров в секунду.Снимите фильтр и поместите линейку под камеру. Отрегулируйте фокус камеры до тех пор, пока линия масштаба не будет ясной и параллельной ширине поля зрения видео и не щелкните захват, настройку и захват видео, чтобы выбрать путь сохранения. Затем нажмите кнопку начать запись, чтобы записать фактическое расстояние, соответствующее 600 пикселей и рассчитать соотношение каждого пикселя к фактическому расстоянию.Прежде чем ввести личинку в настройку изображения, приобрети короткое видео положения света и назовите нефильтрованную область фонового видео. Поместите фильтр обратно на объектив камеры и включите свет вдали от экспериментального устройства при как низкой настройке, насколько это возможно, в то же время позволяя личинки, чтобы быть четко наблюдается. Используйте ложку, чтобы удалить некоторые личинки из среды культуры и осторожно выбрать третью личинку instar.Вымойте личинку в дистиллированной воде и поместите личинку в центре агарной пластины. Аккуратно удалите излишки воды из личинки и выключите свет комнаты. Разрешить личинки акклиматизироваться в течение двух минут в темной среде, прежде чем включение инфракрасного светодиодного света.Следующий эксперимент по избежанию света должен проводиться в темноте. Для удобства демонстрации мы снимали в ярком свете. Аккуратно почистите личинку к центру пластины.Когда личинка начинает ползать прямо, поверните пластину, чтобы личинка голову к светлому месту. Нажмите захват, настройка и захват видео, чтобы выбрать путь сохранения и нажмите кнопку начала записи для записи. Разрешить личинки ползать к, войти, и оставить световое пятно, пока он почти из поля зрения, и нажмите остановить запись.Отмести фильтр от камеры и найми короткое видео положения светового пятна. Затем назовите пост продать нефильтрованное видео световой области два и сравнить это видео с областью света одно видео, чтобы гарантировать, что положение светового пятна не изменилось. Здесь можно наблюдать кривые времени скорости хвоста, угол изгиба кузова и угловую скорость изгиба тела репрезентативной личинки.Размер личинок головы и, следовательно, максимальный угол изгиба тела значительно уменьшается в третьем личинках звезд с октопаминергическими нейронами, ингибируется столбняком токсического выражения по сравнению с родительским контролем, указывающим на то, что нейроны Tdc2-Gal4 необходимы для нормальной реакции личинок света. Для успешной обработки изображений убедитесь, что камера не блокирует свет и что световое пятно круглое и вблизи центра окна. После этой процедуры, оптогенетика может быть выполнена, чтобы наблюдать, как личинки реагируют, когда конкретные нейроны активируются.Используя этот анализ, детали движения личинок могут быть проанализированы, что позволяет изучить далекое воздействие окружающей среды и внутренних факторов на поведение избегания личинок света.

Research

JoVE Journal

Biology

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Препарирование личинок ЦНС у дрозофилы

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

Дрозофилы личинок NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Дрозофилы личинок NMJ Immunohistochemistry

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

Нейронов и астроцитов сотрудничеству культуры Пробирной высоких Анализ содержания Нейротоксичность

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Мониторинг функции сердца в личинок Дрозофилы Для физиологических исследований

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Подготовка Drosophila S2 клеток для световой микроскопии

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Разбор и Окрашивание Drosophila Личинок Яичники

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

Анализ эмбрионального и личиночного рыбок данио скелетных мышечных волокон из диссоциированных препаратов

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Экспертиза<em&gt; Drosophila</em&gt; Личинок трахеи Клетки терминала с помощью световой микроскопии

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...