Name: light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis
Uploaded: 2019-09-27T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

Detta arbete stöds av Natural Science Foundation i Kina (31671074) och grundläggande forskningsmedel för Zhejiang provinsiella universitet (2019XZZX003-12).

1. beredning av Drosophila -larver
<ol><li>Förbered standard medium bestående av kokt majsmjöl (73 g), agar (5,6 g), sojabönor måltid (10 g), jäst (17,3 g), sirap (76 mL) och vatten (1000 mL).</li>
	<li>Höj alla flugor vid 25 ° c på standard medium i ett rum med en 12 h/12 h ljus/mörker cykel.</li>
</ol>2. beredning av agarplattor
<ol><li>Bered 1,0% agar lösning. Väg 3 g agar i en 500 mL bägare med en balans, tillsätt sedan 300 mL destillerat vatten. Placera ett folie pa...

<ol>
	<li>Grossfield, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Geographic+distribution+and+light-dependent+behavior+in+Drosophila.">Geographic distribution and light-dependent behavior in Drosophila.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68, 2669 (1971).</li><li>Godoy-Herrera, R. C. L. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+of+Drosophila+melanogaster+larvae+during+pupation.">The behaviour of Drosophila melanogaster larvae during pupation.</a> Animal Behaviour. 37, (1989).</li><li>Busto, M., Iyengar, B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+behavior:+modulation+of+locomotion+by+light+in+the+Drosophila+melanogaster+larva+requires+genetically+distinct+visual+system+functions.">Genetic dissection of behavior: modulation of locomotion by light in the Drosophila melanogaster larva requires genetically distinct visual system functions.</a> Journal of Neuroscience. 19, 3337 (1999).</li><li>Mazzoni, E. O., Desplan, C., Blau, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Circadian+pacemaker+neurons+transmit+and+modulate+visual+information+to+control+a+rapid+behavioral+response.">Circadian pacemaker neurons transmit and modulate visual information to control a rapid behavioral response.</a> Neuron. 45, 293 (2005).</li><li>Keene, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+visual+pathways+mediate+Drosophila+larval+light+avoidance+and+circadian+clock+entrainment.">Distinct visual pathways mediate Drosophila larval light avoidance and circadian clock entrainment.</a> Journal of Neuroscience. 31, 6527 (2011).</li><li>Keene, A. C., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Seeing+the+light:+photobehavior+in+fruit+fly+larvae.">Seeing the light: photobehavior in fruit fly larvae.</a> Trends in Neurosciences. 35, (2012).</li><li>Kane, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sensorimotor+structure+of+Drosophila+larva+phototaxis.">Sensorimotor structure of Drosophila larva phototaxis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110, E3868 (2013).</li><li>Humberg, T. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dedicated+photoreceptor+pathways+in+Drosophila+larvae+mediate+navigation+by+processing+either+spatial+or+temporal+cues.">Dedicated photoreceptor pathways in Drosophila larvae mediate navigation by processing either spatial or temporal cues.</a> Nature Communications. 9. 1260, (2018).</li><li>Gong, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two+pairs+of+neurons+in+the+central+brain+control+Drosophila+innate+light+preference.">Two pairs of neurons in the central brain control Drosophila innate light preference.</a> Science. 330, (2010).</li><li>Yamanaka, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroendocrine+Control+of+Drosophila+Larval+Light+Preference.">Neuroendocrine Control of Drosophila Larval Light Preference.</a> Science. 341, 1113 (2013).</li><li>Zhao, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+disinhibitory+mechanism+biases+Drosophila+innate+light+preference.">A disinhibitory mechanism biases Drosophila innate light preference.</a> Nature Communications. 10, (2019).</li><li>Gong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Neuronal+Pathway+that+Commands+Deceleration+in+Drosophila+Larval+Light-Avoidance.">A Neuronal Pathway that Commands Deceleration in Drosophila Larval Light-Avoidance.</a> Neuroscience Bulletin. Feb. 27, (2019).</li><li>Larderet, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organization+of+the+Drosophila+larval+visual+circuit.">Organization of the Drosophila larval visual circuit.</a> eLife. 6, (2017).</li><li>Sawin-McCormack, E. P., Sokolowski, M. B., Campos, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+genetic+analysis+of+Drosophila+melanogaster+photobehavior+during+larval+development.">Characterization and genetic analysis of Drosophila melanogaster photobehavior during larval development.</a> Journal of Neurogenetics. 10, (1995).</li><li>Farca, L. A., von Essen, A. M., Widmer, Y. F., Sprecher, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light+preference+assay+to+study+innate+and+circadian+regulated+photobehavior+in+Drosophila+larvae.">Light preference assay to study innate and circadian regulated photobehavior in Drosophila larvae.</a> Journal of Visualized Experiments. 74 (74), e50237 (2013).</li><li>Xiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-avoidance-mediating+photoreceptors+tile+the+Drosophila+larval+body+wall.">Light-avoidance-mediating photoreceptors tile the Drosophila larval body wall.</a> Nature. 468, 921 (2010).</li><li>Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+tracking+of+animal+posture+and+movement+during+exploration+and+sensory+orientation+behaviors.">Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors.</a> PLoS ONE. 7, e41642 (2012).</li></ol>

Detta protokoll presenterar Light spot-analysen för att testa förmågan hos Drosophila larver att fly från ljus. Denna analys möjliggör spårning av beteendet hos larver innan, under stöter på, och efter att ha lämnat en ljus fläck. Detaljer om larv rörelse kan fångas och analyseras. Ljus punkts analysen är mycket enkel och besitter en stark genomförbarhet. Kostnaden för hela enheten är inte hög. I experimentet används LED-ljus som ljuskälla. Den kan bytas ut mot ljuskällor med olika vågläng...

De larver av Drosophila melanogaster visar uppenbara ljus-undvika beteende under födosök scenen. Drosophila larv phototaxis har varit under utredning, särskilt under de senaste 50 åren1,2,3,4,5,6,7 ,8. Under de senaste åren, trots att 1) många nervceller medhjälp larv ljus undvikande har identifierats4,5,9,10,11,12 och 2) den kompletta connectome av larv visuella systemet vid upplösningen av synapser har fastställts13, de neurala mekanismerna bakom larv phototaxis fortfarande i stort sett oklart.
Ett antal beteendemässiga analyser har använts i att studera larv phototaxis. De kan i stort sett delas in i två klasser: en med rumsliga ljus lutningar och den andra som involverar tidsmässiga ljus lutningar. För rumsliga ljus gradientanalyser, är arenan uppdelad i lika många sektioner i ljus och mörker. Arenan kan delas upp i ljusa och mörka halvor2,4 eller ljusa och mörka kvadranter14,15, eller kan även separeras i omväxlande ljus och mörka rutor som på en schackbräde7. Vanligtvis, agar plattor används för rumslig ljus lutning assay, men rör som är indelade i alternativa ljusa och mörka sektioner kan också användas10,14.
I äldre version av analyser, ljus belysning i allmänhet härstammar från under larverna. Men belysningen i nyare versioner härrör till stor del från ovan, eftersom larv ögon (t. ex. Bolwig organ som är känsliga för låg eller medelhög ljusintensiteter16) finns i det ogenomskinliga cephalofaryngeal skelettet med öppningar mot den övre fronten. Detta gör larverna mer känsliga för ljus från övre främre riktningar än underifrån bakom riktningar7. För temporala ljus gradientanalyser är ljusintensiteten rumsligt enhetlig i arenan, men intensiteten förändras över tid. Förutom temporala kvadrat våg ljus (dvs blinkande på/av eller stark/svagt ljus3,7), temporally varierande ljus som överensstämmer med en linjär ramp i intensitet används också8 för att mäta känsligheten hos larver till en temporally växlande ljus stimulans.
En tredje typ av phototaxis assay är riktad ljus Scape navigation, som innebär belysning från ovan i en vinkel på 45 °7. Innan arbetet med Kane et al.7, endast grova parametrar såsom antalet larver i ljusa och mörka regioner, frekvensen av svarvning, och Trail längd beräknades i larv phototaxis assays. Eftersom arbetet i samma grupp, med analys av hög temporala upplösning video rekord för larv phototaxis, detaljerad dynamik larv rörelse under phototaxis (dvs., Instant hastigheter olika delar av larv kropp, rubrik riktning, vänd vinkel och motsvarande vinkelhastighet) har analyserats7. Sålunda, mer detaljerna av larv phototaxis beteende har blitt duglig till vara upptäckt. I dessa analyser testas larver i grupper så att grupp effekter inte utesluts.
Detta protokoll introducerar en Light-spot analys för utredning av larv beteendemässiga svar på individuell ljus stimulering. Den huvudsakliga experimentella uppsättningen består av ett visuellt stimuleringssystem och infrarött Ljusbaserat avbildningssystem. I det visuella stimuleringssystemet genererar en LED-ljuskälla en rund 2 cm-diameter ljuspunkt på en agarplatta, där larven testas. Ljusintensiteten kan justeras med en LED-drivrutin. Avbildnings systemet innehåller en infraröd kamera som fångar beteendet hos larven förutom 3 850 nm infraröda lysdioder som ger belysning för kameran. Kamerans lins täcks av ett 850 nm-pass filter för att blockera ljus från det visuella stimuleringssystemet från att komma in i kameran, medan det infraröda ljuset är tillåtet att komma in i kameran. Således förhindras störning av visuell stimulering på avbildning. I denna analys, de beteendemässiga detaljerna i de snabba Svaren av enskilda larver inom en period inklusive före, under, och efter att ha angett ljus registreras och analyseras.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>850 nm &#177; 3 nm infrared-light-generating LED</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>PM100A</td>
			<td>Compatible Sensors: Photodiode and Thermal 
			Optical Power Rangea: 100 pW to 200 W 
			Available Sensor Wavelength Rangea: 185 nm-25 &#956;m Display Refresh Rate: 20 Hz 
			Bandwidtha: DC-100 kHz 
			Photodiode Sensor Rangeb: 50 nA-5 mA 
			Thermopile Sensor Rangeb: 1 mV-1 V</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>AC to DC converter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S120VC</td>
			<td>Aperture Size: &#216;9.5 mm 
			Wavelength Range: 200-1100 nm 
			Power Range: 50 nW-50 mW 
			Detector Type: Si Photodiode (UV Extended) 
			Linearity: &#177;0.5% 
			Measurement Uncertaintyc: &#177;3% (440-980 nm), &#177;5% (280-439 nm), &#177;7% (200-279 nm, 981-1100 nm)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>band-pass filter</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>DC2100</td>
			<td>LED Current Range: 0-2 A 
			LED Current Resolution: 1 mA 
			LED Current Accuracy: &#177;20 mA 
			LED Forward Voltage: 24 V 
			Modulation Frequency Range: 0-100 kHz Sine Wave 
			Modulation: Arbitrary</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collimated LED blue light&#160;</td>
			<td>ELP, China</td>
			<td>USBFHD01M</td>
			<td>Max. Resolution: 1920X1080 
			F6.0 mm 
			Sensor: 1/2.7&#34; CMOS OV2710</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Compact power meter console&#160;</td>
			<td>Ocean Optics, USA</td>
			<td>USB2000+(RAD)</td>
			<td>Dimensions: 89.1 mm x 63.3 mm x 34.4 mm 
			Weight: 190 g 
			Detector: Sony ILX511B (2048-element linear silicon CCD array) 
			Wavelength range: 200-850 nm 
			Integration time: 1 ms &#8211; 65 seconds (20 seconds typical) 
			Dynamic range: 8.5 x 10^7 (system); 1300:1 for a single acquisition 
			Signal-to-noise ratio: 250:1 (full signal) 
			Dark noise: 50 RMS counts 
			Grating: 2 (250 &#8211; 800 nm) 
			Slit: SLIT-50 
			Detector collection lens: L2 
			Order-sorting: OFLV-200-850 
			Optical resolution: ~2.0 nm FWHM 
			Stray light: &#60;0.05% at 600 nm; &#60;0.10% at 435 nm 
			Fiber optic connector: SMA 905 to 0.22 numerical aperture single-strand fiber</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>High-Power LED Driver</td>
			<td>Minhongshi, China</td>
			<td>MHS-48XY</td>
			<td>Working voltage: DC12V 
			Central wavelength: 850nm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high-resolution web camera</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>MWWHL4</td>
			<td>Color: Warm White 
			Correlated Color Temperature: 3000 K 
			Test Current for Typical LED Power: 1000 mA 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Bandwidth (FWHM): N/A 
			Electrical Power: 3000 mW 
			Viewing Angle (Full Angle): 120&#730; 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: &#62;50 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupa: RG1 &#8211; Low Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED Warm White</td>
			<td>Mega-9, China</td>
			<td>BP850/22K</td>
			<td>&#216;25.4(+0~-0.1) mm 
			Bandwidth: 22&#177;3nm 
			Peak transmittance:80% 
			Central wavelength: 850nm&#177;3nm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectrometer&#160;</td>
			<td>Noel Danjou</td>
			<td>Amcap9.22</td>
			<td>AMCap&#160;is a still and video capture application with advanced preview and recording features. It is a Desktop application designed for computers running Windows 7 SP1 or later. Most&#160;Video-for-Windowsand&#160;DirectShow-compatible devices are supported whether they are cheap webcams or advanced video capture cards.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard photodiode power sensor&#160;</td>
			<td>Super Dragon, China</td>
			<td>YGY-122000</td>
			<td>Input: AC 100-240V~50/60Hz 0.8A 
			Output: DC 12V 2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>M470L3-C1</td>
			<td>Color: Blue 
			Nominal Wavelengtha: 470 nm 
			Bandwidth (FWHM): 25 nm 
			Maximum Current (CW): 1000 mA 
			Forward Voltage: 3.2 V 
			Electrical Power (Max): 3200 mW 
			Emitter Size: 1 mm x 1 mm 
			Typical Lifetime: 100 000 h 
			Operating Temperature (Non-Condensing): 0 to 40 &#176;C 
			Storage Temperature: -40 to 70 &#176;C 
			Risk Groupb: RG2 &#8211; Moderate Risk Group</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermal power sensor&#160;</td>
			<td>Thorlabs, USA</td>
			<td>S401C</td>
			<td>Wavelength range: 190 nm-20 &#956;m 
			Optical power range:10 &#956;W-1 W(3 Wb) 
			Input aperture size: &#216;10 mm 
			Active detector area: 10 mm x 10 mm 
			Max optical power density: 500 W/cm2 (Avg.) 
			Linearity: &#177;0.5%</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

light spot-based assay for analysis of drosophila larval phototaxis

De larver av Drosophila melanogaster visar uppenbara ljus-undvika beteende under födosök scenen. Drosophila larv phototaxis kan användas som en modell för att studera djur undvikande beteende. Detta protokoll introducerar en Light-spot analys för att undersöka larv foto taktik beteende. Den experimentella set-up innehåller två huvuddelar: en visuell stimulering system som genererar ljuspunkten, och en infraröd ljus-baserade bildsystem som registrerar processen för larv lätt undvikande. Denna analys möjliggör spårning av beteendet hos larv innan, under stöter på, och efter att ha lämnat ljuspunkten. Detaljer om larv rörelse inklusive retardation, paus, huvud gjutning, och svarvning kan fångas och analyseras med denna metod.

Enligt protokollet, den Light spot analysen användes för att undersöka lätt undvikande beteende av tredje INSTAR larv som höjdes vid 25 ° c på standard medium i ett rum med en 12 h/12 h ljus/mörker cykel. En enda w1118 larv testades med hjälp av Light spot-analysen vid 25,5 ° c. Den genomsnittliga ljusintensiteten hos ljuspunkten som alstras av en 460 Nm-lysdiod var 0,59 μW/cm2. Hela processen med att gå in och ut ur ljuspunkten spelades in och analyserades med hjälp av SOS-pr...

Watch this Scientific Journal Video about Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis at JoVE.com

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Detta protokoll introducerar en Light-spot-analys för att undersöka Drosophila larv phototactic beteende. I denna analys, en ljus fläck genereras som ljus stimulering, och processen för larv lätt undvikande registreras av en infraröd ljus-baserade Imaging system.

Ljusspot-baserat test för analys av Drosophila larval phototaxis

The larvae of Drosophila melanogaster show obvious light-avoiding behavior during the foraging stage. Drosophila larval phototaxis can be used as a model ...

Med hjälp av ljusfläcksanalysen kan beteendet för larver spåras före, under, och efter att ha kommit in i ljusområdet vilket gör att larvrörelsens detaljrikedom kan analyseras. Denna analys är enkel och lätt att utföra. Ljusresponsen testas endast en gång, så att varje möjlig effekt av ljusanpassning kan uteslutas.För att förbereda agar plattorna, långsamt och jämnt täcka botten av en 15 centimeter Petriskål med en cirka fyra millimeter tjockt lager av varma 1%agar. Låt plattan svalna i rumstemperatur tills agarn har stelnat. För att ställa in det visuella stimuleringssystemet, klipp en förberedd LED-ljuskälla på en järnram, var noga med att ljuset projiceras ner mot skrivbordet.Luta cylindern något tills vinkeln mellan cylinderplanet och det vertikala planet är ca 10 grader. Anslut 470 nanometer blå LED-lampa till LED en plugg av hög effekt LED-drivrutinen och slå på föraren. Vrid ratten i övre högra hörnet av föraren för att välja kanal 470 nanometer och klicka på LED.När skärmen visar en kontroll kommer en blå ljusfläck att visas på skrivbordet. Klicka på OK och vrid på vredet för att justera ljusets intensitet. Flytta ljuskällans position uppåt och nedåt för att justera ljusfläckens diameter till två centimeter.Rotera vredet för att välja ljusintensiteten enligt de experimentella kraven. Använd en kompakt power meter-konsol med en standard-fotodiod strömsensor för att mäta maximal och minimal ljuseffekt på plats. Den ljusa kraften behöver mätas i mörkret i själva experimentet.Spela sedan in ljuseffekten, mät den tre gånger och använd genomsnittsvärdet. För att ställa in fantasisystemet, klämma en högupplöst webbkamera med ett järnklipp ungefär 10 centimeter ovanför ljuspunkten på skrivbordet och justera orienteringen av kameralinsen mot skrivbordet. Anslut kameran till en dator som kör Windows 7 genom ett USB-gränssnitt och placera agarplattan på skrivbordet precis under kameran.Öppna programvaran AMCap 9.22, ljusfläcken kommer automatiskt att visas i AMCap-fönstret. Flytta kameran något åt vänster eller höger för att se till att ljusfläcken är nära mitten av fönstret. Använd ett klipp för att fixa en 850 plus eller minus tre nanometer bandpass filter på fem till sju millimeter omedelbart under kameran.Placera tre infraröda ljus generera lysdioder med en central våglängd på 850 nanometer jämnt runt agar plattan cirka fem centimeter bort från kanten av plattan och med LED-objektiv i 70 graders vinkel vänd mot plattan. Anslut sedan lysdioderna till en strömkälla genom deras AC till DC-omvandlare. I menyn på AMCap-programvaran väljer du alternativ, videoenhet och upptagningsformat och ställer in pixelstorleken för den tagna videon till 800 med 600 och bildhastigheten på 60 bildrutor per sekund.Ta bort filtret och placera en linjal under kameran. Justera kamerans fokus tills skallinjen är klar och parallell med bredden på videofältet i sikte och klicka på capture, setup och video capture för att välja sparbanan. Klicka sedan på startinspelning för att registrera det faktiska avståndet som motsvarar 600 pixlar och beräkna förhållandet mellan varje pixel och det faktiska avståndet.Innan du inför larven till bildframställningen, skaffa en kort video av ljuspositionen och namnge den ofiltrerade styrbakgrundens ljusområde en. Placera tillbaka filtret på kameralinsen och tänd ett ljus långt från den experimentella enheten vid en så låg inställning som möjligt samtidigt som larverna fortfarande kan observeras tydligt. Använd en sked för att ta bort några larver från odlingsmediet och välj försiktigt en tredje instar larva.Tvätta larven i destillerat vatten och placera larven i mitten av agarplattan. Ta försiktigt bort eventuellt överflödigt vatten från larven och stäng av rumslampan. Låt larven acklimatisera sig i två minuter i den mörka miljön innan du slår på den infraröda LED-lampan.Följande ljus undvikande beteende experiment måste utföras i mörker. För att underlätta demonstration vi filmade i starkt ljus. Borsta larven försiktigt till mitten av plattan.När larven börjar krypa rakt, rotera plattan för att få larven att gå mot ljusfläcken. Klicka på capture, setup och video capture för att välja sparvägen och klicka på startinspelning för att spela in. Låt larven krypa mot, gå in och lämna ljuspunkten tills den är nästan utanför synfältet och klicka på stoppinspelning.Flytta filtret bort från kameran och skaffa en kort video av positionen för ljusfläcken. Sedan namn inlägget assay ofiltrerad video ljusområde två och jämför den här videon med ljusområdet en video för att säkerställa att ljuset plats position inte ändras. Här kan tidskurvor av svanshastigheten, kroppsböjningsvinkel och vinkelhastighet hos kroppsböjning av en representativ larv observeras.Storleken på larvhuvudet gjutna och, därför, maximal kropp böjningsvinkel minskas betydligt i tredje instar larver med oktopaminerga nervceller hämmas av stelkramp giftigt uttryck jämfört med föräldrakontroll som visar att Tdc2-Gal4 nervceller är nödvändiga för en normal larvljus svar. För framgångsrik bildbehandling, se till att kameran inte blockerar ljuset och att ljuspunkten är rund och nära mitten av fönstret. Efter denna procedur kan optogenetik utföras för att observera hur larverna reagerar när specifika nervceller aktiveras.Med hjälp av denna analys kan detaljerna i larvrörelse analyseras så att den avlägsna inverkan av miljö och av interna faktorer på larvljusundvikande beteende kan studeras.

Research

JoVE Journal

Biology

Light Spot-Based Assay for Analysis of Drosophila Larval Phototaxis

Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster

Dissekering av Larvernas CNS i Drosophila melanogaster

The central nervous system (CNS) of Drosophila larvae is complex and poorly understood.  One way to investigate the CNS is to use immunohistochemistry to ...

Drosophila Larval NMJ Dissection

Drosophila Larvernas NMJ Dissection

The Drosophila neuromuscular junction (NMJ) is an established model system used for the study of synaptic development and plasticity. The widespread use ...

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Drosophila Larval NMJ Immunohistochemistry

Drosophila Larvernas NMJ Immunohistokemi

A Neuronal and Astrocyte Co-Culture Assay for High Content Analysis of Neurotoxicity

En Neuronal och astrocyternas Co-Kultur-analys för High innehållsanalys av Neurotoxicitet

High Content Analysis (HCA) assays combine cells and detection reagents with automated imaging and powerful image analysis algorithms, allowing ...

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Monitoring Heart Function in Larval Drosophila melanogaster for Physiological Studies

Övervakning av hjärtfunktion i Larvernas Drosophila melanogaster För fysiologiska studier

We present various methods to record cardiac function in the larval Drosophila. The approaches allow heart rate to be measured in unrestrained  and  ...

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Preparation of Drosophila S2 cells for Light Microscopy

Beredning av Drosophila S2 celler för ljusmikroskop

The ideal experimental system would be cheap and easy to maintain, amenable to a variety of techniques, and would be supported by an extensive literature ...

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissection and Staining of Drosophila Larval Ovaries

Dissektion och färgning av Drosophila Larvernas Äggstockar

Many organs depend on stem cells for their development during embryogenesis and for maintenance or repair during adult life. Understanding how stem cells ...

Analysis of Embryonic and Larval Zebrafish Skeletal Myofibers from Dissociated Preparations

Analys av embryonala och Larvernas Zebrafish Skelett myofibers från Dissocierade Förberedelser

The zebrafish has  proven to be a valuable model system for exploring skeletal muscle function and  for studying human muscle diseases. Despite  the many ...

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Examination of Drosophila Larval Tracheal Terminal Cells by Light Microscopy

Undersökning av<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvernas Trakealtuber Terminal Celler med ljusmikroskop

Cell shape is critical for cell function. However, despite the importance of cell morphology, little is known about how individual cells generate specific ...