Name: bulk droplet vitrification for primary hepatocyte preservation
Uploaded: 2019-10-25T13:00:00
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Die Finanzierung durch die US National Institutes of Health (R01DK096075, R01DK107875 und R01DK114506) und das US Department of Defense (DoD RTRP W81XWH-17-1-0680) wird sehr anerkannt.

Die primären Hepatozytenisolationen für dieses Protokoll wurden vom Cell Resource Core (CRC) am Massachusetts General Hospital, Boston, Massachusetts, USA durchgeführt. Das Tierprotokoll (#2011N000111) wurde vom Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) des Massachusetts General Hospital genehmigt.
1. Bulk-Droplet-Vitrifikation
<ol><li>Bereiten Sie die Verglasungslösungen vor.
	<ol>
<li>Fügen Sie 40 mg Rinderserumalbumin (BSA) zu 17,0 ml der Lösung der Univer...

<ol>
	<li>Carpentier, B., Gautier, A., Legallais, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+and+bioartificial+liver+devices:+present+and+future.">Artificial and bioartificial liver devices: present and future.</a> Gut. 58 (12), 1690-1702 (2009).</li><li>Fox, I. J., Chowdhury, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+transplantation:+Hepatocyte+transplantation.">Hepatocyte transplantation: Hepatocyte transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 4, 7-13 (2004).</li><li>Hughes, R. D., Mitry, R. 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Die Kryokonservierung von Hepatozyten durch langsames Einfrieren führt zu verminderter Lebensfähigkeit und metabolischer Funktion. Vitrifikation bietet eine vielversprechende Alternative für die klassische Kryokonservierung, da Gefrierverletzungen vollständig vermieden werden9. Eine Vorinkubation mit CPAs ist jedoch erforderlich, um die kritische Kühlrate8zu senken. Folglich wird die Verglasung durch die CPA-Toxizität17 behindert und auf kleine...

Verlust der Zelllebensfähigkeit und metabolische Funktion nach Kryokonservierung von Hepatozyten ist immer noch ein großes Problem, das klinische Anwendungen begrenzt1,2,3. Die Benchmark-Methode der Hepatozyten-Kryokonservierung ist das langsame Einfrieren, das durch Vorinkubation der Hepatozyten mit CPA (Dimethylsulfoxid [DMSO], Glucose und Albumin) und anschließender kontrollierter Rate gefriert (bei ca. 1 °C/min) kryogene Temperaturen4,5. Trotz vieler gemeldeter Optimierungen bleiben CPA-Toxizität zusammen mit schädlichen osmotischen Ungleichgewichten beim Einfrieren und mechanischer Belastung der Eisbildung grundlegende Nachteile des langsamen Einfrierens6,7.
Vitrifizierung bietet einen Vorteil gegenüber langsamem Einfrieren, da Verletzungen durch Eisbildung durch einen direkten Phasenübergang des Wassers in den Glaszustand6vollständig vermieden werden. Um jedoch die Glasübergangstemperatur von reinem Wasser (-137 °C) zu erreichen, muss das Wasser in einer Größenordnung von einer Million Grad Celsius pro Sekunde (d. h. der kritischen Abkühlrate) gekühlt werden, um eine Eisbildung über der Glasübergangstemperatur 8 zu vermeiden. . Die Zugabe von CPAs kann die kritische Kühlrate senken und die Glasübergangstemperatur wässriger Lösungenerhöhen 9. Doch auch bei hohen CPA-Konzentrationen (z.B. 40% v/v DMSO oder höher) sind für eine erfolgreiche Verglasung8,9dennoch schnelle Abkühlraten erforderlich.
Die erforderlichen Kühlraten und hohen CPA-Konzentrationen führen zu zwei großen Nachteilen der Verglasung. Um eine schnelle Kühlung zu ermöglichen, müssen die Proben zunächst eine geringe thermische Masse haben. Zweitens müssen CPAs langsam eingeführt und vollständig zwischen den intra- und extrazellulären Kompartimenten6ausgeglichen werden, um hohe CPA-Konzentrationen zu erreichen und gleichzeitig osmotische Verletzungen zu vermeiden. Dies erhöht die Expositionszeit von Zellen gegenüber toxischen CPAs. Zusammen macht dies die Verglasung zu einem umständlichen Prozess, der auf ein paar kleine Proben (Mikroliter) gleichzeitig beschränkt ist. Als mögliche Lösung für diese Beschränkungen wurde die Tröpfchenverglasung vorgeschlagen. Durch die Exposition von winzigen zellbeladenen Tröpfchen (Nanolitern) gegenüber flüssigem Stickstoff wird die Kühlrate deutlich erhöht, was eine erhebliche Reduktion der CPA-Konzentration10,11,12 ermöglicht. ,13,14. Obwohl mehrere hochfrequente Tröpfchen-erzeugungserzeugende Düsen potenziell gleichzeitig verwendet werden könnten, begrenzt die extrem kleine Tröpfchengröße den Durchsatz auf Mikroliter pro Minute10, was eine effiziente Verglasung großer Zellen verhindert. Volumen mit um Magnituden höheren Verarbeitungsraten in der Größenordnung von Millilitern pro Minute.
Kürzlich wurde gezeigt, dass diese inhärenten Einschränkungen der Vitrifizierung durch Bulk-Droplet-Vitrifizierung15überwunden werden können. Diese neuartige Methode nutzt eine schnelle osmotische Dehydrierung, um eine intrazelluläre CPA-Konzentration von 7,5 % v/v Ethylenglykol und DMSO unmittelbar vor der Vitrifizierung zu konzentrieren, wodurch die vollständige Ausgleichung toxischer CPA-Konzentrationen entfällt. Die zelluläre Dehydrierung wird in einem fluidischen Gerät durch eine kurze Exposition der Hepatozyten bei einer hohen extrazellulären CPA-Konzentration durchgeführt. Obwohl diese Exposition eine schnelle osmotische Dehydrierung verursacht, ist es zu kurz, als dass die hohe CPA-Konzentration in die Zellen diffundieren könnte. Unmittelbar nach der Dehydrierung werden die Zellen in Tröpfchen geladen, die direkt in flüssigem Stickstoff verglast sind. Diese Methode eliminiert die Notwendigkeit einer vollständigen intrazellulären Aufnahme hoher CPA-Konzentrationen, während die hohe extrazelluläre CPA-Konzentration die Verglasung großer Tröpfchen ermöglicht, was zu hohen Durchsatzvolumina mit minimaler CPA-Toxizität führt.
Tröpfchenverglasung verbessert die direkte und langfristige Lebensfähigkeit nach der Konservierung, sowie Morphologie und metabolische Funktion der primären Rattenhepatozyten im Vergleich zur klassischen Kryokonservierung durch langsames Einfrieren15. Dieses Manuskript enthält die methodischen Details für die Massentropfenverglasung von primären Rattenhepatozyten.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD Disposable 3 mL Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS1000-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belzer UW Cold Storage Solution</td>
			<td>Bridge to Life</td>
			<td>BUW-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cole-Parmer Female Luer to 1/16&#34; low-profile semi-rigid tubing barb, PP</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-45508-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogentic stroage tank / Cryotank</td>
			<td>Chart Industries</td>
			<td>MVE 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, powder, high glucose, pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12800-082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>107-21-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra long forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-316C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Higher-Speed Easy Reader Plastic Centrifuge Tubes - Flat top closure</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-443-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fishing line</td>
			<td>Stren</td>
			<td>SOFS4-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>7727-37-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masterflex L/S Platinum-Cured Silicone Tubing, L/S 14</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-96410-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mix Tips, For Use With 3HPW1</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>3WRL7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Polypropylene Powder Funnel</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4252-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 20 ga</td>
			<td>Becton Dickinson (BD)</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M - Flexible film</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7793-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-06369-18</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip sterile filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SE1M179M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (Crystalline/Certified ACS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S5-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>New Era Pump Systems Inc.</td>
			<td>NE-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo-Flask Benchtop Liquid Nitrogen Container</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>2122</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bulk droplet vitrification for primary hepatocyte preservation

Die Vitrifizierung ist eine vielversprechende eisfreie Alternative zur klassischen Slow-Freezing (bei ca. 1 °C/min) Kryokonservierung biologischer Proben. Die Vitrifizierung erfordert extrem schnelle Kühlraten, um den Übergang von Wasser in die Glasphase zu erreichen und gleichzeitig eine schädliche Eisbildung zu vermeiden. Obwohl die Vorinkubation mit kryoprotektiveN (CPA) die kritische Abkühlrate biologischer Proben reduzieren kann, sind in der Regel hohe Konzentrationen erforderlich, um eine eisfreie Kryokonservierung durch Verglasung zu ermöglichen. Infolgedessen wird die Verglasung durch CPA-Toxizität behindert und auf kleine Proben beschränkt, die schnell gekühlt werden können. Kürzlich wurde gezeigt, dass diese inhärenten Einschränkungen durch die Verglasung von Tröpfchen überwunden werden können. Mit dieser neuartigen Methode werden Zellen zunächst mit einer niedrigen intrazellulären CPA-Konzentration vorinkubiert. Durch die Nutzung einer schnellen osmotischen Dehydrierung konzentriert sich das intrazelluläre CPA direkt vor der Vitrifizierung, ohne dass toxische CPA-Konzentrationen vollständig ausgeglichen werden müssen. Die zelluläre Dehydrierung wird in einem fluidischen Gerät durchgeführt und mit kontinuierlicher hoher Durchsatzerzeugung von großen Tröpfchen integriert, die in flüssigem Stickstoff verglast sind. Diese eisfreie Kryokonservierungsmethode mit minimaler CPA-Toxizität eignet sich für große Zellmengen und führt zu einer erhöhten Hepatozytenlebensfähigkeit und Metabolisierungsfunktion im Vergleich zur klassischen langsam gefrierenden Kryokonservierung. Dieses Manuskript beschreibt die Methoden für eine erfolgreiche Bulk-Droplet-Verglasung im Detail.

Frisch isolierte primäre Hepatozyten aus fünf verschiedenen Rattenlebern wurden für einen direkten Vergleich der Massentropfenverglasung mit der klassischen Kryokonservierung unter Verwendung der in derLiteratur 4 berichteten herausragenden Slow-Freezing-Protokolle verwendet. 5. Kurz gesagt, die Hepatozyten wurden in UW mit BSA (2,2 mg/ml), Glukose (333 mM) und DMSO (10% v/v) ergänzt und mit einem kontrollierten Gefrierschrank eingefroren. Nach der Lagerung ...

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Bulk Droplet Vitrification for Primary Hepatocyte Preservation

Dieses Manuskript beschreibt eine eisfreie Kryokonservierungsmethode für große Mengen von Rattenhepatozyten, bei der Primärzellen mit kryoprotektiven Mitteln in geringer Konzentration vorinkubiert und in großen Tröpfchen verglast werden.

Bulk Droplet Vitrification für primäre HepatozytenKonservierung

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. ...

Vitrifikation wird in der Regel durch Toxizität von kryoprotektive Mittel behandelt. Und wieder in kleine Proben eingefügt, die schnell gekühlt werden können. Dieses Protokoll ermöglicht die Verglasung großer Zellmengen bei gleichzeitig geringer CPA-Konzentration während der Vorinkubation.Durch schnelle osmotische Dehydrierung wird der niedrige Zwischenkeller-CPA direkt vor der Vitrifizierung im Fluidgerät konzentriert. Dadurch entfällt die Notwendigkeit, toxische CPA-Konzentrationen vollständig auszudemtzuführen. Bulk-Tropfen-Vitrifikation kann lebensfähige und metabolisch aktive Hepatozyten für die Verwendung von Hepatozyten Transplantation und bio-künstliche Leber-Geräte, die unsere derzeit durch unzureichende Ergebnisse nach Kryokonservierung behindert.Diese Methode kann möglicherweise für die Verglasung anderer Zelltypen angepasst werden, die in großen Mengen kryokoniert werden müssen;z. B. Blutprodukte oder Stammzellen unter anderem. Um zu beginnen, machen Vitrifizierung Lösung 1 durch Hinzufügen von 40 Milligramm BSA zu 17,0 Milliliter der University of Wisconsin Solution. Verwenden Sie einen 0,22 Mikrometer-Filter, um die Lösung zu sterilisieren und bei vier Grad Celsius aufzubewahren.Erstellen Sie Vitrifizierungslösung 2, wie im Protokoll beschrieben. Und steril es durch einen 0,22 Mikrometer Filter filtern. 3,5 Milliliter sterilgefilterte V2-Lösung in eine Drei-Milliliter-Spritze geben und bei vier Grad Celsius lagern.Um die Bulk-Tröpfchen-Vitrifizierungsapparat vorzubereiten, zuerst entlang einer Seite der Mischnadeln äußere graue Hülse schneiden. Biegen Sie die Hülse auf, um sie von der Mischnadel zu entfernen. Schneiden Sie dann die Mischnadel auf eine Länge von 20 Millimetern und legen Sie ihren Cutoff-Auslass in eine 20-Spur-Injektionsnadel ein.Schieben Sie zwei 25-Millimeter-Silizium-Schlauchabschnitte über die Einlässe der Mischnadel. Und sichern Sie ihre Position mit Kleber. Sterilisieren Sie diese Baugruppe durch Autoklavieren.Füllen Sie einen sterilen Dewar-Kolben mit flüssigem Stickstoff. Und sterilisieren Sie die Außenseite mit Isopropanol, bevor Sie es in eine sterile Laminer-Flow-Zell-Kulturhaube legen. Achten Sie darauf, geeignete persönliche Schutzausrüstung zu tragen, da flüssiger Stickstoff schwere Verbrennungen verursachen kann.Um die Tröpfchensammelvorrichtung zu erstellen, legen Sie einen Trichter mit dem gleichen Außendurchmesser wie der Innendurchmesser des Dewar in ein 50 Milliliter konisches Rohr. Mit großen Zangen drücken Sie das Tröpfchensammelgerät langsam in den flüssigen Stickstoff in seiner endgültigen vertikalen Position. Stellen Sie sicher, dass das konische Rohr in vertikaler Position am unteren Rand des Dewar stagniert.Und der Flüssigstickstoffgehalt ist einen Zentimeter niedriger als der Rand des Trichters. Um eine Spritzenpumpe an einer vertikalen Position an der Wand der Zellkulturhaube zu montieren, binden Sie eine Schnur von den Füßen der Spritzenpumpe an Schrauben, die aus der Zellkultur-Haubewand herausragen. Legen Sie dann den flüssigen Stickstoff Dewar mit der Tröpfchensammelvorrichtung unter die vertikal montierte Spritzenpumpe.Nach Erhalt frisch isolierter Rattenhepatozyten, zählen Sie die Lagerkonzentration durch Tri-Pan-Blau-Ausschluss. Und übertragen Sie 40 Millionen lebensfähige Hepatozyten in eine 50 Milliliter konische Röhre. Zentrifugieren Sie die Hepatozyten bei 50 mal G für fünf Minuten ohne Pause.Aspirieren Sie den Überstand. Setzen Sie die Hepatozyten in 3,4 Millilitern V1-Lösung wieder aus. Und drei Minuten auf Eis brüten.Dann 150 Mikroliter DMSO und 150 Mikroliter EG hinzufügen; sanft mischen und drei Minuten lang wieder auf Eis brüten. 150 Mikroliter DMSO und 150 Mikroliter EG wieder zu den Hepatozyten geben und vorsichtig mischen. 3,5 Milliliter dieser Mischung in eine Drei-Milliliter-Spritze geben.Setzen Sie die Spritze mit vorbebrüten Hepatozyten und die Spritze mit V2-Lösung auf den Spritzenpumpenadapter. Befestigen Sie zwei Buchsen-Schleuse-Adapter an den Spritzen. Und schieben Sie die Siliziumschläuche der Mischnadelbaugruppe über die Widerhakenarmaturen.Legen Sie diese gesamte Baugruppe in die Spritzenpumpe. Drei Minuten nach der letzten Ausgabe von DMSO und EG zu den Hepatozyten, starten Sie die Pumpe mit zwei Milliliter pro Minute. Immerhin wurden dem flüssigen Stickstoff stopp die Pumpe Hepatozyten zugesetzt.Mit einer 20-Spur-Nadel, punktieren Sie 10 kleine Löcher in den Deckel eines 50 Milliliter konischen Rohr. Und wickeln Sie die Außenseite des Deckels mit einem flexiblen Film, wodurch ein Ventil entsteht, das das Entweichen von verdampfendem flüssigem Stickstoff ermöglicht. Um die verglasten Hepatozytentröpfchen zu sammeln, entfernen Sie zuerst den Trichter aus dem Dewar mit flüssigem Stickstoff.Als nächstes, mit langen Zangen, nehmen Sie das konische Rohr, das die Tröpfchen aus dem flüssigen Stickstoff enthält, und gießen Sie langsam den überschüssigen flüssigen Stickstoff aus dem konischen Rohr. Schließen Sie das konische Rohr mit dem durchlöcherten Deckel und legen Sie dann das geschlossene konische Rohr mit verglasten Hepatozytentröpfchen mit flüssigem Stickstoff direkt wieder in den Dewar. Schließlich übertragen Sie das konische Rohr aus dem flüssigen Stickstoff in einen flüssigen Stickstoffkrynotank.Nach der Herstellung der Rewarming-Lösung mit Saccharose- und DMEM-Hepatozyten-Kulturmedien verwenden Sie einen 0,22-Mikrometer-Filter, um sie zu sterilisieren. Dann auf 37 Grad Celsius erwärmen. Um die Hepatozyten wieder aufzuwärmen, entfernen Sie das konische Rohr mit verglasten Hepatozyten aus dem Kryotank und transportieren es in einem flüssigen Stickstoff Dewar in die Subkulturhaube.Lösen Sie die Kappe leicht und legen Sie das konische Rohr wieder in den flüssigen Stickstoff. Arbeiten Sie schnell, fügen Sie alle verglasten Hepatozytentröpfchen zu einem leeren Becher, dann fügen Sie schnell 100 Milliliter 37 Grad Celsius warmes Aufwärmlösung unter Rühren für 10 Sekunden. Wenn die Tröpfchen aus flüssigem Stickstoff entfernt werden, tritt das inest Einfrieren innerhalb von Sekunden auf, wenn die Tröpfchen nicht schnell wieder aufgewärmt werden.Daher ist es wichtig, die Rewarming-Medien direkt zu den Tröpfchen hinzuzufügen, während sie rühren. Teilen Sie die Rewarminglösung mit Hepatozyten in zwei 50 Milliliter konische Schläuche auf. Zentrifugieren Sie die Rohre für zwei Minuten bei 100 mal G bei vier Grad Celsius ohne Pause.Aspirieren Sie die Überstande, um ein Gesamtvolumen von 12,5 Millilitern zu hinterlassen, indem Sie die Graduierungsmarke der Röhre als Referenz verwenden. Um die Rewarming-Lösung zu 50% zu verdünnen, fügen Sie 12,5 Milliliter eiskaltes DMEM pro konischem Rohr hinzu. Drei Minuten lang wieder aufeisern und bebrüten.Um die Rewarminglösung auf 25% zu verdünnen, fügen Sie 25 Milliliter eiskaltes DMEM pro konischem Rohr hinzu. Nach fünf Minuten zentrifugieren bei 50 mal G bei vier Grad Celsius ohne Pause, den Überstand ansaugen und die Hepatozyten in zwei Millilitern des gewünschten Kulturmediums wieder aussetzen. Gemessen durch Tri-Pan-Blau-Ausschluss-Tests, die die Membranintegrität bestimmt, führte die Massentropfenverglasung zu einer direkten Hepatozyten-Lebensfähigkeit nach der Konservierung von 79%. Dies war signifikant höher als die 68%ige Lebensfähigkeit nach klassischer optimierter Kryokonservierung.Die Ausbeute der Bulk-Droplet-Vitrifizierung war 56%, was 10% höher und konsistenter als die klassische Kryokonservierung war. Mit Presto-Glue-Metabolisierungs-Assay in langfristigen College- und Sandwichkulturen wurde die metabolische Aktivität an den Hepatozyten gemessen, um nach der Massentröpfchenverglasung dann nach der klassischen Kryokonservierung deutlich höher zu sein. Albumin-Synthese, als der am weitesten verbreitete Parameter der synthetischen Funktion von Hepatozyten, war größer um fast das Zweifache nach Bulk-Droplet-Vitrifizierung, dann nach klassischer Kryokonservierung.Die Harnstoffproduktion wurde verwendet, um die Entgiftungsfunktion von Hepatozyten in einer einwöchigen Kultur zu messen. In bulk droplet verglasten Hepatozyten war die Harnstoffproduktion deutlich höher als bei klassischen Kryokonservenhepatozyten. Für konsistente Ergebnisse nach der Verglasung von Bulk-Droplet ist es wichtig, genau dem Timing während der Vorinkubation von CPAs und dem erneuten Aufwärmen zu folgen, wie in diesem Protokoll beschrieben.Nach dem Erneutaufwärmen der verglasten Hepatozytentröpfchen erhalten Sie am Ende eine bessere Größensuspension, die daher auf die gleiche Weise verwendet werden kann, als ob sie frisch isoliert wären. Als verbesserte Konservierungsmethode kann die Massentropfenverglasung die Verfügbarkeit für Forschung und klinische Anwendungen erhöhen.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Fluorescence detection methods for microfluidic droplet platforms

Fluoreszenz-Nachweisverfahren für Mikrofluidik-Tropfen-Plattformen

The development of microfluidic platforms for performing chemistry and biology has in large part been driven by a range of potential benefits that ...

Forschung

Biotechnik

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Mikrofluidik-Strömungskammern Mit Rekonstituierte Blut Hämostaseologie und Transfusions Platelet zu Modell<em&gt; In Vitro</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

Multicolor Fluorescence Detection for Droplet Microfluidics Using Optical Fibers

Mehrfarbenfluoreszenzdetektion für Droplet Mikrofluidik Verwendung von Optical Fibers

Fluorescence assays are the most common readouts used in droplet microfluidics due to their bright signals and fast time response. Applications such as ...

Circulating MicroRNA Quantification Using DNA-binding Dye Chemistry and Droplet Digital PCR

Zirkulierende MicroRNA Quantifizierung der Basis von DNA-bindenden Farbstoff Chemie und Droplet Digital-PCR

Circulating (of cell-free) microRNAs (miRNAs) are released from cells into the blood stream. The amount of specific microRNAs in the circulation has been ...

A Microfluidic Flow Chamber Model for Platelet Transfusion and Hemostasis Measures Platelet Deposition and Fibrin Formation in Real-time

Ein Mikrofluidik-Flow-Kammer-Modell für Platelet Transfusions und Hämostase Maßnahmen Platelet Deposition und Fibrinbildung in Echtzeit

Microfluidic models of hemostasis assess platelet function under conditions of hydrodynamic shear, but in the presence of anticoagulants, this analysis is ...

A Droplet-Based Microfluidic Approach and Microsphere-PCR Amplification for Single-Stranded DNA Amplicons

Ein Tröpfchen mikrofluidischen Ansatz und Mikrosphären-PCR Verstärkung für Single-Stranded DNA-Amplifikate

Droplet-based microfluidics enable the reliable production of homogeneous microspheres in the microfluidic channel, providing controlled size and ...

Morphometric Protocol for the Objective Assessment of Blastocyst Behavior During Vitrification and Warming Steps

Morphometrische Protokoll für die objektive Beurteilung der Blastozyste Verhalten während der Verglasung und wärmenden Schritte

This article describes the noninvasive method of blastocyst morphometry based on time-lapse microphotography for the accurate monitoring of a ...

Prospecting Microbial Strains for Bioremediation and Probiotics Development for Metaorganism Research and Preservation

Prospektion mikrobielle Stämme für Bioremediation und Probiotika Entwicklung für Metaorganismus Forschung und Konservierung

Pollution affects all biomes. Marine environments have been particularly impacted, especially coral reefs, one of the most sensitive ecosystems on Earth. ...

High Throughput Yeast Strain Phenotyping with Droplet-Based RNA Sequencing

Hefestamm-Phänotypisierung mit Droplet-basierter RNA-Sequenzierung mit hohem Durchsatz

The powerful tools available to edit yeast genomes have made this microbe a valuable platform for engineering. While it is now possible to construct ...

Primary Clarification of CHO Harvested Cell Culture Fluid using an Acoustic Separator

Primärklärung der CHO geernteten Zellkulturflüssigkeit mittels eines akustischen Separators

Primary clarification is an essential step in a biomanufacturing process for the initial removal of cells from therapeutic products within the harvested ...