Name: bulk droplet vitrification for primary hepatocyte preservation
Uploaded: 2019-10-25T13:00:00
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Financiamento dos Institutos Nacionais de Saúde dos EUA (R01DK096075, R01DK107875 e R01DK114506) e do Departamento de Defesa dos EUA (DoD RTRP W81XWH-17-1-0680) é muito reconhecido.

Os principais isolamentos hepatocitos para este protocolo foram realizados pelo Cell Resource Core (CRC) no Massachusetts General Hospital, Boston, Massachusetts, EUA. O protocolo animal (#2011N000111) foi aprovado pelo Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) do Massachusetts General Hospital.
1. Vitrificação de gotículas em massa
<ol><li>Prepare as soluções de vitrificação.
	<ol>
<li>Adicione 40 mg de albumina de soro bovina (BSA) a 17,0 mL da solução d...

<ol>
	<li>Carpentier, B., Gautier, A., Legallais, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Artificial+and+bioartificial+liver+devices:+present+and+future.">Artificial and bioartificial liver devices: present and future.</a> Gut. 58 (12), 1690-1702 (2009).</li><li>Fox, I. J., Chowdhury, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+transplantation:+Hepatocyte+transplantation.">Hepatocyte transplantation: Hepatocyte transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 4, 7-13 (2004).</li><li>Hughes, R. D., Mitry, R. R., Dhawan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Current+Status+of+Hepatocyte+Transplantation.">Current Status of Hepatocyte Transplantation.</a> Transplantation. 93 (4), 342-347 (2012).</li><li>St&#233;phenne, X., Najimi, M., Sokal, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hepatocyte+cryopreservation:+is+it+time+to+change+the+strategy.">Hepatocyte cryopreservation: is it time to change the strategy.</a> World Journal of Gastroenterology. 16 (1), 1-14 (2010).</li><li>Terry, C., Dhawan, A., Mitry, R. R., Lehec, S. C., Hughes, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimization+of+the+cryopreservation+and+thawing+protocol+for+human+hepatocytes+for+use+in+cell+transplantation.">Optimization of the cryopreservation and thawing protocol for human hepatocytes for use in cell transplantation.</a> Liver Transplantation. 16 (2), 229-237 (2010).</li><li>Pegg, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+cryopreservation.">Principles of cryopreservation.</a> Methods in Molecular Biology. 368, 39 (2007).</li><li>Baust, J. G., Gao, D., Baust, J. 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E., Mohamet, L., Ward, C. 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J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bulk+Droplet+Vitrification:+An+Approach+to+Improve+Large-Scale+Hepatocyte+Cryopreservation+Outcome.">Bulk Droplet Vitrification: An Approach to Improve Large-Scale Hepatocyte Cryopreservation Outcome.</a> Langmuir. , (2019).</li><li>Parmegiani, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sterilization+of+liquid+nitrogen+with+ultraviolet+irradiation+for+safe+vitrification+of+human+oocytes+or+embryos.">Sterilization of liquid nitrogen with ultraviolet irradiation for safe vitrification of human oocytes or embryos.</a> Fertility and Sterility. 94 (4), 1525-1528 (2010).</li><li>Best, B. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cryoprotectant+Toxicity:+Facts,+Issues,+and+Questions.">Cryoprotectant Toxicity: Facts, Issues, and Questions.</a> Rejuvenation Research. 18 (5), 422-436 (2015).</li></ol>

Criopreservação de hepatócitos por congelamento lento resulta em redução da viabilidade e função metabólica. Vitrificação oferece uma alternativa promissora para a criopreservação clássica, como lesão de congelamento é completamente evitado9. No entanto, a pré-incubação com CPAs é necessária para reduzir a taxa de resfriamento crítico8. Consequentemente, a vitrificação é dificultada pela toxicidadecpa 17 e limitada a pequenos ...

Perda de viabilidade celular e função metabólica após criopreservação de hepatócitos ainda é uma questão importante que limita as aplicações clínicas1,2,3. O método de referência da criopreservação de hepatocitos é o congelamento lento, que é realizado por pré-incubação dos hepatócitos com CPA (dimetil sulfoxida [DMSO], glicose e albumina) e subsequente congelamento da taxa controlada (em aproximadamente 1 °C/min) para temperaturas criogênicas4,5. Apesar de muitas otimizações relatadas, a toxicidade do CPA, juntamente com desequilíbrios osmóticos injuriosos durante o congelamento e o estresse mecânico da formação de gelo, continuam a ser inconvenientes fundamentais de congelamento lento6,7.
Vitrificação oferece uma vantagem sobre o congelamento lento em que a lesão devido à formação de gelo é completamente evitado por uma transição de fase direta da água para o estado de vidro6. No entanto, para atingir a temperatura de transição de vidro da água pura (-137 °C), a água deve ser resfriada a taxas na ordem de um milhão de graus Celsius por segundo (ou seja, a taxa crítica de resfriamento) para evitar a formação de gelo acima da temperatura de transição de vidro8 . A adição de CPAs pode abaixar a taxa refrigerando crítica e aumentar a temperatura de transição de vidro de soluções aquosas9. No entanto, mesmo com altas concentrações de CPA (por exemplo, 40% v/v DMSO ou maiores) taxas de resfriamento rápido são necessárias para vitrificação bem-sucedida8,9.
As taxas de resfriamento necessárias e altas concentrações de CPA resultam em duas grandes desvantagens da vitrificação. Primeiro, para permitir o resfriamento rápido, as amostras devem ter uma baixa massa térmica. Em segundo lugar, para atingir altas concentrações de CPA, evitando lesões osmóticas, os CPAs devem ser lentamente introduzidos e totalmente equilibrados entre os compartimentos intra e extracelular6. Isso aumenta o tempo de exposição das células para CPAs tóxicos. Juntos, isso torna a vitrificação um processo complicado que se limita a algumas amostras de pequeno porte (microlitros) de cada vez. A vitrificação de gotículas foi proposta como uma solução potencial para essas restrições. Ao expor gotículas minúsculas carregadas de células (nanolitros) a nitrogênio líquido, a taxa de resfriamento é significativamente aumentada, o que, consequentemente, permite uma redução considerável na concentração de CPA10,11,12 13,14. Embora vários bicos geradores de gotículas de alta frequência possam ser usados simultaneamente, o tamanho das gotículas extremamente pequenalimita a taxa de produção a microlitros por minuto10,o que impede a vitrificação eficiente de grandes células volumes com magnitudes maiores taxas de processamento na ordem de mililitros por minuto.
Recentemente, foi demonstrado que essas limitações inerentes à vitrificação podem ser superadas pela vitrificação de gotículas em massa15. Este novo método aproveita a desidratação osmótica rápida para concentrar uma concentração intracelular de CPA de 7,5% v/v etilenoglicol e DMSO imediatamente precedendo a vitrificação, eliminando a necessidade de equilíbrio total das concentrações tóxicas de CPA. A desidratação celular é realizada em um dispositivo fluídico por uma breve exposição dos hepatócitos a uma alta concentração extracelular de CPA. Embora esta exposição cause a desidratação osmótica rápida, é demasiado curta para que a concentração elevada do CPA difunda nas pilhas. Imediatamente após a desidratação, as células são carregadas em gotículas que são diretamente vitrificadas em nitrogênio líquido. Este método elimina a necessidade de captação intracelular completa de altas concentrações de CPA, enquanto a alta concentração de CPA extracelular permite a vitrificação de gotículas de grande porte, resultando em altos volumes de taxa de rendimento com toxicidade mínima de CPA.
A vitrificação de gotículas melhora a viabilidade direta e de longo prazo após a preservação, bem como a morfologia e a função metabólica dos hepatócitos primários de ratos em comparação com a criopreservação clássica por15de congelamento lento. Este manuscrito fornece os detalhes metodológicos para vitrificação de gotículas em massa de hepatócitos primários de ratos.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>BD Disposable 3 mL Syringes with Luer-Lok Tips</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-823-435</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Beaker</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS1000-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Belzer UW Cold Storage Solution</td>
			<td>Bridge to Life</td>
			<td>BUW-001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A7906</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cole-Parmer Female Luer to 1/16&#34; low-profile semi-rigid tubing barb, PP</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-45508-12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cryogentic stroage tank / Cryotank</td>
			<td>Chart Industries</td>
			<td>MVE 800</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl sulfoxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8418</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, powder, high glucose, pyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>12800-082</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene Glycol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>107-21-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extra long forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-316C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fisherbrand Higher-Speed Easy Reader Plastic Centrifuge Tubes - Flat top closure</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>06-443-18</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fishing line</td>
			<td>Stren</td>
			<td>SOFS4-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid nitrogen</td>
			<td>Airgas</td>
			<td>7727-37-9</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Masterflex L/S Platinum-Cured Silicone Tubing, L/S 14</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-96410-14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mix Tips, For Use With 3HPW1</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>3WRL7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nalgene Polypropylene Powder Funnel</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>4252-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle 20 ga</td>
			<td>Becton Dickinson (BD)</td>
			<td>305175</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M - Flexible film</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P7793-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Razor Blade</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-640</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spatula</td>
			<td>Cole-Parmer</td>
			<td>EW-06369-18</td>
			<td>&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Steriflip sterile filter</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SE1M179M6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose (Crystalline/Certified ACS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S5-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe Pump</td>
			<td>New Era Pump Systems Inc.</td>
			<td>NE-1000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo-Flask Benchtop Liquid Nitrogen Container</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>2122</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

bulk droplet vitrification for primary hepatocyte preservation

A vitrificação é uma alternativa promissora sem gelo para a criopreservação clássica de congelamento lento (a aproximadamente 1 °C/min) de amostras biológicas. A vitrificação requer taxas de resfriamento extremamente rápidas para alcançar a transição da água para a fase de vidro, evitando a formação de gelo prejudicial. Embora a pré-incubação com agentes crioprotetores (CPA) possa reduzir a taxa crítica de resfriamento de amostras biológicas, altas concentrações são geralmente necessárias para permitir a criopreservação sem gelo por vitrificação. Como resultado, a vitrificação é dificultada pela toxicidade do CPA e restrita a pequenas amostras que podem ser resfriadas rapidamente. Demonstrou-se recentemente que estas limitações inerentes podem ser superadas pela vitrificação da gota maioria. Usando este método novo, as pilhas são pre-incubadas primeiramente com uma baixa concentração intracelular do CPA. Aproveitando a desidratação osmótica rápida, o CPA intracelular está concentrado diretamente à frente da vitrificação, sem a necessidade de equilibrar totalmente as concentrações tóxicas de CPA. A desidratação celular é realizada em um dispositivo fluídico e integrada com a geração contínua de alta taxa de produção de gotículas de grande porte que são vitrificadas em nitrogênio líquido. Este método de criopreservação sem gelo com toxicidade mínima de CPA é adequado para grandes quantidades celulares e resulta em maior viabilidade hepatocito e função metabólica em comparação com a criopreservação clássica de congelamento lento. Este manuscrito descreve os métodos para vitrificação bem-sucedida de gotículas em massa em detalhes.

Hepatócitos primários recém-isolados de cinco fígados de rato diferentes foram usados para uma comparação direta da vitrificação de gotículas em massa com a criopreservação clássica usando os proeminentes protocolos de congelamento lento relatados na literatura4, 5.Em suma, os hepatócitos foram suspensos em UW complementados com BSA (2,2 mg/mL), glicose (333 mM) e DMSO (10% v/v) e congelados por meio de um congelador de taxa controlada. Após o arma...

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Bulk Droplet Vitrification for Primary Hepatocyte Preservation

Este manuscrito descreve um método de criopreservação sem gelo para grandes quantidades de hepatócitos de ratos em que as células primárias são pré-incubadas com agentes crioprotetores em baixa concentração e vitrificadas em grandes gotículas.

Vitrificação de gotículas em massa para preservação primária de hepatócitos

Vitrification is a promising ice-free alternative for classic slow-freezing (at approximately 1 &#176;C/min) cryopreservation of biological samples. ...

A vitrificação é tipicamente tratada pela toxicidade dos agentes crioprotetores. E reinserido em pequenas amostras que podem ser resfriadas rapidamente. Este protocolo permite a vitrificação de grandes quantidades celulares enquanto usa uma baixa concentração de CPA durante a pré-incubação.Usando desidratação osmótica rápida, o CPA inter-adega baixo está concentrado no dispositivo fluido diretamente antes da vitrificação. Isso elimina a necessidade de equilibrar totalmente as concentrações tóxicas de CPA. A vitrificação de gotículas em massa pode fornecer hepatócitos viáveis e metabolicamente ativos para o uso de transplante de hepatócitos e dispositivos hepáticos bio-artificiais que atualmente dificultam por desfechos inadequados após a criopreservação.Este método pode potencialmente ser adaptado para vitrificação de outros tipos de células que precisam ser preservados em grandes quantidades; como produtos sanguíneos ou células-tronco, entre outros. Para começar, faça a solução de vitrificação 1 adicionando 40 miligramas de BSA a 17,0 mililitros da University of Wisconsin Solution. Use um filtro de 0,22 micrômetro para filtrar a solução e armazenar a quatro graus Celsius.Faça a solução de vitrificação 2 conforme descrito no protocolo. E filtrar estéril através de um filtro de 0,22 micrômetros. Carregue 3,5 mililitros de solução V2 filtrada estéril em uma seringa de três mililitros e armazene a quatro graus Celsius.Para preparar o aparelho de vitrificação de gota a granel, primeiro, corte ao longo de um lado da manga cinza exterior das agulhas de mistura. Dobre a manga aberta para removê-la da agulha de mistura. Em seguida, corte a agulha de mistura para um comprimento de 20 milímetros e insira sua saída de corte em uma agulha de injeção de calibre 20.Deslize duas seções de tubos de silício de 25 milímetros sobre as entradas da agulha de mistura. E garantir sua posição com cola. Esterilize este conjunto autoclaving.Encha um frasco estéril de Dewar com nitrogênio líquido. E esterilize o exterior com isopropanol antes de colocá-lo em uma estéril capa de cultura laminer. Certifique-se de usar equipamentos de proteção individual adequados, pois o nitrogênio líquido pode causar queimaduras graves.Para criar o dispositivo de coleta de gotículas, insira um funil com o mesmo diâmetro externo do diâmetro interno do Dewar, em um tubo cônico de 50 mililitros. Usando grandes fórceps, pressione lentamente o dispositivo de coleta de gotículas para baixo no nitrogênio líquido em sua posição vertical final. Certifique-se de que o tubo cônico repousa na posição vertical na parte inferior do Dewar.E o nível de nitrogênio líquido é um centímetro mais baixo que a borda do funil. Para montar uma bomba de seringa em uma posição vertical na parede do capô de cultura celular, amarre uma corda dos pés da bomba de seringa aos parafusos salientes da parede do capô da cultura celular. Em seguida, coloque o nitrogênio líquido Dewar com o dispositivo de coleta de gotículas sob a bomba de seringa verticalmente montada.Após a obtenção de hepatócitos de rato recém-isolados, conte a concentração de estoque por exclusão azul tri-pan. E transferir 40 milhões de hepatócitos viáveis para um tubo cônico de 50 mililitros. Centrifugar os hepatócitos a 50 vezes G por cinco minutos sem pausa.Aspire o supernatante. Suspenda os hepatócitos em 3,4 mililitros da Solução V1. E incubar no gelo por três minutos.Em seguida, adicione 150 microliters de DMSO e 150 microliters de EG;misture suavemente e incubar no gelo novamente por três minutos. Adicione 150 microliters de DMSO e 150 microliters de EG aos hepatócitos novamente e misture suavemente. Carregue 3,5 mililitros desta mistura em uma seringa de três mililitros.Insira a seringa com hepatócitos pré-incubados e a seringa com solução V2 no adaptador da bomba de seringa. Conecte dois adaptadores femininos de mangueira-barb Luer Lock às seringas. E deslize a tubulação de silicone do conjunto de agulhas de mistura sobre os encaixes de barb.Coloque toda essa montagem na bomba de seringa. Três minutos após a última edição de DMSO e EG para os hepatócitos, inicie a bomba a dois mililitros por minuto. Depois de todos os hepatócitos foram adicionados ao nitrogênio líquido parar a bomba.Usando uma agulha calibre 20, puna 10 pequenos furos na tampa de um tubo cônico de 50 mililitros. E enrole o lado de fora da tampa com um filme flexível, criando uma válvula que permitirá a fuga da evaporação do nitrogênio líquido restante. Para coletar as gotículas de hepatócito vitrificadas, primeiro remova o funil do Dewar com nitrogênio líquido.Em seguida, com fórceps longos, retire o tubo cônico que contém as gotículas do nitrogênio líquido, e despeje lentamente o excesso de nitrogênio líquido do tubo cônico. Feche o tubo cônico com a tampa perfurada e, em seguida, coloque diretamente o tubo cônico fechado com gotículas de hepatócitas vitrificadas de volta no Dewar com nitrogênio líquido. Finalmente, transfira o tubo cônico do nitrogênio líquido para um criotank de nitrogênio líquido.Depois de fazer a solução de reaquecimento com sacarose e mídia de cultura hepatócida DMEM, use um filtro de 0,22 micrômetro para filtrar estéril. Em seguida, aqueça-o a 37 graus Celsius. Para reaquecir os hepatócitos remova o tubo cônico com hepatócitos vitrificados do criotank e transporte-o em um nitrogênio líquido Dewar para a subcultura.Solte levemente a tampa e coloque o tubo cônico de volta no nitrogênio líquido. Trabalhando rapidamente, adicione todas as gotículas de hepatócito vitrificadas a um béquer vazio, em seguida, adicione rapidamente 100 mililitros de solução de reaquecimento quente de 37 graus Celsius enquanto mexe por 10 segundos. Quando as gotículas são removidas do congelamento intra-est de nitrogênio líquido ocorre em segundos se as gotículas não forem rapidamente recasadas.Portanto, é fundamental adicionar diretamente a mídia de reaquecimento às gotículas enquanto mexe. Divida a solução de reaquecimento com hepatócitos em dois tubos cônicos de 50 mililitros. Centrifugar os tubos por dois minutos a 100 vezes G a quatro graus Celsius sem quebrar.Aspire os supernantes para deixar um volume total de 12,5 mililitros usando a marca de graduação do tubo como referência. Para diluir a solução de reaquecimento a 50% adicione 12,5 mililitros de DMEM gelado por tubo cônico. Suspenda e incuba no gelo por três minutos.Para diluir a solução de reaquecimento a 25% adicione 25 mililitros de DMEM gelado por tubo cônico. Depois de centrifugar por cinco minutos a 50 vezes G a quatro graus Celsius sem pausa, aspirar o supernatário e suspender os hepatócitos em dois mililitros do meio de cultura desejado. Quando medido por testes de exclusão azul tri-pan, que determina a integridade da membrana, a vitrificação de gotículas em massa resultou em uma viabilidade hepatócida pós-preservação direta de 79%Esta foi significativamente maior do que a viabilidade de 68% após a criopreservação clássica otimizada.O rendimento da vitrificação de gotículas a granel foi de 56%, 10% maior e mais consistente que a criopreservação clássica. Usando o ensaio de metabolização de pré-cola em culturas universitárias e sanduíches de longo prazo, a atividade metabólica nos hepatócitos foi medida para ser significativamente maior após a vitrificação de gotículas em massa, em seguida, após a criopreservação clássica. A síntese de albumina, como o parâmetro mais utilizado da função sintética dos hepatocitos, foi maior em quase duas vezes após a vitrificação de gotículas a granel, depois da criopreservação clássica.A produção de ureia foi usada para medir a função de desintoxicação de hepatócitos em uma cultura de uma semana. Em hepatocitos vitrificados a granel, a produção de ureia foi significativamente maior do que a dos hepatócitos criopreservados clássicos. Para resultados consistentes após a vitrificação de gotículas em massa, é importante acompanhar exatamente o tempo durante a pré-incubação de CPAs e reaquecimento conforme detalhado neste protocolo.Depois de reaquecimento das gotículas de hepatócitas vitrificadas, você acabará com uma suspensão de tamanho melhor que, portanto, pode ser usada da mesma forma como se estivessem recém-isoladas. Como um método de preservação melhorado, a vitrificação de gotículas em massa pode aumentar a disponibilidade pri-ma para pesquisas e aplicações clínicas.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

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Bioengenharia

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Prospecção de cepas microbianas para desenvolvimento de bioremediação e probióticos para pesquisa e preservação de metaorganismos

Pollution affects all biomes. Marine environments have been particularly impacted, especially coral reefs, one of the most sensitive ecosystems on Earth. ...

High Throughput Yeast Strain Phenotyping with Droplet-Based RNA Sequencing

Fenotipagem de tensão de levedura de alta produtividade com sequenciamento de RNA baseado em gotículas

The powerful tools available to edit yeast genomes have made this microbe a valuable platform for engineering. While it is now possible to construct ...

Primary Clarification of CHO Harvested Cell Culture Fluid using an Acoustic Separator

Esclarecimento Primário do Fluido de Cultura Celular Colhida cho usando um separador acústico

Primary clarification is an essential step in a biomanufacturing process for the initial removal of cells from therapeutic products within the harvested ...