Name: implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice
Uploaded: 2019-12-21T10:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice at JoVE.com

Denne forskning blev finansieret af Ligue genevoise contre Le cancer (til V.S.-B.) og af Center for Biomedical Imaging (CIBM) af universiteter og hospitaler i Genève og Lausanne (til D.J.C., O.B. og S.G.).

Alle de procedurer, der er beskrevet nedenfor, blev godkendt af Udvalget for institutionel dyrepasning og-anvendelse og af dyrlæge statens kontor i Genève, Schweiz (tilladelse GE/106/16). MPM Cell line H2052/484 blev etableret og karakteriseret i vores laboratorium som beskrevet i artiklen af Colin DJ og et al.23. Kort, H2052/484 cellelinje blev etableret fra en thorax tumor opnået efter en intrapleural injektion af NCI-H2052 (ATCC) celler i immunodedygtige Nude mus.
1...

<ol>
	<li>Grishman, E., Cohen, S., Salomon, M. I., Churg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+lesions+in+acute+rheumatic+fever.">Renal lesions in acute rheumatic fever.</a> The American Journal of Pathology. 51 (6), 1045-1061 (1967).</li><li>Mossman, B. T., Gee, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asbestos-related+diseases.">Asbestos-related diseases.</a> The New England Journal of Medicine. 320 (26), 1721-1730 (1989).</li><li>Pass, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asbestos+exposure,+pleural+mesothelioma,+and+serum+osteopontin+levels.">Asbestos exposure, pleural mesothelioma, and serum osteopontin levels.</a> The New England Journal of Medicine. 353 (15), 1564-1573 (2005).</li><li>Allen, L. P., Baez, J., Stern, M. E. C., Takahashi, K., George, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+and+the+Economic+Effect+of+Asbestos+Bans+and+Decline+in+Asbestos+Consumption+and+Production+Worldwide.">Trends and the Economic Effect of Asbestos Bans and Decline in Asbestos Consumption and Production Worldwide.</a> The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (3), (2018).</li><li>LaDou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+a+global+ban+on+asbestos.">The case for a global ban on asbestos.</a> Environmental Health Perspectives. 118 (7), 897-901 (2010).</li><li>Soeberg, M., Vallance, D. A., Keena, V., Takahashi, K., Leigh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Australia's+Ongoing+Legacy+of+Asbestos:+Significant+Challenges+Remain+Even+after+the+Complete+Banning+of+Asbestos+Almost+Fifteen+Years+Ago.">Australia's Ongoing Legacy of Asbestos: Significant Challenges Remain Even after the Complete Banning of Asbestos Almost Fifteen Years Ago.</a> The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (2), (2018).</li><li>Glynn, M. E., Keeton, K. A., Gaffney, S. H., Sahmel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Asbestos+Fiber+Concentrations+and+Long-Term+Trends+in+Pleural+Mesothelioma+Incidence+between+Urban+and+Rural+Areas+in+the+United+States+(1973-2012).">Ambient Asbestos Fiber Concentrations and Long-Term Trends in Pleural Mesothelioma Incidence between Urban and Rural Areas in the United States (1973-2012).</a> Risk Analysis. 38 (3), 454-471 (2018).</li><li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+trend+analysis+on+malignant+mesothelioma+in+China.">Epidemiology and trend analysis on malignant mesothelioma in China.</a> The Chinese Journal of Cancer Research. 29 (4), 361-368 (2017).</li><li>Chernova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Fiber+Carbon+Nanotubes+Replicate+Asbestos-Induced+Mesothelioma+with+Disruption+of+the+Tumor+Suppressor+Gene+Cdkn2a+(Ink4a/Arf).">Long-Fiber Carbon Nanotubes Replicate Asbestos-Induced Mesothelioma with Disruption of the Tumor Suppressor Gene Cdkn2a (Ink4a/Arf).</a> Current Biology. 27 (21), 3302-3314 (2017).</li><li>Fukushima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinogenicity+of+multi-walled+carbon+nanotubes:+challenging+issue+on+hazard+assessment.">Carcinogenicity of multi-walled carbon nanotubes: challenging issue on hazard assessment.</a> The Journal of Occupational Health. 60 (1), 10-30 (2018).</li><li>Robinson, B. W., Musk, A. W., Lake, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> The Lancet. 366 (9483), 397-408 (2005).</li><li>Ricciardi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+malignant+pleural+mesothelioma:+an+international+guidelines+review.">Surgery for malignant pleural mesothelioma: an international guidelines review.</a> The Journal of Thoracic Diseases. 10, 285-292 (2018).</li><li>Hiddinga, B. I., Rolfo, C., van Meerbeeck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesothelioma+treatment:+Are+we+on+target?+A+review.">Mesothelioma treatment: Are we on target? A review.</a> The Journal of Advanced Research. 6 (3), 319-330 (2015).</li><li>Kim, J., Bhagwandin, S., Labow, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+peritoneal+mesothelioma:+a+review.">Malignant peritoneal mesothelioma: a review.</a> Annals of Translational Medicine. 5 (11), 236 (2017).</li><li>Ampollini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-chemotherapy+reduces+recurrence+of+malignant+pleural+mesothelioma:+an+experimental+setting.">Immuno-chemotherapy reduces recurrence of malignant pleural mesothelioma: an experimental setting.</a> The European Journal of Cardiothoracic Surgery. 35 (3), 457-462 (2009).</li><li>de Jong, M., Essers, J., van Weerden, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+preclinical+tumour+models:+improving+translational+power.">Imaging preclinical tumour models: improving translational power.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (7), 481-493 (2014).</li><li>Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+animal+models+and+clinical+trials+in+cancer+treatment.">Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment.</a> The American Journal of Translational Research. 6 (2), 114-118 (2014).</li><li>Mazzocchi, A. R., Rajan, S. A. P., Votanopoulos, K. I., Hall, A. R., Skardal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+patient-derived+3D+mesothelioma+tumor+organoids+facilitate+patient-centric+therapeutic+screening.">In vitro patient-derived 3D mesothelioma tumor organoids facilitate patient-centric therapeutic screening.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2886 (2018).</li><li>Gengenbacher, N., Singhal, M., Augustin, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+mouse+solid+tumour+models:+status+quo,+challenges+and+perspectives.">Preclinical mouse solid tumour models: status quo, challenges and perspectives.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (12), 751-765 (2017).</li><li>Kanemura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+response+assessment+with+18F-FDG-PET/CT+is+superior+to+modified+RECIST+for+the+evaluation+of+response+to+platinum-based+doublet+chemotherapy+in+malignant+pleural+mesothelioma.">Metabolic response assessment with 18F-FDG-PET/CT is superior to modified RECIST for the evaluation of response to platinum-based doublet chemotherapy in malignant pleural mesothelioma.</a> The European Journal of Radiology. 86, 92-98 (2017).</li><li>Truong, M. T., Viswanathan, C., Godoy, M. B., Carter, B. W., Marom, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+pleural+mesothelioma:+role+of+CT,+MRI,+and+PET/CT+in+staging+evaluation+and+treatment+considerations.">Malignant pleural mesothelioma: role of CT, MRI, and PET/CT in staging evaluation and treatment considerations.</a> Seminars in Roentgenology. 48 (4), 323-334 (2013).</li><li>MacArthur Clark, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3Rs+in+research:+a+contemporary+approach+to+replacement,+reduction+and+refinement.">The 3Rs in research: a contemporary approach to replacement, reduction and refinement.</a> The British Journal of Nutrition. 120, 1-7 (2018).</li><li>Colin, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Model+of+Human+Malignant+Mesothelioma+in+Athymic+Mice.">Experimental Model of Human Malignant Mesothelioma in Athymic Mice.</a> The International Journal of Molecular Sciences. 19 (7), (2018).</li><li>Fueger, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+animal+handling+on+the+results+of+18F-FDG+PET+studies+in+mice.">Impact of animal handling on the results of 18F-FDG PET studies in mice.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 47 (6), 999-1006 (2006).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissues+in+different+anatomical+sites+can+sculpt+and+vary+the+tumor+microenvironment+to+affect+responses+to+therapy.">Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy.</a> Molecular Therapy. 22 (1), 18-27 (2014).</li><li>Beliz&#225;rio, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodeficient+mouse+models:+An+overview.">Immunodeficient mouse models: An overview.</a> The Open Immunology Journal. 2, 79-85 (2009).</li><li>Jackaman, C., Yeoh, T. L., Acuil, M. L., Gardner, J. K., Nelson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+mesothelioma+induces+locally-proliferating+IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+)+M3+macrophages+that+can+be+selectively+depleted+by+chemotherapy+or+immunotherapy.">Murine mesothelioma induces locally-proliferating IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+) M3 macrophages that can be selectively depleted by chemotherapy or immunotherapy.</a> Oncoimmunology. 5 (6), 1173299 (2016).</li><li>James, M. L., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+imaging+primer:+modalities,+imaging+agents,+and+applications.">A molecular imaging primer: modalities, imaging agents, and applications.</a> Physiological Reviews. 92 (2), 897-965 (2012).</li><li>Kenny, L. M., Aboagye, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+translation+of+molecular+imaging+agents+used+in+PET+studies+of+cancer.">Clinical translation of molecular imaging agents used in PET studies of cancer.</a> Advances in Cancer Research. 124, 329-374 (2014).</li></ol>

Dette papir beskriver en oprindelig ortotopisk model af MPM H2052/484 celler injiceres i pleural hulrum af athymic mus og en metode til overvågning af små dyr PET/CT Imaging. Denne model kan gennemføres med moderat dyre håndtering og kirurgi færdigheder og viser en meget god udvikling sats. Det giver mulighed for en stor eksperimentel vindue på omkring 10 uger i ubehandlede mus og ikke-invasiv langsgående påvisning af tumorer så tidligt som 2 uger efter injektion.
Orthotopic modeller ...

Malign pleural mesotheliom (MPM) er en kræft oftest forbundet med eksponeringen for asbestfibre1,2,3. Selv om asbest er blevet forbudt i de fleste vestlige lande4,5,6, forekomsten af MPM er stadig stigende7,8. For nylig tyder eksponering af mus på Carbon Nanorør, at de kan resultere i en betydelig sundhedsrisiko i mennesker9,10. Dataene tyder på, at eksponering for disse produkter kan forårsage kronisk inflammation og molekylære ændringer (f. eks tab af tumor-suppressor veje), der ligger til grund for progression til malign lungehindekræft. I øjeblikket er multiwall Carbon Nanorør et af de vigtigste produkter af nanoteknologi og er i stigende grad indarbejdet i forskellige produkter som kompositter, energi lagrings materialer, medicin, elektronik og miljømæssige afhjælpnings materialer.
MPM er en kræft med dårlig prognose, og de fleste patienter dør inden for to år efter diagnosen på grund af en begrænset effekt af de nuværende behandlingsmetoder11. Valget af behandling for MPM afhænger af kræft scenen. For de fleste tidlige fase MPM (fase 1 og muligvis nogle fase 2 eller 3 tumorer), den kliniske tilgang er en multimodal terapi, herunder kirurgisk resektion af tumorer, forbundet til strålebehandling og kemoterapi12. En kombineret kemoterapi med Cisplatin og pemetrexed er indiceret til behandling af de fleste patienter diagnosticeret med fremskreden lokalt invasiv sygdom, der ikke er modtagelig for kirurgisk resektion, eller som ellers ikke er kandidater til helbredende kirurgi13,14. Der er derfor et presserende behov for at udvikle mere effektive behandlinger for MPM-patienter. Der er dog få validerede in vivo-dyremodeller, der afspejler MPM'S kliniske relevans. Flere murine MPM modeller er blevet udviklet, men de fleste af dem ikke trofast rekapitulere de komplekse aspekter af MPM tumor mikromiljø15,16,17,18. Brugen af asbest-induceret MPM i mus, genmanipulerede MPM-musemodeller eller modeller af syngeneisk transplantation af murine MPM-cellelinjer er begrænset af grundlæggende fænotypiske og funktionelle forskelle og derfor dårligt oversætte nye opdagelser til klinikken. Andre prækliniske murine MPM-modeller er for det meste afhængige af subkutane eller peritoneale xenografter af humane cellelinjer i immundefekt mus. Selv om disse modeller er lette at overvåge og levere grundlæggende data, er mikromiljøet af disse xenografter ikke så sammenlignelige med humane tumorer, der hæmmer den translationelle effekt i de fleste af disse prækliniske studier17,19. Omvendt, ortotopisk xenografter bedre afspejle patientens tumor adfærd og respons på behandling, da de er omgivet med en lignende mikromiljø som den, der findes i den oprindelige tumor site16.
Molekylær billeddannelse med [18F] FDG-PET/CT er den foretrukne metode til at overvåge sygdomsprogression i længderetningen hos patienter med MPM20,21. Derfor, ty til denne ikke-invasive Imaging metode i høj grad fremmer oversættelsen af prækliniske undersøgelser til kliniske forsøg16,22. Desuden bidrager det til at reducere det krævede antal dyr, da hvert dyr repræsenterer sin egen kontrol over tid.
I denne artikel præsenterer vi en pålidelig ortotopisk xenograft MPM model opnået efter injektion af den humane MPM cellelinje H2052/484 ind i pleural hulrum af athymic mus. Kombineret med [18F] FDG-PET/CT Imaging, denne model er en værdifuld og reproducerbar metode til at studere funktionelle og mekanistiske virkninger af nye diagnostiske strategier og behandlinger for menneskelig MPM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-mice bed</td>
			<td>Minerve</td>
			<td></td>
			<td>bed for mice imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Athymic Nude-Foxn1n nu/nu</td>
			<td>Envigo, Huntingdon, UK</td>
			<td>6907F</td>
			<td>immunodeficient mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Mundipharma Medical Company, CH</td>
			<td>111131</td>
			<td>polyvidone iodine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>14190094</td>
			<td>Buffer for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>PAA Laboratories, Pasching, Austria</td>
			<td>A15-101</td>
			<td>cell culture medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>324826</td>
			<td>syringe for cell injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td>antibiotics for cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>61870010</td>
			<td>basal cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic (Buprenorphin 0.3 mg/mL)</td>
			<td>Alloga SA, CH</td>
			<td>700320</td>
			<td>opioid analgesic product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triumph PET/SPECT/CT</td>
			<td>Trifoil, Chatsworth, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>imaging equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>25050014</td>
			<td>enzymatic cell dissociation buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon S 2%</td>
			<td>Milian, Vernier, CH</td>
			<td>972472</td>
			<td>disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vivoquant</td>
			<td>Invicro, Boston, MA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice

Malign pleural mesotheliom (MPM) er en sjælden og aggressiv tumor, der opstår i mesothelium, som dækker lungerne, hjertet og brysthulen. MPM-udvikling er hovedsageligt forbundet med asbest. Behandlinger giver kun beskeden overlevelse, da median overlevelsesgennemsnittet er 9 – 18 måneder fra diagnosetidspunktet. Derfor skal der identificeres mere effektive behandlinger. De fleste data, der beskriver nye terapeutiske mål, blev indhentet fra in vitro-eksperimenter og skal valideres i pålidelige in vivo prækliniske modeller. Denne artikel beskriver en sådan pålidelig MPM ortotopisk model opnået efter injektion af en menneskelig MPM cellelinje H2052/484 i pleural hulrum af immunodedygtige athymic mus. Transplantation i ortotopisk site gør det muligt at studere progression af tumor i det naturlige in vivo miljø. Positron emission tomografi/computertomografi (PET/CT) molekylær billeddannelse ved hjælp af den kliniske [18f] -2-fluoro-2-deoxy-D-glucose ([18f] FDG) radiotracer er den diagnosemetode til at undersøge patienter med MPM. [18F] FDG-PET/CT blev derfor anvendt til at overvåge sygdomsprogression af H2052/484 ortotopisk-modellen i længderetningen. Denne teknik har en høj 3R potentiale (reduce antallet af dyr, refine at mindske smerter og ubehag, og rErstat dyreforsøg med alternativer), da tumor udvikling kan overvåges ikke-invasivt og antallet af dyr, der kræves kunne reduceres betydeligt.
Denne model viser en høj udviklingsrate, en hurtig tumorvækst, er omkostningseffektiv og giver mulighed for hurtig klinisk oversættelse. Ved at bruge denne ortotopisk xenograft MPM-model kan forskerne vurdere biologiske reaktioner af en pålidelig MPM-model efter terapeutiske indgreb.

Den H2052/484 ortotopisk model Orthotopic MPM modeller ved intra-thorax injektion af dyrkede kræftceller, især H2052/484 celler er relativt let at setup. De forskellige trin beskrevet ovenfor kræver kun beskeden cellekultur viden og kirurgi trin er tilgængelige for moderat uddannet dyreforsøg. Nøgne mus og celler bør manipuleres under sterile forhold for at maksimere resultatet af implantationer. Ved omhyggeligt at følge denne protokol, som involverer kort bedøvelse og minimal kirurgi, vi st?...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice at JoVE.com

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Denne artikel beskriver genereringen af en ortotopisk musemodel af humant pleural mesotheliom ved implantation af H2052/484 Mesotheliom celler i pleural hulrum af immunkompromitterede athymic mus. Den langsgående overvågning af udviklingen af intrapleural tumorer blev vurderet af ikke-invasiv multimodal [18F] -2-fluoro-2-Deoxy-D-glucose Positron-emissions tomografi og computertomografi-billeddannelse.

Implantation og overvågning af PET/CT af en Ortotopisk model af humant pleural Mesothelioma i Athymic mus

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...

Denne metode kan bidrage til at besvare centrale spørgsmål i forbindelse med udvikling, behandling og diagnosticering af human pleural lungehindekræft. Den største fordel ved denne pålidelige prækliniske ortopiske model er, at den replikerer den menneskelige sygdomsprogression og patologi i et mikromiljø tæt på det, der findes hos patienter med pleural lungehindekræft. Derfor er denne uvurderlige model af stor betydning, og brugen af ikke-invasiv molekylær billeddannelse muliggør overvågning i længderetningen i overensstemmelse med de tre R-konceptet.Før du begynder at forberede anæstesisystemet og det kirurgiske område i en laminar flow hætte ved at sprøjte alle overflader med desinfektionsmiddel. Anvend de mikroisolerede SPF-bure i den desinficerede flowhætte. Placer en varmepude, povidone-jod løsning 30 gauge Hamilton sprøjte, gaze og vatpinde kirurgi instrumenter og mikropipetter og tips i laminar flow hætte.Når musen er korrekt bedøvet subkutanely injicere 0,05 mg / kg Buprinorphin for post-operative pan relief. Derefter placere musen på sin højre side på toppen af varmepuden og rense det kirurgiske område med povidone-jod opløsning og gøre en 5 millimeter snit af huden. Ryd det omgivende fedt og muskler med stump saks til at udsætte ribbenene.Homogeniser celleophænget og belastning 50 mikroliter i Hamilton sprøjten og sørg for at undgå luftbobler. Tør nålen af med 70 % alkohol før hver injektion. Injicer langsomt cellerne ind i pleural hulrummet mellem det sjette og syvende ribben, der holder nålen i en vinkel på 30 grader og to til tre millimeter under interkostale muskler.Hold nålen lige under ribbenene for at undgå indsprøjtning i lungerne. Det skal være synligt gennem musklerne. Når du er færdig, lukkes såret med tre til fire absorberbare suturer og opbevar musen i et opvarmet miljø, indtil det vågner op.Ved implantation er det meget vigtigt at placere nålen korrekt for at begrænse dybden af nåleindtrængningen. Brug en varmekammer varmepude, eller infrarød lampe til at prewarm musene ved 30 grader celsius i 30 minutter før injektion af fluor-18 (FDG)Ved hjælp af en dosis regnemaskine forberede tre til fire megabecquerel doser af fluor-18 (FDG) i 150 til 200 mikroliter saltvand i 1 milliliter sprøjte insuliner. Sørg for at registrere alle tider af røntgenaktivitet dosis målinger injektioner, og PET-scanninger for at beregne standard optagelse værdier eller SUV'er.Musene afvejes derefter intravenøst indsprøjte fluor-18(FDG)Efter injektionen skal musene være vågne i varme forhold i 45 minutter. Læg derefter musene på scannersengen overfør sengen til en scanner og motiver dyrene til en CT-scanning centreret om lungerne. Flyt sengen til PET-delsystemet, og indsæt anskaffelsen en time efter injektionen af fluor-18(FDG)i en periode på 15 minutter.Fjern derefter musene fra billeddannelseskammeret og lad dem komme sig i deres bur og holde dem i et område dedikeret til radioaktivt henfald. Forud for billedanalyse rekonstruere CT og PET scanninger som beskrevet i manuskriptet. Kalibrer billederne ved at scanne en fantomcylinder, og indregistrer automatisk scanningerne i henhold til den indbyggede softwareløsning.Hvis du vil analysere billederne, indlæses CT-dataene som reference ved at klikke på ikonet for åbne data. Indlæs derefter PET-dataene som input ved at klikke på ikonet for tilføjelsesdata. Juster farveskalaen, så CT og PET kontrast billeder til visuel inspektion.Vælg 3D ROI-værktøjet i rullemenuen klik på tilføj investeringsafkast, og navngråbe fillungerne. Klik på segmentering algoritmer og nabolag tærskelring derefter definere input som baggrund og billede som ref. Indtast min og max i henhold til musens lungetæthedsværdier.Undersøg de 3D-afsmeltede lunger ved at klikke på VTK-ikonet. Klik derefter på Vis tabelikon, og hent diskenheden i den genererede tabel. At analysere fluor-18 (FDG) i tumorer konvertere PET-billeder til SUV ved at vælge aritmetik fra rullemenuen.Vælg skalarmultiplikation, og brug derefter NP one som valgt, og angiv becquerel pr. milliliter til SUV-faktor som skalar. Endelig skal du vælge 3D ROI værktøj fra rullemenuen og klik på tilføj ROI og navngive filen tumorer. Klik på 3D-maling tilstand og kugle fjerne markeringen 2D kun og justere størrelsen af formen til at omgive tumorer.Klik på vis tabel ikon og hente SUV max værdi fra den genererede tabel. 3D-gengivelserne fra CT-scanningerne giver et overblik over MPM tumor lokalisering og giver mulighed for beregning af lungemængder. Lungevolumenmålinger falder betydeligt over tid efter injektion af intrapleurale tumorer.PET-scanningen giver værdifulde oplysninger om den metaboliske status af MPM tumorer. Tumorerne var skelnes to uger efter podning og fluor-18 (FDG) optagelse blev kvantificeret ved at udvinde SUV'er, som var positivt korreleret med antallet af dage efter injektion. Desuden, lunge mængder og fluor-18 (FDG) avidity korrelerer med hinanden med en R kvadreret på 0,6, som understøtter styrken af disse målinger til overvågning af MPM ortopisk tumor udvikling.Efter denne procedure andre metoder såsom histologi, immunohistokæmi, og flow cytometri kan udføres for at reagere på ortopæologiske spørgsmål såsom spredning tilstand og fænokompiske karakteristiske for tumorer og mikromiljø. Afslutningsvis vil jeg sige, at disse prækliniske teknikker baner vejen for forskere til at udforske nye diagnostiske og behandlingsstrategi for lungehindekræft. Desuden berettiger brugen af molekylær billeddannelse en hurtig oversættelse af nye resultater til klinikken.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

We present the video about assisting anti-retroviral therapy (ART) by an apt laboratory service - representing a South-African role model for economical ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induktion af graft-versus-host sygdom og<em&gt; In Vivo</em&gt; T Cell Monitoring Brug en MHC-matchet murin model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

Tilbagevendende Herpetisk stromal keratitis i Mus, en model for at studere menneskets HSK

Herpetic eye disease, termed herpetic stromal keratitis (HSK), is a potentially blinding infection of the cornea that results in over 300,000 clinical ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

En<em&gt; In vitro</em&gt; Model til Studieinformationen Heterogeneity for Human Makrofag Differentiering og polarisering

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Optimized Protocols for Mycobacterium leprae Strain Management: Frozen Stock Preservation and Maintenance in Athymic Nude Mice

Optimized Protocols for Mycobacterium leprae Strain Management: Frozen Stock Preservation and Maintenance in Athymic Nude Mice

Optimerede protokoller til<em&gt; Mycobacterium leprae</em&gt; Strain Management: Frosne Stock bevarelse og vedligeholdelse i Atymiske Nude Mus

Leprosy, caused by Mycobacterium leprae, is an important infectious disease that is still endemic in many countries around the world, including Brazil. ...

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

En Semi-automatiske tilgang til Forberedelse Antibody Cocktails for immunfænotypisk Analyse af Human Perifer Blod

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Muse lymfocyt Mærkning af<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-antistofreceptor Målretning for<em&gt; In vivo</em&gt; Cell Trafficking af PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analyse af lymfocyt Ekstravasation Ved anvendelse af en<em&gt; In vitro</em&gt; Model af humant blod-hjernebarrieren

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model for<em&gt; In vivo</em&gt; Langsigtet overvågning af inflammatoriske reaktioner

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...