Name: implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice
Uploaded: 2019-12-21T10:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice at JoVE.com

Denne forskningen ble finansiert av Ligue Genevoise contre Le Cancer (til V.S.-B.) og ved Center for Biomedical Imaging (CIBM) av universiteter og sykehus i Genève og Lausanne (til D.J.C., O.B. og S.G.).

Alle prosedyrene som er beskrevet nedenfor, ble godkjent av den institusjonelle dyre omsorgen og bruks komitéen og av veterinær Statens kontor i Genève, Sveits (Authorization GE/106/16). MPM cellelinje H2052/484 ble etablert og karakterisert i vårt laboratorium som beskrevet i artikkelen av Colin DJ og et al.23. Kort, H2052/484 cellelinje ble etablert fra en bryst svulst oppnådd etter en intrapleural injeksjon av NCI-H2052 (ATCC) celler til immunodeficient Nude mus.
...

<ol>
	<li>Grishman, E., Cohen, S., Salomon, M. I., Churg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+lesions+in+acute+rheumatic+fever.">Renal lesions in acute rheumatic fever.</a> The American Journal of Pathology. 51 (6), 1045-1061 (1967).</li><li>Mossman, B. T., Gee, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asbestos-related+diseases.">Asbestos-related diseases.</a> The New England Journal of Medicine. 320 (26), 1721-1730 (1989).</li><li>Pass, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asbestos+exposure,+pleural+mesothelioma,+and+serum+osteopontin+levels.">Asbestos exposure, pleural mesothelioma, and serum osteopontin levels.</a> The New England Journal of Medicine. 353 (15), 1564-1573 (2005).</li><li>Allen, L. P., Baez, J., Stern, M. E. C., Takahashi, K., George, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+and+the+Economic+Effect+of+Asbestos+Bans+and+Decline+in+Asbestos+Consumption+and+Production+Worldwide.">Trends and the Economic Effect of Asbestos Bans and Decline in Asbestos Consumption and Production Worldwide.</a> The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (3), (2018).</li><li>LaDou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+a+global+ban+on+asbestos.">The case for a global ban on asbestos.</a> Environmental Health Perspectives. 118 (7), 897-901 (2010).</li><li>Soeberg, M., Vallance, D. A., Keena, V., Takahashi, K., Leigh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Australia's+Ongoing+Legacy+of+Asbestos:+Significant+Challenges+Remain+Even+after+the+Complete+Banning+of+Asbestos+Almost+Fifteen+Years+Ago.">Australia's Ongoing Legacy of Asbestos: Significant Challenges Remain Even after the Complete Banning of Asbestos Almost Fifteen Years Ago.</a> The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (2), (2018).</li><li>Glynn, M. E., Keeton, K. A., Gaffney, S. H., Sahmel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Asbestos+Fiber+Concentrations+and+Long-Term+Trends+in+Pleural+Mesothelioma+Incidence+between+Urban+and+Rural+Areas+in+the+United+States+(1973-2012).">Ambient Asbestos Fiber Concentrations and Long-Term Trends in Pleural Mesothelioma Incidence between Urban and Rural Areas in the United States (1973-2012).</a> Risk Analysis. 38 (3), 454-471 (2018).</li><li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+trend+analysis+on+malignant+mesothelioma+in+China.">Epidemiology and trend analysis on malignant mesothelioma in China.</a> The Chinese Journal of Cancer Research. 29 (4), 361-368 (2017).</li><li>Chernova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Fiber+Carbon+Nanotubes+Replicate+Asbestos-Induced+Mesothelioma+with+Disruption+of+the+Tumor+Suppressor+Gene+Cdkn2a+(Ink4a/Arf).">Long-Fiber Carbon Nanotubes Replicate Asbestos-Induced Mesothelioma with Disruption of the Tumor Suppressor Gene Cdkn2a (Ink4a/Arf).</a> Current Biology. 27 (21), 3302-3314 (2017).</li><li>Fukushima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinogenicity+of+multi-walled+carbon+nanotubes:+challenging+issue+on+hazard+assessment.">Carcinogenicity of multi-walled carbon nanotubes: challenging issue on hazard assessment.</a> The Journal of Occupational Health. 60 (1), 10-30 (2018).</li><li>Robinson, B. W., Musk, A. W., Lake, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> The Lancet. 366 (9483), 397-408 (2005).</li><li>Ricciardi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+malignant+pleural+mesothelioma:+an+international+guidelines+review.">Surgery for malignant pleural mesothelioma: an international guidelines review.</a> The Journal of Thoracic Diseases. 10, 285-292 (2018).</li><li>Hiddinga, B. I., Rolfo, C., van Meerbeeck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesothelioma+treatment:+Are+we+on+target?+A+review.">Mesothelioma treatment: Are we on target? A review.</a> The Journal of Advanced Research. 6 (3), 319-330 (2015).</li><li>Kim, J., Bhagwandin, S., Labow, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+peritoneal+mesothelioma:+a+review.">Malignant peritoneal mesothelioma: a review.</a> Annals of Translational Medicine. 5 (11), 236 (2017).</li><li>Ampollini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-chemotherapy+reduces+recurrence+of+malignant+pleural+mesothelioma:+an+experimental+setting.">Immuno-chemotherapy reduces recurrence of malignant pleural mesothelioma: an experimental setting.</a> The European Journal of Cardiothoracic Surgery. 35 (3), 457-462 (2009).</li><li>de Jong, M., Essers, J., van Weerden, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+preclinical+tumour+models:+improving+translational+power.">Imaging preclinical tumour models: improving translational power.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (7), 481-493 (2014).</li><li>Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+animal+models+and+clinical+trials+in+cancer+treatment.">Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment.</a> The American Journal of Translational Research. 6 (2), 114-118 (2014).</li><li>Mazzocchi, A. R., Rajan, S. A. P., Votanopoulos, K. I., Hall, A. R., Skardal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+patient-derived+3D+mesothelioma+tumor+organoids+facilitate+patient-centric+therapeutic+screening.">In vitro patient-derived 3D mesothelioma tumor organoids facilitate patient-centric therapeutic screening.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2886 (2018).</li><li>Gengenbacher, N., Singhal, M., Augustin, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+mouse+solid+tumour+models:+status+quo,+challenges+and+perspectives.">Preclinical mouse solid tumour models: status quo, challenges and perspectives.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (12), 751-765 (2017).</li><li>Kanemura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+response+assessment+with+18F-FDG-PET/CT+is+superior+to+modified+RECIST+for+the+evaluation+of+response+to+platinum-based+doublet+chemotherapy+in+malignant+pleural+mesothelioma.">Metabolic response assessment with 18F-FDG-PET/CT is superior to modified RECIST for the evaluation of response to platinum-based doublet chemotherapy in malignant pleural mesothelioma.</a> The European Journal of Radiology. 86, 92-98 (2017).</li><li>Truong, M. T., Viswanathan, C., Godoy, M. B., Carter, B. W., Marom, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+pleural+mesothelioma:+role+of+CT,+MRI,+and+PET/CT+in+staging+evaluation+and+treatment+considerations.">Malignant pleural mesothelioma: role of CT, MRI, and PET/CT in staging evaluation and treatment considerations.</a> Seminars in Roentgenology. 48 (4), 323-334 (2013).</li><li>MacArthur Clark, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3Rs+in+research:+a+contemporary+approach+to+replacement,+reduction+and+refinement.">The 3Rs in research: a contemporary approach to replacement, reduction and refinement.</a> The British Journal of Nutrition. 120, 1-7 (2018).</li><li>Colin, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Model+of+Human+Malignant+Mesothelioma+in+Athymic+Mice.">Experimental Model of Human Malignant Mesothelioma in Athymic Mice.</a> The International Journal of Molecular Sciences. 19 (7), (2018).</li><li>Fueger, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+animal+handling+on+the+results+of+18F-FDG+PET+studies+in+mice.">Impact of animal handling on the results of 18F-FDG PET studies in mice.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 47 (6), 999-1006 (2006).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissues+in+different+anatomical+sites+can+sculpt+and+vary+the+tumor+microenvironment+to+affect+responses+to+therapy.">Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy.</a> Molecular Therapy. 22 (1), 18-27 (2014).</li><li>Beliz&#225;rio, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodeficient+mouse+models:+An+overview.">Immunodeficient mouse models: An overview.</a> The Open Immunology Journal. 2, 79-85 (2009).</li><li>Jackaman, C., Yeoh, T. L., Acuil, M. L., Gardner, J. K., Nelson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+mesothelioma+induces+locally-proliferating+IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+)+M3+macrophages+that+can+be+selectively+depleted+by+chemotherapy+or+immunotherapy.">Murine mesothelioma induces locally-proliferating IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+) M3 macrophages that can be selectively depleted by chemotherapy or immunotherapy.</a> Oncoimmunology. 5 (6), 1173299 (2016).</li><li>James, M. L., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+imaging+primer:+modalities,+imaging+agents,+and+applications.">A molecular imaging primer: modalities, imaging agents, and applications.</a> Physiological Reviews. 92 (2), 897-965 (2012).</li><li>Kenny, L. M., Aboagye, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+translation+of+molecular+imaging+agents+used+in+PET+studies+of+cancer.">Clinical translation of molecular imaging agents used in PET studies of cancer.</a> Advances in Cancer Research. 124, 329-374 (2014).</li></ol>

Dette papiret beskriver en original orthotopic modell av MPM H2052/484 celler injisert i pleural hulrom av athymic mus og en metode for overvåking av små dyr PET/CT Imaging. Denne modellen kan implementeres med moderat dyr håndtering og kirurgi ferdigheter og viser en meget god utvikling rate. Det gjør at en stor eksperimentell vindu på ca 10 uker i ubehandlede mus og ikke-invasiv langsgående påvisning av svulster så tidlig som 2 uker etter injeksjon.
Orthotopic modeller stole på impl...

Ondartet pleural mesothelioma (MPM) er en kreft som oftest assosiert med eksponering for asbest fiber1,2,3. Selv om asbest har vært forbudt i de fleste vestlige land4,5,6, forekomsten av MPM er fortsatt økende7,8. Nylig, antyder eksponering av mus til Carbon nanorør at de kan føre til betydelig helserisiko hos mennesker9,10. Dataene tyder på at eksponering for disse produktene kan indusere kroniske betennelser og molekylære endringer (f. eks, tap av tumor-Suppressor trasé) som ligger til grunn progresjon til ondartet mesothelioma. For tiden er multiwall Carbon nanorør en av de viktigste produktene av nanoteknologi og er i økende grad innarbeidet i ulike produkter som kompositter, energi lagrings materialer, medisin, elektronikk og miljømessige Utbedring materialer.
MPM er en kreft med dårlig prognose, og de fleste pasientene dør innen to år etter diagnosen på grunn av en begrenset effekt av gjeldende behandlingsmetoder11. Valget av behandling for MPM avhenger av kreft fasen. For de fleste tidlig stadium MPM (trinn 1 og muligens noen trinn 2 eller 3 svulster), klinisk tilnærming er en multimodal terapi inkludert kirurgisk reseksjon av svulster, knyttet til strålebehandling og kjemoterapi12. En kombinert kjemoterapi med Cisplatin og pemetreksed er indisert for behandling av de fleste pasienter diagnostisert med avansert lokalt invasiv sykdom, som ikke er mottagelig for kirurgiske reseksjon, eller som ellers ikke kandidater til helbredende kirurgi13,14. Det er derfor et presserende behov for å utvikle mer effektive behandlinger for MPM pasienter. Men, det er få validerte in vivo dyremodeller som reflekterer den kliniske relevansen av MPM. Flere murine MPM modeller har blitt utviklet, men de fleste av dem ikke trofast recapitulate de komplekse aspektene av MPM tumor mikromiljøet15,16,17,18. Bruken av asbest-indusert MPM i mus, genetisk konstruerte MPM musemodeller, eller modeller av syngeneic transplantasjon av murine MPM cellelinjer er begrenset av grunnleggende fenotypiske og funksjonelle forskjeller, og følgelig dårlig oversette nye funn til klinikken. Andre prekliniske murine MPM-modeller er mest avhengige av subkutan eller xenotransplantater av humane cellelinjer i immunodeficient mus. Mens disse modellene er enkle å overvåke og gi fundamentale data, mikromiljøet av disse xenotransplantater er ikke så sammenlignbare med menneskelige svulster svekke den translational kraften i de fleste av disse prekliniske studier17,19. Omvendt, orthotopic xenotransplantater bedre reflektere pasienten svulst atferd og respons på behandling som de er omgitt av en lignende mikromiljøet som den finnes i den opprinnelige tumor området16.
Molekylær Imaging av [18F] FDG-pet/CT er metoden for valg å lengderetningen overvåke sykdomsprogresjon hos pasienter med MPM20,21. Derfor, ty til denne ikke-invasiv imaging metode sterkt fremmer oversettelsen av prekliniske studier til kliniske studier16,22. Dessuten, den hjelper å nedskrive det krevde antallet av dyrene idet hver dyr representerer dens egen administrere over tid.
I denne artikkelen presenterer vi en pålitelig orthotopic xenograft MPM-modell innhentet etter injeksjon av den menneskelige MPM cellelinjen H2052/484 inn i pleural hulrom av athymic mus. Sammen med [18F] FDG-pet/CT Imaging, denne modellen er en verdifull og reproduserbar metode for å studere funksjonelle og mekanistisk effekter av nye diagnostiske strategier og behandlinger for menneskelig MPM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-mice bed</td>
			<td>Minerve</td>
			<td></td>
			<td>bed for mice imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Athymic Nude-Foxn1n nu/nu</td>
			<td>Envigo, Huntingdon, UK</td>
			<td>6907F</td>
			<td>immunodeficient mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Mundipharma Medical Company, CH</td>
			<td>111131</td>
			<td>polyvidone iodine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>14190094</td>
			<td>Buffer for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>PAA Laboratories, Pasching, Austria</td>
			<td>A15-101</td>
			<td>cell culture medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>324826</td>
			<td>syringe for cell injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td>antibiotics for cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>61870010</td>
			<td>basal cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic (Buprenorphin 0.3 mg/mL)</td>
			<td>Alloga SA, CH</td>
			<td>700320</td>
			<td>opioid analgesic product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triumph PET/SPECT/CT</td>
			<td>Trifoil, Chatsworth, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>imaging equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>25050014</td>
			<td>enzymatic cell dissociation buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon S 2%</td>
			<td>Milian, Vernier, CH</td>
			<td>972472</td>
			<td>disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vivoquant</td>
			<td>Invicro, Boston, MA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice

Ondartet pleural mesothelioma (MPM) er en sjelden og aggressiv svulst som oppstår i Mesothelium som dekker lungene, hjertet og bryst hulen. MPM utvikling er i hovedsak knyttet til asbest. Behandlinger gir bare beskjeden overlevelse siden median overlevelse gjennomsnittet er 9 – 18 måneder fra tidspunktet for diagnosen. Derfor må mer effektive behandlinger identifiseres. De fleste data som beskriver nye terapeutiske mål, ble innhentet fra in vitro-eksperimenter og må valideres i pålitelige in vivo prekliniske-modeller. Denne artikkelen beskriver en slik pålitelig MPM orthotopic modell innhentet etter injeksjon av en menneskelig MPM cellelinje H2052/484 i pleural hulrom immunodeficient athymic mus. Transplantasjon i orthotopic området kan studere progresjon av tumor i det naturlige in vivo miljø. Positron utslipps tomografi/beregnet tomografi (PET/CT) molekyl avbildning ved hjelp av klinisk [18f] -2-fluoro-2-Deoxy-D-glukose ([18F] FDG) radiotracer er diagnose metoden som er valgt for å undersøke pasienter med MPM. Følgelig [18F] FDG-pet/CT ble brukt til å lengderetningen overvåke sykdomsprogresjon av H2052/484 orthotopic modell. Denne teknikken har en høy 3R potensial (reduce antall dyr, refine å minske smerte og ubehag, og rErstatt dyr eksperimentering med alternativer) siden tumor utvikling kan overvåkes ikke-invasivt og antall dyr som kreves kan bli betydelig redusert.
Denne modellen viser en høy utviklings rate, en rask tumor vekst, er kostnadseffektiv og gir mulighet for rask klinisk oversettelse. Ved å bruke denne orthotopic xenograft MPM-modellen kan forskerne vurdere biologiske svar på en pålitelig MPM-modell etter terapeutiske intervensjoner.

Den H2052/484 orthotopic modellen Orthotopic MPM modeller ved intra-bryst injeksjon av kultivert kreftceller, spesielt H2052/484 celler er relativt lett å sette opp. Det annerledes skritt beskrevet over bare forlange beskjeden cellen kulturen kunnskap og kirurgi skritt er tilgjengelighet å moderat utdannet dyr forskere. Nakne mus og celler bør manipuleres under sterile forhold for å maksimere utfallet av implantat IONS. Ved nøye å følge denne protokollen, som innebærer kort anestesi og minimal...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice at JoVE.com

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Denne artikkelen beskriver generering av en orthotopic mus modell av menneskelig pleural mesothelioma av implantation av H2052/484 Mesothelioma celler inn i pleural hulrom immunsupprimerte athymic mus. Den langsgående overvåking av utviklingen av intrapleural svulster ble vurdert av ikke-invasiv multimodal [18F] -2-fluoro-2-Deoxy-D-glukose positron utslipp tomografi og beregnede tomografi Imaging.

Implantation og overvåking av PET/CT av en Orthotopic modell av Human pleural mesothelioma i Athymic mus

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...

Denne metoden kan bidra til å svare på viktige spørsmål knyttet til utvikling, behandling og diagnose av humant pleural mesothelioma. Den største fordelen med denne pålitelige prekliniske ortotopiske modellen er at den replikerer den menneskelige sykdomsprogresjonen og patologien i et mikromiljø nær det som finnes hos pasienter med pleural mesothelioma. Derfor er denne uvurderlige modellen av høy betydning, og bruk av ikke-invasiv molekylær avbildning tillater langsgående overvåking i tråd med det tre R-konseptet.Før du begynner å forberede anestesisystemet og operasjonsområdet i en laminær strømningshette ved å sprøyte alle overflater med desinfeksjonsmiddel. Plasser de mikroisolerte SPF-burene i den desinfiserte strømningshetten. Plasser en varmepute, povidone-jodoppløsning 30 gauge Hamilton sprøyte, gasbind og bomullspinner kirurgi instrumenter og mikropipetter og tips i laminær strømningshette.Når musen er riktig bedøvet subkutant injisere 0,05 milligram per kilo Buprinorphine for postoperativ pan lettelse. Plasser deretter musen på høyre side på toppen av varmeputen og rengjør det kirurgiske området med povidon-jodløsning og lag et 5 millimeter snitt av huden. Fjern det omkringliggende fettet og musklene med stump saks for å eksponere ribbeina.Homogenisere cellefjæringen og last 50 mikroliter inn i Hamilton-sprøyten og sørg for å unngå luftbobler. Tørk av nålen med 70 % alkohol før hver injeksjon. Injiser cellene langsomt inn i pleuralhulen mellom sjette og syvende ribbein som holder nålen i en vinkel på 30 grader og to til tre millimeter under interkostalrommuskulaturen.Hold nålen rett under ribbeina for å unngå å injisere i lungene. Det skal være synlig gjennom musklene. Når du er ferdig, lukk såret med tre til fire absorberbare suturer og lagre musen i et oppvarmet miljø til den våkner.Når du utfører implantasjon er det svært viktig å plassere nålen riktig for å begrense dybden av nålepenetrasjonen. Bruk en varmekammer varmepute, eller infrarød lampe for å prewarm musene på 30 grader celsius i 30 minutter før injeksjon av fluor-18 (FDG)Bruk en dose kalkulator forberede tre til fire megabecquerel doser av fluor-18 (FDG) i 150 til 200 mikroliter saltvann i 1 milliliter insulin sprøyter. Sørg for å registrere alle tider med radioaktivitetsdosemålinger injeksjoner, og PET-skanninger for å beregne standard opptaksverdier eller SUV-er.Vei musene deretter intravenøst injisere fluor-18 (FDG)Etter injeksjonen la musene våken i varme forhold i 45 minutter. Deretter laster musene på skannersengen overføre sengen til en skanner og utsette dyrene for en CT-skanning sentrert på lungene. Flytt sengen til PET-delsystemet sett inn oppkjøpet en time etter at injeksjonen med fluor-18(FDG) er på 15 minutter.Fjern deretter musene fra bildekammeret og la dem gjenopprette i buret og holde dem i et område dedikert til radioaktivt forfall. Før bildeanalyse rekonstruere CT og PET skanner som beskrevet i manuskriptet. Kalibrer bildene ved å skanne en fantomsylinder og automatisk registrere skanningene i henhold til den innebygde programvareløsningen.For å analysere bildene laste CT-dataene som en referanse ved å klikke på det åpne dataikonet. Last deretter inn PET-dataene som inndata ved å klikke på ikonet for tilføyingsdata. Juster fargeskalaen slik at CT og PET kan sammenligne bilder for visuell inspeksjon.Velg 3D ROI-verktøyet fra rullegardinmenyen klikk på legg til avkastning, og gi filen lunger navn. Klikk på segmenteringsalgoritmer og nabolagsterskelsering og definer deretter inndata som bakgrunn og bilde som ref. Angi min og maks i henhold til mus lunge tetthet verdier.Inspiser 3D-gjengitte lunger ved å klikke på VTK-ikonet. Klikk deretter vis tabellikon og hent volumet i den genererte tabellen. For å analysere fluor-18 (FDG) i svulster konvertere PET bilder til SUV ved å velge aritmetikk fra rullegardinmenyen.Velg skalar multiplisitet deretter bruke NP en som valgt og angi becquerel per milliliter til SUV-faktor som skalar. Til slutt velger du 3D ROI-verktøyet fra rullegardinmenyen og klikker på legg til avkastning og navngir filsvulster. Klikk på 3D maling modus og sfære uncheck 2D bare og justere størrelsen på formen for å omgi svulstene.Klikk på vis tabellikonet og hent SUV-maksverdien fra den genererte tabellen. 3D-gjengivelsene fra CT-skanningene gir en oversikt over MPM tumor lokalisering og tillater beregning av lungevolumer. Lungevolummålinger reduseres betydelig over tid etter injeksjon av intrapleurale svulster.PET-skanningen gir verdifull informasjon om metabolsk status for MPM-svulster. Svulstene kunne skilles to uker etter pode og fluor-18 (FDG)-opptaket ble kvantifisert ved å trekke ut SUV-er som var positivt korrelert med antall dager etter injeksjon. Videre korrelerer lungevolumer og fluor-18 (FDG) iiditet med hverandre med en R kvadrert på 0,6 som støtter styrken av disse målingene for overvåking av MPM ortotopisk tumorutvikling.Etter denne prosedyren kan andre metoder som histologi, immunohistochemistry og strømningscytometri utføres for å svare på ortobiologiske spørsmål som spredningstilstand og fenotypisk karakteristikk for svulster og mikromiljø. For å konkludere, disse prekliniske teknikkene bane vei for forskere å utforske ny diagnostisk og behandlingsstrategi pleural mesothelioma. Videre krever bruk av molekylær avbildning rask oversettelse av nye funn til klinikken.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

We present the video about assisting anti-retroviral therapy (ART) by an apt laboratory service - representing a South-African role model for economical ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induksjon av transplantat-mot-vert-sykdom og<em&gt; In Vivo</em&gt; T Cell overvåking ved hjelp av en MHC-matched Murine Model

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

Tilbakevendende Herpes stromal keratitt i Mus, en modell for å studere menneskelig HSK

Herpetic eye disease, termed herpetic stromal keratitis (HSK), is a potentially blinding infection of the cornea that results in over 300,000 clinical ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

En<em&gt; In vitro</em&gt; Modell for å studere heterogenitet of Human Macrophage Differensiering og Polarisering

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Optimized Protocols for Mycobacterium leprae Strain Management: Frozen Stock Preservation and Maintenance in Athymic Nude Mice

Optimized Protocols for Mycobacterium leprae Strain Management: Frozen Stock Preservation and Maintenance in Athymic Nude Mice

Optimaliserte protokoller for<em&gt; Leprabasill</em&gt; Strain Management: Frozen Stock Bevaring og vedlikehold i atymiske Nude Mus

Leprosy, caused by Mycobacterium leprae, is an important infectious disease that is still endemic in many countries around the world, including Brazil. ...

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

En semi-automatisert tilnærming til Klar Antistoff Cocktails for Immunophenotypic analyse av perifert blod

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymfocytter Merking av<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-antistoff Reseptor for målretting<em&gt; In Vivo</em&gt; Celletrafikken av PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analyse av lymfocytt-ekstravasasjon ved hjelp av en<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell av det menneskelige blod-hjernebarrieren

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model for<em&gt; In vivo</em&gt; Langsiktig overvåking av inflammatoriske responser

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...