Name: implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice
Uploaded: 2019-12-21T10:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice at JoVE.com

Denna forskning finansierades av Ligue genevoise contre le cancer (till vs-B.) och av centrum för biomedicinsk avbildning (CIBM) av universiteten och sjukhusen i Genève och Lausanne (till D.J.C., O.B. och S.G.).

Alla förfaranden som beskrivs nedan godkändes av den institutionella myndigheten för djuromsorg och användning och av veterinärmyndigheten i Genève, Schweiz (bemyndigande GE/106/16). MPM cell line H2052/484 etablerades och karaktäriserades i vårt laboratorium så som beskrivs i artikeln i Colin DJ och et al.23. Kortfattat, H2052/484 cellinjer bildades från en bröstkorg tumör erhålls efter en intrapleural injektion av NCI-H2052 (ATCC) celler till immunobristfällig naken möss.
<p c...

<ol>
	<li>Grishman, E., Cohen, S., Salomon, M. I., Churg, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Renal+lesions+in+acute+rheumatic+fever.">Renal lesions in acute rheumatic fever.</a> The American Journal of Pathology. 51 (6), 1045-1061 (1967).</li><li>Mossman, B. T., Gee, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asbestos-related+diseases.">Asbestos-related diseases.</a> The New England Journal of Medicine. 320 (26), 1721-1730 (1989).</li><li>Pass, H. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asbestos+exposure,+pleural+mesothelioma,+and+serum+osteopontin+levels.">Asbestos exposure, pleural mesothelioma, and serum osteopontin levels.</a> The New England Journal of Medicine. 353 (15), 1564-1573 (2005).</li><li>Allen, L. P., Baez, J., Stern, M. E. C., Takahashi, K., George, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trends+and+the+Economic+Effect+of+Asbestos+Bans+and+Decline+in+Asbestos+Consumption+and+Production+Worldwide.">Trends and the Economic Effect of Asbestos Bans and Decline in Asbestos Consumption and Production Worldwide.</a> The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (3), (2018).</li><li>LaDou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+case+for+a+global+ban+on+asbestos.">The case for a global ban on asbestos.</a> Environmental Health Perspectives. 118 (7), 897-901 (2010).</li><li>Soeberg, M., Vallance, D. A., Keena, V., Takahashi, K., Leigh, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Australia's+Ongoing+Legacy+of+Asbestos:+Significant+Challenges+Remain+Even+after+the+Complete+Banning+of+Asbestos+Almost+Fifteen+Years+Ago.">Australia's Ongoing Legacy of Asbestos: Significant Challenges Remain Even after the Complete Banning of Asbestos Almost Fifteen Years Ago.</a> The Journal of Environmental Research and Public Health. 15 (2), (2018).</li><li>Glynn, M. E., Keeton, K. A., Gaffney, S. H., Sahmel, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ambient+Asbestos+Fiber+Concentrations+and+Long-Term+Trends+in+Pleural+Mesothelioma+Incidence+between+Urban+and+Rural+Areas+in+the+United+States+(1973-2012).">Ambient Asbestos Fiber Concentrations and Long-Term Trends in Pleural Mesothelioma Incidence between Urban and Rural Areas in the United States (1973-2012).</a> Risk Analysis. 38 (3), 454-471 (2018).</li><li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+and+trend+analysis+on+malignant+mesothelioma+in+China.">Epidemiology and trend analysis on malignant mesothelioma in China.</a> The Chinese Journal of Cancer Research. 29 (4), 361-368 (2017).</li><li>Chernova, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Long-Fiber+Carbon+Nanotubes+Replicate+Asbestos-Induced+Mesothelioma+with+Disruption+of+the+Tumor+Suppressor+Gene+Cdkn2a+(Ink4a/Arf).">Long-Fiber Carbon Nanotubes Replicate Asbestos-Induced Mesothelioma with Disruption of the Tumor Suppressor Gene Cdkn2a (Ink4a/Arf).</a> Current Biology. 27 (21), 3302-3314 (2017).</li><li>Fukushima, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carcinogenicity+of+multi-walled+carbon+nanotubes:+challenging+issue+on+hazard+assessment.">Carcinogenicity of multi-walled carbon nanotubes: challenging issue on hazard assessment.</a> The Journal of Occupational Health. 60 (1), 10-30 (2018).</li><li>Robinson, B. W., Musk, A. W., Lake, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+mesothelioma.">Malignant mesothelioma.</a> The Lancet. 366 (9483), 397-408 (2005).</li><li>Ricciardi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgery+for+malignant+pleural+mesothelioma:+an+international+guidelines+review.">Surgery for malignant pleural mesothelioma: an international guidelines review.</a> The Journal of Thoracic Diseases. 10, 285-292 (2018).</li><li>Hiddinga, B. I., Rolfo, C., van Meerbeeck, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesothelioma+treatment:+Are+we+on+target?+A+review.">Mesothelioma treatment: Are we on target? A review.</a> The Journal of Advanced Research. 6 (3), 319-330 (2015).</li><li>Kim, J., Bhagwandin, S., Labow, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+peritoneal+mesothelioma:+a+review.">Malignant peritoneal mesothelioma: a review.</a> Annals of Translational Medicine. 5 (11), 236 (2017).</li><li>Ampollini, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immuno-chemotherapy+reduces+recurrence+of+malignant+pleural+mesothelioma:+an+experimental+setting.">Immuno-chemotherapy reduces recurrence of malignant pleural mesothelioma: an experimental setting.</a> The European Journal of Cardiothoracic Surgery. 35 (3), 457-462 (2009).</li><li>de Jong, M., Essers, J., van Weerden, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+preclinical+tumour+models:+improving+translational+power.">Imaging preclinical tumour models: improving translational power.</a> Nature Reviews Cancer. 14 (7), 481-493 (2014).</li><li>Mak, I. W., Evaniew, N., Ghert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lost+in+translation:+animal+models+and+clinical+trials+in+cancer+treatment.">Lost in translation: animal models and clinical trials in cancer treatment.</a> The American Journal of Translational Research. 6 (2), 114-118 (2014).</li><li>Mazzocchi, A. R., Rajan, S. A. P., Votanopoulos, K. I., Hall, A. R., Skardal, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+patient-derived+3D+mesothelioma+tumor+organoids+facilitate+patient-centric+therapeutic+screening.">In vitro patient-derived 3D mesothelioma tumor organoids facilitate patient-centric therapeutic screening.</a> Scientific Reports. 8 (1), 2886 (2018).</li><li>Gengenbacher, N., Singhal, M., Augustin, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preclinical+mouse+solid+tumour+models:+status+quo,+challenges+and+perspectives.">Preclinical mouse solid tumour models: status quo, challenges and perspectives.</a> Nature Reviews Cancer. 17 (12), 751-765 (2017).</li><li>Kanemura, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+response+assessment+with+18F-FDG-PET/CT+is+superior+to+modified+RECIST+for+the+evaluation+of+response+to+platinum-based+doublet+chemotherapy+in+malignant+pleural+mesothelioma.">Metabolic response assessment with 18F-FDG-PET/CT is superior to modified RECIST for the evaluation of response to platinum-based doublet chemotherapy in malignant pleural mesothelioma.</a> The European Journal of Radiology. 86, 92-98 (2017).</li><li>Truong, M. T., Viswanathan, C., Godoy, M. B., Carter, B. W., Marom, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant+pleural+mesothelioma:+role+of+CT,+MRI,+and+PET/CT+in+staging+evaluation+and+treatment+considerations.">Malignant pleural mesothelioma: role of CT, MRI, and PET/CT in staging evaluation and treatment considerations.</a> Seminars in Roentgenology. 48 (4), 323-334 (2013).</li><li>MacArthur Clark, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+3Rs+in+research:+a+contemporary+approach+to+replacement,+reduction+and+refinement.">The 3Rs in research: a contemporary approach to replacement, reduction and refinement.</a> The British Journal of Nutrition. 120, 1-7 (2018).</li><li>Colin, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+Model+of+Human+Malignant+Mesothelioma+in+Athymic+Mice.">Experimental Model of Human Malignant Mesothelioma in Athymic Mice.</a> The International Journal of Molecular Sciences. 19 (7), (2018).</li><li>Fueger, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+animal+handling+on+the+results+of+18F-FDG+PET+studies+in+mice.">Impact of animal handling on the results of 18F-FDG PET studies in mice.</a> The Journal of Nuclear Medicine. 47 (6), 999-1006 (2006).</li><li>Devaud, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissues+in+different+anatomical+sites+can+sculpt+and+vary+the+tumor+microenvironment+to+affect+responses+to+therapy.">Tissues in different anatomical sites can sculpt and vary the tumor microenvironment to affect responses to therapy.</a> Molecular Therapy. 22 (1), 18-27 (2014).</li><li>Beliz&#225;rio, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunodeficient+mouse+models:+An+overview.">Immunodeficient mouse models: An overview.</a> The Open Immunology Journal. 2, 79-85 (2009).</li><li>Jackaman, C., Yeoh, T. L., Acuil, M. L., Gardner, J. K., Nelson, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+mesothelioma+induces+locally-proliferating+IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+)+M3+macrophages+that+can+be+selectively+depleted+by+chemotherapy+or+immunotherapy.">Murine mesothelioma induces locally-proliferating IL-10(+)TNF-alpha(+)CD206(-)CX3CR1(+) M3 macrophages that can be selectively depleted by chemotherapy or immunotherapy.</a> Oncoimmunology. 5 (6), 1173299 (2016).</li><li>James, M. L., Gambhir, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+molecular+imaging+primer:+modalities,+imaging+agents,+and+applications.">A molecular imaging primer: modalities, imaging agents, and applications.</a> Physiological Reviews. 92 (2), 897-965 (2012).</li><li>Kenny, L. M., Aboagye, E. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+translation+of+molecular+imaging+agents+used+in+PET+studies+of+cancer.">Clinical translation of molecular imaging agents used in PET studies of cancer.</a> Advances in Cancer Research. 124, 329-374 (2014).</li></ol>

Denna uppsats beskriver en ursprunglig ortotopisk modell av MPM H2052/484 celler injiceras i pleurautgjutning hålighet av atymiska möss och en metod för övervakning av små djur Pet/CT Imaging. Denna modell kan implementeras med måttlig djurhantering och kirurgi färdigheter och visar en mycket bra utvecklingstakt. Det möjliggör en stor experimentell fönster av ca 10 veckor i obehandlade möss och icke-invasiv longitudinell detektion av tumörer så tidigt som 2 veckor efter injektion.
<p class="jove_content"...

Malignt pleurautgjutning mesoteliom (MPM) är en cancer som oftast förknippas med exponering för asbestfibrer1,2,3. Även om asbest har förbjudits i de flesta västerländska länder4,5,6, är incidensen av MPM ökar fortfarande7,8. Nyligen tyder exponering av möss till kolnanorör att de kan resultera i betydande hälsorisker hos människor9,10. Data tyder på att exponering för dessa produkter kan framkalla kronisk inflammation och molekylära förändringar (t. ex. förlust av tumör-suppressor vägar) som ligger bakom progression till malignt mesoteliom. För närvarande, flerväggiga kolnanorör är en av de viktigaste produkterna av nanoteknik och alltmer införlivas i olika produkter såsom kompositer, energilagring material, medicin, elektronik, och miljösanering material.
MPM är en cancer med dålig prognos, och de flesta patienter dör inom två år efter diagnosen på grund av en begränsad effekt av nuvarande behandlingsformer11. Valet av behandling för MPM beror på cancer stadiet. För de flesta tidigt stadium MPM (steg 1 och möjligen några steg 2 eller 3 tumörer), den kliniska metoden är en multimodal terapi inklusive kirurgisk resektion av tumörer, associerade till strålbehandling och kemoterapi12. En kombinerad kemoterapi med cisplatin och pemetrexed är indicerat för behandling av de flesta patienter som diagnostiserats med avancerad lokalt invasiv sjukdom, som inte är mottaglig för kirurgisk resektion, eller som annars inte är kandidater för kurativ kirurgi13,14. Det finns därför ett trängande behov av att utveckla effektivare behandlingar för MPM-patienter. Det finns dock få validerade in vivo djurmodeller som återspeglar den kliniska relevansen av MPM. Flera murina MPM modeller har utvecklats, men de flesta av dem inte troget recapitulate de komplexa aspekterna av MPM tumör mikromiljö15,16,17,18. Användningen av asbestinducerad MPM i möss, genetiskt modifierade MPM Mouse-modeller, eller modeller av uterustransplantat-transplantation av murin MPM-cellinjer begränsas av grundläggande fenotypiska och funktionella skillnader och därmed dåligt översätta nya upptäckter till kliniken. Andra prekliniska murina MPM modeller förlitar sig främst på subkutan eller peritonealdialys xenograft av humana cellinjer hos immunofattiga möss. Även om dessa modeller är lätta att övervaka och ge grundläggande data, mikromiljön av dessa xenograft är inte så jämförbar med mänskliga tumörer försämra den translationella kraften i de flesta av dessa prekliniska studier17,19. Omvänt, ortoämne xenograft bättre återspegla patientens tumör beteende och svar på behandling som de är omgivna med en liknande mikromiljö som den som finns i den ursprungliga tumören plats16.
Molekylär avbildning av [18F] FDG-PET/CT är en metod för val av longitudinellt övervaka sjukdomsprogression hos patienter med MPM20,21. Att tillgripa denna icke-invasiva avbildningsmetod främjar därför kraftigt översättningen av prekliniska studier till kliniska prövningar16,22. Dessutom bidrar det till att minska erforderligt antal djur eftersom varje djur representerar sin egen kontroll över tiden.
I denna artikel presenterar vi en tillförlitlig ortotopisk xenograft MPM-modell som erhålls efter injektion av den humana MPM-celllinjen H2052/484 i pleurahålan hos atymiska-möss. Tillsammans med [18F] FDG-PET/CT Imaging, är denna modell en värdefull och reproducerbar metod för att studera funktionella och mekanistiska effekter av nya diagnostiska strategier och behandlingar för Human MPM.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3-mice bed</td>
			<td>Minerve</td>
			<td></td>
			<td>bed for mice imaging</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Athymic Nude-Foxn1n nu/nu</td>
			<td>Envigo, Huntingdon, UK</td>
			<td>6907F</td>
			<td>immunodeficient mouse</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Mundipharma Medical Company, CH</td>
			<td>111131</td>
			<td>polyvidone iodine solution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s Phosphate-Buffered Saline (DPBS)</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>14190094</td>
			<td>Buffer for cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>PAA Laboratories, Pasching, Austria</td>
			<td>A15-101</td>
			<td>cell culture medium supplement</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin syringes</td>
			<td>BD Biosciences, San Jose, CA, USA</td>
			<td>324826</td>
			<td>syringe for cell injection</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>15140122</td>
			<td>antibiotics for cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>61870010</td>
			<td>basal cell culture medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Temgesic (Buprenorphin 0.3 mg/mL)</td>
			<td>Alloga SA, CH</td>
			<td>700320</td>
			<td>opioid analgesic product</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triumph PET/SPECT/CT</td>
			<td>Trifoil, Chatsworth, CA, USA</td>
			<td></td>
			<td>imaging equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin</td>
			<td>ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA</td>
			<td>25050014</td>
			<td>enzymatic cell dissociation buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Virkon S 2%</td>
			<td>Milian, Vernier, CH</td>
			<td>972472</td>
			<td>disinfectant</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vivoquant</td>
			<td>Invicro, Boston, MA, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implantation and monitoring by pet/ct of an orthotopic model of human pleural mesothelioma in athymic mice

Malignt pleurautgjutning mesoteliom (MPM) är en sällsynt och aggressiv tumör som uppstår i mesothelium som täcker lungorna, hjärtat, och brösthålan. MPM utveckling är främst förknippad med asbest. Behandlingar ger endast blygsam överlevnad eftersom median överlevnad genomsnittet är 9 – 18 månader från tidpunkten för diagnosen. Därför måste effektivare behandlingar identifieras. De flesta data som beskriver nya terapeutiska mål erhölls från in vitro-experiment och måste valideras i pålitliga in vivo prekliniska modeller. Denna artikel beskriver en sådan pålitlig MPM neobladder modellerar erhållande efter injektion av en människa MPM cell fodrar H2052/484 in i pleurautgjutning hålighet av immunobristfällig atymiska möss. Transplantation i ortotopisk webbplats gör det möjligt att studera utvecklingen av tumören i den naturliga in vivo miljön. Positron emissions tomografi/datortomografi (PET/CT) molekylär avbildning med hjälp av den kliniska [18f] -2-fluoro-2-Deoxy-D-glukos ([18f] FDG) radiotracer är diagnosmetod för att undersöka patienter med MPM. Följaktligen användes [18F] FDG-PET/CT för att longitudinellt övervaka sjukdomsförloppet för H2052/484-ortotopisk modell. Denna teknik har en hög 3R potential (reducera antalet djur, refine att minska smärta och obehag, och rErsätt djur experiment med alternativ) eftersom tumörutveckling kan övervakas icke-invasivt och antalet djur som krävs kan minskas avsevärt.
Denna modell visar en hög utvecklingstakt, en snabb tumörtillväxt, är kostnadseffektiv och möjliggör snabb klinisk översättning. Genom att använda denna neobladder xenograft MPM-modell kan forskarna bedöma biologiska reaktioner av en tillförlitlig MPM-modell efter terapeutiska ingrepp.

Modellen H2052/484 neobladder Orthotopic MPM modeller genom intrathorakala injektion av odlade cancerceller, särskilt H2052/484 celler är relativt lätt att installera. De olika stegen som beskrivs ovan kräver endast blygsam cellkultur kunskap och kirurgi stegen är tillgängliga för måttligt utbildade djur praktiker. Nakna möss och celler bör manipuleras under sterila förhållanden för att maximera resultatet av implantationerna. Genom att noga följa detta protokoll, som innebär kort anest...

Watch this Scientific Journal Video about Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice at JoVE.com

Implantation and Monitoring by PET/CT of an Orthotopic Model of Human Pleural Mesothelioma in Athymic Mice

Denna artikel beskriver generationen av en ortotopisk musmodell av humant pleurautgjutning mesoteliom genom implantation av H2052/484 mesoteliom celler i pleurautgjutning hålighet av immunkomprometterade atymiska möss. Den longitudinella övervakningen av utvecklingen av intrapleural tumörer bedömdes genom icke-invasiv multimodal [18F] -2-fluoro-2-Deoxy-D-glukos positron emissions tomografi och datortomografi Imaging.

Implantation och övervakning av PET/CT av en ortotopisk modell av humant pleural mesoteliom i athymic möss

Malignant pleural mesothelioma (MPM) is a rare and aggressive tumor arising in the mesothelium that covers the lungs, the heart, and the thoracic cavity. ...

Denna metod kan bidra till att besvara viktiga frågor som rör utveckling, behandling och diagnos av humant pleura-mesoteliom. Den största fördelen med denna tillförlitliga pre-kliniska orthotopic modell är att det replikerar den mänskliga sjukdomen progression och patologi i en microenvironment nära den som finns hos patienter med pleura mesoteliom. Denna ovärderliga modell har därför stor betydelse och användningen av icke-invasiv molekylär avbildning tillåter longitudinell övervakning i linje med det tre R-konceptet.Före start förbereda anestesi systemet och kirurgiska området i en laminär flöde huva genom att spruta alla ytor med desinfektionsmedel. Placera de mikro-isolerade SPF-burarna i den desinficerade flödeshuven. Placera en värmedyna, povidon-jodlösning 30 gauge Hamilton spruta, gasväv och bomullspinner kirurgi instrument och micropipettes och tips i laminär flöde huva.När musen är ordentligt sövda subkutant injicera 0,05 milligram per kilo Buprinorfin för postoperativ pan lättnad. Placera sedan musen på sin högra sida på toppen av värmedynan och rengör det kirurgiska området med povidone-jodlösning och gör ett 5 millimeters snitt av huden. Rensa det omgivande fettet och musklerna med trubbig sax för att exponera revbenen.Homogenisera cellfjädringen och ladda 50 mikroliter i Hamiltonsprutan och se till att undvika luftbubblor. Torka av nålen med 70 %alkohol före varje injektion. Injicera långsamt cellerna i pleurahålan mellan sjätte och sjunde revbenen som håller nålen i en vinkel på 30 grader och två till tre millimeter under de interkräta musklerna.Håll nålen precis under revbenen för att undvika att injicera i lungorna. Det ska synas genom musklerna. När du är klar, stäng såret med tre till fyra resorberbara suturer och förvara musen i en varm miljö tills den vaknar.När du utför implantation är det mycket viktigt att korrekt placera nålen för att begränsa djupet av nålen penetration. Använd en värmekammares värmedyna, eller infraröd lampa för att förvärma mössen i 30 grader celsius i 30 minuter före injektion av fluor-18(FDG)Med hjälp av en doskalkylator bered tre till fyra megabecquereldoser fluor-18(FDG)i 150 till 200 mikroliter saltlösning i 1 milliliter insulinsprutor. Se till att registrera alla tider av radioaktivitetsdos mätningar injektioner, och PET-skanningar för att beräkna standard upptagningsvärden eller stadsjeepar.Väg mössen injicera sedan intravenöst fluor-18(FDG)Efter injektionen låt mössen vara vakna under varma förhållanden i 45 minuter. Sedan ladda möss på skanner säng överföra sängen till en scanner och utsätta djuren för en datortomografi centrerad på lungorna. Flytta sängen till PET-delsystemet infoga förvärvet en timme efter fluor-18(FDG)injektion under en löptid på 15 minuter.Ta sedan bort mössen från bildkammaren och låt dem återhämta sig i sin bur och hålla dem i ett område som är avsedda för radioaktivt sönderfall. Före bildanalys rekonstruera CT och PET-skanningar som beskrivs i manuskriptet. Kalibrera bilderna genom att skanna en fantomcylinder och automatiskt co registrera genomsökningar enligt den inbyggda mjukvarulösningen.För att analysera bilderna ladda CT-data som en referens genom att klicka på ikonen öppna data. Ladda sedan PET-data som inmatning genom att klicka på ikonen för append-data. Justera färgskalan så CT och PET för att kontrastera bilder för visuell inspektion.Välj 3D ROI verktyget från rullgardinsmenyn klicka på lägg till ROI, och namn filen lungor. Klicka på segmentering algoritmer och grannskap thresholding sedan definiera indata som bakgrund och bild som ref. Ange min och max enligt mus lung densitet värden.Inspektera 3D-återgivna lungor genom att klicka på VTK-ikonen. Klicka sedan på Visa tabellikon och hämta volymen i den genererade tabellen. För att analysera fluor-18(FDG)i tumörer konvertera PET-bilder till SUV genom att välja aritmetik från rullgardinsmenyn.Välj skalär multiplicity sedan använda NP en som valt och ställa in becquerel per milliliter till SUV faktor som skalär. Slutligen välja 3D ROI verktyg från rullgardinsmenyn och klicka på Lägg till ROI och namn filen tumörer. Klicka på 3D-färg läge och sfär avmarkera 2D bara och justera storleken på formen för att omge tumörer.Klicka på Visa tabell ikon och hämta DEN SUV max värde från den genererade tabellen. 3D-renderingarna från datortomografierna ger en översikt över MPM tumör lokalisering och möjliggöra beräkning av lungvolymer. Lungvolym mätningar minskar betydligt över tiden efter injektionen av intrapleural tumörer.PET-skanningen ger värdefull information om metaboliska statusen för MPM-tumörer. Tumörerna var urskiljbara två veckor efter ympning och fluor-18(FDG)upptag kvantifierades genom att utvinna stadsjeepar som var positivt korrelerade med antalet dagar efter injektion. Vidare, lungvolymer och fluor-18(FDG)avidity korrelerar med varandra med en R i kvadrat av 0,6 som stöder styrkan i dessa mätningar för övervakning MPM orthotopic tumör utveckling.Efter detta förfarande andra metoder såsom histologi, immunohistokemi och flöde cytometry kan utföras för att svara på orthobiologiological frågor såsom spridning staten och fenotypiska karakteristiska för tumörer och av mikromiljö. Som avslutning, dessa pre-kliniska tekniker bana väg för forskare att utforska nya diagnostiska och behandling strategi pleura mesoteliom. Dessutom motiverar användningen av molekylär avbildning snabb översättning av nya rön till kliniken.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

An Orthotopic Model of Serous Ovarian Cancer in Immunocompetent Mice for in vivo Tumor Imaging and Monitoring of Tumor Immune Responses

En Orthotopic Modell av serös äggstockscancer hos immunkompetenta möss In vivo Bildgivande och övervakning av tumör Immunsvar

Background: Ovarian cancer is generally diagnosed at an advanced stage where the case/fatality ratio is high and thus remains the most lethal of all ...

Comprehensive &amp; Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Comprehensive & Cost Effective Laboratory Monitoring of HIV/AIDS: an African Role Model

Omfattande och kostnadseffektiva Laboratoriet Övervakning av hiv / aids: ett afrikanskt föredöme

We present the video about assisting anti-retroviral therapy (ART) by an apt laboratory service - representing a South-African role model for economical ...

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induction of Graft-versus-host Disease and In Vivo T Cell Monitoring Using an MHC-matched Murine Model

Induktion av transplantat-mot-värd-sjukdom och<em&gt; In Vivo</em&gt; T cell övervakning med en MHC-matchade musmodell

Graft-versus-host disease (GVHD) is the limiting barrier to the broad use of bone marrow transplant as a curative therapy for a variety of hematological ...

Recurrent Herpetic Stromal Keratitis in Mice, a Model for Studying Human HSK

Återkommande herpetisk stromal keratit hos möss, en modell för att studera mänskliga HSK

Herpetic eye disease, termed herpetic stromal keratitis (HSK), is a potentially blinding infection of the cornea that results in over 300,000 clinical ...

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

An In vitro Model to Study Heterogeneity of Human Macrophage Differentiation and Polarization

Ett<em&gt; In vitro</em&gt; Modell för att studera skillnader mellan de mänskliga makrofagdifferentiering och polarisation

Monocyte-derived macrophages represent an important cell type of the innate immune system. Mouse models studying macrophage biology suffer from the ...

Optimized Protocols for Mycobacterium leprae Strain Management: Frozen Stock Preservation and Maintenance in Athymic Nude Mice

Optimized Protocols for Mycobacterium leprae Strain Management: Frozen Stock Preservation and Maintenance in Athymic Nude Mice

Optimerade protokoll för<em&gt; Mycobacterium leprae</em&gt; Draghantering: Fryst Stock Bevarande och underhåll i atymiska nakna möss

Leprosy, caused by Mycobacterium leprae, is an important infectious disease that is still endemic in many countries around the world, including Brazil. ...

A Semi-automated Approach to Preparing Antibody Cocktails for Immunophenotypic Analysis of Human Peripheral Blood

En halvautomatisk metoden att förbereda antikropp Cocktails för Immunophenotypic Analys av humant perifert blod

Immunophenotyping of peripheral blood by flow cytometry determines changes in the frequency and activation status of peripheral leukocytes during disease ...

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo Cell Trafficking by PET/CT

Murine Lymphocyte Labeling by 64Cu-Antibody Receptor Targeting for In Vivo  Cell Trafficking by PET/CT

Murina Lymfocyt Märkning av<sup&gt; 64</sup&gt; Cu-antikroppreceptor Targeting för<em&gt; In Vivo</em&gt; Cell Trafficking med PET / CT

This protocol illustrates the production of 64Cu and the chelator conjugation/radiolabeling of a monoclonal antibody (mAb) followed by murine lymphocyte ...

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analysis of Lymphocyte Extravasation Using an In Vitro Model of the Human Blood-brain Barrier

Analys av Lymphocyte Extravasation Med användning av ett<em&gt; In Vitro</em&gt; Modell av det mänskliga blod-hjärnbarriären

Lymphocyte extravasation into the central nervous system (CNS) is critical for immune surveillance. Disease-related alterations of lymphocyte ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

En IL-8 Transient Transgenized Mouse Model för<em&gt; In vivo</em&gt; Långvarig övervakning av inflammatoriska reaktioner

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...