Name: intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system
Uploaded: 2019-10-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System at JoVE.com

ونود ان نشكر Ionis الصيدلة لتوريد ASOs الموصوفة في المقالة.

وأجريت جميع الإجراءات المجرية في اطار البروتوكولات المعتمدة للجنة المعنية بالاستخدام الحيواني والرعاية المؤسسية Biogen (IACUC) التي تتبع المبادئ التوجيهية التي وضعها دليل المعاهد الوطنية للصحة في الولايات المتحدة لرعاية واستخدام الماشية المختبرية.
1. اعداد المواد والاداهات
<...

<ol>
	<li>Abbott, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+CNS+barriers:+evolution,+differentiation,+and+modulation.">Dynamics of CNS barriers: evolution, differentiation, and modulation.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 25 (1), 5-23 (2005).</li><li>Greene, C., Campbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junction+modulation+of+the+blood+brain+barrier:+CNS+delivery+of+small+molecules.">Tight junction modulation of the blood brain barrier: CNS delivery of small molecules.</a> Tissue Barriers. 4 (1), e1138017 (2016).</li><li>Daneman, R., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+barriers+in+health+and+disease.">Brain barriers in health and disease.</a> Neurobiology of Disease. 107, 1-3 (2017).</li><li>Ballabh, P., Braun, A., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-brain+barrier:+an+overview:+structure,+regulation,+and+clinical+implications.">The blood-brain barrier: an overview: structure, regulation, and clinical implications.</a> Neurobiology of Disease. 16 (1), 1-13 (2004).</li><li>Cardoso, F. L., Brites, D., Brito, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Looking+at+the+blood-brain+barrier:+molecular+anatomy+and+possible+investigation+approaches.">Looking at the blood-brain barrier: molecular anatomy and possible investigation approaches.</a> Brain Research Reviews. 64 (2), 328-363 (2010).</li><li>Larsen, J. M., Martin, D. R., Byrne, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+delivery+through+the+blood-brain+barrier.">Recent advances in delivery through the blood-brain barrier.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 14 (9), 1148-1160 (2014).</li><li>Brinker, T., Stopa, E., Morrison, J., Klinge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+look+at+cerebrospinal+fluid+circulation.">A new look at cerebrospinal fluid circulation.</a> Fluids Barriers CNS. 11, 10 (2014).</li><li>Standifer, K. M., Chien, C. C., Wahlestedt, C., Brown, G. P., Pasternak, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+loss+of+delta+opioid+analgesia+and+binding+by+antisense+oligodeoxynucleotides+to+a+delta+opioid+receptor.">Selective loss of delta opioid analgesia and binding by antisense oligodeoxynucleotides to a delta opioid receptor.</a> Neuron. 12 (4), 805-810 (1994).</li><li>Wahlestedt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligodeoxynucleotides+to+NMDA-R1+receptor+channel+protect+cortical+neurons+from+excitotoxicity+and+reduce+focal+ischaemic+infarctions.">Antisense oligodeoxynucleotides to NMDA-R1 receptor channel protect cortical neurons from excitotoxicity and reduce focal ischaemic infarctions.</a> Nature. 363 (6426), 260-263 (1993).</li><li>Wahlestedt, C., Pich, E. M., Koob, G. F., Yee, F., Heilig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+anxiety+and+neuropeptide+Y-Y1+receptors+by+antisense+oligodeoxynucleotides.">Modulation of anxiety and neuropeptide Y-Y1 receptors by antisense oligodeoxynucleotides.</a> Science. 259 (5094), 528-531 (1993).</li><li>Mazur, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simple,+rapid,+and+robust+intrathecal+catheterization+method+in+the+rat.">Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 280, 36-46 (2017).</li><li>Wolf, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+dual-isotope+molecular+imaging+elucidates+principles+for+optimizing+intrathecal+drug+delivery.">Dynamic dual-isotope molecular imaging elucidates principles for optimizing intrathecal drug delivery.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (2), e85311 (2016).</li><li>Becker, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+reduction+of+ataxin-2+extends+lifespan+and+reduces+pathology+in+TDP-43+mice.">Therapeutic reduction of ataxin-2 extends lifespan and reduces pathology in TDP-43 mice.</a> Nature. 544 (7650), 367-371 (2017).</li><li>Zhang, X., Hamblin, M. H., Yin, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+long+noncoding+RNA+Malat1:+Its+physiological+and+pathophysiological+functions.">The long noncoding RNA Malat1: Its physiological and pathophysiological functions.</a> RNA Biology. 14 (12), 1705-1714 (2017).</li><li>Crooke, S. T., Witztum, J. L., Bennett, C. F., Baker, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-Targeted+Therapeutics.">RNA-Targeted Therapeutics.</a> Cell Metabolism. 27 (4), 714-739 (2018).</li><li>DeVos, S. L., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intraventricular+delivery+of+drugs+to+the+rodent+central+nervous+system.">Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50326 (2013).</li><li>McCampbell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+extend+survival+and+reverse+decrement+in+muscle+response+in+ALS+models.">Antisense oligonucleotides extend survival and reverse decrement in muscle response in ALS models.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (8), 3558-3567 (2018).</li><li>Schoch, K. M., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+Oligonucleotides:+Translation+from+Mouse+Models+to+Human+Neurodegenerative+Diseases.">Antisense Oligonucleotides: Translation from Mouse Models to Human Neurodegenerative Diseases.</a> Neuron. 94 (6), 1056-1070 (2017).</li><li>Lane, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+Antisense+Technology+into+a+Treatment+for+Huntington's+Disease.">Translating Antisense Technology into a Treatment for Huntington's Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1780, 497-523 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+in+neurological+disorders.">Antisense oligonucleotides in neurological disorders.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li><li>Hach&#233;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+Injections+in+Children+With+Spinal+Muscular+Atrophy:+Nusinersen+Clinical+Trial+Experience.">Intrathecal Injections in Children With Spinal Muscular Atrophy: Nusinersen Clinical Trial Experience.</a> Journal of Child Neurology. 31 (7), 899-906 (2016).</li><li>Goodkey, K., Aslesh, T., Maruyama, R., Yokota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+in+the+Treatment+of+Spinal+Muscular+Atrophy.">Nusinersen in the Treatment of Spinal Muscular Atrophy.</a> Methods in Molecular Biology. 1828, 69-76 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+for+spinal+muscular+atrophy.">Nusinersen for spinal muscular atrophy.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li></ol>

وتبين هذه المادة طريقه قويه لتسليم العوامل العلاجية مباشره إلى الفئران العصبية. من الناحية النظرية ، يمكن أيضا ان يتم تنفيذ تقنيه مماثله في الفئران ، علي الرغم من انه نظرا لصغر حجمها ، فان الطريقة يمكن ان تكون أكثر تحديا. ولذلك ، تقوم مجموعتنا باجراء حقن البطين البطيني (ICV) في الفئران لتسلي?...

وقد تطور نظام الاوعيه الدموية في الجهاز العصبي المركزي (CNS) كمنظم الحرجة من التوازن ، والسيطرة علي حركه المرور من الجزيئات ، وتوفير المواد الغذائية والتخلص من النفايات. هذا النظام هو أيضا خط الدفاع الأول من هجمات مسببات الامراض الخارجية ، وذلك بفضل التوزيع الكثيف لتقاطعات ضيقه علي طول جدران الخلايا البطانية. هذه التقاطعات الضيقة تشكل جانبا واحدا من حاجز الدم في الدماغ (BBB). في حين يسمح BBB نقل الجزيئات المطلوبة لتلبيه الاحتياجات الغذائية والطاقة (علي سبيل المثال ، الأيونات والجلوكوز) ، فانه يحد أيضا بشكل انتقائي مرور مسببات الامراض وكذلك المواد الكيميائية السامة1،2،3.
ومن المفارقات ان نفس وظيفة الحماية من BBB التي تحد من مرور مسببات الامراض والمواد الكيميائية السامة هي أيضا العقبة الرئيسية امام قدرتنا علي الوصول بسهوله إلى الجهاز العصبي العام مع العلاجات العلاجية بعد الاداره الجهازية للكائن2، 4,5. وقد حفز هذا الدور لتطوير مجموعه كبيره من التكنولوجيات والنهج الجديدة لتوزيع المخدرات6.
طريقه واحده للتغلب علي هذه العقبة هو حقن المخدرات مباشره في السائل النخاعي (السائل الدماغي الشوكي) التي perfuses باستمرار كل من الدماغ والحبل الشوكي7,8,9,10. في هذه المقالة ، ونحن وصف طريقه لتسليم العملاء بنجاح في الفضاء داخل البراز القطنية عن طريق وضع الطرف الداخلي للقثطار تماما في الفضاء المساواة متلازم من العمود الفقري الفئران. وقد سبق ان نشر السيد مازور وآخرون وصفا لهذا الاجراء في الأماكن الأخرى11.
والبروتوكول فعال جدا وينتج معدل نجاح أكبر من 90 في المائة من التسليم المضاد لقله الكريات الوحيدة المفعول (ASO) إلى النظام العصبي الوطني عند تقييمه بواسطة تحليل تفاعل البلمره الكمي (qPCR) للجينات المستهدفة بالضربة القاضية8. الاجراء يسبب الحد الأدنى من الانزعاج للحيوانات ، كما 100 ٪ من الفئران البقاء علي قيد الحياة الجراحة وتظهر الحد الأدنى من التورم حول الجرح الجراحي وعدم وجود علامات الاستغاثة (علي سبيل المثال ، فرط النشاط ، والجفاف ، وتحلق ، وفقدان التوازن ، وانخفاض كميه الطعام ، و الجفاف) خلال فتره ما بعد العملية المراقبة. ميزه أخرى من الطريقة الموصوفة هنا هو انه لا يتطلب معدات باهظه الثمن ، ولا اي أدوات خاصه.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3M Steri-Drape Small Drape with Adhesive Aperture</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc</td>
			<td></td>
			<td>8416-160Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swab sticks</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>NO 1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="https://punchout.fishersci.com/shop/products/bd-general-use-syringes-5/22124967?crossRef=BD%20302830#?keyword=BD+302830">BD General Use Syringes 1 mL Luer-Lok tip</a></td>
			<td>BD</td>
			<td>1ml TB Luer-Lok tip</td>
			<td>BD 302830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE50 Diameter 0.023 in</td>
			<td>BD 427400 (10ft, Fischer Scientific 22-204008) or 427401 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12P)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE10 Diameter 0.011 in</td>
			<td>BD 427410 (10ft, Fischer Scientific 14-170-11B) or 4274011 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12B)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing Adapters</td>
			<td>BD</td>
			<td>23 gauge intramedic luer stub adaper</td>
			<td>BD 427565 or Fisher Scientific 14-826-19E</td>
			<td>120V 1.2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Single-use Needles 30G</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>BD 305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Sustained Release-lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>Prescription required</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene oxide sterilizer</td>
			<td>Andersen Sterilizer INC.</td>
			<td>AN 74i, gas sterilizer</td>
			<td>AN 74i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>BD</td>
			<td>19G x 1 WT (1.1 mm x 25mm) needle</td>
			<td>BD 305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td>Hamilton company</td>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead Sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td>STERILIZER MODELNO FST 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra veterranery product</td>
			<td></td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pocket Pro Pet Trimmer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td>CLP-9931 B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone scrub</td>
			<td>PDI</td>
			<td></td>
			<td>S48050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Sodium Chloride 0.9% Intravenous Infusion BP 50ml</td>
			<td>FE1306G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>disposable scalpel</td>
			<td>No. 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal heating pad</td>
			<td>K&#38;H Manufacturing</td>
			<td></td>
			<td>Model # 1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1749T14</td>
			<td>LH-36233780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Towel drape</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>4410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors and forceps</td>
			<td>FST and Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>4-0 or 5-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tool to make the Guide cannular</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>Rotary tool (Dremel)</td>
			<td>14H446 (Mfr: EZ456)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter, Pk5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock cut off Wheel</td>
			<td>1PKX5 (Mfr: 3000-1/24)</td>
			<td>1.5&#8221;, Pk2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Grinding Wheel, Aluminum Oxide</td>
			<td>38EY44 (Mfr: EZ541GR)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock Mandrel</td>
			<td>1PKX8 (Mfr: EZ402-01)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diamond wheel floor Tile</td>
			<td>3DRN4 (Mfr: EZ545)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative source for pre-made and sterilized materials for this procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosing catheter system</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-GCA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Internal Catheters</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-INC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-STY</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system

حاجز الدم في الدماغ (BBB) هو دفاع مهم ضد مدخل العوامل التي يحتمل ان تكون سامه أو المسببة للامراض من الدم إلى الجهاز العصبي المركزي (CNS). ومع ذلك ، فان وجودها يقلل أيضا بشكل كبير من امكانيه الوصول إلى العوامل العلاجية الخاضعة للنظام الجهازي للجهاز العصبي الخاص. طريقه واحده للتغلب علي هذا ، هو حقن تلك العوامل مباشره في السائل النخاعي (الدماغي الشوكي) ، التالي تجاوز BBB. ويمكن القيام بذلك عن طريق غرس القسطرة اما للحقن المستمر باستخدام مضخة اوموتيك ، أو للتسليم بالبولي واحد. في هذه المقالة ، ونحن وصف بروتوكول العمليات الجراحية لتسليم الموجات العصبية التي تستهدف مضادات الأقليات (ASOs) عن طريق القسطرة زرعت مباشره في الفضاء المساواة متلازم من العمود الفقري الفئران الكبار. وكنتائج تمثيليه ، فاننا نظهر فعاليه حقنه واحده من البولي بالبراز (IT) من خلال نظام القسطرة هذا في إسقاط الجيش النيبالي الريبي المستهدف في مناطق مختلفه من الفئران CNS. الاجراء أمن وفعال ولا يتطلب معدات باهظه الثمن أو أدوات جراحيه. ويمكن تكييف التقنية الموصوفة هنا لتقديم الادويه في طرائق أخرى أيضا.

باستخدام الطريقة الموصوفة هنا ، قمنا بحقن مجموعتين من الجرذان الانثويه البالغة (250 − 300 غ ؛ ن = 10/مجموعه) اما بالنسبة لكل من الفوسفات المخزن بالمحلول الملحي أو 300 ميكروغرام من اسو التي تستهدف التشفير الطويل غير الترميز (لينك) RNA Malat1 ؛ في مختبرنا نستخدم بشكل روتيني Malat1 ASO كمرك?...

Watch this Scientific Journal Video about Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System at JoVE.com

Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System

هنا ، ونحن وصف طريقه لتسليم المخدرات إلى الجهاز العصبي المركزي الفئران عن طريق زرع قسطرة في الفضاء داخل البراز القطني من العمود الفقري. ونحن نركز علي تسليم قله الكريات الأقليات انتيسنس ، علي الرغم من ان هذه الطريقة هي مناسبه لتسليم الطرائق العلاجية الأخرى ، وكذلك.

توصيل البراز المضاد للندرة في الجهاز العصبي المركزي للفئران

The blood brain barrier (BBB) is an important defense against the entrance of potentially toxic or pathogenic agents from the blood into the central ...

يسمح هذا البروتوكول بالتسليم المباشر للعلاجات في الجهاز العصبي المركزي للجرذان لتقييم العوامل الدوائية والديناميكا الدوائية وفعالية العلاجات الجديدة في نماذج أمراض الفئران. هذا الإجراء آمن وفعال ولا يتطلب معدات باهظة الثمن أو أدوات جراحية. وسوف يكون إثبات الإجراء يي تشن ويي لو، علماء البحوث من مختبري.لإعداد cannulas دليل خاص، واستخدام أداة دوارة مع قطع عجلة لقطع كلا طرفي إبرة قياس 19 للحصول على ما يقرب من واحد ونصف إلى اثنين من cannula دليل سنتيمتر طويل. ثم استخدام عجلة طحن من أداة دوارة على نحو سلس كلا الطرفين. لإعداد الجمعية الأسلاك القسطرة، وقطع واحد قطعة طولها ثمانية سنتيمترات من 011 بوصة قطر PE10 الأنابيب لتكون بمثابة القسطرة داخل القثطار لكل.استخدم قلم علامة مقاومة الإيثانول لجعل علامة سمين من نهاية واحدة من كل قطعة من الأنابيب. لكل حيوان، إدراج سلك نمط 11 سنتيمترا طويلة قطع من البوليتيترافلورو الإيثيلين المغلفة أسلاك الفولاذ المقاوم للصدأ في تجويف القسطرة PE10 سنتيمتر ثمانية. لإعداد تجميع قسطرة التسليم، قطع قطعة من خمسة إلى 10 سنتيمتر 023 بوصة قطر PE50 القسطرة وإدراج محول أنابيب قياس 23 في نهاية واحدة من القسطرة.ثم أدخل إبرة قياس 30 مع محور قطع إلى ما يقرب من 0.5 سنتيمتر قطعة من أنابيب PE10 وربط أنابيب PE10 إلى الطرف الآخر من القسطرة. لإعداد دليل تجميع الإبرة cannula، وضع قنية دليل على نهاية إبرة قياس 23. قبل البدء في الجراحة، ضع وسادة تسخين على طاولة الجراحة واغطي الوسادة بغطاء معقمة من الأغطية.ضع أنبوب طرد مركزي مخروطي 50mL على الورقة وتأكد من عدم الاستجابة لقرصة إصبع في الجرذ التجريبي المُجرف. بعد وزن الحيوان، حلق الظهر من الذيل إلى العمود الفقري الصدري السدي ووضع الجرذ الحليق على ورقة معقم في موقف عرضة. ضع أنبوب 50 مل تحت البطن لثني العمود الفقري في منطقة أسفل الظهر ، وتطبيق مرهم العيون على العينين.المقبل، حقن تحت الجلد مليغرام واحد لكل كيلوغرام من الإفراج المستمر Buprenorphine وتنظيف الجلد المكشوفة مع povidone متتابعة والدعك الكحول. ثني الحيوان مع ورقة شفافة معقم. لوضع القسطرة وحقن المركب ، حدد الحفرتين الطبيعيتين بين العضلات فوق الحوض الحليق ، ومع وجود يد واحدة تحمل الحفر ، استخدم اليد الأخرى للضغط بلطف والشعور بالعمود الفقري من الاتجاه السدي إلى الاتجاه التاجي لتحديد المسافة البادئة الرئيسية الأولى بين الفقرات.بعد تحديد الفضاء بين الفقرات بين الفقرتين S1 و L6، انتقل قليلاً إلى حد ما لتحديد الفضاء بين الفقرات بين الفقرتين L5 و L6. استخدام مشرط لجعل شق لا يزيد عن سنتيمترين طويلة في الجلد والعضلات كبسولة في هذا الموقع على طول خط الوسط من اتجاه روسترال إلى السد بحيث يكون موقع الحقن في مركز الشق. استخدام مقص تشريح لتشريح بعيدا النسيج الضام حتى يمكن تصور طبقة العضلات.إجراء شق سنتيمتر واحد في كبسولة العضلات الجانبي على الفور إلى عملية العمود الفقري الظهرية في الفقرات القطنية L6. ضع دليل الإبرة التجميع بالقرب من الجانب الأمامي من الفقرة القطنية السادسة ودفع الجمعية في الفضاء بين الفقرات على طول الجانب الأمامي من الفقرة السادسة بحيث تخترق نهاية الإبرة القناة الشوكية. استخدام ملقط حادة لتحديد موقع عملية العمود الفقري الظهرية من الفقرات القطنية L6 ثم دفع الإبرة على طول الجانب الأمامي من الفقرة السادسة في الفضاء العاكس.دفع قنية دليل في مكان على طول الإبرة، وإزالة الإبرة، وإدراج تجميع سلك القسطرة في cannula دليل. الالقنان القسطرة في زاوية 45 درجة تقريبا إلى القناة الشوكية، قوة نهاية القسطرة ما يقرب من 0.3 سم في القناة. إزالة سلك نمط ما يقرب من 2.5 سم من داخل الطرف القثطار وتقدم القسطرة في القناة الشوكية حتى وسم اثنين سنتيمتر على القسطرة مرئية فقط تحت العضلات.عندما يكون القسطرة في مكانها، قم بإزالة قنية الدليل لترك القسطرة والأسلاك في مكانها. تقدم القسطرة في القناة الشوكية حتى علامة سنتيمترين عند مدخل القناة وسحب السلك النمط تماما. يمكن تصور السائل الشوكي الدماغي دخول القسطرة المزروعة.ثم قم بتوصيل تجميع قسطرة التسليم إلى نهاية القثطار المزروع عبر نهاية إبرة قياس 30. بعد ذلك ، قم بتحميل 60 ميكرولترات من المالحة المعقمة في حقنة 100 ميكروليتر وتحميل بولوس من 30 ميكروليتر من مجمع الاختبار في حقنة ثانية. توصيل حقنة ملحية إلى نهاية محول أنابيب من تجميع قسطرة التسليم وشطف 20 ميكرولترات من المالحة العقيمة في الفضاء داخلالكال.عندما يتم مسح كل من المالحة، استبدال حقنة المالحة مع حقنة محملة bolus وحقن 30 ميكرولترات من مجمع الاختبار في الفضاء داخلالكال على مدى فترة 30 ثانية. عندما تم تسليم كل من bolus، استبدال حقنة محملة بولوس مع حقنة أخرى محملة المالحة وشطف القسطرة مع 40 ميكرولترات إضافية من المالحة. عندما تم تسليم الحجم الثاني من المالحة، فصل الجمعية قسطرة التسليم من القسطرة المزروعة واستخدام زوج من حار جدا الحرارة معقمة تشريح ملقط لتضييق الخناق على أنابيب لقطع aseptically والحرارة ختم القسطرة المزروعة.استخدم خياطة أحادية قابلة للامتصاص لتأمين القسطرة المختومة حراريًا إلى النسيج الضام ثم استخدم خياطة غير قابلة للغلق لإغلاق الجلد. ثم استخدم الشاش والملوحة لغسل أي دم من الجلد ووضع الجرذ في حاضنة ساخنة مع المراقبة حتى إعادة الكفاءة الكاملة. في هذه التجربة التمثيلية، تم الحصول على ضربة قاضية جيدة جدا في جميع المناطق التي تم جمعها بعد تسليم oligonucleotide واحد bolus antisense كما هو موضح.ومع ذلك، تم قياس درجة ما من التباين الإقليمي مع إظهار الحبل الشوكي أعلى نسبة من الضربة القاضية. بعد الحقن الناجح لـ oligonucleotide antisense ، أو علاجات أخرى ، في نموذج مناسب ، يمكن للمرء تقييم العوامل الدوائية ، والديناميكا الدوائية ، وفعالية العلاجات.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

النظامية والمحلية تسليم المخدرات لعلاج أمراض الجهاز العصبي المركزي في المجموعات القوارض

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System

العصب البصري Transection : نموذج من موت الخلايا المبرمج الخلية العصبية الكبار في الجهاز العصبي المركزي

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. 
The optic nerve can be ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

التصوير المتعدد الوسائط من زرع الخلايا الجذعية في الجهاز العصبي المركزي من الفئران

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

انتاج ناقلات Lentiviral للخلايا Transducing من الجهاز العصبي المركزي

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

وضع العلامات واحدة من الخلايا في الجهاز العصبي المركزي<em&gt; ذبابة الفاكهة الدروسوفيلا</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

والنموذج الإصابات المعنية بالتحقيق في وسط الجهاز العصبي في إصلاح<em&gt; ذبابة الفاكهة</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

مباشرة داخل البطين تسليم المخدرات الى القوارض الجهاز العصبي المركزي

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

تحليل المناعى في الجهاز العصبي المركزي والمحيطي الجرذ العقدة الليمفاوية أقسام الأنسجة

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

في الجسم الحي الاستجواب من النظام العصبي المركزي Translatome بواسطة Polyribosome تجزئة

Multiple processes are involved in gene expression including transcription, translation and stability of mRNAs and proteins. Each of these steps are ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

في الجسم الحي Optogenetic تحفيز الجهاز العصبي المركزي القوارض

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...