Name: intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system
Uploaded: 2019-10-29T14:00:00
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Wir danken Ionis Pharmaceuticals für die Lieferung der in dem Artikel beschriebenen ASOs.

Alle In-vivo-Verfahren wurden im Rahmen des vom Biogen Institutional Animal Use and Care Committee (IACUC) genehmigten Protokollen durchgeführt, die den Richtlinien des United States National Institutes of Health Guide für die Pflege und Verwendung von Labortieren entsprechen.
1. Material- und Instrumentenvorbereitung
<ol><li>Bereiten Sie die speziellen Führungskanülen vor.<ol>
<li>Verwenden Sie ein Drehwerkzeug mit Trennrad (oder einer scharfen Säge), um die beiden Enden einer 19 G Nad...

<ol>
	<li>Abbott, N. 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F., Yee, F., Heilig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+anxiety+and+neuropeptide+Y-Y1+receptors+by+antisense+oligodeoxynucleotides.">Modulation of anxiety and neuropeptide Y-Y1 receptors by antisense oligodeoxynucleotides.</a> Science. 259 (5094), 528-531 (1993).</li><li>Mazur, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simple,+rapid,+and+robust+intrathecal+catheterization+method+in+the+rat.">Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 280, 36-46 (2017).</li><li>Wolf, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+dual-isotope+molecular+imaging+elucidates+principles+for+optimizing+intrathecal+drug+delivery.">Dynamic dual-isotope molecular imaging elucidates principles for optimizing intrathecal drug delivery.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (2), e85311 (2016).</li><li>Becker, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+reduction+of+ataxin-2+extends+lifespan+and+reduces+pathology+in+TDP-43+mice.">Therapeutic reduction of ataxin-2 extends lifespan and reduces pathology in TDP-43 mice.</a> Nature. 544 (7650), 367-371 (2017).</li><li>Zhang, X., Hamblin, M. H., Yin, K. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intraventricular+delivery+of+drugs+to+the+rodent+central+nervous+system.">Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50326 (2013).</li><li>McCampbell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+extend+survival+and+reverse+decrement+in+muscle+response+in+ALS+models.">Antisense oligonucleotides extend survival and reverse decrement in muscle response in ALS models.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (8), 3558-3567 (2018).</li><li>Schoch, K. M., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+Oligonucleotides:+Translation+from+Mouse+Models+to+Human+Neurodegenerative+Diseases.">Antisense Oligonucleotides: Translation from Mouse Models to Human Neurodegenerative Diseases.</a> Neuron. 94 (6), 1056-1070 (2017).</li><li>Lane, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+Antisense+Technology+into+a+Treatment+for+Huntington's+Disease.">Translating Antisense Technology into a Treatment for Huntington's Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1780, 497-523 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. 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D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+for+spinal+muscular+atrophy.">Nusinersen for spinal muscular atrophy.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li></ol>

Der vorliegende Artikel zeigt eine leistungsfähige Methode, um therapeutische Wirkstoffe direkt in das CNS der Ratte zu liefern. Theoretisch kann eine ähnliche Technik auch bei Mäusen durchgeführt werden, obwohl aufgrund der kleineren Größe die Methode anspruchsvoller sein kann. Daher führt unsere Gruppe intracerebroventricular (ICV) Injektionen bei Mäusen für die CNS-Medikamentenabgabe durch, die die gleichen Ziele über einen anderen Verabreichungsweg erreichen. Diese Methode wurde in einer anderen Studie besc...

Das Gefäßsystem des Zentralnervensystems (ZNS) hat sich zu einem kritischen Regulator der Homöostase entwickelt, der den Handel mit Molekülen steuert, Nährstoffe liefert und Abfall loswird. Dieses System ist auch die erste Verteidigungslinie gegen Angriffe von externen Krankheitserregern, dank einer dichten Verteilung von engen Kreuzungen entlang der Wände der Endothelzellen. Diese engen Kreuzungen bilden einen Aspekt der Blut-Hirn-Schranke (BBB). Während das BBB den Transport von Molekülen ermöglicht, die zur Erfüllung des Nährstoff- und Energiebedarfs (z.B. Ionen, Glukose) erforderlich sind, begrenzt es auch selektiv den Durchgang von Krankheitserregern sowie toxischen Chemikalien1,2,3.
Ironischerweise ist die gleiche Schutzfunktion des BBB, die den Durchgang von Krankheitserregern und toxischen Chemikalien begrenzt, auch das Haupthindernis für unsere Fähigkeit, mit therapeutischen Behandlungen nach systemischer Verabreichung an den Organismus leicht auf das ZNS zuzugreifen2, 4,5. Diese Rolle des BBB hat zur Entwicklung einer Vielzahl neuer Technologien und Ansätze für den Vertrieb von Arzneimitteln geführt6.
Eine Möglichkeit, dieses Hindernis zu überwinden, ist die Injektion der Medikamente direkt in die Zerebrospinalflüssigkeit (CSF), die kontinuierlich durchdringt sowohl das Gehirn und Rückenmark7,8,9,10. In diesem Artikel beschreiben wir eine Methode, um Agenten erfolgreich in den lendenintrathekalen Raum zu liefern, indem das innere Ende des Katheters vollständig in den Cauda-Equina-Raum der Rattenwirbelsäule gestellt wird. Eine Beschreibung dieses Verfahrens wurde zuvor von Mazur et al. andernorts veröffentlicht11.
Das Protokoll ist sehr effektiv und erzeugt eine Erfolgsrate von mehr als 90% der Antisense-Oligonukleotid (ASO)-Abgabe an das ZNS, wenn es durch quantitative Polymerase-Kettenreaktion (qPCR) Analyse des Zielgenknockdowns8bewertet wird. Das Verfahren verursacht minimale Beschwerden bei den Tieren, da 100% der Ratten die Operation überleben und minimale Schwellungen um die chirurgische Wunde zeigen und keine Anzeichen von Not zeigen (z. B. Hyperaktivität, Dehydrierung, Kreisen, Gleichgewichtsverlust, verminderte Nahrungsaufnahme und Dehydrierung) während der Post-Op-Beobachtung. Ein weiterer Vorteil der hier beschriebenen Methode ist, dass sie weder teure Ausrüstung noch Spezialwerkzeuge benötigt.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3M Steri-Drape Small Drape with Adhesive Aperture</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc</td>
			<td></td>
			<td>8416-160Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swab sticks</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>NO 1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="https://punchout.fishersci.com/shop/products/bd-general-use-syringes-5/22124967?crossRef=BD%20302830#?keyword=BD+302830">BD General Use Syringes 1 mL Luer-Lok tip</a></td>
			<td>BD</td>
			<td>1ml TB Luer-Lok tip</td>
			<td>BD 302830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE50 Diameter 0.023 in</td>
			<td>BD 427400 (10ft, Fischer Scientific 22-204008) or 427401 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12P)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE10 Diameter 0.011 in</td>
			<td>BD 427410 (10ft, Fischer Scientific 14-170-11B) or 4274011 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12B)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing Adapters</td>
			<td>BD</td>
			<td>23 gauge intramedic luer stub adaper</td>
			<td>BD 427565 or Fisher Scientific 14-826-19E</td>
			<td>120V 1.2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Single-use Needles 30G</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>BD 305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Sustained Release-lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>Prescription required</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene oxide sterilizer</td>
			<td>Andersen Sterilizer INC.</td>
			<td>AN 74i, gas sterilizer</td>
			<td>AN 74i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>BD</td>
			<td>19G x 1 WT (1.1 mm x 25mm) needle</td>
			<td>BD 305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td>Hamilton company</td>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead Sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td>STERILIZER MODELNO FST 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra veterranery product</td>
			<td></td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pocket Pro Pet Trimmer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td>CLP-9931 B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone scrub</td>
			<td>PDI</td>
			<td></td>
			<td>S48050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Sodium Chloride 0.9% Intravenous Infusion BP 50ml</td>
			<td>FE1306G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>disposable scalpel</td>
			<td>No. 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal heating pad</td>
			<td>K&#38;H Manufacturing</td>
			<td></td>
			<td>Model # 1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1749T14</td>
			<td>LH-36233780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Towel drape</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>4410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors and forceps</td>
			<td>FST and Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>4-0 or 5-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tool to make the Guide cannular</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>Rotary tool (Dremel)</td>
			<td>14H446 (Mfr: EZ456)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter, Pk5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock cut off Wheel</td>
			<td>1PKX5 (Mfr: 3000-1/24)</td>
			<td>1.5&#8221;, Pk2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Grinding Wheel, Aluminum Oxide</td>
			<td>38EY44 (Mfr: EZ541GR)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock Mandrel</td>
			<td>1PKX8 (Mfr: EZ402-01)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diamond wheel floor Tile</td>
			<td>3DRN4 (Mfr: EZ545)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative source for pre-made and sterilized materials for this procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosing catheter system</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-GCA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Internal Catheters</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-INC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-STY</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system

Die Blut-Hirn-Schranke (BBB) ist eine wichtige Abwehr gegen den Eintritt potenziell toxischer oder pathogener Wirkstoffe aus dem Blut in das Zentralnervensystem (ZNS). Seine Existenz verringert jedoch auch die Zugänglichkeit systemisch verabreichter therapeutischer Wirkstoffe zum ZNS drastisch. Eine Methode, dies zu überwinden, besteht darin, diese Wirkstoffe direkt in die Zerebrospinalflüssigkeit (CSF) zu injizieren und damit die BBB zu umgehen. Dies kann durch Implantation eines Katheters zur kontinuierlichen Infusion mit einer osmotischen Pumpe oder zur Einzelbolusabgabe erfolgen. In diesem Artikel beschreiben wir ein chirurgisches Protokoll zur Abgabe von CNS-targeting Antisense Oligonukleotiden (ASOs) über einen Katheter, der direkt in den Cauda-Equina-Raum der erwachsenen Rattenwirbelsäule implantiert wird. Als repräsentative Ergebnisse zeigen wir die Wirksamkeit einer einzelnen Bolus-ASO-Intrathekalinjektion (IT) über dieses Katheterisierungssystem bei der Abschlagsmenge der Ziel-RNA in verschiedenen Regionen des Ratten-ZNS. Das Verfahren ist sicher, effektiv und erfordert keine teure Ausrüstung oder chirurgische Werkzeuge. Die hier beschriebene Technik kann angepasst werden, um Medikamente auch in anderen Modalitäten zu liefern.

Mit der hier beschriebenen Methode injizierten wir zwei Gruppen erwachsener weiblicher Ratten (250-300 g; n = 10/Gruppe) entweder mit einem einzigen Bolus phosphatgepufferter Saline-PBS oder 300 g ASO, die auf die lange nicht-kodierende (linc) RNA Malat1 abzielten; in unserem Labor verwenden wir routinemäßig die Malat1 ASO als Werkzeugverbindung, weil Malat1 allgegenwärtig und auf hohen Ebenen in allen Geweben14ausgedrückt wird, einschließlich Gehirn und Rück...

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Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System

Hier beschreiben wir eine Methode zur Abgabe von Medikamenten an das zentrale Nervensystem der Ratte, indem wir einen Katheter in den lendenintrathekalen Raum der Wirbelsäule implantieren. Wir konzentrieren uns auf die Lieferung von Antisense-Oligonukleotiden, obwohl diese Methode auch für die Lieferung anderer therapeutischer Modalitäten geeignet ist.

Intrathekale Lieferung von Antisense Oligonukleotiden im Zentralen Nervensystem der Ratte

The blood brain barrier (BBB) is an important defense against the entrance of potentially toxic or pathogenic agents from the blood into the central ...

Dieses Protokoll ermöglicht die direkte Abgabe von Therapeutika in das zentrale Nervensystem der Ratte, um die Pharmakokinetik, Pharmakodynamik und Wirksamkeit neuartiger Therapeutika in Rattenkrankheitsmodellen zu bewerten. Dieses Verfahren ist sicher, effektiv und erfordert keine teuren Geräte oder chirurgischen Werkzeuge. Demonstriert wird das Verfahren von Yi Chen und Yi Luo, Forschern aus meinem Labor.Um die speziellen Führungskanülen vorzubereiten, verwenden Sie ein Drehwerkzeug mit einem abgeschnittenen Rad, um beide Enden einer 19-Spur-Nadel abzuschneiden, um eine etwa eineinhalb bis zwei Zentimeter lange Führungskanüle zu erhalten. Dann verwenden Sie die Schleifscheibe des Drehwerkzeugs, um beide Enden zu glätten. Zur Vorbereitung der Katheterdrahtanordnung schneiden Sie ein acht Zentimeter langes Stück PE10-Schläuche mit einem Durchmesser von 011 Zoll als intrathekalen Katheter für jedes Tier.Verwenden Sie einen ethanolresistenten Markerstift, um eine Markierung zwei Zentimeter von einem Ende jedes Schlauchstücks zu machen. Legen Sie für jedes Tier einen 11 Zentimeter langen, aus Polytetrafluorethylen beschichteten Edelstahldraht in das Lumen des acht Zentimeter großen PE10-Katheters ein. Zur Vorbereitung der Lieferkatheterbaugruppe ein Stück von fünf bis 10 Zentimetern PE50-Katheter mit einem Durchmesser von 023 Zoll schneiden und einen 23-Spur-Schlauchadapter in ein Ende des Katheters stecken.Legen Sie dann eine 30-Spur-Nadel mit abgeschnittener Nabe in ein etwa 0,5 Zentimeter großes Stück PE10-Schläuche ein und verbinden Sie den PE10-Schlauch mit dem anderen Ende des Katheters. Um eine Führungskanülennadel-Montage vorzubereiten, legen Sie eine Führungskanüle über das Ende einer 23-Spur-Nadel. Bevor Sie mit der Operation beginnen, legen Sie ein Heizkissen auf den Operationstisch und bedecken Sie das Pad mit einem sterilen Drapat.Legen Sie ein 50 ml konisches Zentrifugenrohr auf das Blatt und bestätigen Sie einen Mangel an Reaktion auf Zehenkneifen in der anästhesierten experimentellen Ratte. Nach dem Wiegen des Tieres den Rücken vom Schwanz bis zur kaudalen Brustwirbelsäule rasieren und die rasierte Ratte auf das sterile Blatt in der anfälligen Position legen. Positionieren Sie das 50ml-Rohr unter dem Bauch, um die Wirbelsäule im Lendenbereich zu biegen, und tragen Sie die ophthalmologische Salbe auf die Augen auf.Als nächstes, subkutan injizieren ein Milligramm pro Kilogramm anhaltende Freisetzung Buprenorphin und reinigen Sie die exponierte Haut mit sequentiellen Povidon und Alkohol Peelings. Das Tier mit einem sterilen transparenten Blatt verdornen. Für die Platzierung des Katheters und die Injektion der Verbindung, identifizieren Sie die beiden natürlichen Gruben zwischen den Muskeln über dem rasierten Becken, und mit einer Hand, die die Gruben hält, verwenden Sie die andere Hand, um sanft zu drücken und fühlen Sie die Wirbelsäule von der kaudalen zur rostralen Richtung, um den ersten großen Einzug zwischen den Wirbeln zu lokalisieren.Nach der Identifizierung des Intervertebral-Raums zwischen den Wirbeln S1 und L6, bewegen Sie sich leicht rostral, um den Intervertebral-Raum zwischen den Wirbeln L5 und L6 zu identifizieren. Verwenden Sie ein Skalpell, um einen nicht mehr als zwei Zentimeter langen Schnitt in Haut und Muskelkapsel an dieser Stelle entlang der Mittellinie von der rostralen bis kaudalen Richtung zu machen, so dass die Injektionsstelle in der Mitte des Einschnitts sein wird. Verwenden Sie eine Sezierschere, um das Bindegewebe zu sezieren, bis die Muskelschicht visualisiert werden kann.Machen Sie einen ein Zentimeter Schnitt in der Muskelkapsel sofort seitlich zum dorsalen Wirbelsäulenprozess des L6 Lendenwirbels. Positionieren Sie die Führungskanülennadelinin in der Nähe des vorderen Aspekts des sechsten Lendenwirbels und schieben Sie die Baugruppe entlang des vorderen Aspekts des sechsten Wirbels in den Intervertebralen Raum, so dass das Ende der Nadel in den Spinalkanal eindringt. Verwenden Sie stumpfe Zangen, um den dorsalen Wirbelsäulenprozess des L6-Lendenwirbels zu lokalisieren und dann die Nadel entlang des vorderen Aspekts des sechsten Wirbels in den wirbellosen Raum zu schieben.Drücken Sie die Führungskanüle entlang der Nadel, entfernen Sie die Nadel und legen Sie die Katheterdrahtbaugruppe in die Führungskanüle ein. Wenn Sie den Katheter in einem etwa 45-Grad-Winkel zum Spinalkanal anwinkeln, zwingen Sie das Ende des Katheters etwa 0,3 Zentimeter in den Kanal. Entfernen Sie den Stylet-Draht etwa 2,5 Zentimeter von der intrathekalen Spitze des Katheters und leiten Sie den Katheter in den Spinalkanal, bis die zwei Zentimeter markierte Markierung am Katheter nur unterhalb des Muskels sichtbar ist.Wenn der Katheter vorhanden ist, entfernen Sie die Führungskanüle, um den Katheter und den Stylet-Draht an Ort und Stelle zu lassen. Fördern Sie den Katheter in den Spinalkanal, bis sich die Zwei-Zentimeter-Marke am Eingang des Kanals befindet, und ziehen Sie den Stylet-Draht vollständig zurück. Zerebrale Rückenmarksflüssigkeit kann beim Eindringen in den implantierten Katheter visualisiert werden.Dann verbinden Sie die Entbindungskatheterbaugruppe über das 30-Spur-Nadelende an das distale Ende des implantierten Katheters. Als nächstes 60 Mikroliter steriler Saline in eine 100-Mikroliter-Spritze laden und einen Bolus von 30 Mikrolitern der Prüfverbindung in eine zweite Spritze laden. Schließen Sie die Salinespritze an das Rohradapterende der Förderkatheterbaugruppe an und spülen Sie 20 Mikroliter steriler Saline in den intrathekalen Raum.Wenn die gesamte Saline gespült wurde, ersetzen Sie die Salinespritze durch die Bolus-Spritze und injizieren Sie 30 Mikroliter der Testverbindung über einen Zeitraum von 30 Sekunden in den intrathekalen Raum. Wenn der gesamte Bolus geliefert ist, ersetzen Sie die Bolus-beladungsspritze durch eine weitere mit Einer Sättigung beladene Spritze und spülen Sie den Katheter mit zusätzlichen 40 Mikroliter naline. Wenn das zweite Volumen der Kochsaline geliefert wurde, lösen Sie die Entbindungskatheterbaugruppe vom implantierten Katheter und verwenden Sie ein Paar sehr heißer wärmesterilisierter Sezierzangen, um die Schläuche zu klemmen, um den implantierten Katheter aseptisch zu schneiden und abzudichten.Verwenden Sie resorbierbare Monofilament-Nähte, um den wärmeversiegelten Katheter am Bindegewebe zu befestigen und dann nicht resorbierbare Nähte zu verwenden, um die Haut zu schließen. Dann verwenden Sie Gaze und Saline, um Blut von der Haut zu waschen und legen Sie die Ratte in einem beheizten Inkubator mit Überwachung bis zur vollen Wiederverfrorenheit. In diesem repräsentativen Experiment wurde in allen Regionen, die nach der Einzigen Bolus-Antisense-Oligonukleotid-Abgabe gesammelt wurden, ein sehr guter Knockdown erzielt, wie gezeigt.Allerdings wurde ein gewisses Maß an regionaler Variabilität gemessen, wobei das Rückenmark den höchsten Prozentsatz an Knockdown aufweist. Nach einer erfolgreichen Injektion des Antisense-Oligonukleotids oder anderer Therapeutika in ein geeignetes Modell kann man die Pharmakokinetik, Pharmakodynamik und Wirksamkeit der Therapeutika bewerten.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

Systemischen und lokalen Drug Delivery zur Behandlung von Erkrankungen des Zentralen Nervensystems in Nagermodellen

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Forschung

Neurowissenschaften

Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System

Optic Nerve Durchtrennung: Ein Modell des Adult Neuron Apoptose in das zentrale Nervensystem

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. 
The optic nerve can be ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Multimodale Bildgebung von Stem Cell Implantation in das zentrale Nervensystem der Mäuse

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

Die Produktion von lentiviralen Vektoren für die Transduktion von Zellen aus dem Zentralen Nervensystems

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Beschriften einzelner Zellen im zentralen Nervensystem<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

Eine Verletzung Paradigm Central Nervous System Repair in Untersuchen<em&gt; Drosophila</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Direkt Intraventrikuläre Abgabe von Arzneimitteln an die Nager Central Nervous System

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

Immunhistochemische Analyse im Rat des Zentralnervensystems und peripheren Lymphknoten Gewebeschnitte

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In-vivo-Abfrage des Zentralen Nervensystems durch Translatome Polyribosom Fraktionierung

Multiple processes are involved in gene expression including transcription, translation and stability of mRNAs and proteins. Each of these steps are ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo optogenetische Stimulation des Nager Central Nervous System

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...