Name: intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system
Uploaded: 2019-10-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System at JoVE.com

이 기사에 설명된 ASO를 공급해 주신 Ionis 제약에 감사드립니다.

모든 생체 내 절차는 실험실 동물의 관리 및 사용에 대한 미국 국립 보건원 가이드에 의해 명시된 지침을 따르는 Biogen 기관 동물 사용 및 관리 위원회 (IACUC) 승인 된 프로토콜에 따라 수행되었습니다.
1. 재료 및 악기 준비
<ol><li>특별 가이드 캐뉼라를 준비합니다.<ol>
<li>컷 오프 휠 (또는 날카로운 톱)이있는 회전 도구를 사용하여 19G 바늘의 두 끝을 잘라내어 ~ 1.5-2cm 길이의 가...

<ol>
	<li>Abbott, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+CNS+barriers:+evolution,+differentiation,+and+modulation.">Dynamics of CNS barriers: evolution, differentiation, and modulation.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 25 (1), 5-23 (2005).</li><li>Greene, C., Campbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junction+modulation+of+the+blood+brain+barrier:+CNS+delivery+of+small+molecules.">Tight junction modulation of the blood brain barrier: CNS delivery of small molecules.</a> Tissue Barriers. 4 (1), e1138017 (2016).</li><li>Daneman, R., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+barriers+in+health+and+disease.">Brain barriers in health and disease.</a> Neurobiology of Disease. 107, 1-3 (2017).</li><li>Ballabh, P., Braun, A., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-brain+barrier:+an+overview:+structure,+regulation,+and+clinical+implications.">The blood-brain barrier: an overview: structure, regulation, and clinical implications.</a> Neurobiology of Disease. 16 (1), 1-13 (2004).</li><li>Cardoso, F. 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F., Yee, F., Heilig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+anxiety+and+neuropeptide+Y-Y1+receptors+by+antisense+oligodeoxynucleotides.">Modulation of anxiety and neuropeptide Y-Y1 receptors by antisense oligodeoxynucleotides.</a> Science. 259 (5094), 528-531 (1993).</li><li>Mazur, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simple,+rapid,+and+robust+intrathecal+catheterization+method+in+the+rat.">Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 280, 36-46 (2017).</li><li>Wolf, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+dual-isotope+molecular+imaging+elucidates+principles+for+optimizing+intrathecal+drug+delivery.">Dynamic dual-isotope molecular imaging elucidates principles for optimizing intrathecal drug delivery.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (2), e85311 (2016).</li><li>Becker, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+reduction+of+ataxin-2+extends+lifespan+and+reduces+pathology+in+TDP-43+mice.">Therapeutic reduction of ataxin-2 extends lifespan and reduces pathology in TDP-43 mice.</a> Nature. 544 (7650), 367-371 (2017).</li><li>Zhang, X., Hamblin, M. H., Yin, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+long+noncoding+RNA+Malat1:+Its+physiological+and+pathophysiological+functions.">The long noncoding RNA Malat1: Its physiological and pathophysiological functions.</a> RNA Biology. 14 (12), 1705-1714 (2017).</li><li>Crooke, S. T., Witztum, J. L., Bennett, C. F., Baker, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-Targeted+Therapeutics.">RNA-Targeted Therapeutics.</a> Cell Metabolism. 27 (4), 714-739 (2018).</li><li>DeVos, S. L., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intraventricular+delivery+of+drugs+to+the+rodent+central+nervous+system.">Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50326 (2013).</li><li>McCampbell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+extend+survival+and+reverse+decrement+in+muscle+response+in+ALS+models.">Antisense oligonucleotides extend survival and reverse decrement in muscle response in ALS models.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (8), 3558-3567 (2018).</li><li>Schoch, K. M., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+Oligonucleotides:+Translation+from+Mouse+Models+to+Human+Neurodegenerative+Diseases.">Antisense Oligonucleotides: Translation from Mouse Models to Human Neurodegenerative Diseases.</a> Neuron. 94 (6), 1056-1070 (2017).</li><li>Lane, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+Antisense+Technology+into+a+Treatment+for+Huntington's+Disease.">Translating Antisense Technology into a Treatment for Huntington's Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1780, 497-523 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+in+neurological+disorders.">Antisense oligonucleotides in neurological disorders.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li><li>Hach&#233;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+Injections+in+Children+With+Spinal+Muscular+Atrophy:+Nusinersen+Clinical+Trial+Experience.">Intrathecal Injections in Children With Spinal Muscular Atrophy: Nusinersen Clinical Trial Experience.</a> Journal of Child Neurology. 31 (7), 899-906 (2016).</li><li>Goodkey, K., Aslesh, T., Maruyama, R., Yokota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+in+the+Treatment+of+Spinal+Muscular+Atrophy.">Nusinersen in the Treatment of Spinal Muscular Atrophy.</a> Methods in Molecular Biology. 1828, 69-76 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+for+spinal+muscular+atrophy.">Nusinersen for spinal muscular atrophy.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li></ol>

본 문서는 쥐 CNS내로 직접 치료제를 전달하는 강력한 방법을 보여준다. 이론적으로, 유사한 기술은 더 작은 크기 때문에, 방법이 더 도전적 일 수 있더라도, 마우스에서 또한 수행될 수 있습니다. 따라서, 우리 그룹은 다른 투여 경로를 통해 동일한 목표에 도달하는 CNS 약물 전달을 위해 마우스에서 intracerebroincular (ICV) 주사를 수행합니다. 이 방법은 또 다른 연구16에기재되어 있다...

중추 신경계 (CNS)의 혈관 시스템은 항상성의 중요한 레귤레이터로 진화하여 분자의 트래픽을 제어하고 영양소를 공급하고 폐기물을 제거합니다. 이 시스템은 또한 내피 세포의 벽을 따라 단단한 접합부가 조밀하게 분포되어 있기 때문에 외부 병원균의 공격으로부터 첫 번째 방어선입니다. 이 단단한 접합은 혈액 두뇌 방벽의 1개의 양상을 구성합니다 (BBB). BBB는 영양소 및 에너지 요구(예를 들어, 이온, 포도당)를 충족시키는 데 필요한 분자의 수송을 허용하지만, 또한 독성 화학물질뿐만 아니라 병원체의 통과를 선택적으로 제한한다1,2,3.
아이러니하게도, 병원균과 독성 화학물질의 통과를 제한하는 BBB의 동일한 보호 기능은유기체에대한 전신 투여 후 치료적 치료로 CNS에 쉽게 접근할 수 있는 우리의 능력에 큰 장애가 된다2. 4,5. BBB의 이러한 역할은 신약 유통 기술의 과다한 개발을 촉발시켰으며6.
이러한 장애를 극복하는 한 가지 방법은뇌와 척수7,8,9,10을지속적으로 투과시키는 뇌척수액(CSF)에 약물을 직접 주입하는 것이다. 이 기사에서는, 우리는 쥐 척추의 카우다 에퀴나 공간에 카테터의 내부 단부를 완전히 배치하여 요추 내 공간으로 에이전트를 성공적으로 전달하는 방법을 설명합니다. 이 절차에 대한 설명은 이전에 Mazur 외11.
이 프로토콜은 표적 유전자의 정량적 중합효소 연쇄 반응(qPCR) 분석에 의해 평가될 때 CNS에 대한 안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO) 전달의 90% 이상의 성공률을 매우 발휘한다8. 이 절차는 쥐의 100 %가 수술에서 생존하고 수술 상처 주위에 최소한의 붓기와 고통의 흔적을 보이지 않는 것처럼 동물에게 최소한의 불편 을 초래합니다 (예 : 과잉 행동, 탈수, 순환, 균형 상실, 음식 섭취 감소, 및 탈수) 수술 후 관찰 중. 여기에 설명된 방법의 또 다른 장점은 고가의 장비나 특수 공구가 필요하지 않다는 것입니다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3M Steri-Drape Small Drape with Adhesive Aperture</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc</td>
			<td></td>
			<td>8416-160Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swab sticks</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>NO 1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="https://punchout.fishersci.com/shop/products/bd-general-use-syringes-5/22124967?crossRef=BD%20302830#?keyword=BD+302830">BD General Use Syringes 1 mL Luer-Lok tip</a></td>
			<td>BD</td>
			<td>1ml TB Luer-Lok tip</td>
			<td>BD 302830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE50 Diameter 0.023 in</td>
			<td>BD 427400 (10ft, Fischer Scientific 22-204008) or 427401 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12P)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE10 Diameter 0.011 in</td>
			<td>BD 427410 (10ft, Fischer Scientific 14-170-11B) or 4274011 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12B)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing Adapters</td>
			<td>BD</td>
			<td>23 gauge intramedic luer stub adaper</td>
			<td>BD 427565 or Fisher Scientific 14-826-19E</td>
			<td>120V 1.2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Single-use Needles 30G</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>BD 305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Sustained Release-lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>Prescription required</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene oxide sterilizer</td>
			<td>Andersen Sterilizer INC.</td>
			<td>AN 74i, gas sterilizer</td>
			<td>AN 74i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>BD</td>
			<td>19G x 1 WT (1.1 mm x 25mm) needle</td>
			<td>BD 305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td>Hamilton company</td>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead Sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td>STERILIZER MODELNO FST 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra veterranery product</td>
			<td></td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pocket Pro Pet Trimmer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td>CLP-9931 B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone scrub</td>
			<td>PDI</td>
			<td></td>
			<td>S48050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Sodium Chloride 0.9% Intravenous Infusion BP 50ml</td>
			<td>FE1306G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>disposable scalpel</td>
			<td>No. 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal heating pad</td>
			<td>K&#38;H Manufacturing</td>
			<td></td>
			<td>Model # 1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1749T14</td>
			<td>LH-36233780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Towel drape</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>4410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors and forceps</td>
			<td>FST and Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>4-0 or 5-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tool to make the Guide cannular</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>Rotary tool (Dremel)</td>
			<td>14H446 (Mfr: EZ456)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter, Pk5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock cut off Wheel</td>
			<td>1PKX5 (Mfr: 3000-1/24)</td>
			<td>1.5&#8221;, Pk2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Grinding Wheel, Aluminum Oxide</td>
			<td>38EY44 (Mfr: EZ541GR)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock Mandrel</td>
			<td>1PKX8 (Mfr: EZ402-01)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diamond wheel floor Tile</td>
			<td>3DRN4 (Mfr: EZ545)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative source for pre-made and sterilized materials for this procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosing catheter system</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-GCA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Internal Catheters</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-INC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-STY</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system

혈액 뇌 장벽 (BBB) 중추 신 경계에 혈액에서 잠재적으로 독성 또는 병원 성 에이전트의 입구에 대 한 중요 한 방어 (CNS). 그러나, 그것의 존재는 또한 극적으로 CNS에 체계적으로 관리된 치료에이전트의 접근성을 낮춥시다. 이를 극복하는 한 가지 방법은, 이러한 제제를 뇌척수액(CSF)에 직접 주입하여 BBB를 우회하는 것이다. 이것은 삼투성 펌프를 사용하여 연속 주입을 위해 카테터를 이식하거나 단일 볼러스 전달을 위해 수행 할 수 있습니다. 본 문서에서는, 우리는 성인 쥐 척추의 카우다 에퀴나 공간에 직접 이식된 카테터를 통해 CNS 표적화 안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO)의 전달을 위한 외과 프로토콜을 기술한다. 대표적인 결과로서, 우리는 쥐 CNS의 다른 지구에 있는 표적 RNA를 쓰러뜨리는 이 카테터 삽입 시스템을 통해 단일 볼루스 ASO 내(IT) 주입의 효능을 보여준다. 절차는 안전하고 효과적이며 고가의 장비 또는 수술 도구가 필요하지 않습니다. 여기에 설명 된 기술은 뿐만 아니라 다른 양식에 약물을 제공 하도록 적응 될 수 있다.

여기에 기재된 방법을 사용하여, 우리는 긴 비코딩(linc) RNA Malat1을 표적으로 하는 인산완충 식염수 PBS 또는 300 μg의 단일 볼루스와 함께 성인 암컷 쥐(250-300 g; n=10/군)의 두 그룹을 주입하였다; 우리 실험실에서 우리는 Malat1이 뇌와 척수를 포함한 모든 조직14에서유비쿼터스로 그리고 높은 수준으로 표현되었기 때문에 Malat1 ASO를 도구 화합물로 일상적으로 ...

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Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System

여기서, 우리는 척추의 요추 내 공간에 카테터를 이식하여 쥐 중추 신경계에 약물을 전달하는 방법을 설명합니다. 우리는 안티 센스 올리고 뉴클레오티드의 전달에 초점을 맞추고, 이 방법은 뿐만 아니라 다른 치료 양식의 전달에 적합 하지만.

쥐 중추 신경계에서 안티 센스 올리고 뉴클레오티드의 내 전달

The blood brain barrier (BBB) is an important defense against the entrance of potentially toxic or pathogenic agents from the blood into the central ...

이 프로토콜은 쥐의 중추 신경계에 치료제를 직접 전달하여 쥐 질병 모델에서 약동학, 약물 역학 및 새로운 치료법의 효능을 평가할 수 있습니다. 이 절차는 안전하고 효과적이며 고가의 장비 또는 수술 도구가 필요하지 않습니다. 이 절차를 시연하는 것은 이첸과 이루오, 내 실험실에서 연구 과학자가 될 것입니다.특별 가이드 캐뉼라를 준비하려면 휠이 잘린 로터리 도구를 사용하여 19 게이지 바늘의 양쪽 끝을 잘라 약 1~2센티미터 길이가이드 캐뉼라를 얻습니다. 그런 다음 로터리 공구의 연삭 휠을 사용하여 양쪽 끝을 부드럽게 합니다. 카테터 와이어 조립을 준비하려면 각 동물의 인트라테칼 카테터 역할을 하기 위해 직경 011인치 PE10 튜브의 8센티미터 길이의 PE10 튜브를 잘라냅니다.에탄올 내성 마커 펜을 사용하여 각 튜브의 한쪽 끝에서 2센티미터 의 마크를 만듭니다. 각 동물에 대해, 8센티미터 PE10 카테터의 루멘에 폴리테트라플루오로틸렌 코팅 스테인리스 스틸 와이어에서 절단 된 11 센티미터 긴 스타일 와이어를 삽입합니다. 배달 카테터 조립을 준비하려면 직경 5~10cm 023인치 PE50 카테터를 자르고 23게이지 튜브 어댑터를 카테터의 한쪽 끝에 삽입합니다.그런 다음 허브가 잘려낸 30 게이지 바늘을 PE10 튜브의 약 0.5센티미터 조각으로 잘라내고 PE10 튜브를 카테터의 다른 쪽 끝에 연결합니다. 가이드 캐뉼라 바늘 조립을 준비하려면 23 게이지 바늘 끝에 가이드 캐뉼라를 놓습니다. 수술을 시작하기 전에 수술 테이블에 가열 패드를 놓고 멸균 드레이프 시트로 패드를 덮습니다.시트에 50mL 원심분리기 튜브를 놓고 마취된 실험 쥐의 발가락 핀치에 대한 반응부족을 확인한다. 동물의 무게를 측정 한 후, 꼬리에서 caudal 흉부 척추에 뒷면을 면도하고 경향이 위치에 멸균 시트에 면도 쥐를 배치합니다. 50mL 튜브를 복부 아래에 배치하여 요추 부위의 척추를 구부리고 안과 연고를 눈에 바릅니다.다음으로, 피하하여 1킬로그램당 1밀리그램의 지속적인 방출 부프레노르핀을 주입하고 순차적인 포비도네와 알코올 스크럽으로 노출된 피부를 청소합니다. 펜에스트처리된 멸균 투명 시트로 동물을 드레이프합니다. 카테터의 배치및 화합물의 주입을 위해, 면도 골반 위의 근육 사이의 두 가지 천연 구덩이를 식별하고, 한 손으로 구덩이를 잡고, 부드럽게 누르고 척추 사이의 첫 번째 주요 들여쓰기를 찾기 위해 로스트랄 방향으로 코달에서 척추를 느낄 수있는 다른 손을 사용합니다.S1과 L6 척추 사이의 무척추 동물 공간을 식별 한 후 약간 장밋빛으로 움직여 L5와 L6 척추 사이의 추간판 공간을 식별하십시오. 메스를 사용하여 로스트랄에서 코달 방향으로 중간선을 따라 이 부위의 피부와 근육 캡슐에 2센티미터 이상의 긴 절개를 하여 주사 부위가 절개의 중심에 있게 한다. 해부 가위를 사용하여 근육 층이 시각화 될 때까지 결합 조직을 해부하십시오.L6 요추 척추의 등쪽 척추 과정에 즉시 근육 캡슐에 1 센티미터 절개를합니다. 제6요추 척추의 전방 측면 근처에 가이드 캐뉼라 바늘 조립을 배치하고 바늘의 끝이 척추 운하에 침투할 수 있도록 여섯 번째 척추의 전방 측면을 따라 추간판 공간으로 어셈블리를 밀어 넣습니다. 무딘 집게를 사용하여 L6 요추 척추의 등쪽 척추 과정을 찾은 다음 여섯 번째 척추의 전방 측면을 따라 바늘을 구산구 공간으로 밀어 넣습니다.가이드 캐뉼라를 바늘을 따라 제자리에 밀어 넣고 바늘을 제거하고 카테터 와이어 어셈블리를 가이드 캐뉼라에 삽입합니다. 카테터를 척추 운하에 약 45도 각도로 기울여 카테터의 끝을 운하로 약 0.3cm 밀어 넣습니다. 카테터의 내트라테칼 끝에서 약 2.5센티미터의 스타일 와이어를 제거하고 카테터의 2센티미터 표시가 근육 아래에 보일 때까지 카테터를 척추 운하로 전진시다.카테터가 제자리에 있을 때 가이드 캐뉼라를 제거하여 카테터와 스타일 와이어를 제자리에 놓습니다. 카테터를 척추 운하로 진출하여 두 센티미터 표시가 운하 입구에 있고 스타일 와이어를 완전히 철회할 때까지 진행합니다. 대뇌 척수액은 이식된 카테터에 들어가는 것을 시각화할 수 있다.그런 다음 30 게이지 바늘 끝을 통해 이식 된 카테터의 단면 끝에 전달 카테터 어셈블리를 연결합니다. 다음으로, 멸균 식염수 60마이크로리터를 100 마이크로리터 주사기에 적재하고 시험 화합물의 30 마이크로리터를 두 번째 주사기로 로드합니다. 식염수 주사기를 전달 카테터 조립의 튜브 어댑터 끝에 연결하고 멸균 식염수 20 마이크로리터를 내트라테칼 공간으로 플러시합니다.식염수의 모든 플러시 된 경우, 식염수 주사기를 볼러스로드 주사기로 교체하고 30 초 동안 인트라 테칼 공간에 테스트 화합물의 30 마이크로 리터를 주입. 모든 볼러스가 전달되면 볼루스로드 주사기를 다른 식염수로드 주사기로 교체하고 카테터를 식염수 40 마이크로리터로 플러시합니다. 식염수의 두 번째 부피가 전달되면, 이식 된 카테터에서 배달 카테터 어셈블리를 분리하고 매우 뜨거운 열 살균 해부 집게 한 쌍을 사용하여 튜브를 고정하여 절단하고 이식 된 카테터를 열 밀봉합니다.흡수성 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 열 밀봉 카테터를 결합 조직에 고정한 다음 흡수할 수 없는 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다. 그런 다음 거즈와 식염수로 피부의 혈액을 씻고 쥐를 완전한 보상이 될 때까지 모니터링하여 가열 된 인큐베이터에 놓습니다. 본 대표적인 실험에서, 단일 볼루스 안티센스 올리고뉴클레오티드 전달 후 수집된 모든 지역에서 매우 양호한 녹다운을 얻어낸 바와 같이.그러나, 어느 정도의 지역 적 변동성은 척수로 측정되어 가장 높은 백분율의 녹다운을 나타냈다. 안티센스 올리고뉴클레오티드 또는 기타 치료제를 성공적으로 주입한 후 적절한 모델로, 약물역학, 약물역학 및 치료제의 효능을 평가할 수 있다.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

쥐 모델에서 중추 신경계의 질병 치료를위한 체계와 지역 마약 배달

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

연구

신경과학

Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System

시신경의 절개 : 중추 신경계에서 신경 세포의 Apoptosis 성인의 모델

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. 
The optic nerve can be ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

마우스의 중추 신경계에서 줄기 세포 주입의 Multimodal 이미징

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

중추 신경계에서 Transducing 전지 Lentiviral 벡터 제작

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

의 중추 신경계에 단일 세포의 라벨<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

에 중추 신경 시스템 복구를 조사하기 위해 상해 패러다임<em&gt; Drosophila</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계에 약물을 직접 심실 배달

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

쥐 중추 신경계에서 면역 조직 화학 분석 및 주변 림프절 조직 섹션

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

Polyribosome 분별에 의한 중추 신경계 Translatome의 생체 심문

Multiple processes are involved in gene expression including transcription, translation and stability of mRNAs and proteins. Each of these steps are ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

설치류 중추 신경계의 생체 Optogenetic 자극

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...