Name: intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system
Uploaded: 2019-10-29T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System at JoVE.com

Ionis Pharmaceuticals'a makalede açıklanan AsO'ları temin ettiği için teşekkür ederiz.

Tüm in vivo prosedürleri Biogen Kurumsal Hayvan Kullanımı ve Bakım Komitesi (IACUC) onaylı protokoller altında laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Sağlık Enstitüleri kılavuzu tarafından belirlenen yönergeleri takip yapıldı.
1. Malzeme ve alet hazırlama
<ol><li>Özel rehber kanüllerini hazırlayın.<ol>
<li>19 G iğnenin iki ucunu kesmek için kesme tekerleği (veya keskin testere) olan bir döner alet kullanın ve bu ...

<ol>
	<li>Abbott, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+CNS+barriers:+evolution,+differentiation,+and+modulation.">Dynamics of CNS barriers: evolution, differentiation, and modulation.</a> Cellular and Molecular Neurobiology. 25 (1), 5-23 (2005).</li><li>Greene, C., Campbell, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tight+junction+modulation+of+the+blood+brain+barrier:+CNS+delivery+of+small+molecules.">Tight junction modulation of the blood brain barrier: CNS delivery of small molecules.</a> Tissue Barriers. 4 (1), e1138017 (2016).</li><li>Daneman, R., Engelhardt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+barriers+in+health+and+disease.">Brain barriers in health and disease.</a> Neurobiology of Disease. 107, 1-3 (2017).</li><li>Ballabh, P., Braun, A., Nedergaard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+blood-brain+barrier:+an+overview:+structure,+regulation,+and+clinical+implications.">The blood-brain barrier: an overview: structure, regulation, and clinical implications.</a> Neurobiology of Disease. 16 (1), 1-13 (2004).</li><li>Cardoso, F. L., Brites, D., Brito, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Looking+at+the+blood-brain+barrier:+molecular+anatomy+and+possible+investigation+approaches.">Looking at the blood-brain barrier: molecular anatomy and possible investigation approaches.</a> Brain Research Reviews. 64 (2), 328-363 (2010).</li><li>Larsen, J. M., Martin, D. R., Byrne, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+delivery+through+the+blood-brain+barrier.">Recent advances in delivery through the blood-brain barrier.</a> Current Topics in Medicinal Chemistry. 14 (9), 1148-1160 (2014).</li><li>Brinker, T., Stopa, E., Morrison, J., Klinge, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+look+at+cerebrospinal+fluid+circulation.">A new look at cerebrospinal fluid circulation.</a> Fluids Barriers CNS. 11, 10 (2014).</li><li>Standifer, K. M., Chien, C. C., Wahlestedt, C., Brown, G. P., Pasternak, G. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+loss+of+delta+opioid+analgesia+and+binding+by+antisense+oligodeoxynucleotides+to+a+delta+opioid+receptor.">Selective loss of delta opioid analgesia and binding by antisense oligodeoxynucleotides to a delta opioid receptor.</a> Neuron. 12 (4), 805-810 (1994).</li><li>Wahlestedt, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligodeoxynucleotides+to+NMDA-R1+receptor+channel+protect+cortical+neurons+from+excitotoxicity+and+reduce+focal+ischaemic+infarctions.">Antisense oligodeoxynucleotides to NMDA-R1 receptor channel protect cortical neurons from excitotoxicity and reduce focal ischaemic infarctions.</a> Nature. 363 (6426), 260-263 (1993).</li><li>Wahlestedt, C., Pich, E. M., Koob, G. F., Yee, F., Heilig, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+anxiety+and+neuropeptide+Y-Y1+receptors+by+antisense+oligodeoxynucleotides.">Modulation of anxiety and neuropeptide Y-Y1 receptors by antisense oligodeoxynucleotides.</a> Science. 259 (5094), 528-531 (1993).</li><li>Mazur, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+simple,+rapid,+and+robust+intrathecal+catheterization+method+in+the+rat.">Development of a simple, rapid, and robust intrathecal catheterization method in the rat.</a> Journal of Neuroscience Methods. 280, 36-46 (2017).</li><li>Wolf, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+dual-isotope+molecular+imaging+elucidates+principles+for+optimizing+intrathecal+drug+delivery.">Dynamic dual-isotope molecular imaging elucidates principles for optimizing intrathecal drug delivery.</a> Journal of Clinical Investigation Insight. 1 (2), e85311 (2016).</li><li>Becker, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Therapeutic+reduction+of+ataxin-2+extends+lifespan+and+reduces+pathology+in+TDP-43+mice.">Therapeutic reduction of ataxin-2 extends lifespan and reduces pathology in TDP-43 mice.</a> Nature. 544 (7650), 367-371 (2017).</li><li>Zhang, X., Hamblin, M. H., Yin, K. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+long+noncoding+RNA+Malat1:+Its+physiological+and+pathophysiological+functions.">The long noncoding RNA Malat1: Its physiological and pathophysiological functions.</a> RNA Biology. 14 (12), 1705-1714 (2017).</li><li>Crooke, S. T., Witztum, J. L., Bennett, C. F., Baker, B. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RNA-Targeted+Therapeutics.">RNA-Targeted Therapeutics.</a> Cell Metabolism. 27 (4), 714-739 (2018).</li><li>DeVos, S. L., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+intraventricular+delivery+of+drugs+to+the+rodent+central+nervous+system.">Direct intraventricular delivery of drugs to the rodent central nervous system.</a> Journal of Visualized Experiments. (75), e50326 (2013).</li><li>McCampbell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+extend+survival+and+reverse+decrement+in+muscle+response+in+ALS+models.">Antisense oligonucleotides extend survival and reverse decrement in muscle response in ALS models.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (8), 3558-3567 (2018).</li><li>Schoch, K. M., Miller, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+Oligonucleotides:+Translation+from+Mouse+Models+to+Human+Neurodegenerative+Diseases.">Antisense Oligonucleotides: Translation from Mouse Models to Human Neurodegenerative Diseases.</a> Neuron. 94 (6), 1056-1070 (2017).</li><li>Lane, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+Antisense+Technology+into+a+Treatment+for+Huntington's+Disease.">Translating Antisense Technology into a Treatment for Huntington's Disease.</a> Methods in Molecular Biology. 1780, 497-523 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+oligonucleotides+in+neurological+disorders.">Antisense oligonucleotides in neurological disorders.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li><li>Hach&#233;, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intrathecal+Injections+in+Children+With+Spinal+Muscular+Atrophy:+Nusinersen+Clinical+Trial+Experience.">Intrathecal Injections in Children With Spinal Muscular Atrophy: Nusinersen Clinical Trial Experience.</a> Journal of Child Neurology. 31 (7), 899-906 (2016).</li><li>Goodkey, K., Aslesh, T., Maruyama, R., Yokota, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+in+the+Treatment+of+Spinal+Muscular+Atrophy.">Nusinersen in the Treatment of Spinal Muscular Atrophy.</a> Methods in Molecular Biology. 1828, 69-76 (2018).</li><li>Wurster, C. D., Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nusinersen+for+spinal+muscular+atrophy.">Nusinersen for spinal muscular atrophy.</a> Therapeutic Advances in Neurological Disorders. 11, (2018).</li></ol>

Bu makalede sıçan CNS doğrudan terapötik ajanlar sunmak için güçlü bir yöntem gösterir. Teorik olarak, benzer bir teknik farelerde de yapılabilir, ancak küçük boyutu nedeniyle, yöntem daha zor olabilir. Bu nedenle, grubumuz, farklı bir uygulama yolu ile aynı hedeflere ulaşan CNS ilaç teslimatı için farelerde intracerebroventricular (ICV) enjeksiyonları gerçekleştirmelidir. Bu yöntem başka bir çalışmada16tanımlanmıştır.
Burada açıklanan...

Merkezi sinir sisteminin vasküler sistemi (CNS) homeostaz kritik bir düzenleyici olarak gelişti, moleküllerin trafiğini kontrol, besin temini ve atık kurtulmak. Bu sistem aynı zamanda endotel hücrelerinin duvarları boyunca sıkı kavşakların yoğun dağılımı sayesinde, dış patojenlerin saldırılarına karşı ilk savunma hattıdır. Bu sıkı kavşaklar kan beyin bariyerinin bir yönünü oluşturan (BBB). BBB besin ve enerji taleplerini karşılamak için gerekli moleküllerin taşınmasına izin verirken (örneğin, iyonlar, glikoz), aynı zamanda seçici olarak patojenlerin yanı sıra toksik kimyasalların geçişini de sınırlandırır1,2,3.
İronik olarak, bbb'nin patojenlerin ve toksik kimyasalların geçişini sınırlayan aynı koruyucu işlevi de, organizmaya sistemik uygulamadan sonra cns'ye terapötik tedaviler ile kolayca erişebilme yeteneğimizin önündeki en büyük engeldir2, 4,5. BBB'nin bu rolü, yeni uyuşturucu dağıtım teknolojilerinin bir bolluk ve yaklaşımlar bir bolluk gelişimini yol açmıştır6.
Bu engeli aşmak için bir yolu sürekli beyin ve omurilikhemde perfuses beyin omurilik sıvısı (BOS) içine doğrudan ilaç enjekteetmektir 7 ,8,9,10. Bu makalede, kateterin iç ucunu tamamen sıçan omurgasının kauda equina alanına yerleştirerek ajanları lomber intratekal alana başarılı bir şekilde teslim etme yöntemini açıklıyoruz. Bu prosedürün bir açıklaması daha önce Mazur ve ark. başka bir yerde11tarafından yayınlanmıştır .
Protokol çok etkilidir ve hedef gen knockdown8kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) analizi ile değerlendirildiğinde CNS'ye antisense oligonükleotid (ASO) teslimatının %90'dan daha büyük bir başarı oranı üretir. İşlem hayvanlar için en az rahatsızlığa neden olur, çünkü sıçanların %100'ü ameliyattan sağ kurtulur ve cerrahi yaranın etrafında en az şişlik ve herhangi bir sıkıntı belirtisi göstermez (örn. hiperaktivite, dehidratasyon, daire çizme, denge kaybı, gıda alımında azalma ve dehidratasyon) post-op gözlem sırasında. Burada açıklanan yöntemin bir diğer avantajı pahalı ekipman, ne de herhangi bir özel araçlar gerektirmez.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>3M Steri-Drape Small Drape with Adhesive Aperture</td>
			<td>3M</td>
			<td></td>
			<td>1020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>70% ethanol</td>
			<td>Decon Laboratories, Inc</td>
			<td></td>
			<td>8416-160Z</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alcohol swab sticks</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>NO 1204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="https://punchout.fishersci.com/shop/products/bd-general-use-syringes-5/22124967?crossRef=BD%20302830#?keyword=BD+302830">BD General Use Syringes 1 mL Luer-Lok tip</a></td>
			<td>BD</td>
			<td>1ml TB Luer-Lok tip</td>
			<td>BD 302830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE50 Diameter 0.023 in</td>
			<td>BD 427400 (10ft, Fischer Scientific 22-204008) or 427401 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12P)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing</td>
			<td>BD</td>
			<td>Polyethylene tubing PE10 Diameter 0.011 in</td>
			<td>BD 427410 (10ft, Fischer Scientific 14-170-11B) or 4274011 (100ft, Fischer Scientific 14-170-12B)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Intramedic PE Tubing Adapters</td>
			<td>BD</td>
			<td>23 gauge intramedic luer stub adaper</td>
			<td>BD 427565 or Fisher Scientific 14-826-19E</td>
			<td>120V 1.2A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD PrecisionGlide Single-use Needles 30G</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>BD 305128</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine Sustained Release-lab</td>
			<td>ZooPharm</td>
			<td>Prescription required</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylene oxide sterilizer</td>
			<td>Andersen Sterilizer INC.</td>
			<td>AN 74i, gas sterilizer</td>
			<td>AN 74i</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>BD</td>
			<td>19G x 1 WT (1.1 mm x 25mm) needle</td>
			<td>BD 305186</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td>Hamilton company</td>
			<td>Hamilton syringe 100ul</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot bead Sterilizer</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td></td>
			<td>STERILIZER MODELNO FST 250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ophthalmic ointment</td>
			<td>Dechra veterranery product</td>
			<td></td>
			<td>17033-211-38</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pocket Pro Pet Trimmer</td>
			<td>Braintree Scientific</td>
			<td></td>
			<td>CLP-9931 B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Povidone scrub</td>
			<td>PDI</td>
			<td></td>
			<td>S48050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>Baxter</td>
			<td>Sodium Chloride 0.9% Intravenous Infusion BP 50ml</td>
			<td>FE1306G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>disposable scalpel</td>
			<td>No. 10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small animal heating pad</td>
			<td>K&#38;H Manufacturing</td>
			<td></td>
			<td>Model # 1060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1749T14</td>
			<td>LH-36233780</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgery Towel drape</td>
			<td>Dynarex</td>
			<td></td>
			<td>4410</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissors and forceps</td>
			<td>FST and Fisher Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sutures</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td></td>
			<td>4-0 or 5-0</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tool to make the Guide cannular</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>Rotary tool (Dremel)</td>
			<td>14H446 (Mfr: EZ456)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter, Pk5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock cut off Wheel</td>
			<td>1PKX5 (Mfr: 3000-1/24)</td>
			<td>1.5&#8221;, Pk2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Grinding Wheel, Aluminum Oxide</td>
			<td>38EY44 (Mfr: EZ541GR)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>EZ lock Mandrel</td>
			<td>1PKX8 (Mfr: EZ402-01)</td>
			<td>1.5&#8221; diameter</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Diamond wheel floor Tile</td>
			<td>3DRN4 (Mfr: EZ545)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Alternative source for pre-made and sterilized materials for this procedure</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dosing catheter system</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Guide cannula</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-GCA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Internal Catheters</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-INC</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stylet Wire</td>
			<td>SAI Infusion Systems</td>
			<td></td>
			<td>RIDC-STY</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intrathecal delivery of antisense oligonucleotides in the rat central nervous system

Kan beyin bariyeri (BBB) merkezi sinir sistemi (CNS) içine kan potansiyel toksik veya patojenik ajanların girişine karşı önemli bir savunmadır. Ancak, varlığı da önemli ölçüde CNS için sistematik olarak yönetilen terapötik ajanların erişilebilirliğini düşürür. Bunun üstesinden gelmek için bir yöntem, beyin omurilik sıvısı (BOS) içine doğrudan bu ajanları enjekte etmektir, böylece BBB atlayarak. Bu bir ozmotik pompa kullanarak sürekli infüzyon için bir kateter implantasyonu yoluyla yapılabilir, ya da tek bolus teslimat için. Bu makalede, cns hedefleyen antisense oligonükleotidlerin (ASOs) yetişkin sıçan omurgasının kauda equina alanına doğrudan yerleştirilen bir kateter aracılığıyla teslimi için bir cerrahi protokol açıklanır. Temsili sonuçlar olarak, sıçan CNS'nin farklı bölgelerinde hedef RNA'yı devirmede bu kateterizasyon sistemi ile tek bir bolus ASO intratekal (BT) enjeksiyonunun etkinliğini gösteriyoruz. Prosedür güvenli, etkili ve pahalı ekipman veya cerrahi aletler gerektirmez. Burada açıklanan teknik, diğer yöntemlerde de ilaç teslim etmek için uyarlanabilir.

Burada açıklanan yöntemi kullanarak, iki grup yetişkin dişi sıçana (250−300 g; n = 10/grup) iki grup fosfat tamponlu salin PBS veya uzun kodlamaz (linc) RNA Malat1'i hedefleyen 300 μg aso enjekte ettik; Laboratuarımızda rutin bir araç bileşeni olarak Malat1 ASO kullanın, Malat1 her yerde ifade edilir çünkü ve tüm dokularda yüksek düzeyde14, beyin ve omurilik de dahil olmak üzere. Malat1 ASO, RNA'yı alçaltan ve yıkılmaya (KD) yol açan RNa1...

Watch this Scientific Journal Video about Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System at JoVE.com

Intrathecal Delivery of Antisense Oligonucleotides in the Rat Central Nervous System

Burada, omurganın lomber intratekal uzayına bir kateter yerleştirerek sıçan merkezi sinir sistemine ilaç teslim etmek için bir yöntem açıklıyoruz. Bu yöntem diğer terapötik yöntemlerin de teslimi için uygun olsa da, antisense oligonükleotidlerin teslimatına odaklanıyoruz.

Sıçan Merkezi Sinir Sisteminde Antisense Oligonükleotidlerin İntinal Teslimi

The blood brain barrier (BBB) is an important defense against the entrance of potentially toxic or pathogenic agents from the blood into the central ...

Bu protokol sıçan merkezi sinir sistemine terapötik doğrudan teslim farmakokinetiği değerlendirmek için izin verir, farmakodinamik, ve sıçan hastalığı modellerinde yeni terapötik etkinliğini. Bu işlem güvenli, etkili ve pahalı ekipman veya cerrahi araçlar gerektirmez. Prosedürü gösteren ler, Laboratuvarımdaki araştırma bilim adamları Yi Chen ve Yi Luo olacak.Özel kılavuz kanülleri hazırlamak için, yaklaşık bir buçuk ila iki santimetre uzunluğundaki kılavuz kanülelde etmek için 19 kalibrelik bir iğnenin her iki ucunu da kesmek için kesme tekerleği olan bir döner alet kullanın. Daha sonra her iki ucunu da düzeltmek için döner aletin taşlama tekerleğikullanın. Kateter teli tertibatını hazırlamak için, her hayvan için intratekal kateter görevi görmek için 011 inç çapında PE10 borudan sekiz santimetre uzunluğunda bir parça kesin.Boru her parçasının bir ucundan iki santimetre işareti yapmak için etanol dirençli marker kalem kullanın. Her hayvan için, politetrafloroetilen kaplamalı paslanmaz çelik telden sekiz santimetre LIK PE10 kateterinlüne 11 santimetre uzunluğunda stylet tel kesimi yerleştirin. Teslimat kateter montajını hazırlamak için, 5 ila 10 santimetre 023 inç çapında PE50 kateter bir parça kesti ve kateterin bir ucuna 23 gauge boru adaptörü takın.Daha sonra pe10 boru yaklaşık 0,5 santimetrelik bir parça içine kesilmiş bir göbek ile 30 gauge iğne takın ve kateterin diğer ucuna PE10 boru bağlayın. Bir kılavuz kanül-iğne montaj hazırlamak için, bir 23 gauge iğne ucuna bir kılavuz kanül yerleştirin. Ameliyata başlamadan önce, ameliyat masasına bir ısıtma yastığı yerleştirin ve pedi steril bir perde levha ile kapatın.Çarşafüzerine 50mL konik santrifüj tüp yerleştirin ve anestezili deneysel sıçanda parmak tutam yanıt eksikliği ni onaylayın. Hayvanı tarttıktan sonra, kuyruktan kaudal torasik omurgaya kadar arkatıraş ve eğilimli pozisyonda steril levha üzerine tıraş sıçan yerleştirin. Lomber bölgede omurgayı esnetmek için 50mL tüpünü karın altına yerleştirin ve gözlere oftalmik merhem uygulayın.Daha sonra, deri altı sürekli sürüm Buprenorfin kilogram başına bir miligram enjekte ve sıralı povison ve alkol scrubs ile maruz kalan cilt temizleyin. Bir fenestre steril şeffaf levha ile hayvan drape. Kateterin yerleştirilmesi ve bileşiğin enjeksiyonu için, tıraşlı pelvis üzerindeki kaslar arasındaki iki doğal çukuru belirleyin ve bir elinizi çukurları tutarak, omurgayı omurlar arasındaki ilk büyük girintiyi bulmak için kaudal yönden rostral yöne hafifçe basmak ve hissetmek için diğer elinizi kullanın.S1 ve L6 omurları arasındaki intervertebral uzayı belirledikten sonra, L5 ve L6 omurları arasındaki intervertebral uzayı tanımlamak için biraz rostrally hareket. Enjeksiyon bölgesi kesi merkezinde olacak, böylece rostral gelen kaudal yönde orta hat boyunca bu sitede deri ve kas kapsülü en fazla iki santimetre uzunluğunda kesi yapmak için bir neşter kullanın. Kas tabakası görselleştirilene kadar bağ dokusunu parçalamak için diseksiyon makası kullanın.L6 lomber vertebra dorsal spinal süreci hemen lateral kas kapsülü bir santimetre kesi olun. Kılavuz kanül iğne tertibatını altıncı lomber vertebranın ön yönüne yakın konumlandırın ve iğnenin ucunun spinal kanala nüfuz edebilmesi için altıncı omurun ön kısmı boyunca kontrayı intervertebral uzaya doğru itin. L6 lomber vertebra dorsal spinal süreci bulmak için künt forceps kullanın sonra invertebrata uzaya altıncı vertebra ön yönü boyunca iğne itin.Kılavuz kanülini iğne boyunca yerine itin, iğneyi çıkarın ve kateter telinin tersini kılavuz kanüle takın. Kateteri omurilik kanalına yaklaşık 45 derecelik açıyla sokmak, kateterin ucunu kanala yaklaşık 0,3 santimetre kadar zorlar. Kateterin intratekal ucundan yaklaşık 2,5 santimetre lik stylet telini çıkarın ve kateterüzerindeki iki santimetrelik işaret kasın altında nisbi görünene kadar kateteri omurilik kanalına ilerletin.Kateter yerinde yken, kateteri ve stylet telini yerinde bırakmak için kılavuz kanüllerini çıkarın. İki santimetre işareti kanalın girişinde olana kadar kateteri omurilik kanalına doğru ilerletin ve stil kablolarını tamamen geri çekin. Serebral spinal sıvı implante kateter girerek görselleştirilmiş olabilir.Daha sonra doğum kateter tertibatını 30 gauge iğne ucu ile implante edilen kateterin distal ucuna bağlayın. Daha sonra, 100 mikrolitrelik bir şırıngaya 60 mikrolitre steril salin yükleyin ve test bileşiğin30 mikrolitrelik bir bolus'u ikinci bir şırıngaya yükleyin. Tuzlu şırıngayı, doğum kateter tertibatının boru adaptörü ucuna bağlayın ve 20 mikrolitre steril salini intratekal uzaya boşaltın.Tüm tuzlu su temizlendiğinde, tuzlu şırıngayı bolus yüklü şırınga ile değiştirin ve test bileşiğinden 30 mikrolitrelik mikrolitreyi 30 saniyelik bir süre içinde intratekal uzaya enjekte edin. Tüm bolus teslim edildiğinde, başka bir tuzlu yüklü şırınga ile bolus yüklü şırınga değiştirin ve ek bir 40 mikrolitre tuzlu ile kateter floş. İkinci cilt salin teslim edildiğinde, doğum kateter intibakını implante edilen kateterden ayırın ve implante edilen kateteri aseptik olarak kesmek ve ısı yakmak için tüpü bağlamak için bir çift sıcak ısı yalıtımlı diseksiyon forceps kullanın.Isı yalıtımlı kateteri bağ dokusuna sabitlemek için emilebilir monofilament dikişleri kullanın ve sonra cildi kapatmak için emilemez dikişler kullanın. Sonra deriden herhangi bir kan yıkamak için gazlı bez ve tuzlu kullanın ve tam telafi kadar izleme ile ısıtmalı bir kuvöz de sıçan yerleştirin. Bu temsili deneyde tek bolus antisense oligonükleotid tesliminden sonra toplanan tüm bölgelerde çok iyi bir nakavt elde edilmiştir.Ancak, bölgesel değişkenlik bir dereceye kadar nakavt en yüksek yüzdesi gösteren omurilik ile ölçüldü. Uygun bir modeliçine antisense oligonükleotid başarılı bir enjeksiyon sonra, ya da diğer terapötikler, bir farmakokinetik değerlendirebilirsiniz, farmakodinamik, ve terapötik etkinliğini.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Systemic and Local Drug Delivery for Treating Diseases of the Central Nervous System in Rodent Models

Kemirgen Modeller Merkezi Sinir Sistemi Hastalıkları Tedavisinde Sistemik ve Yerel İlaç Taşıyıcı

Thorough preclinical testing of central nervous system (CNS) therapeutics includes a consideration of routes of administration and agent biodistribution ...

Optic Nerve Transection: A Model of Adult Neuron Apoptosis in the Central Nervous System

Optik Sinir transeksiyonu: Santral Sinir Sistemi Yetişkin Nöron Apoptoz Bir Model

Retinal ganglion cells (RGCs) are CNS neurons that output visual information from the retina to the brain, via the optic nerve. 
The optic nerve can be ...

Multimodal Imaging of Stem Cell Implantation in the Central Nervous System of Mice

Fareler ve Merkezi Sinir Sisteminde Kök Hücre İmplantasyonu Multimodal Görüntüleme

During the past decade, stem cell transplantation has gained increasing interest as primary or secondary therapeutic modality for a variety of diseases, ...

Production of Lentiviral Vectors for Transducing Cells from the Central Nervous System

Merkezi sinir sisteminin transducing Hücreleri için lentiviral Vektörler Üretimi

Efficient gene delivery in the central nervous system (CNS) is important in studying gene functions, modeling neurological diseases and developing ...

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Labeling of Single Cells in the Central Nervous System of Drosophila melanogaster

Merkez Sinir Sistemi Tek Hücreler Etiketleme<em&gt; Drosophila melanogaster</em

In this  article we describe how to individually label neurons in the embryonic CNS of Drosophila melanogaster by juxtacellular injection of the ...

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

An Injury Paradigm to Investigate Central Nervous System Repair in Drosophila

Santral Sinir Sistemi Onarım İnceleyecek Bir Sakatlık Paradigma<em&gt; Drosophila</em

An experimental method has been developed to investigate the cellular responses to central nervous system (CNS) injury using the fruit-fly Drosophila. ...

Direct Intraventricular Delivery of Drugs to the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Merkezi Sinir Sistemi İlaçların doğrudan Intraventriküler teslim

Due to an inability to cross the blood brain barrier, certain drugs need to be directly delivered into the central nervous system (CNS). Our lab focuses ...

Immunohistochemical Analysis in the Rat Central Nervous System and Peripheral Lymph Node Tissue Sections

Sıçan Santral Sinir Sistemi immunohistokimyasal Analizi ve Çevresel lenf nodu Doku Bölümler

Immunohistochemistry (IHC) provides highly specific, reliable and attractive protein visualization. Correct performance and interpretation of an IHC-based ...

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

In vivo Interrogation of Central Nervous System Translatome by Polyribosome Fractionation

Polyribosome Fraksiyonu tarafından Santral Sinir Sistemi Translatome in vivo sorguluyor

Multiple processes are involved in gene expression including transcription, translation and stability of mRNAs and proteins. Each of these steps are ...

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

In vivo Optogenetic Stimulation of the Rodent Central Nervous System

Kemirgen Santral Sinir Sistemi vivo optogenetic Stimülasyon içinde

The ability to probe defined neural circuits in awake, freely-moving animals with cell-type specificity, spatial precision, and high temporal resolution ...