Name: high throughput co-culture assays for the investigation of microbial interactions
Uploaded: 2019-10-15T14:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about High Throughput Co-culture Assays for the Investigation of Microbial Interactions at JoVE.com

우리는 원고의 비판적 독서에 대한 다니엘 월, 마크 체브렛, 돈 호앙 감사합니다. 카메론 R. 커리의 노력을 포함하여이 작품은 위스콘신 - 매디슨 대학, 위스콘신 동창 연구 재단의 자금으로 연구 및 대학원 교육 부총장 사무실의 지원, 또한 에 의해 제공 된 자금 번역 연구를위한 우수성에 대한 보건 센터의 국립 연구소 (U19-AI109673-01). 리드 M. Stubbendieck 는 생물학 및 의학 교육 프로그램의 전산 및 정보학에 대한 국립 의학 교육 보조금 (NLM 5T15LM007359)에 의해 지원되었습니다. 기금 모금자는 연구 디자인, 데이터 수집 및 해석, 또는 출판을 위해 작품을 제출하기로 결정에 아무런 역할이 없었다.

통보 된 동의는 기증자의 부모로부터 얻은, 위스콘신 - 매디슨 대학의 인간 과목위원회는 연구를 승인 (기관 검토 위원회 [IRB] 승인 번호 H-2013-1044).
1. 견본 문화
참고: 이 절차는 인간 비강에서 분리 된 박테리아 간의 상호 작용 연구를 위해 여기에 사용됩니다. 원칙적으로 다음 방법은 모든 문화 조건에 적용할 수 있습니다. 뇌-심장 주입 국물 (B...

<ol>
	<li>Stubbendieck, R. M., Vargas-Bautista, C., Straight, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bacterial+Communities:+Interactions+to+Scale.">Bacterial Communities: Interactions to Scale.</a> Frontiers in Microbiology. 7 (August), 1234 (2016).</li><li>Green, J., Bohannan, B. J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spatial+scaling+of+microbial+biodiversity.">Spatial scaling of microbial biodiversity.</a> Trends in Ecology &amp; Evolution. 21 (9), 501-507 (2006).</li><li>Fleming, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Antibacterial+Action+of+Cultures+of+a+Penicillium,+with+Special+Reference+to+their+Use+in+the+Isolation+of+B.+influenz&#230;.">On the Antibacterial Action of Cultures of a Penicillium, with Special Reference to their Use in the Isolation of B. influenz&#230;.</a> British Journal of Experimental Pathology. 10 (3), 226 (1929).</li><li>Stubbendieck, R. M., Straight, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Escape+from+Lethal+Bacterial+Competition+through+Coupled+Activation+of+Antibiotic+Resistance+and+a+Mobilized+Subpopulation.">Escape from Lethal Bacterial Competition through Coupled Activation of Antibiotic Resistance and a Mobilized Subpopulation.</a> PLoS Genetics. 11 (12), e1005722 (2015).</li><li>Zipperer, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+commensals+producing+a+novel+antibiotic+impair+pathogen+colonization.">Human commensals producing a novel antibiotic impair pathogen colonization.</a> Nature. 535 (7613), 511-516 (2016).</li><li>Currie, C. R., Scott, J. A., Summerbell, R. C., Malloch, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungus-growing+ants+use+antibiotic-producing+bacteria+to+control+garden+parasites.">Fungus-growing ants use antibiotic-producing bacteria to control garden parasites.</a> Nature. 398 (6729), 701-704 (1999).</li><li>Balouiri, M., Sadiki, M., Ibnsouda, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+for+in+vitro+evaluating+antimicrobial+activity:+A+review.">Methods for in vitro evaluating antimicrobial activity: A review.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 6 (2), 71-79 (2016).</li><li>Heatley, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+for+the+assay+of+penicillin.">A method for the assay of penicillin.</a> The Biochemical Journal. 38 (1), 61-65 (1944).</li><li>Clinical and Laboratory Standards Institute. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests; approved standard -11th ed. CLSI document M02-A11. , (2012).</li><li>Adnani, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Coculture+of+Marine+Invertebrate-Associated+Bacteria+and+Interdisciplinary+Technologies+Enable+Biosynthesis+and+Discovery+of+a+New+Antibiotic,+Keyicin.">Coculture of Marine Invertebrate-Associated Bacteria and Interdisciplinary Technologies Enable Biosynthesis and Discovery of a New Antibiotic, Keyicin.</a> ACS Chemical Biology. 12 (12), 3093-3102 (2017).</li><li>Nichols, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Use+of+iChip+for+high+throughput+in+situ+cultivation+of+&amp;#34;uncultivable&amp;#34;+microbial+species.">Use of iChip for high throughput in situ cultivation of &amp;#34;uncultivable&amp;#34; microbial species.</a> Applied and Environmental Microbiology. 76 (8), 2445-2450 (2010).</li><li>Gonzalez, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+competition+between+Bacillus+subtilis+and+Staphylococcus+aureus+monitored+by+imaging+mass+spectrometry.">Microbial competition between Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus monitored by imaging mass spectrometry.</a> Microbiology (Reading, England). 157 (Pt 9), 2485-2492 (2011).</li><li>Hoefler, B. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+resistance+to+the+lipopeptide+surfactin+as+identified+through+imaging+mass+spectrometry+of+bacterial+competition.">Enzymatic resistance to the lipopeptide surfactin as identified through imaging mass spectrometry of bacterial competition.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (32), 13082-13087 (2012).</li><li>Hoefler, B. C., Straight, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+Mass+Spectrometry,+Metabolism,+and+New+Views+of+the+Microbial+World.">Imaging Mass Spectrometry, Metabolism, and New Views of the Microbial World.</a> Natural Products Analysis. , 349-396 (2014).</li><li>Yang, Y. L., Xu, Y., Straight, P., Dorrestein, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Translating+metabolic+exchange+with+imaging+mass+spectrometry.">Translating metabolic exchange with imaging mass spectrometry.</a> Nature Chemical Biology. 5 (12), 885-887 (2009).</li><li>Stubbendieck, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Competition+among+Nasal+Bacteria+Suggests+a+Role+for+Siderophore-Mediated+Interactions+in+Shaping+the+Human+Nasal+Microbiota.">Competition among Nasal Bacteria Suggests a Role for Siderophore-Mediated Interactions in Shaping the Human Nasal Microbiota.</a> Applied and Environmental Microbiology. 85 (10), 1-17 (2019).</li><li>Winkelmann, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbial+siderophore-mediated+transport.">Microbial siderophore-mediated transport.</a> Biochemical Society transactions. 30 (4), 691-696 (2002).</li><li>Chevrette, M. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+antimicrobial+potential+of+Streptomyces+from+insect+microbiomes.">The antimicrobial potential of Streptomyces from insect microbiomes.</a> Nature Communications. 10 (1), 516 (2019).</li></ol>

미생물 상호 작용을 중재하는 항생제 및 기타 이차 대사 산물은 약물 발견을 포함한 다양한 응용 분야에 유용합니다. 본 명세서에서, 많은 수의 미생물 상호작용을 평가하기 위한 공동 배양 분석에 대한 프로토콜이 제시된다. 이러한 공동 배양 상호 작용 검사는 간단하고 저렴하며 확장 가능하며 처리량이 높은 미생물의 많은 쌍조합을 나란히 조사하는 것을 의미합니다. 표적 유기체는 접종 스탬?...

자연에서 미생물은 거의 고립되어 존재하지 않습니다. 따라서, 그들은 지속적으로 다른 유기체와 상호 작용하고 있습니다. 따라서 미생물이 서로 상호 작용하는 방식을 연구하는 것은 수많은 미생물 행동을 이해하는 데 필수적입니다1. 미생물 상호 작용은 상호, 공생, 또는 길항제 일 수 있습니다. 이 것들은 미생물 자체뿐만 아니라 미생물이1,2를식민지화하는 환경과 숙주에도 영향을 미칠 수 있습니다.
많은 과학자들은 새로운 항균 분자를 확인하기 위해 미생물 상호 작용을 연구합니다. 첫 번째 임상적으로 중요 한 항균 분자 중 하나는 미생물 상호 작용의 연구를 통해 발견 되었다. 경 알렉산더 플레밍은 오염 페니실륨 종자를 관찰. 황색 포도상 구균 균주의 성장을 억제 분리, 이는 일반적으로 사용되는 항생제 페니실린의 발견을 주도3. 미생물이 경쟁사를 적대하는 데 사용하는 메커니즘의 특성화는 항균 분자의 발견을위한 유익한 자원으로 남아 있습니다. 예를 들어, 최근 스트렙토마이스 스프랭크 Mg1이 항생제 라인아미신을 생산하는 것으로 나타났으며, 이는 바실러스 서브틸리스4에대한 용염및 분해 활성을 갖는다.
또한, 루그두닌이라는 비리보솜 합성 펩티드는 최근 비강 공생황색포도상구균 루그두넨시스가 황색포도상구균5를억제한다는 관찰 을 받은 후발견되었다. 연구는 또한 미생물 간의 상호 상호 상호 작용은 항균 분자의 발견에 대 한 길항 상호 작용으로 동등 하 게 강력한 나타났습니다. 예를 들어, 아티니 항구 공생 박테리아에 있는 많은 곰팡이 농업 개미는 그들의 진균 작물의 의무 병원체를 억제하기 위하여 항진균 분자를 생성하는 그들의 외골격에 슈도노카디아에게 불린6. 미생물 상호 작용의 연구는 항균 분자를 발견에 대 한 도움이 되었습니다., 높은 처리량 스크린의 사용 새로운 항균 분자의 발견귀착될 수 있습니다.
비용과 성능의 용이성에 관하여, 미생물 상호 작용을 연구하는 데 사용되는 방법론은 간단한에서 복잡한 범위. 예를 들어, 한천 플러그 분석법은 여러 미생물 사이의 적대감을 조사하는 데 사용할 수있는 저렴하고 간단한 방법입니다7. 그러나, 한천 플러그 분석은 효율적인 절차가 아니며 많은 쌍으로 조합에 대한 노동 집약적 일 수있다. 미생물로 생산된 제품이 높은 처리량 방식으로 관심 있는 표적 분리에 미치는 영향을 평가하기 위해 많은 실험실에서 디스크 확산 검정 을 사용합니다8. 이러한 검사는 쉽고 저렴하며 샘플7의더 많은 수로 확장 할 수 있습니다. 그러나, 이러한 분석법은 미생물 추출물의 생성을 필요로 하며 살모넬라 및 세팔로스포린스9와같은 표적 유기체 및 항생제의 특정 조합에 대해 오해의 소지가 있는 결과를 생성할 수 있다.
선행 접근법은 미생물이 서로 상호 작용하는 대신, 표적 유기체에 있는 반응을 이끌어 내는 격리된 분대에 의존합니다. 이것은 미생물 간의 상호 작용이 단일 배양에서 생산되지 않는 "비밀스러운"항균 분자의 생산을 유도 할 수 있기 때문에 주의입니다. 예를 들어, 최근에는 항균 키이신이 동일한 스폰지 미생물군유전체10으로부터분리되는 로도코쿠스 스프로도코쿠스와 병용배할 때 에 의해서만 마이크로모노스포라 스프로 생산되는 것으로 나타났다. 더 복잡한 상호 작용 방법론은 이러한 잠재적단일 문화 장애를 우회합니다. 예를 들어, iChip은 환경 샘플로부터 박테리아를 배양하기 어렵고 희귀하고 어려운 분리에 유용하며,11번소자에서의 성장을 통한 미생물 상호작용의 관찰을 가능하게 한다. 상호 작용을 자세히 조사하기 위해 매트릭스 보조 레이저 탈착/이온화 시간(MALDI-TOF-IMS)을 사용할 수 있습니다. 이 접근법은 높은 공간 분해능으로 미생물 식민지를 상호 작용하여 생성된 소분자 및 펩타이드의 조성 및 분포에 대한 자세한 정보를 제공합니다. MALDI-TOF-IMS는 또한 경쟁12,13,14,15의메커니즘을 특성화하기 위해 세균 상호 작용의 다중 연구에서 사용되어 왔다. 그러나 MALDI-TOF-IMS는 종종 까다로운 시료 준비, 장비를 작동하기 위한 전문 지식, 고가의 특수 질량 분석기를 필요로 합니다. 이러한 이유로 높은 처리량 연구에 사용하기가 어렵습니다. 따라서, 상기 접근법의 많은 한계를 극복하는 미생물 상호작용에 대한 간단하고 확장 가능하며 높은 처리량의 공동 배양 분석이 유익할 것이다.
여기서, 높은 처리량 미생물 공동 배양에 대한 프로토콜이 제시된다. 이 분석법은 간단하고 쉽게 미생물 상호 작용의 기존 연구에 통합. 미생물 상호 작용의 연구를 위해 일반적으로 사용되는 많은 방법과는 달리, 우리의 방법은 간단하고 저렴하며 많은 수의 상호 작용을 조사할 수 있습니다. 이러한 어설미는 수행하기 쉬울 뿐만 아니라 대부분의 실험실 공급업체 또는 공공 자원(예: 라이브러리 및 메이커스페이스)에서 널리 사용할 수 있습니다. 따라서, 이 분석은 미생물의 많은 쌍으로 조합 중 흥미로운 패턴을 확인하고 구문 분석하는 조사의 첫 번째 라인으로 유리하다, 이는 미생물 생태학의 조사에 특히 유용 할 수있다.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>1 &#956;L disposable polystyrene inoculating loops, blue</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12000-806</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 &#956;L disposable polystyrene inoculating loops, yellow</td>
			<td>VWR</td>
			<td>12000-810</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>12-well cell culture plate, sterile with lid</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>665 180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>14 mL polystyrene round bottom tube, 17 x 100mm style, nonpyrogenic, sterile</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>352057</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.0 self standing screw cap tubes with caps, sterile</td>
			<td>USA scientific</td>
			<td>1420-9710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipet</td>
			<td>Cell Treat</td>
			<td>229225B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar, bacteriological</td>
			<td>VWR</td>
			<td>J637</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brain Heart Infusion Broth</td>
			<td>Dot Scientific</td>
			<td>DSB11000-5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polycarbonate filament, white, 3mm diameter</td>
			<td>Keene Village Plastics</td>
			<td>12.1-3MM-WH-581.2-1KG-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>School Glue</td>
			<td>Elmer&#39;s</td>
			<td>EPIE304</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Taz 6 3D printer</td>
			<td>Lulzbot</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

high throughput co-culture assays for the investigation of microbial interactions

미생물 간의 상호 작용에 대한 연구는 새로운 항균제에서 미생물 생태학의 통찰력에 이르기까지 수많은 발견으로 이어졌습니다. 미생물 상호 작용의 연구에 사용되는 많은 접근 은 특수 장비를 필요로하고 비싸고 시간 집약적입니다. 이 백서는 저렴하고, 큰 샘플 수로 확장 가능하며, 수많은 실험 설계에 쉽게 적응할 수 있는 공동 배양 상호 작용 분석프로토콜을 제시합니다. 미생물은 함께 배양되며, 각각의 우물은 미생물의 쌍으로 조합을 나타냅니다. 시험 유기체는 각 우물의 한쪽에 배양되고 먼저 단일 배양에서 배양됩니다. 그 후, 표적 유기체는 3D 인쇄 접종 스탬프를 사용하여 각 우물의 반대쪽에 동시에 접종됩니다. 공동 배양 후, 완성된 어소시에이스는 성장 또는 억제와 같은 시각적 표현형에 대해 채점된다. 이 계산은 표현형을 확인하거나 관심의 격리 중 패턴을 확인하기 위하여 이용될 수 있습니다. 이 간단하고 효과적인 방법을 사용하여 사용자는 미생물의 조합을 신속하고 효율적으로 분석 할 수 있습니다. 이 공동 배양 접근법은 항생제 발견뿐만 아니라 배양 기반 미생물군유전체 연구에 적용가능하며 이미 두 응용 분야에 성공적으로 적용되었습니다.

공동 배양 상호 작용 검사는 미생물 상호 작용을 이해하고, 관심있는 패턴을 식별하고, 흥미로운 활동으로 미생물 격리를 발견하는 데 사용할 수 있습니다. 이러한 실험에서, 시험 유기체는 12개의 잘 한천 판의 한쪽면에 단양되고 7일 동안 배양된다. 이어서, 표적 유기체는 시험 유기체 옆에 발견되고 2개의 미생물은 표적 유기체의 성장 표현형을 위해 채점하기 전에 7일 ?...

Watch this Scientific Journal Video about High Throughput Co-culture Assays for the Investigation of Microbial Interactions at JoVE.com

High Throughput Co-culture Assays for the Investigation of Microbial Interactions

이 프로토콜에 제시된 공동 문화 상호 작용 분석은 저렴하고 높은 처리량이며 간단합니다. 이 계산은 공동 배양에 있는 미생물 상호 작용을 관찰하고, 상호 작용 패턴을 확인하고, 인간과 환경 병원체에 대하여 관심있는 미생물 긴장의 억제 잠재력을 특성화하기 위하여 이용될 수 있습니다.

미생물 상호 작용의 조사를 위한 높은 처리량 공동 문화 애세서

The study of interactions between microorganisms has led to numerous discoveries, from novel antimicrobials to insights in microbial ecology. Many ...

우리의 프로토콜은 미생물 군연구 및 항균 발견을 도울 수 있는 관심의 상호 작용을 확인하기 위해 많은 수의 쌍방향 미생물 상호 작용을 함께 선별하는 높은 처리량 방법을 제공합니다. 이 방법은 미생물이 실험실 조건 하에서 배양에 우호적인 한 다양한 시스템에서 미생물 상호 작용을 연구하는 데 쉽게 적용됩니다. 이 기술의 주요 장점은 사용자가 상대적으로 짧은 기간에 많은 수의 미생물 상호 작용을 선별 할 수 있다는 것입니다.이 기술의 새로운 사용자는 특히 생물 분석 판을 접종할 때 과성장이나 오염을 최소화하는 데 주의해야 하므로 시간이 걸릴 수 있습니다. 이 기술의 시각적 데모는 생물 분석 판을 접종하는 것은 유기체가 우물을 과도하게 성장시키지 않고 공동 배양이 오염되지 않도록 정밀도가 필요하기 때문에 중요합니다. 하룻밤 문화를 준비하여 시작합니다.세로지학적 파이펫을 사용하여 14밀리리터 배양 튜브에 3밀리리터의 BHI 국물을 추가하십시오. 그런 다음 세균성 식민지를 국물에 접종하기 위해 멸균 1 개의 마이크로 리터 접종 루프를 사용합니다. 루프를 소용돌이쳐 덩어리가 국물에 분산되도록 합니다.배양 튜브를 잠시 소용돌이쳐 내고 250 RPM에서 셰이커에서 섭씨 37도에서 하룻밤 동안 배양하십시오. 세균성 배양이 1개 이상의 OD 600에 도달하면 세포의 덩어리를 분해하기 위해 소용돌이를 가합니다. 1.5%의 천으로 PHI 미디어를 준비하고, 오토클레이브를 통해 살균합니다.그런 다음 온도 조절 수조에서 미디어를 섭씨 55도로 냉각하고, 용융 된 BHI 매체의 3 밀리리터를 접시에 있는 12 개의 우물각각에 분배하여 우물이 가능한 한 균일하게 되도록합니다. 그런 다음 한천을 하룻밤 사이에 설정하도록 허용합니다. 멸균 10 마이크로리터 접종 루프를 하룻밤 배양에 삽입하고, 플레이트의 왼쪽 3분의 1에 배양액을 잘 줄임으로써 생체분석 판상에서 시험 유기체를 접종한다.접시에 있는 모든 12개의 우물이 접종될 때까지 반복합니다. 7일 동안 적절한 온도에서 플레이트를 거꾸로 배양합니다. 섭씨 37도 이상 또는 건조한 기후에서 배양하는 경우, 습한 용기에 접시를 저장하여 건조하지 않도록 하십시오.바이오아세이 플레이트의 6일 배양 후, 이전에 설명한 바와 같이 대상 유기체의 하룻밤 배양을 준비한다. 1.8 밀리리터의 BHI, 대상 하룻밤 배양의 200 마이크로리터로 빈 12웰 플레이트의 각 웰을 채우고 대상 플레이트를 준비한다. 멸균 접종 스탬프를 대상 플레이트에 넣습니다.우물 주위의 배양을 부드럽게 소용돌이치며, 이웃 우물을 교차 오염시키지 않도록 합니다. 접종 스탬프를 들어 올리고 각 스탬프 팁에 희석 대상 배양물 방울이 있는지 확인합니다. 접종 스탬프를 단장된 바이오아세이 플레이트에 놓고 스탬프를 부드럽게 흔들어 배양 액적방울이 각각 잘 접종되도록 합니다.스탬프가 제거되면 우물에서 문화 물방울을 볼 수 있습니다. 접종 스탬프로 유정이 접종되지 않은 경우 파이펫을 사용하여 희석 된 하룻밤 문화의 3 개의 마이크로 리터를 우물에 발견하십시오. 그런 다음 이전에 설명한 바와 같이 생체 분석 판을 접종하지만 스탬프 팁을 12웰 플레이트의 오른쪽에 정렬하여 스탬프가 기존 세균 식민지에 접촉하지 않도록 합니다.조심스럽게 스탬프를 제거하고 대상 플레이트에 다시 놓습니다. 한천이 우물에 고르지 않게 굳어지면 스탬프를 앞뒤로 부드럽게 흔들지만 스탬프를 시험 유기체 성장으로 옮기지 않도록 주의하십시오. 모든 플레이트가 접종될 때까지 각 생체 분석 판에 대한 접종을 반복한 다음 7일 동안 적절한 온도에서 플레이트를 거꾸로 배양합니다.1 주일 동안 시험 및 표적 유기체를 공동 배양 한 후, 시각적 평가에 따라 상호 작용을 점수. 단일문화와 구별할 수 없는 성장을 나타내는 목표 유기체 성장으로 우물을 0으로 점수. 하나의 성장 감소와 우물 점수, 그리고 두 로 성장하지.여기에 설명된 공동 배양 분석은 인간 비강으로부터 분리된 유기체를 대상으로 한 액티노박테리아 시험 유기체의 억제 활성을 평가하는 데 사용되었다. 총 812쌍의 조합이 테스트되었습니다. 특히, 코린박테리움 프로빈쿰은 응고효소 네거티브 황색포도상구균을 강하게 억제했으며, 특히 응고효소 네거티브 황색포도상구균을 약화시키거나 억제 효과가 없는 다른 코린박테리아와 비교했을 때 특히 억제 효과가 없었다.비교 유전체학의 사용을 통해, 측측산생산을 위한 생합성 유전자 클러스터가 코리네박테리움 프로인쿰 게놈에서 확인되었다. 표준 및 철 보충 BHI 배지를 이용한 공동 배양 상호 작용 분석은 코리네박테리움 프로빈쿰과 응고효소 네거티브 황색포도상구균 사이의 억제 표현형이 사실상 철에 의존적이었다는 것을 확인하였다. 접시에 스탬프를 찍을 때주의하는 것이 중요합니다.스탬핑 후 각 우물을 다시 확인하고 접종 스탬프가 올바르게 정렬되어 오염을 방지하십시오. 관심의 상호 작용을 확인 한 후, 미생물 유전학및 유전체학을 사용하여 후속 연구, 천연 제품 격리 및 특성화, 또는 이미징 질량 분광법은 이러한 상호 작용의 기본 메커니즘을 특성화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 최근에 인간 비강 미생물군유증 중의 측면 중재 경쟁을 발견하는 데 사용되었으며, cyphomycin에게 불린 새로운 항진균 분자의 발견에 원조되었습니다.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

High-throughput Detection Method for Influenza Virus

인플루엔자 바이러스에 대한 높은 처리량 검출 방법

Influenza virus is a respiratory pathogen that causes a high degree of morbidity and mortality every year in multiple parts of the world. Therefore, ...

연구

면역학 및 감염병학

A Microscopic Phenotypic Assay for the Quantification of Intracellular Mycobacteria Adapted for High-throughput/High-content Screening

고처리량/고함량 스크리닝에 적용된 세포내 진균의 정량화를 위한 현미경 표티픽 분석

Despite the availability of therapy and vaccine, tuberculosis (TB) remains one of the most deadly and widespread bacterial infections in the world. Since ...

High-throughput Screening for Broad-spectrum Chemical Inhibitors of RNA Viruses

RNA 바이러스의 넓은 스펙트럼 화학 억제를위한 높은 처리량 검사

RNA viruses are responsible for major human diseases such as flu, bronchitis, dengue, Hepatitis C or measles. They also represent an emerging threat ...

ScanLag: High-throughput Quantification of Colony Growth and Lag Time

ScanLag : 높은 처리량 식민지 성장의 정량화 및 시간 지연

Growth dynamics are fundamental characteristics of microorganisms. Quantifying growth precisely is an important goal in microbiology. Growth dynamics are ...

Scalable High Throughput Selection From  Phage-displayed Synthetic Antibody Libraries

파지 - 표시 합성 항체 라이브러리의 확장 성 높은 처리량 선택

The demand for antibodies that fulfill the needs of both basic and clinical research applications is high and will dramatically increase in the future. ...

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

Microscopy-based Assays for High-throughput Screening of Host Factors Involved in Brucella Infection of Hela Cells

에 참여 호스트 요인의 높은 처리량 검사에 대한 현미경 기반 분석 실험<em&gt; 브루셀라</em&gt; HeLa 세포의 감염

Brucella species are facultative intracellular pathogens that infect animals as their natural hosts. Transmission to humans is most commonly caused by ...

Electrochemiluminescence Assays for Human Islet Autoantibodies

인간의 섬 신경에 대 한 Electrochemiluminescence 분석 실험

Pinpointing islet autoantibodies associated with type 1 diabetes (T1D) leads the way to project and deter this disease in the general population. A novel ...

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

A High-throughput Platform for the Screening of Salmonella spp./Shigella spp.

살 모 넬 라 종의 심사에 대 한 높은 처리 플랫폼 /Shigella 종

Fecal-oral transmission of acute gastroenteritis occurs from time to time, especially when people who handled food and water are infected by Salmonella ...

High-throughput Measurement of Plasma Membrane Resealing Efficiency in Mammalian Cells

포유류 세포에서 효율 Resealing 원형질 막의 높은 처리량 측정

In their physiological environment, mammalian cells are often subjected to mechanical and biochemical stresses that result in plasma membrane damage. In ...