Name: time-lapse live imaging and quantification of fast dendritic branch dynamics in developing drosophila neurons
Uploaded: 2019-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons at JoVE.com

Diese Arbeit wird vom Intramural Research Program des National Institute of Neurological Disorders and Stroke, National Institutes of Health, unterstützt. Projektnummer 1ZIANS003137.

ACHTUNG: Dieses Protokoll beinhaltet den Einsatz von Lasern der Klasse IV und erfordert die Begenutzung der richtigen Schulungs- und Sicherheitsrichtlinien. Vermeiden Sie augen- oder hauteinwirkungsmitteliges Laserlicht. HINWEIS: Das Protokoll umfasst sechs Schritte. Der Workflow ist in Abbildung 1Adargestellt.
1. Beschriften einzelner Neuronen mit der Ausklapptechnik
HINWEIS:<...

<ol>
	<li>Wong, W. T., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changing+specificity+of+neurotransmitter+regulation+of+rapid+dendritic+remodeling+during+synaptogenesis.">Changing specificity of neurotransmitter regulation of rapid dendritic remodeling during synaptogenesis.</a> Nature Neuroscience. 4 (4), 351-352 (2001).</li><li>Wu, G. Y., Zou, D. J., Rajan, I., Cline, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Dynamics+In+Vivo+Change+during+Neuronal+Maturation.">Dendritic Dynamics In Vivo Change during Neuronal Maturation.</a> The Journal of Neuroscience. 19 (11), 4472-4483 (1999).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. 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G., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+FLP+recombinase+of+yeast+catalyzes+site-specific+recombination+in+the+drosophila+genome.">The FLP recombinase of yeast catalyzes site-specific recombination in the drosophila genome.</a> Cell. 59 (3), 499-509 (1989).</li><li>Harrison, D. 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T., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-regulated+dynamic+behavior+of+early+dendritic+protrusions:+evidence+for+different+types+of+dendritic+filopodia.">Activity-regulated dynamic behavior of early dendritic protrusions: evidence for different types of dendritic filopodia.</a> Journal of Neuroscience. 23 (18), 7129-7142 (2003).</li><li>Niell, C. M., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+optical+imaging+of+nervous+system+development.">Live optical imaging of nervous system development.</a> Annual Review of Physiology. 66, 771-798 (2004).</li><li>Barry, D. J., Durkin, C. H., Abella, J. 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M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F-dynamics:+Automated+quantification+of+dendrite+filopodia+dynamics+in+living+neurons.">F-dynamics: Automated quantification of dendrite filopodia dynamics in living neurons.</a> Journal of Neuroscience Methods. 236, 148-156 (2014).</li><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FiloQuant+reveals+increased+filopodia+density+during+breast+cancer+progression.">FiloQuant reveals increased filopodia density during breast cancer progression.</a> The Journal of Cell Biology. 216 (10), 3387 (2017).</li><li>Nilufar, S., Morrow, A. A., Lee, J. M., Perkins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FiloDetect:+automatic+detection+of+filopodia+from+fluorescence+microscopy+images.">FiloDetect: automatic detection of filopodia from fluorescence microscopy images.</a> BMC Systems Biology. 7 (1), 66 (2013).</li><li>Tsygankov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellGeo:+A+computational+platform+for+the+analysis+of+shape+changes+in+cells+with+complex+geometries.">CellGeo: A computational platform for the analysis of shape changes in cells with complex geometries.</a> The Journal of Cell Biology. 204 (3), 443-460 (2014).</li><li>Urban&#269;i&#269;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filopodyan:+An+open-source+pipeline+for+the+analysis+of+filopodia.">Filopodyan: An open-source pipeline for the analysis of filopodia.</a> The Journal of Cell Biology. 216 (10), 3405-3422 (2017).</li></ol>

Hier beschreiben wir ein Protokoll, das wir entwickelt haben, um das dynamische Verhalten dendritischer Zweige in individuell gekennzeichneten Neuronen in Drosophila Larvengehirnen aufzuzeichnen und zu quantifizieren. Insbesondere enthält unser Live-Imaging-Protokoll spezifische Parameter, die es uns ermöglichen, die gesamte dendritische Arbor eines Larven-LNv zu erfassen und einen globalen Überblick über den dynamischen Zustand seiner Dendritenzweige zu geben. Da unsere Quantifizierungsmethoden jedoch stark...

Dendriten sind spezialisierte neuronale Kompartimente, die sensorische und synaptische Eingaben empfangen und verarbeiten. Die komplexe und stereotype Struktur der dendritischen Lauben wird seit ihrer Entdeckung intensiv untersucht. Eine Reihe von Modellsystemen, einschließlich Xenopus-Optik-Tektal-Neuronen, Kichern-Retinal-Ganglienzellen und dendritischer Arborisierung (da) Neuronen im Drosophila-System, wurden eingerichtet, um die Entwicklung, Umgestaltung und Plastizität von neuronale Dendriten1,2,3,4. Drosophila ventrale Lateralneuronen (LNvs) sind eine Gruppe von visuellen Projektionneuronen, die ursprünglich für ihre wichtigen Funktionen bei der zirkadianen Regulation von Fliegenverhalten identifiziert wurden5. Studien zeigten auch die Rolle der Larven LNvs als das direkte postsynaptische Ziel der Larven photorezeptoren (PRs)6,7. Wichtig ist, dass die Kultivierung von Larven in verschiedenen Lichtregimen stark die Größe der dendritischen Lauben von LNvs beeinflusst und die Eignung von LNvs als neues Modell zur Untersuchung der dendritischen Plastizität demonstriert7. Jüngste Arbeiten unserer Gruppe deuten ferner darauf hin, dass sowohl die Größe des LNv-Dendriten als auch das dynamische Verhalten der dendritischen Zweige erfahrungsabhängige Plastizität8,9aufweisen. Im Rahmen dieser Arbeit entwickelten wir ein neues Live-Bildgebungs- und Quantifizierungsprotokoll, um die Dendritendynamik von LNvs aus2. oder3. Instar-Larven zu analysieren.
Die transparente Natur des Drosophila Larvenhirns macht es ideal für Live-Bildgebung. Die dendritischen Lauben von LNvs befinden sich jedoch im dicht besiedelten Larvenoptik-Neuropil (LON) in der Mitte des Larvenhirnlappens6. Um Bilder von feinen Dendritenzweigen und Filopodia im intakten Hirngewebe zu erfassen, verwenden wir eine Zwei-Photonen-Mikroskopie, die die Tiefe der Lichtdurchdringung erhöht und die Phototoxizität bei Live-Bildgebungsexperimenten10reduziert. Mit diesem Setup führten wir erfolgreich Live-Bildgebungsexperimente auf LNvs über 30 min durch, ohne eine offensichtliche morphologische Verschlechterung des Neurons zu beobachten. Darüber hinaus ermöglichten uns genetische Manipulationen mit der Flip-out-Technik die Kennzeichnung der einzelnen LNvs mit einer Membran mit gfP-Kennzeichnung, die auch für die Überwachung der Bewegungen einzelner Zweige entscheidend ist11,12,13 .
Um das dynamische Verhalten aller Zweige auf der Dendritischen Laube LNv mit optimaler optischer Auflösung zu erfassen, führten wir Zeitraffer-3D-Bildgebung an frisch sezierten Larvenhirn-Explants mit einer hohen räumlichen Auflösung bei 1 min pro Frame für 10 bis 30 min durch. Dendriten sind hochdynamisch, wobei ein großer Prozentsatz der Zweige beobachtbare Änderungen innerhalb des 10-min-Fensters anzeigt. Dies führt zu einer der wichtigsten technischen Herausforderungen bei der Untersuchung der Dendritendynamik, der Quantifizierung des Zweigverhaltens auf Basis der 4D-Bilddatensätze. Zuvor etablierte Methoden haben verschiedene Einschränkungen, einschließlich mangelnder Genauigkeit und übermäßiger Zeitanforderung. Daher haben wir eine halbautomatische Methode entwickelt, die die Bildnachbearbeitung, die manuelle Markierung der Verzweigungsklemmen und die automatische 4D-Spotverfolgung mit einer Bildanmerkungssoftware kombiniert. Wir berechnen die Bewegungen von Zweigklemmen zu verschiedenen Zeitpunkten basierend auf den 3D-Koordinaten der Spots. Die Daten werden dann exportiert und analysiert, um quantitative Messungen der Branchendynamik zu erstellen. Diese Methode bewertet genau die Dauer und das Ausmaß der Verlängerungs- und Rückzugsereignisse bestehender Zweige sowie die Bildung neuer Zweige, so dass wir die Dendritendynamik in einer großen Anzahl von Neuronen überwachen können.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chameleon Vision II multiphoton laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high vacuum grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>79751-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 780 two-photon laser scanning confocal microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>upright configuration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>for processing .csv files</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huygens Professional</td>
			<td colspan="2">Scientific Volume Imaging</td>
			<td>for drift correction and deconvolution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td></td>
			<td>for 3D visualization and image annotation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

time-lapse live imaging and quantification of fast dendritic branch dynamics in developing drosophila neurons

Hochmotile dendritische Filopodien sind in Neuronen in frühen Entwicklungsstadien weit verbreitet. Diese explorativen dynamischen Zweige proben die Umgebung und initiieren Kontakte mit potenziellen synaptischen Partnern. Obwohl der Zusammenhang zwischen dendritischer Verzweigungsdynamik und Synaptogenese gut etabliert ist, ist nicht gut verstanden, wie entwicklungs- und aktivitätsabhängige Prozesse die dendritische Zweigdynamik regulieren. Dies ist zum Teil auf die technischen Schwierigkeiten zurückzuführen, die mit der Live-Bildgebung und quantitativen Analysen dieser feinen Strukturen mit Hilfe eines In-vivo-Systems verbunden sind. Wir haben eine Methode zur Untersuchung der Dendritendynamik mit Drosophila larval ventrallateralen Neuronen (LNvs) etabliert, die mit genetischen Ansätzen individuell gekennzeichnet werden können und für Live-Bildgebung zugänglich sind. Unter Ausnutzung dieses Systems entwickelten wir Protokolle, um die Zweigdynamik der gesamten dendritischen Laube einer einzigen markierten LNv durch Zeitraffer-Live-Bildgebung zu erfassen. Anschließend führten wir eine Nachbearbeitung durch, um die Bildqualität durch Driftkorrektur und Dekonvolution zu verbessern, gefolgt von der Analyse der Verzweigungsdynamik auf Ein-Zweig-Ebene durch Kommentieren der räumlichen Positionen aller Zweigklemmen. Schließlich haben wir R-Skripte (Supplementary File) und spezifische Parameter entwickelt, um die Verzweigungsdynamik mithilfe der von der Terminalablaufverfolgung generierten Koordinateninformationen zu quantifizieren. Zusammen genommen ermöglicht uns dieses Protokoll eine detaillierte quantitative Beschreibung der Zweigdynamik der neuronalen dendritischen Laube mit hoher zeitlicher und räumlicher Auflösung. Die von uns entwickelten Methoden sind allgemein auf dünn markierte Neuronen sowohl in vitro als auch in vivo anwendbar.

Mit dem oben beschriebenen Live-Imaging-Protokoll erfassen wir hochauflösende Bildstapel für die nachfolgenden Analysen und Quantifizierungen. Ergänzendes Video 1 zeigt die maximale projizierte (MIP) Bildserie, die von einem repräsentativen, individuell beschrifteten LNv gesammelt wurde. Abbildung 2B zeigt die entsprechende Montage von acht Bildern der Bildreihe. In beiden Bereichen markieren Pfeilspitzen Rückzugsereigni...

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Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Hier beschreiben wir die Methode, die wir angewendet haben, um hochmotile dendritische Filopodia in einer Live-Vorbereitung des Drosophila-Larvenhirns abzubilden, und das Protokoll, das wir entwickelt haben, um Zeitraffer-3D-Bildgebungsdatensätze für quantitative Bewertungen von Dendriten zu quantifizieren. Dynamik bei der Entwicklung von Neuronen.

Zeitraffer Live Imaging und Quantifizierung der schnellen dendritischen Zweigdynamik bei der Entwicklung von Drosophila Neuronen

Highly motile dendritic filopodia are widely present in neurons at early developmental stages. These exploratory dynamic branches sample the surrounding ...

Dieses Protokoll bietet einen neuen Ansatz zur Quantifizierung der Zweigdynamik der dendritischen Laube und zur Entwicklung von Neuronen mithilfe von Live-Zeitraffer-Bildgebung und einer 3D-Bildanmerkungssoftware. Diese Technik bildet und verfolgt die Zweigklemmen und bietet eine schnelle und effiziente Methode zur Messung des dynamischen Verhaltens der dendritischen Filopodia. Die Forschung mit dieser Methode gibt Einblicke in das Verständnis, wie Entwicklung und Aktivität die Dendritenmorphogenese regulieren.Unsere Methoden sind sowohl in in vitro als auch in vivo auf dünn markierte Neuronen anwendbar. Denken Sie bei dieser Ausführung dieses Verfahrens daran, dass die bildgebenden Parameter sorgfältig angepasst werden müssen, um eine ausreichende zeitliche und räumliche Auflösung zu erreichen. Um Gehirne aus Larvendrosophila zu ernten, unter einem Sezieren Mikroskop verwenden Sie ein Paar von Nummer fünf Standard-SpitzensesektionSzange, um eine Larvenprobe an Ort und Stelle zu halten, während die andere verwendet, um sorgfältig das Gehirn zu sezieren, die Augenscheiben, Gehirnlappen, und ventrale Nervenschnur zu erhalten.Entfernen Sie dann die angeschlossenen Muskeln, um jede Bewegung der Probe während der Bildgebung zu minimieren. Wenn alle Gehirne geerntet sind, verwenden Sie Vakuumfett, um eine quadratische Kammer auf eine Glasrutsche zu ziehen und 20 Mikroliter externe Saline-Lösung in die Kammer hinzuzufügen. Verwenden Sie die Zange, um die Gehirne in die Kammer zu übertragen und die Positionen der Gehirne unter dem Mikroskop mit den dorsalen Seiten nach oben anzupassen.Bedecken Sie die Kammer mit einem Glasdeckel-Slip und drücken Sie vorsichtig auf den Deckelschlupf, um das Abdriften der Proben während des Bildgebungsverfahrens zu reduzieren. Um Hirnexplantationen zu identifizieren, die individuell markierte Neuronen enthalten, wählen Sie innerhalb von 30 Minuten nach der Sezierung ein 40-faches Wasser-Eintauchziel und eine Epifluoreszenzlichtquelle aus. Wählen Sie einen zwei Photonenlaser mit 920 Nanometern und einen Nicht-Dscan-Detektor aus, und legen Sie die Bildparameter fest, um die Bilder auf 512 x 512 Pixel pro Frame und eine Minute pro Z-Stack für 10 Minuten zu erfassen.Passen Sie dann den optischen und digitalen Zoom an, um eine ausreichende X-, Y-, Z-Auflösung zu erzielen und gleichzeitig die Abdeckung der gesamten dendritischen Laube innerhalb einer Minute sicherzustellen. Die Einstellungen erzeugen Bilder mit einer typischen X-, Y-, Z-Auflösung von 0,11 x 0,11 mal 0,25 Mikrometern. Für die Driftkorrektur öffnen Sie die Interessendatei in einem geeigneten Driftkorrektur-Softwareprogramm und klicken Sie auf Mikroskopische Parameter bearbeiten und bearbeiten.Stellen Sie den Mikroskoptyp für die beiden Photonenbilder auf "Breitfeld", wenn es eine Zwei-Photon-Option gibt, und folgen Sie dem von der Software definierten Workflow. Öffnen Sie zur Dekonvolution das driftkorrigierte Bild in der Dekonvolution-Software und folgen Sie dem Workflow. Speichern Sie dann das dekonvolvedbildte Bild in einem Dateityp, der von der nachfolgenden Bildanmerkungssoftware unterstützt wird, die 4D-Daten analysieren und die räumlichen Koordinaten definierter Flecken innerhalb des Bildes melden kann.Öffnen Sie für Bildanmerkungen das dekonvolvedbildte Bild in der Bildanmerkungssoftware, und untersuchen und markieren Sie die Verzweigungsspitzen zu allen Zeitpunkten in 3D. Die Bildanmerkungssoftware meldet und speichert die räumlichen und zeitlichen Koordinaten der markierten Verzweigungsspitzen. Exportieren Sie die Koordinateninformationen als CSV-Datei für nachfolgende Berechnungen.Klicken Sie im Spots-Modul auf Automatische Erstellung überspringen, manuell bearbeiten und aktivieren Sie das Kontrollkästchen Automatische Verbindung mit ausgewähltem Punkt. Überprüfen Sie die Frames in der Zeitreihe, und wählen Sie einen Zweig für Anmerkungen aus. Wenn Sie die Umschalttaste gedrückt halten, klicken Sie auf die Zweigklemmenspitze, um einen Punkt hinzuzufügen.Klicken Sie dann auf die Registerkarte Statistik, und wählen Sie Detaillierte Werte, Bestimmte Werte und Position aus. Die aufgezeichneten räumlichen und zeitlichen Koordinateninformationen werden angezeigt. Klicken Sie auf Speichern, um die Daten als CSV-Datei zu exportieren.Um die Verzweigungsspitze in 3D zu berechnen, öffnen Sie die CSV-Datei als Kalkulationstabelle, und wählen Sie die Spalte Spur-ID aus. Klicken Sie auf Kleinstes Sortieren nach Größte, und akzeptieren Sie die Auswahl erweitern. Nach dem Sortieren identifiziert Track ID jeden eindeutigen dendritischen Zweig und die Spots aus derselben Zweigstelle haben dieselbe Spur-ID. Die Spalte Zeit speichert die Informationen aus verschiedenen Zeitrahmen.Fügen Sie in der Kalkulationstabelle eine Spalte Entfernung hinzu, und verwenden Sie die Koordinaten, um die Entfernung von zwei zeitlich benachbarten Punkten zu berechnen. Um kleinere Bewegungen auf einer Voxelebene zu messen, setzen Sie alle Entfernungswerte kleiner als 0,3 Mikrometer zurück, um unkorrigierte Drift- oder unvollkommene Bildanmerkungen zu filtern. Erstellen Sie als Nächstes eine Spalte Verschiebung, und kopieren Sie die Werte aus der Spalte Entfernung in die Spalte Verschiebung.Weisen Sie die Erweiterungs- und Rückzugsereignisse manuell für jede Zweigspitze zu. Wenn es sich um eine Erweiterung handelt, lassen Sie den positiven Verschiebungswert unverändert. Wenn es sich um einen Rückzug handelt, ändern Sie den entsprechenden Verschiebungswert in einen negativen Wert.Summieren Sie dann in einer neuen Ereignisspalte die Verschiebungswerte für einzelne Erweiterungs- und Rückzugsereignisse. In diesem Video kann eine maximale Intensität projizierte Bildserie aus einem repräsentativen individuell beschrifteten ventralen Lateralneuron beobachtet werden. Einzelbildbilder ermöglichen die Auswertung der Rückzugs- und Erweiterungsereignisse.Die halbautomatische 4D-Verfolgung der Zweigklemmen ermöglicht die Annotation der dynamischen Zweigklemmen von individuell beschrifteten ventralen Lateralneuronen, wie gezeigt. Die Berechnung der Richtung und des Abstands der Zweigbewegungen an jedem Zeitpunkt ermöglicht einen Vergleich der dendritischen Zweigdynamik für individuell beschriftete ventrale Lateralneuronen in verschiedenen Entwicklungsstadien. Der wichtigste Schritt ist die Erhaltung der Integrität des Hirngewebes und des Dendritmorpholos während der Zerlegung und Montage.Die Qualität der Rohbildserie ist auch entscheidend für eine erfolgreiche Nachverfolgung und Quantifizierung. Mit dieser Technik gewannen wir die Fähigkeit, quantitative Analysen von Dendritenfilopodien bei der Entwicklung von drosophila zentralen Neuronen durchzuführen und die molekulare Maschinerie zu erforschen, die die Dendritreifung und Synaptogenese betrifft.

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Live-Darstellung von PKC-Translokation in Sf9-Zellen und in Aplysia sensorischen Neuronen

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Forschung

Neurowissenschaften

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Zeitraffer-Live-Imaging von klonal verbundenen neuronalen Vorläuferzellen in der Entwicklung von Zebrafisch Vorderhirnneuronen

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

Neuromodulation und Mitochondriale Transport: Live Imaging in Hippocampus-Neuronen über lange Zeiträume

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Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-Cell-Imaging von Sinnesorgan Vorläuferzellen im Intact Drosophila Puppen

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Analysis of Dendritic Spine Morphology in Cultured CNS Neurons

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compartment of synapses. These ...

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

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