Name: time-lapse live imaging and quantification of fast dendritic branch dynamics in developing drosophila neurons
Uploaded: 2019-09-25T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons at JoVE.com

この研究は、国立神経障害・脳卒中研究所の内壁研究プログラム(国立衛生研究所)によって支援されています。プロジェクト番号 1ZIANS003137.

注意:このプロトコルは、クラスIVレーザーの使用を含み、従うべき適切な訓練と安全ガイドラインを必要とします。直接的または散乱したレーザー光への眼や皮膚への露出を避けてください。 注:プロトコルには 6 つの手順が含まれています。ワークフローを図 1Aに示します。
1. フリップアウト技術を用いて?...

<ol>
	<li>Wong, W. T., Wong, R. O. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changing+specificity+of+neurotransmitter+regulation+of+rapid+dendritic+remodeling+during+synaptogenesis.">Changing specificity of neurotransmitter regulation of rapid dendritic remodeling during synaptogenesis.</a> Nature Neuroscience. 4 (4), 351-352 (2001).</li><li>Wu, G. Y., Zou, D. J., Rajan, I., Cline, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+Dynamics+In+Vivo+Change+during+Neuronal+Maturation.">Dendritic Dynamics In Vivo Change during Neuronal Maturation.</a> The Journal of Neuroscience. 19 (11), 4472-4483 (1999).</li><li>Jan, Y. N., Jan, L. 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G., Cardona, A., Hartenstein, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Drosophila+larval+visual+system:+High-resolution+analysis+of+a+simple+visual+neuropil.">The Drosophila larval visual system: High-resolution analysis of a simple visual neuropil.</a> Developmental Biology. 358 (1), 33-43 (2011).</li><li>Yuan, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Light-Induced+Structural+and+Functional+Plasticity+in+Drosophila+Larval+Visual+System.">Light-Induced Structural and Functional Plasticity in Drosophila Larval Visual System.</a> Science. 333 (6048), 1458-1462 (2011).</li><li>Sheng, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experience-dependent+structural+plasticity+targets+dynamic+filopodia+in+regulating+dendrite+maturation+and+synaptogenesis.">Experience-dependent structural plasticity targets dynamic filopodia in regulating dendrite maturation and synaptogenesis.</a> Nature Communications. 9 (1), 3362 (2018).</li><li>Yin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transcriptional+Regulation+of+Lipophorin+Receptors+Supports+Neuronal+Adaptation+to+Chronic+Elevations+of+Activity.">Transcriptional Regulation of Lipophorin Receptors Supports Neuronal Adaptation to Chronic Elevations of Activity.</a> Cell Reports. 25 (5), 1181-1192 (2018).</li><li>Denk, W., Strickler, J., Webb, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+scanning+fluorescence+microscopy.">Two-photon laser scanning fluorescence microscopy.</a> Science. 248 (4951), 73-76 (1990).</li><li>Golic, K. G., Lindquist, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+FLP+recombinase+of+yeast+catalyzes+site-specific+recombination+in+the+drosophila+genome.">The FLP recombinase of yeast catalyzes site-specific recombination in the drosophila genome.</a> Cell. 59 (3), 499-509 (1989).</li><li>Harrison, D. A., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simple+and+efficient+generation+of+marked+clones+in+Drosophila.">Simple and efficient generation of marked clones in Drosophila.</a> Current Biology. 3 (7), 424-433 (1993).</li><li>del Valle Rodr&#237;guez, A., Didiano, D., Desplan, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Power+tools+for+gene+expression+and+clonal+analysis+in+Drosophila.">Power tools for gene expression and clonal analysis in Drosophila.</a> Nature Methods. 9, 47 (2011).</li><li>Portera-Cailliau, C., Pan, D. T., Yuste, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activity-regulated+dynamic+behavior+of+early+dendritic+protrusions:+evidence+for+different+types+of+dendritic+filopodia.">Activity-regulated dynamic behavior of early dendritic protrusions: evidence for different types of dendritic filopodia.</a> Journal of Neuroscience. 23 (18), 7129-7142 (2003).</li><li>Niell, C. M., Smith, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Live+optical+imaging+of+nervous+system+development.">Live optical imaging of nervous system development.</a> Annual Review of Physiology. 66, 771-798 (2004).</li><li>Barry, D. J., Durkin, C. H., Abella, J. V., Way, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Open+source+software+for+quantification+of+cell+migration,+protrusions,+and+fluorescence+intensities.">Open source software for quantification of cell migration, protrusions, and fluorescence intensities.</a> The Journal of Cell Biology. 209 (1), 163-180 (2015).</li><li>Hendricusdottir, R., Bergmann, J. H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=F-dynamics:+Automated+quantification+of+dendrite+filopodia+dynamics+in+living+neurons.">F-dynamics: Automated quantification of dendrite filopodia dynamics in living neurons.</a> Journal of Neuroscience Methods. 236, 148-156 (2014).</li><li>Jacquemet, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FiloQuant+reveals+increased+filopodia+density+during+breast+cancer+progression.">FiloQuant reveals increased filopodia density during breast cancer progression.</a> The Journal of Cell Biology. 216 (10), 3387 (2017).</li><li>Nilufar, S., Morrow, A. A., Lee, J. M., Perkins, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FiloDetect:+automatic+detection+of+filopodia+from+fluorescence+microscopy+images.">FiloDetect: automatic detection of filopodia from fluorescence microscopy images.</a> BMC Systems Biology. 7 (1), 66 (2013).</li><li>Tsygankov, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CellGeo:+A+computational+platform+for+the+analysis+of+shape+changes+in+cells+with+complex+geometries.">CellGeo: A computational platform for the analysis of shape changes in cells with complex geometries.</a> The Journal of Cell Biology. 204 (3), 443-460 (2014).</li><li>Urban&#269;i&#269;, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Filopodyan:+An+open-source+pipeline+for+the+analysis+of+filopodia.">Filopodyan: An open-source pipeline for the analysis of filopodia.</a> The Journal of Cell Biology. 216 (10), 3405-3422 (2017).</li></ol>

ここでは、ショウジョウバエ幼虫脳における個別に標識されたニューロンにおける樹状枝の動的挙動を記録し定量するために開発したプロトコルについて述べた。特に、私たちのライブイメージングプロトコルは、幼虫LNvの樹状樹木全体をキャプチャし、そのデンドライト分岐の動的状態のグローバルビューを提供することを可能にする特定のパラメータが含まれています。しかし、?...

デンドライトは、感覚入力とシナプス入力を受け取り、処理する特殊なニューロンコンパートメントです。樹状樹木の複雑でステレオタイプ化された構造は、発見以来、厳しい調査を受けています。脱視管系におけるキセノプス光学系ニューロン、ひよこ甲状腺細胞、樹状樹盤形成(da)ニューロンを含む多くのモデルシステムが、その発達、改造、可塑性を研究するために確立されている。神経デンドライト1,2,3,4.ショウジョウバエ腹部横ニューロン(LNvs)は、ハエ行動の概日調節における重要な機能について最初に同定された視覚投影ニューロンのグループである5。研究はまた、幼虫光受容体(PR)6、7の直接ポストナプティックターゲットとしての幼虫LNvsの役割を明らかにした。重要なことに、異なる光系で幼虫を発達させる培養は、LNvsの樹状樹木の樹木の大きさに強く影響を与え、樹状可塑性7を研究するための新しいモデルとしてLNvsの適合性を実証する。我々のグループからの最近の研究は、LNvデンドライトのサイズと樹状枝の動的挙動の両方が経験に依存する可塑性8、9を示すことをさらに示している。この研究の一環として、我々は新しいライブイメージングおよび定量プロトコルを開発し、2番目または3番目の幼虫からLNvsのデンドライトダイナミクスに関する分析を行った。
ショウジョウバエ幼虫脳の透明な性質は、ライブイメージングに最適です。しかし、LNvsの樹状樹木は、幼虫脳葉6の中心にある密に内来性の幼虫視神経ピル(LON)に位置している。無傷の脳組織内の微細なデンドライトの枝とフィロポディアの画像をキャプチャするために、我々は光の浸透の深さを増加させ、ライブイメージング実験10の間に光毒性を減少させる2光子顕微鏡を利用する。このセットアップを用いて、ニューロンの明らかな形態学的劣化を観察することなく、30分以上のLNvsでライブイメージング実験を行いました。さらに、フリップアウト技術を用いた遺伝子操作により、個々のLNvsにGFPというタグが付けられた膜でラベルを付け、個々の枝の動きを監視するためにも重要です11,12,13.
最適な光学分解能を持つLNv樹状樹木の全ての枝の動的挙動を捉えるために、新たに解剖された幼虫脳移植所でタイムラプス3Dイメージングを行い、フレームあたり1分間1分の高い空間分解能を10~30分間行いました。デンドライトは非常に動的であり、ブランチの大部分は10分のウィンドウ内で観察可能な変化を表示します。これは、4D画像データセットに基づいて分岐動作を定量化するデンドライトダイナミクスを研究する際の主な技術的課題の1つにつながります。以前に確立された方法には、精度の欠如や過剰な時間要件など、さまざまな制限があります。そこで、画像後処理、分岐端子の手動マーキング、画像アニテーションソフトを用いて自動4Dスポットトレースを組み合わせた半自動方式を開発しました。スポットの3D座標に基づいて、異なる時点での分岐端子の動きを計算します。その後、データがエクスポートおよび分析され、分岐ダイナミクスの定量的測定値が生成されます。この方法は、既存の分岐の延長および引き込みイベントの持続時間と範囲、および新しい分岐の形成を正確に評価し、多数のニューロンでデンドライトダイナミクスを監視することを可能にします。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Chameleon Vision II multiphoton laser</td>
			<td>Coherent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>high vacuum grease</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>79751-30</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LSM 780 two-photon laser scanning confocal microscope</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td></td>
			<td>upright configuration</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Cover Glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-544-E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost Plus Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>for processing .csv files</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Huygens Professional</td>
			<td colspan="2">Scientific Volume Imaging</td>
			<td>for drift correction and deconvolution</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Imaris</td>
			<td>Oxford Instruments</td>
			<td></td>
			<td>for 3D visualization and image annotation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HEPES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sucrose</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TES</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

time-lapse live imaging and quantification of fast dendritic branch dynamics in developing drosophila neurons

高運動性樹状フィロポディアは、発達初期のニューロンに広く存在する。これらの探索的動的ブランチは、周囲の環境をサンプリングし、潜在的なシナプスパートナーとの接触を開始します。樹状分岐ダイナミクスとシナプトジェネシスとの関係は十分に確立されているが、発達過程と活性依存的なプロセスが樹状分岐ダイナミクスをどのように調節するかはよく理解されていない。これは、インビボシステムを使用してこれらの微細構造のライブイメージングおよび定量分析に関連する技術的な困難が原因の一部です。我々は、遺伝的アプローチを用いて個別に標識することができ、ライブイメージングのためにアクセス可能であるショウジョウバエ幼虫の心室腹部横ニューロン(LNvs)を用いてデンドライトダイナミクスを研究する方法を確立した。このシステムを利用して、タイムラプスライブイメージングを通じて、単一のラベル付きLNvの樹状樹木全体の分岐ダイナミクスを捕捉するプロトコルを開発しました。その後、ドリフト補正やデコンボリューションによる画質向上を目的とした後処理を行い、その後、全ての分岐端子の空間位置にアニズを付け、単一分岐レベルで分岐ダイナミクスを解析しました。最後に、端末トレースによって生成された座標情報を使用して分岐ダイナミクスを定量化するためのRスクリプト(補足ファイル)と特定のパラメータを開発しました。まとめると、このプロトコルは、高い時間的および空間分解能を有する神経樹状樹木樹の分岐ダイナミクスの詳細な定量的記述を達成することを可能にする。我々が開発した方法は、一般的にインビトロとインビボ条件の両方でまばらに標識されたニューロンに適用可能である。

上記のライブイメージングプロトコルを使用して、その後の解析と定量化のための高解像度画像スタックをキャプチャします。補足ビデオ1は、LNv.図2Bの代表から収集された最大強度投影(MIP)画像シリーズを示し、画像シリーズの8フレームの対応するモンタージュを示す。どちらのパネルでも、矢印はリトラクション イ?...

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Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

ここでは、ショウジョウバエ幼虫脳の生体調における高刺激性樹状フィロポディアの画像化に用いた方法と、デンドライトの定量的評価のためのタイムラプス3Dイメージングデータセットを定量化するために開発したプロトコルについて説明します。ニューロンの発達におけるダイナミクス。

ショウジョウバエニューロンの開発における高速樹状分岐ダイナミクスのタイムラプスライブイメージングと定量化

Highly motile dendritic filopodia are widely present in neurons at early developmental stages. These exploratory dynamic branches sample the surrounding ...

このプロトコルは、樹状樹状アーバーの分岐ダイナミクスを定量化し、ライブタイムラプスイメージングと3D画像注釈ソフトウェアを使用してニューロンを開発するための新しいアプローチを提供します。この技術は、樹状フィロポディアの動的挙動を測定するための迅速かつ効率的な方法を提供する分岐端子を画像および追跡します。この方法を用いた研究は、開発と活動がデンドライト形態素形成を調節する方法を理解する洞察を提供する。我々の方法は、インビトロおよびインビボ設定の両方でまばらな標識ニューロンに適用可能である。この手順を実行する場合は、十分な時間的および空間的解像度を達成するために、イメージング パラメータを慎重に調整する必要があることに注意してください。幼虫ショウジョウバエから脳を収穫するために、解剖顕微鏡の下で、第5種の標準的な先端解剖鉗子の1組を使用して幼虫標本を所定の位置に保持し、もう1つを使用して慎重に脳を解剖し、眼球盤、脳LOB、および腹側神経コードを維持する。次に、取り付けられた筋肉を取り除き、イメージング中のサンプルの動きを最小限に抑えます。すべての脳が収穫されたら、真空グリースを使用して正方形の部屋をガラススライドに引き出し、20マイクロリットルの外部生理食塩水をチャンバーに加えます。鉗子を使用して脳をチャンバーに移し、後側を上に向けて顕微鏡下の脳の位置を調整します。ガラスカバースリップでチャンバーを覆い、カバースリップを軽く押して、イメージング手順中のサンプルの漂流を減らします。個別に標識されたニューロンを含む脳外植を同定するために、解剖の30分以内に40X水浸漬目的および発蛍光光源を選択する。920ナノメートルと非Dscan検出器に調整された2つの光子レーザーを選択し、画像をフレームあたり512 x 512ピクセル、Zスタックあたり1分で10分間収集するイメージングパラメータを設定します。次に、光ズームとデジタルズームを調整して十分なX、Y、Z解像度を達成し、樹状樹状の樹状アーバー全体のカバレッジを1分以内に確保します。この設定では、0.11 x 0.11 x 0.25 マイクロメートルの標準 X、Y、Z 解像度のイメージが生成されます。ドリフト補正の場合は、適切なドリフト補正ソフトウェアプログラムで目的のファイルを開き、[微視的パラメータを編集および編集]をクリックします。2 つのフォトン オプションがある場合は、2 つのフォトン 画像の顕微鏡の種類を [広視野] に設定し、ソフトウェアで定義されたワークフローに従います。デコンボリューションの場合は、デコンボリューションソフトウェアでドリフト補正画像を開き、ワークフローに従います。次に、4Dデータを解析し、画像内の定義されたスポットの空間座標を報告することができる後続の画像注釈ソフトウェアでサポートされているファイルタイプでデコンボルブ画像を保存します。イメージ注釈の場合、イメージ注釈ソフトウェアでデコンボルブされたイメージを開き、3D のすべての時点で分岐のヒントを確認してマークします。イメージ注釈ソフトウェアは、マークされたブランチ ヒントの空間座標と時間座標をレポートし、保存します。後続の計算のために座標情報を CSV ファイルとしてエクスポートします。スポット モジュールで、[自動作成をスキップして手動で編集する] をクリックし、[選択したスポットに自動接続] チェックボックスをオンにします。時系列のフレームを確認し、注釈の分岐を選択します。Shift キーを押したまま、分岐端子の先端をクリックしてスポットを追加します。次に、[統計] タブをクリックし、[詳細]、[特定の値]、[位置] を選択します。記録された空間座標と時間座標情報が表示されます。[保存] をクリックして、データを CSV ファイルとしてエクスポートします。3D で分岐チップの配置を計算するには、CSV ファイルをスプレッドシートとして開き、[トラック ID] 列を選択します。[最小から最大に並べ替え] をクリックし、[選択を展開] を受け入れます。並べ替え後、トラック ID は一意の樹状分岐を識別し、同じ分岐のスポットが同じトラック ID を共有します。スプレッドシートで[距離]列を追加し、座標を使用して、一時的に隣接する 2 つのスポットの距離を計算します。単一ボクセル レベルでの小さな動きを測定するには、0.3 マイクロメートル未満のすべての距離値をリセットして、補正されていないドリフトまたは不完全な画像注釈をフィルター処理します。次に、変位列を作成し、距離列から変位列に値をコピーします。各ブランチ ヒントに対して、拡張機能と取り消しイベントを手動で割り当てます。延長の場合は、正の変位値をそのままにします。引き込みである場合は、対応する変位値を負の値に変更します。次に、新しい Event 列で、個々の延長イベントと退位イベントの変位値を合計します。本ビデオでは、個別に標識された腹側ニューロンの代表から収集された最大強度投影画像系列が観察できる。単一フレームイメージは、取り消しイベントと拡張イベントの評価を可能にします。分岐端子の半自動4Dトラッキングにより、個別に標識された腹側神経細胞の動的分岐端子のアノテーションを示す。各時点における分岐の動きの方向と距離の計算により、異なる発達段階で個別に標識された腹側ニューロンの樹状枝ダイナミクスを比較することができます。最も重要なステップは、解剖および取り付け中に脳組織および樹状突起形態の完全性を維持することである。生の画像シリーズの品質は、追跡と定量化を成功させるためにも重要です。この技術を用いて、ショウジョウバエ中枢神経細胞の開発においてデンドライトフィロポディアの定量分析を行い、デンドライト成熟とシナプト発生に関連する分子機械を探索する能力を得た。

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging and Quantification of Fast Dendritic Branch Dynamics in Developing Drosophila Neurons

Live-imaging of PKC Translocation in Sf9 Cells and in Aplysia Sensory Neurons

Sf9細胞でとアメフラシ感覚ニューロンにおけるPKC転座のライブイメージング

Protein kinase Cs (PKCs) are serine threonine kinases that play a central role in regulating a wide variety of cellular processes such as cell growth and ...

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

開発ゼブラフィッシュ前脳におけるクローン関連の神経前駆細胞のタイムラプスライブイメージング

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

ニューロモデュレーションとミトコンドリア輸送：長時間にわたって海馬ニューロンのライブイメージング

To understand the relationship between mitochondrial transport and neuronal function, it is critical to observe mitochondrial behavior in live cultured ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

無傷の感覚器官の前駆細胞の生細胞イメージングショウジョウバエ蛹

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Analysis of Dendritic Spine Morphology in Cultured CNS Neurons

培養中枢神経系ニューロンの樹状突起スパイン形態の解析

Dendritic spines are the sites of the majority of excitatory connections within the brain, and form the post-synaptic 
compartment of synapses. These ...

Inducing Dendritic Growth in Cultured Sympathetic Neurons

培養交感神経ニューロンの樹状成長を誘導する

The shape of the dendritic arbor determines the total synaptic input a neuron can receive 1-3, and influences the types and distribution of these inputs ...

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

開発神​​経上皮における細胞挙動の高解像度のライブイメージング

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Time-lapse Imaging of Neuroblast Migration in Acute Slices of the Adult Mouse Forebrain

成体マウスの前脳の急性スライスにおける神経芽細胞の移行のタイムラプスイメージング

There is a substantial body of evidence indicating that new functional neurons are constitutively generated from an endogenous pool of neural stem cells ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

モーター神経切断とライブゼブラフィッシュにおけるグリア細胞の挙動のタイムラプスイメージング

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

グルタミン酸とGABAの高速マイクロイオン導入：シナプス統合を調査するために便利なツール

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...