Name: a pre-clinical rat model for the study of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery
Uploaded: 2019-11-08T14:00:00
Duration: 8 min 5 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery at JoVE.com

Araştırma projesi, ICTS Nanbiosis'in bir parçası olan Jesús Usón Minimal İnvaziv Cerrahi Merkezi'nde (CCMIJU) gerçekleştirildi. Çalışma aşağıdaki Nanbiosis birimlerinin yardımıyla yapıldı: U21, deneysel ameliyathane; U22, hayvan barınağı; ve U14, hücre terapisi. Bu çalışma ISCIII projesi PI16/02164 tarafından desteklenmiştir. Araştırmanın tasarım, veri toplama ve analiz, yayımlama kararı veya el yazması hazırlama da hiçbir rolü yoktu. María Pérez'e rakamları hazırladığı ve Fernanda Carrizosa'ya sürekli teşvik sağladığı ve bilimsel bibliyografyayı desteklediği için özel teşekkürler verilir.

Tüm prosedürler Jesús Usón Minimal İnvaziv Cerrahi Merkezi etik komitesi ve Avrupa mevzuatına dayalı bölgesel hükümetin refah yönergelerine uygun olarak yürütülmüştür.
1. Cerrahi Öncesi ve Cerrahi Hazırlık
<ol><li>House Wistar sıçanlar 22-25 °C'de kafeslerde 290-350 g ağırlığında yiyecek ve suya ücretsiz erişim ile. Strese bağlı sorunları önlemek için ameliyattan 1 hafta önce alışMa.</li>
	<li>Bir anestezik indüksiyon odasına bir sıçan yerleştirin, oksijen 5 dakika teslim (0.5-1 L/dk), ve anestezi neden% 5 sevofluran eki teslim etmek için bir buharlaştırıcı kullanın.</li>
	<li>Anestezi uygulandıktan sonra fareyi odadan alın. Sıçan üzerinde teneffüs yüz maskesi yerleştirin ve anestezi korumak için% 2 sevofluran bir akış hızı sağlar. Bir parmak sıkışması yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol edin.</li>
	<li>Korneanın kurumasını ve hasar görmesini önlemek için göz koruması merhemi kullanın.</li>
	<li>Hayvanı genel anestezi altında aşağıdaki gibi izleyin: Rektal termometre (35.9-37.5 °C) yerleştirin, mukoza rengini kontrol edin ve O2 doygunluğu kontrol etmek için bir kemirgen darbe oksimetresini yerleştirin (>%95) ve kalp hızı (250-450 bpm).</li>
	<li>Hipotermi önlemek ve prosedür sonrası anestezi kurtarma geliştirmek için bir ısı desteği (elektrikli ısıtma pedleri veya dolaşan su battaniye) kullanın.</li>
	<li>Uygun hidrasyonu korumak için 5 mL ılık deri altı fizyolojik tuzlu çözelti enjekte edin.</li>
	<li>Analjezik ve anti-inflamatuar ilaçlar (meloksikam 1 mg/kg/gün) ve profilaktik antibiyotikler (enrofloksasin 7.5 mg/kg/gün) ameliyat öncesi ve ameliyat sonrası 5 gün boyunca subkutan olarak temin edin.</li>
	<li>Hayvanın karın ve inguinal bölgelerini tıraş edin.</li>
	<li>Topikal povison-iyot uygulayın, ardından% 70 etanol. Hayvanı steril bir perdeyle örtün.</li>
</ol>2. Ücretsiz Cilt Flep Modeli Cerrahisi
<ol><li>Cerrahi bir belirteç kullanarak, 6 cm'lik kenarlardan birine sahip 3 cm x 6 cm'lik bir flep çizin. Daha sonra, karın orta hattında 6 cm deri kesi ve 6 cm orta hat kesi üst ve alt kısmında iki dik 3 cm kesiler olun.</li>
	<li>Tasarlanan 3 cm x 6 cm cilt kapağını incelemeye başlamak için, cildin hareketliliği nedeniyle flebi (neşter yerine) yükseltmek için makas ve Adson kefenleri kullanın.</li>
	<li>Yavaşça diseksiyonu ile yardımcı olmak için kaudal alana doğru kranial bölgeden flep çekin ve bol gevşek bağ dokusu ile çevrili epigastrik pedikül belirlemek.</li>
	<li>Kapak pedikülüne dokunmadan veya adventiyi mümkün olduğunca az kavrararak damar duvarına zarar vermemek için parçalayın.</li>
	<li>Proksimal kaudal femoral damarlar, lateral circumflex femoral damarlar ve safenöz damarlar bağ tarafından tıkanmak için 8/0 naylon dikişkullanın. Bu nedenle, flep perfüzyonu femoral arter tarafından sağlanır ve doğrudan yüzeysel kaudal epigastrik arter yoluyla devam, venöz drenaj femoral ven doğru yüzeysel kaudal epigastrik ven tarafından yapılır iken.</li>
	<li>Kıskaç vasküler pedikül ve daha sonra 8 h iskemi dönemi başlatmak için kesti. İşlem sırasında sıcaklığı korumak için elektrikli battaniye kullanın. İki adet 5 ml ılık enjeksiyon (25°C) %0.9 tuzlu çözelti subkutan olarak uygulanır. İlk yönetim işlemin başlamasından sonra 2 saat yapılır; ve prosedürün sonunda ikinci hayvanın uygun bir iyileşme elde etmek için.</li>
	<li>Flebi perfüzyon ve mikrosirkülasyon dan durgun kan kaldırmak için heparinized tuzlu çözelti (100 U / mL) kullanın.</li>
	<li>Mikrocerrahi anastomozları gerçekleştirmek için 10/0 naylon dikiş kullanın.</li>
	<li>8 saat iskemiden sonra mikrovasküler kelepçeleri çıkararak flebi yeniden tekrarlayın ve aşağıda açıklandığı gibi vasküler açıklık kontrol edin.</li>
</ol>3. İntraoperatif Değerlendirme
<ol><li>Damar ve arter için manuel açıklık testi (boş ve dolum testi) yapın. Bunu yapmak için, iki mikrocerrahi forceps kullanın, anastomoz onları distal konumlandırmak ve sağım gerçekleştirmek. Önce anastomoz bölgesine en yakın forceps bırakın. Damar kesiti boşaltıldıktan sonra kan akışı devam ederse, anastomoz patenti dir.</li>
	<li>Bir transit zamanlı ultrason akış ölçer ve mikrocerrahi problar kullanarak kan akışını değerlendirin.
	<ol>
<li>Akış probları için uygun boyutu seçmek için pedikül damarlarının çapını ölçün. NOT: 0,7 mm akış probu, 0,4 mm ile 0,7 mm arasında değişen gemileri ölçebilir; 1,0 mm akış probu 0,7 mm ile 1,0 mm arasında değişen gemileri ölçebilir; 1,5 mm akış probu, 1,0 mm ile 1,5 mm arasında değişen gemileri ölçebilir.</li>
		<li>Akış hacmini ölçmek için akış sondasının ultrasonik algılama penceresine (reflektör ve dönüştürücüler arasında) hedef kabı yerleştirin. NOT: Herhangi bir gerginlik veya çekme önlemek için, geminin düzlemine sonda nötr tutun.</li>
		<li>Ekrandaki tüm çubukların yeşil olduğunu gözlemleyerek akustik bağlantının kalitesini kontrol edin. NOT: Zor iyi akustik kaplin almak için, ultrasonik jel veya fizyolojik tuzlu çözelti topikal kullanın.</li>
		<li>İyi bir bağlantı sağlandığında ve gemi herhangi bir gerilim olmadan akustik pencereye yerleştirildiğinde, verileri depolamak için ekrandaki Kayıt düğmesine tıklayın. NOT: Güvenilir ve doğru bir ölçüm elde etmek için dalga formu deseninin sürekli tekrarlanabilir olduğundan emin olun.</li>
	</ol></li>
	<li>Bir kez yapılır, cildi kapatmak için Poliglikolik Asit (PGA) 4-0 emilebilir örgülü dikişler (16mm 3/ 8 üçgen iğne) kullanın. Sütür parçası postoperatif sıçan tarafından ısırılırsa güç ve doku konumunu korumak için basit bir kesme desen kullanın.</li>
	<li>Lazer benek kontrast analizi (LASCA) kullanarak flep mikrosirkülasyon unu değerlendirin.
	<ol>
<li>Her hayvan için ve çalışmanın her takibi için yeni bir kayıt yapın. Bunun için Dosya/Yeni Kayıt'ıtıklatın. Yeni bir pencere açılır ve Kurulum Paneli görüntülenir. Daha sonra proje adı, konu, işleç ve kayıt adı bilgilerini edin.</li>
		<li>Maksimum tekrarlanabilirlik için aşağıdaki parametreleri standartlaştırın: çalışma mesafesi, ölçüm alanı, nokta yoğunluğu, çerçeve hızı ve ortam ışığı koşulları.<ol>
<li>Lazeri dokuya göre hareket ettirerek Çalışma Mesafesini ayarlayın. Lazer kafasını ilgi dokuya doğru yakınlaştırın veya uzaklaştırın. Ölçülen değeri denetlemek için Resim Kurulumu'nutıklatın. Burada, 12.0 cm ayarlayın.</li>
			<li>Görüntü Kurulumu'naistenilen Genişlik ve Yükseklik girerek Ölçüm Alanını Standartlaştırın. Tasarlanan flep 3 cm x 6 cm ölçüleri. Bu ölçüm için, fazladan alan olması için 4,0 cm genişliğinde ve 7,0 cm yüksekliğinde bir yükseklik seçin.</li>
			<li>Görüntü Kurulumu'nda Nokta Yoğunluğunu yüksek olarak ayarlayın. Yüksek, orta ve düşük üç seçenektir.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Görüntü Yakalama Kurulumu'nda, kayıt için Kare Hızı (10 görüntü/s) ve kaydın Süresi (1 dk) seçeneğini belirleyin. NOT: Ameliyat sırasında veya değerlendirmeleri yaparken ameliyathanede aynı ortam ışığı durumuna sahip.</li>
		<li>Kaydet düğmesini tıklatarak kayda başlayın. Kurulum Paneli kayıt paneli ile değiştirilir. Veriler otomatik olarak kaydedilir. Daha fazla karşılaştırma sağlamak için yordam sırasında anlık görüntü alın. NOT: Perfüzyon ölçeği görselleştirmeyi geliştirmek için değiştirilebilir (Click Tools | Filtreler ve Renk Skalaları | Perfüzyon Ölçeği | Manuel 0 - 150), ancak ölçülen perfüzyon değerleri etkilenmez. Kayıttan önce ve sonra, içlerindeki perfüzyonu ölçmek için farklı ilgi alanları (ROI' ler) oluşturulabilir. Burada sadece uygulanan flep alanı (3 cm x 6 cm) değerlendirildi.</li>
	</ol></li>
	<li>Hayatta kalma ve nekroz alanlarını ölçmek için ImageJ yazılımını kullanın.
	<ol>
<li>Flep in yanında bir cetvel bulun ve ardından flep sağkalım alanının makroskopik ölçümleri için kontrol fotoğraflarını çekin.</li>
		<li>Resimleri değerlendirmek için ImageJ kullanıcı arabirimini açın. Dosya'yı tıklatın ve ölçülecek resmi açın.</li>
		<li>Araç kutusunda Düz Çizgi'yi seçin ve cetvelin 1 cm'den üzerinde düz bir çizgi çizin. Analiz et ' e tıklayın | Ölçek ayarlayın ve bilinen mesafe 1 cm değeri için metin kutusuna tanıtmak.</li>
		<li>Çokgen Seçim Aracı'na tıklayın ve uygun alanı hesaplamak için çokgen çizgileri kapağın üzerine çizin. Sonuçta, Analyze tıklayın | Alan değerini elde etmek için ölçün.</li>
	</ol></li>
	<li>Cerrahi alanın kendi kendine sakatlanmasını önlemek için hayvanın üzerine ameliyat sonrası pansumanı yerleştirmeden önce muhafaza edin. İşlemlerden sonra hayvanlar ayrı ayrı kafeslerde, sıcaklık kontrolü olan bir odada (22°C ila 25°C) barınmaktadır.</li>
</ol>4. Postoperatif Değerlendirme ve Doku Örneklemesi
<ol><li>Bu protokolde daha önce açıklanan adımları izleyerek flep değerlendirmesi ve doku örneklemesi için 7 ameliyat sonrası gün içinde sıçanı anestezi edin (adım 1.2 ve 1.3). Parmak ucuna yanıt eksikliği ile anestezi derinliği ni kontrol edin.</li>
	<li>Flep sağkalım ve nekroz alanlarının makroskopik ölçümlerini sağlamak için cerrahi alanın fotoğrafını niçin fotoğraflayın. Protokolde daha önce açıklanan intraoperatif değerlendirmenin aynı adımlarını izleyerek postoperatif makroskopik ölçümleryapın (adım 3.5). NOT: Poligon Seçim Aracı'nı kullanırken, kapaktaki çizgileri çizerek dikkat edin (cm2cinsinden ölçülür). Canlı alanın yüzdesi (cm2 canlı alan/cm2 toplam flep alanı) × 100 olarak hesaplanabilir.</li>
	<li>Perfüzyon farklılıklarını görselleştirmek ve ölçmek için LASCA tekniğini (adım 3.4) kullanarak flep mikrosirkülasyonunu değerlendirin</li>
	<li>Makroskopik analizden sonra, 4/0 dikişleri çıkarın ve transit zamanlı ultrason kullanarak vasküler pedikül kan akışını yeniden değerlendirmek için flep yükseltin.</li>
	<li>
Kapağı 1,5 cm x 6 cm'lik iki parçaya böldürerek doku örneklemesi yapın.
	<ol>
<li>Daha ileri histolojik analizler için oda sıcaklığında %4 paraformaldehit içeren biyopsi kabına bir parça batırın.</li>
		<li>Bir kriyopreservation tüp içinde dokunun diğer kısmını tanıtmak, sıvı nitrojen batırmak ve daha sonra, gelecekte moleküler analizler için -80 °C'de saklayarak tüp kriyokorunmuş.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Etik komitenin tavsiyelerine göre 2 M KCl/kg hızlı intrakardiyak enjeksiyon kullanarak genel inhalasyon anestezisi altında sıçanı ötenazi.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Siemionow, M., Arslan, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia/reperfusion+injury:+a+review+in+relation+to+free+tissue+transfers.">Ischemia/reperfusion injury: a review in relation to free tissue transfers.</a> Microsurgery. 24 (6), 468-475 (2004).</li><li>Wang, W. Z., Baynosa, R. C., Zamboni, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Update+on+ischemia-reperfusion+injury+for+the+plastic+surgeon:+2011.">Update on ischemia-reperfusion injury for the plastic surgeon: 2011.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 128 (6), 685-692 (2011).</li><li>Chen, K. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Timing+of+presentation+of+the+first+signs+of+vascular+compromise+dictates+the+salvage+outcome+of+free+flap+transfers.">Timing of presentation of the first signs of vascular compromise dictates the salvage outcome of free flap transfers.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 120 (1), 187-195 (2007).</li><li>Sears, E. D., Chung, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Replantation+of+finger+avulsion+injuries:+a+systematic+review+of+survival+and+functional+outcomes.">Replantation of finger avulsion injuries: a systematic review of survival and functional outcomes.</a> The Journal of Hand Surgery. 36 (4), 686-694 (2011).</li><li>Caterson, E. J., Lopez, J., Medina, M., Pomahac, B., Tullius, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+in+vascularized+composite+allotransplantation.">Ischemia-reperfusion injury in vascularized composite allotransplantation.</a> The Journal of Craniofacial Surgery. 24 (1), 51-56 (2013).</li><li>Amin, K. R., Wong, J. K. F., Fildes, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+Reduce+Ischemia+Reperfusion+Injury+in+Vascularized+Composite+Allotransplantation+of+the+Limb.">Strategies to Reduce Ischemia Reperfusion Injury in Vascularized Composite Allotransplantation of the Limb.</a> The Journal of Hand Surgery. 42 (12), 1019-1024 (2017).</li><li>Barre-Sinoussi, F., Montagutelli, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+are+essential+to+biological+research:+issues+and+perspectives.">Animal models are essential to biological research: issues and perspectives.</a> Future Science OA. 1 (4), (2015).</li><li>Shaughness, G., Blackburn, C., Ballestin, A., Akelina, Y., Ascherman, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Predicting+Thrombosis+Formation+in+1-mm-Diameter+Arterial+Anastomoses+with+Transit-Time+Ultrasound+Technology.">Predicting Thrombosis Formation in 1-mm-Diameter Arterial Anastomoses with Transit-Time Ultrasound Technology.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (6), 1400-1405 (2017).</li><li>Ballestin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ischemia-reperfusion+injury+in+a+rat+microvascular+skin+free+flap+model:+A+histological,+genetic,+and+blood+flow+study.">Ischemia-reperfusion injury in a rat microvascular skin free flap model: A histological, genetic, and blood flow study.</a> PloS One. 13 (12), 0209624 (2018).</li><li>Kochi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+Arterial+Anatomy+of+the+Murine+Hindlimb:+Functional+Role+in+the+Design+and+Understanding+of+Ischemia+Models.">Characterization of the Arterial Anatomy of the Murine Hindlimb: Functional Role in the Design and Understanding of Ischemia Models.</a> PloS One. 8 (12), (2013).</li><li>Smit, J. M., Zeebregts, C. J., Acosta, R., Werker, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advancements+in+free+flap+monitoring+in+the+last+decade:+a+critical+review.">Advancements in free flap monitoring in the last decade: a critical review.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 125 (1), 177-185 (2010).</li><li>Krag, C., Holck, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+value+of+the+patency+test+in+microvascular+anastomosis:+Correlation+between+observed+patency+and+size+of+intraluminal+thrombus:+An+experimental+study+in+rats.">The value of the patency test in microvascular anastomosis: Correlation between observed patency and size of intraluminal thrombus: An experimental study in rats.</a> British Journal of Plastic Surgery. 34, 64-66 (1981).</li><li>Selber, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+prospective+study+of+transit-time+flow+volume+measurement+for+intraoperative+evaluation+and+optimization+of+free+flaps.">A prospective study of transit-time flow volume measurement for intraoperative evaluation and optimization of free flaps.</a> Plastic and Reconstructive Surgery. 131 (2), 270-281 (2013).</li><li>Briers, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser+speckle+contrast+imaging:+theoretical+and+practical+limitations.">Laser speckle contrast imaging: theoretical and practical limitations.</a> Journal of Biomedical Optics. 18 (6), 066018 (2013).</li><li>Zotterman, J., Bergkvist, M., Iredahl, F., Tesselaar, E., Farnebo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+of+partial+and+full+venous+outflow+obstruction+in+a+porcine+flap+model+using+laser+speckle+contrast+imaging.">Monitoring of partial and full venous outflow obstruction in a porcine flap model using laser speckle contrast imaging.</a> Journal of Plastic, Recontructive and Aesthetic Surgery. 69 (7), 936-943 (2016).</li><li>Zotterman, J., Tesselaar, E., Farnebo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+laser+speckle+contrast+imaging+to+predict+flap+necrosis:+An+experimental+study+in+a+porcine+flap+model.">The use of laser speckle contrast imaging to predict flap necrosis: An experimental study in a porcine flap model.</a> Journal of Plastic, Recontructive and Aesthetic Surgery. 72 (5), 771-777 (2019).</li></ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Mikrocerrahi serbest doku transferleri büyük kusurları yeniden yapılandırmak için tercih edilen bir yöntem haline gelmiştir. Bu tür serbest doku transferleri sırasında iskemi dönemi meydana gelir. Bu süre doku toleransını aştığında, G/Y yaralanması uygulanan serbest flep9'unbaşarısızlığa neden olabilir. Rekonstrüktif mikrocerrahide I/R yaralanmasını incelemek için uygun maliyetli ve çevirisel preklinik bir model geliştirmek için metodolojinin tanımı, bu patofizyolojik süreci etkisiz hale getirmek için farklı bileşiklerin çalışmasına öncülük edebilir.
Açıklanan hayvan modelinde, vasküler bağlar yerleştirildikten ve serbest flep çıkarıldıktan sonra, arka bacakkan akışında herhangi bir taviz verilmedi, ne ağrı ne de topal. Kochi ve ark.10'un tarif ettiği gibi, modelimiz kas içi ağlar üzerinden üç teminat rotası da bırakmaktadır.
Serbest fleplerin izlenmesi büyük önem taşımaktadır11, kurtarma ters iskemi başlangıcı ve klinik tanıma arasındaki süre ile ilgilidir. Bu amaçla ameliyat içi ve sonrası serbest flepler çalışılmalıdır.
Intraoperatif olarak, yaygın olarak kullanılan boş ve dolum testi veya akustik Doppler tanımlama sağlamak ama bir anastomoz12ile akış varlığı veya yokluğun sayısallaştırılması değil. Bu nedenle, biz transit zaman ultrason teknolojisi, cerrahlar mikrocerrahi anastomoz13kan akışını ölçmek için izin veren yeni bir yöntem kullanılır. Çalışmamızda tüm mikrocerrahi anastomozlar 8 saat iskemik hakaretten sonra ve çalışmanın sonunda patentlenmiştir. Mikrocerrahi anastomozların oluşturulmasından hemen sonra, literatürde önerilen minimumlardan daha yüksek kan akımı hacimleri dikkat çekti8. Bu, çalışmanın sonunda iyi pedikül perfüzyonu öngörerek, sonuçların mikrocerrahi teknikten değil, olayların I/R yaralanmasından etkilendiğini gösterdi. Ancak, bu teknik sınırlamalar içermez. Güvenilir sonuçlar elde etmek için, mikrocerrahi problar geminin düzlemine nötr tutulmalıdır, çekmeveya herhangi bir gerginlik oluşturmadeğil. Ultrasonik jel veya salin kullanılarak elde edilebilir uygun bir sinyal elde etmek için iyi bir akustik bağlantı gereklidir. Ekipman tarafından sağlanan yüksek kaliteli bağlantı sinyali, ölçümler sırasında göz önünde bulundurulması gereken önemli bir parametredir.
Biz LASCA kullandık, ayrıca lazer benek kontrast görüntüleme veya lazer benek görüntüleme olarak bilinen, postoperatif14. Bu teknoloji, burada doğrulanan serbest kanatlar içindeki akışın yarı kantitatif gerçek zamanlı haritalaması için değerli bir tekniği temsil eder. Sınırlamalardan biri, sonuçların rasgele birimler halinde sağlanmış olması ve gerçek akış değerleriyle doğrudan ilişkili olmamasıdır. Bu anlamda, daha fazla araştırma bu korelasyon doğrulamak için gereklidir. Lazer Doppler flowmetry daha yaygın olarak kullanılan ancak sadece flep tek bir noktada perfüzyon ölçer gerçeği ile sınırlıdır, LASCA flep içinde cilt perfüzyonbölgesel değişikliklerin tespiti sağlar ise15. Ayrıca, yeni bir çalışma16 LASCA perioperatif postoperatif flep nekrozu riski yüksek olan bölgeleri tahmin edebilir gösterdi. Sonuçlarımız LASCA'nın serbest fleplerin peri-ve postoperatif takibi için umut verici bir teknik olduğunu göstermektedir.

Mikrocerrahi, karmaşık doku defektlerinin, ampütasyonlu ekstremitelerin yeniden plantasyonuna ve hatta kompozit doku allotransplants'una müdahalelere (örn. serbest doku transferleri) olanak tanıyan rekonstrüksiyon için ortak bir cerrahi teknik haline gelmiştir.
Mikrocerrahi rekonstrüksiyonlar travmatik yaralanmalar, yanıklar veya onkolojik rezeksiyonların neden olduğu çok çeşitli defektler için idealdir. Ancak, iskemi-reperfüzyon (I/R) yaralanması ana sorumlu faktörlerden biri olan serbest flep yetmezliği nin düşük bir yüzdesi vardır. Mikrocerrahi olarak transfer edilen tüm dokular zorunlu bir iskemi dönemine ve reperfüzyona kadar dayanır. Primer iskemi bu dönem genellikle iyi tolere edilir; böylece mikrocerrahi işlemlerin başarı oranı %901,2'yiaşmaktadır. Ancak cerrahi revizyon gerektiren fleplerin sadece %63,7'si tamamen kurtarılabilir3. Buna ek olarak, parmak avulsiyon yaralanmalarıreplantasyon durumlarda, başarı oranı% 664; ve kompozit doku allotransplantasyonu i/ R yaralanma acı durumlarda, I / R yaralanma doğuştan gelen bağışıklıkaktiveberi ret yüzdeleri artar 5,6.
Bu nedenle, bu patofizyolojik fenomenin incelenmesi ilgi çekicidir. Hayvan modelleri fizyolojik mekanizmaları araştırmak ve insanlara uygulanmadan önce yeni tedavilerin değerlendirilmesi için gereklidir7. Damar anatomisi ve sıçanlar ve insanlar arasındaki fizyolojik benzerlikler fareleri I/R yaralanması gibi biyolojik süreçlerin araştırılması için ideal bir model haline getirmektedir.
Burada, I/R yaralanması olan sıçansız deri flep modelinin oluşturulması için ayrıntılı bir protokol ve ameliyat içi ve sonrası değerlendirmeler için farklı olanaklar saklıyız. Bu yöntemin genel amacı, ilgili zararları azaltmak için G/B yaralanmalarını ve olası tedavileri incelemek için yararlı bir preklinik modeli tanımlamaktır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:681px;" width="681">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:232px;">AureFlo Unit</td>
			<td style="width:121px;">Transonic (Ithaca, USA)</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td style="width:167px;">Transit-time ultrasound flowmeter equipment</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">Commbined Basic Hand- and Reconstructive Surgery Set (round handle)</td>
			<td style="width:121px;">S&#38;T AG (Neuhausen, Switzerland)</td>
			<td style="width:161px;">RHR-SET. Art.No.00795</td>
			<td>Set of microsurgical instruments</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">FLOW-i</td>
			<td style="width:121px;">Maquet Critical Care AB (Solna, Sweeden)</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>Anesthesia Delivery System</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">Micro clamps ABB-1</td>
			<td style="width:121px;">S&#38;T AG (Neuhausen, Switzerland)</td>
			<td style="width:161px;">00408V</td>
			<td>Double microvascular clamp with frame</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">Micro clamps ABB-11</td>
			<td style="width:121px;">S&#38;T AG (Neuhausen, Switzerland)</td>
			<td style="width:161px;">00414V</td>
			<td>Double microvascular clamp without frame</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">Micro clamps B-1</td>
			<td style="width:121px;">S&#38;T AG (Neuhausen, Switzerland)</td>
			<td style="width:161px;">00396V</td>
			<td>Sigle microvascular clamp</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:232px;">Nylon suture 10/0</td>
			<td style="width:121px;">Laboratorio Arag&#243; (Barcelona, Spain)</td>
			<td style="width:161px;">19921</td>
			<td>Microsurgical suture</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">OPMI Pentero 800</td>
			<td style="width:121px;">Carl Zeiss AG (Oberkochen, Germany)</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>Surgical microscope</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:232px;">PeriCam PSI System</td>
			<td style="width:121px;">Perimed AB (J&#228;rf&#228;lla, Sweden)</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>Laser speckle contrast analysis equipment</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:232px;">Philips Intellivue MX450</td>
			<td style="width:121px;">Philips Medizin Systeme (B&#246;blingen, Germany)</td>
			<td style="width:161px;">N/A</td>
			<td>Monitoring system</td>
		</tr>
		<tr height="126">
			<td height="126" style="height:126px;width:232px;">Protector posoperatorio para roedores</td>
			<td style="width:121px;">Fundaci&#243;n Centro de Cirug&#237;a de M&#237;nima Invasi&#243;n Jes&#250;s Us&#243;n (C&#225;ceres, Spain)</td>
			<td style="width:161px;">P201400272</td>
			<td>Postoperative protector for rodents</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a pre-clinical rat model for the study of ischemia-reperfusion injury in reconstructive microsurgery

Rekonstrüktif mikrocerrahide flep yetmezliğinin ana nedeni İskemi-reperfüzyon hasarıdır. Sıçan maliyet etkinliği ve insanlara çevirisi nedeniyle biyomedikal araştırma birçok alanda tercih edilen preklinik hayvan modelidir. Bu protokol, iskemi-reperfüzyon yaralanması olan sıçanlarda preklinik serbest deri flep modeli oluşturmak için bir yöntem açıklar. Açıklanan 3 cm x 6 cm sıçan serbest deri flep modeli birkaç vasküler ligatürler ve vasküler pedikül bölümü yerleştirildikten sonra kolayca elde edilir. Daha sonra, iskemik hakaret ve mikrocerrahi anastomoz tamamlanmasından sonra 8 saat, serbest deri flebi doku hasarı gelişir. Bu iskemi-reperfüzyon yaralanmasına bağlı hasarlar bu modelde incelenebilir, bu patofizyolojik süreci ele almak için terapötik ajanların değerlendirilmesi için uygun bir model haline. Ayrıca, bu hayvan modelinin değerlendirilmesi için protokolde iki ana izleme tekniği tanımlanmıştır: transit zamanlı ultrason teknolojisi ve lazer benek kontrast analizi.

Mikrocerrahi anastomozların oluşturulmasından hemen sonra, literatürde önerilen minimum akışlardan daha yüksek kan akımı hacimleri elde ettik8; bu nedenle, tüm mikrocerrahi anastomozlar ameliyattan 1 hafta sonra patentlenmiştir (Şekil 1).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60292/60292fig1.jpg"> Şekil 1: Transit zamanlı ultrason kan akımı değerlendirmesi. (A) Kan akışını değerlendirmek için mikrocerrahi akış sondasının konumu. (B) Flep pedikülünün anastomozlu damarlarından elde edilen kan akımı paterni ve nicelikselifikasyon. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60292/60292fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
İskemik hakaret sırasında kan akımının mikrosirkülasyon yoksunluğunun gözlemi LASCA tekniği ile mümkün oldu, flep reperfüzyonu sırasında ani hiper perfüzyon da dahil olmak üzere, ve perioperatif olarak, daha az perfüzyona sahip farklı bölgeler ve çalışmanın bitiminden 7 gün sonra gerçekten nekrotiroza neden olan postoperatif flep nekrozu riski daha yüksektir(Şekil 2).
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60292/60292fig2.jpg"> Şekil 2: Lazer benek kontrast analizi teknolojisi. (A) Fizyolojik durumda mikrosirkülasyon doku kan perfüzyonu görselleştirilmesi. (B) Iskemi sırasında mikrosirkülasyon doku kan perfüzyonunun görselleştirilmesi. (C) Reperfüzyondan hemen sonra mikrosirkülasyon dokusu kan perfüzyonunun görselleştirilmesi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60292/60292fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
8 saat iskemi sonrası flep sağkalım alanı ve sonraki reperfüzyonu %40 civarındaydı. Daha önce yayınlanan sonuçlar9, bu modelin iskemik hakarete maruz kıldığı fleplerle karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar gösterdiğini göstermiştir.

Watch this Scientific Journal Video about A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery at JoVE.com

A Pre-clinical Rat Model for the Study of Ischemia-reperfusion Injury in Reconstructive Microsurgery

Burada rekonstrüktif mikrocerrahide iskemi-reperfüzyon hasarının patofizyolojisini incelemek için klinik öncesi bir hayvan modelini açıklıyoruz. Sıçanyüzeysel kaudal epigastrik damarlar dayalı Bu ücretsiz deri flep modeli de iskemi-reperfüzyon yaralanma ile ilgili hasarı dengelemek için farklı tedaviler ve bileşiklerin değerlendirilmesi için izin verebilir.

Rekonstrüktif Mikrocerrahide İskemi-Reperfüzyon Hasarı Nın İnceleştirilmesinde Klinik Öncesi Sıçan Modeli

Ischemia-reperfusion injury is the main cause of flap failure in reconstructive microsurgery. The rat is the preferred preclinical animal model in many ...

Rekonstrüktif mikrocerrahide flep yetmezliğinin ana nedeni İskemi-reperfüzyon hasarıdır. Bu video bu patofizyoloji çalışma için bir pre-klinik hayvan modeli açıklar. Sıçanda yüzeysel kaudal epigastrik damarlara dayalı bu serbest cilt flep modeli iskemi-reperfüzyon hasarı ile ilgili zararları karşı koymak için farklı tedaviler ve bileşiklerin değerlendirilmesi izin verebilir.Mikrocerrahi rekonstrüksiyonlar çok çeşitli defektler için idealdir. Ancak, bu yordamlar reperfüzyon ardından iskemi zorunlu bir süre sağlamak. Bu dönem genellikle iyi tolere edilir ve mikrocerrahi işlemlerin başarı oranı %90'ı aşmaktadır ancak cerrahi revizyon gerektiren fleplerin sadece %73.7'si tamamen güvenli olabilir.Buna ek olarak, parmak avulsiyon yaralanmalarının replantasyonu vakalarında başarı oranı yaklaşık %60'tır ve kompozit doku renakli vakalarında, yaralanma doğuştan bağışıklığı aktive ettiği için iskemi-reperfüzyon yaralanması projeksiyon yüzdeleri artmaktadır. Bu nedenle, bu patofizyolojik fenomenin incelenmesi ilgi çekicidir. Bu prosedüre başlamak için, altı santimetre lik kenarlardan birinin karın orta hattıyla eşleştiğinden emin olmak için üç santimetreye altı santimetrelik bir flep çizmek için cerrahi bir belirteç kullanın.Daha sonra, karın orta hattında altı santimetre deri kesi yapmak, iki dik üç santimetre kesiler, hem de ilk kesi paralel altı santimetre. Belirlenen deri flebini incelemeye başlamak için, flebi yükseltmek için makas ve Adson forceps kullanın. Kapağı kranial bölgeden kaudal bölgeye doğru yavaşça çekin.Kapak pedikülüne dokunmadan veya adventiyi mümkün olduğunca az kavrararak damar duvarına zarar vermemek için parçalayın. 8-0 kullanın bağ ile tıkanması için naylon dikişler saphenous damarlar, lateral circumflex femoral damarlar, ve proksimal kaudal femoral damarlar. Damar pedikülkıs ve sonra sekiz saatlik iskemi dönemi başlatmak için kesti.Flep perfuse için heparinized tuzlu çözelti sin, sonra mikrosirkülasyon gelen durgun kan kaldırmak için kullanın. Mikrocerrahi anastomozları gerçekleştirmek için 10-0 naylon sütür kullanın. Sekiz saatlik iskemiden sonra mikrovasküler kelepçeleri çıkararak flebi yeniden tekrarlayın ve vasküler açıklığı kontrol edin.İlk olarak, bir transit zamanlı ultrason akış ölçer ve mikrocerrahi problar kullanarak kan akışını değerlendirmek. Akış hacmini ölçmek için hedef kabı akış sondasının ultrasonik algılama penceresine yerleştirin. İyi bir bağlantı sağlandığında ve gemi herhangi bir gerilim olmadan akustik pencereye yerleştirildiğinde, verileri depolamak için ekrandaki kayıt düğmesine tıklayın.Bundan sonra, cildi kapatmak için 4-0 emilebilir dikişler kullanın. Flep'in mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için lazer benek kontrast analizini kullanın. Dosyaya, yeni kayda tıklayarak her örnek ve her takip çalışması için yeni bir kayıt yapın.Kurulum panelini görüntüleyen yeni bir pencere açılır. Burada, proje adı, konu, işleç ve kayıt adı için bilgileri edin. Lazeri dokuya göre hareket ettirerek çalışma mesafesini ayarlayın.Lazer kafasını ilgi dokusuna doğru yakınlaştırın. Görüntü kurulumunda, istenilen genişlik ve yüksekliği girerek ölçüm alanını standartlaştırın. Nokta yoğunluğunu yükseklere ayarlayın.Görüntü yakalama kurulumunda, kayıt için kare hızını ve süresini seçin. Ardından, kaydetmeye başlamak için kayıt düğmesini tıklatın. Kurulum paneli kayıt paneli ile değiştirilir ve veriler otomatik olarak kaydedilir.Daha fazla karşılaştırma sağlamak için yordam sırasında anlık görüntü alın. Bundan sonra, ilk flep yerinde bir cetvel yerleştirerek ve makroskopik ölçüm için kontrol resimleri alarak hayatta kalma ve nekroz alanları ölçmek için ImageJ yazılımı kullanın. ImageJ araç kutusunda, düz çizgiyi seçin ve cetvelin bir santimetre üzerinde bir çizgi çizin.Analiz e tıklayın, ölçeği ayarlayın ve bilinen mesafe için metin kutusuna bir santimetre değerini girin. Çokgen seçim aracıtıklayın ve uygun alanı hesaplamak için flep üzerinde çokgen çizgileri çizin. Analiz üzerine tıklayın, alan değerini elde etmek için ölçü.Daha sonra, kendi kendine sakatlanma önlemek için konut önce hayvan bir postoperatif pansuman yerleştirin. Ameliyattan yedi gün sonra, flep sağkalım ve nekroz alanlarının makroskopik ölçümlerini sağlamak için cerrahi alanın fotoğrafını çekin. Daha önce açıklanan lazer benek kontrast analizi tekniğini kullanarak, flep mikrosirkülasyonunu değerlendirmek için perfüzyon farklılıklarını görselleştirin ve ölçün.Makroskopik analizden sonra, 4-0 dikişleri çıkarın, flebi kaldırın ve vasküler pedikül kan akışını yeniden değerlendirmek için transit zamanlı ultrason kullanın. Flebi 1,5 santimetreyi altı santimetreye kadar ölçen iki parçaya uzunlamasına bölerek doku örneklemesi yapın. Mikrocerrahi anastomozların oluşturulmasından hemen sonra literatürde önerilen minimum akışlardan daha yüksek kan akışı değerleri elde ettik.Böylece tüm mikrocerrahi anastomozlar ameliyattan bir hafta sonra patentlendi. Lazer benek kontrast analizi tekniği ile iskemik hakaret sırasında kan akımının mikrosirkülasyon bozunması gözlemi mümkün oldu. Bu flep reperfüzyonu sırasında hemen hiperperfüzyon ve perioperatif içerir, daha az perfüzyon ile farklı alanlarda gerçekten çalışmanın bitiminden yedi gün sonra nekrotizan postoperatif flep nekrozu daha yüksek bir risk vardı.Sekiz saatlik iskemi ve sonraki reperfüzyondan sonra flep sağkalım alanı yaklaşık %40 daha önce yayınlanmış sonuçlar, bu modelin iskemik hakaretin yapılmadığı fleplerle karşılaştırıldığında istatistiksel olarak anlamlı farklılıklar gösterdiğini göstermektedir. Flep pedikülüne dokunmadan veya adventiyi mümkün olduğunca az kavrarak damar duvarına zarar vermemeyi ve cerrahi tekniknedeniyle komplikasyonları önlemek için uygun mikrocerrahi anastomozları yapmayı unutmayın. İntraoperatif olarak, transit zamanlı ultrason teknolojisi mikrocerrahi anastomozların kan akışını ölçmemizi ve böylece flep perfüzyonu tahmin etmemizi sağlar.Postoperatif olarak, lazer benek kontrast analizi serbest flepler içinde akış gerçek zamanlı haritalama yarı süreklilik sağlar. Bu umut verici bir tekniktir, ancak daha fazla araştırma gereklidir. Bu video rekonstrüktif mikrocerrahi alanında iskemi-reperfüzyon hasarı na karşı terapötik ajanların değerlendirilmesi için uygun bir model protokolü açıklanmıştır.

Research

JoVE Journal

Medicine

Normothermic Cardiac Arrest and Cardiopulmonary Resuscitation: A Mouse Model of Ischemia-Reperfusion Injury

Normotermik Kardiyak Arrest ve Kardiyopulmoner Resusitasyon: İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Acute Kidney Injury (AKI) is a common, highly lethal, complication of critical illness which has a high mortality1-4 and which is most 
frequently caused ...

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

In situ Transverse Rectus Abdominis Myocutaneous Flap: A Rat Model of Myocutaneous Ischemia Reperfusion Injury

Miyokutanöz İskemi Reperfüzyon Hasarı Rat Modeli: in situ Enine Rektus abdominis kas deri Flap

Free tissue transfer is the gold standard of reconstructive surgery to repair complex defects not amenable to local options or those requiring composite ...

Ischemia-reperfusion Model of Acute Kidney Injury and Post Injury Fibrosis in Mice

Farelerde Akut Böbrek Hasarı ve Post Yaralanma Fibrozis iskemi-reperfüzyon Model

Ischemia-reperfusion induced acute kidney injury (IR-AKI) is widely used as a model of AKI in mice, but results are often quite variable with high, often ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

Induction and Assessment of Ischemia-reperfusion Injury in Langendorff-perfused Rat Hearts

Langendorff-perfüze sıçan Hearts indüksiyon ve İskemi-reperfüzyon Hasarı Değerlendirilmesi

The biochemical events surrounding ischemia reperfusion injury in the acute setting are of great importance to furthering novel treatment options for ...

Murine Model of Intestinal Ischemia-reperfusion Injury

Bağırsak İskemi-reperfüzyon Hasarı Murin Modeli

Intestinal ischemia is a life-threatening condition associated with a broad range of clinical conditions including atherosclerosis, thrombosis, ...

A Mouse Model of Retinal Ischemia-Reperfusion Injury Through Elevation of Intraocular Pressure

Göz İçi Basıncı Yükselmesi ile Retina İskemi-Reperfüzyon Hasarı Fare Modeli

Retinal ischemia-reperfusion (I/R) is a pathophysiological process contributing to cellular damage in multiple ocular conditions, including glaucoma, ...

Inducing Ischemia-reperfusion Injury in the Mouse Ear Skin for Intravital Multiphoton Imaging of Immune Responses

Bağışıklık Yanıtları intravital multiphoton Görüntüleme Fare Kulak Skin uyaran İskemi-reperfüzyon yaralanması

Ischemia-reperfusion injury (IRI) occurs when there is transient hypoxia due to the obstruction of blood flow (ischemia) followed by a subsequent ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...

Modified Heterotopic Hindlimb Osteomyocutaneous Flap Model in the Rat for Translational Vascularized Composite Allotransplantation Research

Translasyonel vaskülarize kompozit allotransplantasyon araştırmaları için Rat 'ta değiştirilmiş heterotopik Hindekstremite Osteomokutanöz Flap modeli

Vascularized composite allotransplantation (VCA) is a relatively new field in the reconstructive surgery. Clinical achievements in human VCA include hand ...