Name: abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains
Uploaded: 2020-06-03T13:00:00
Duration: 12 min 28 s
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Nous souhaitons dédier ce travail au Dr.ssa Michela Mangieri. Avant de mourir prématurément, elle a conçu et lancé le projet Abbiategrasso Brain Bank.
Nous sommes reconnaissants à nos donneurs de cerveau, qui contribuent généreusement à la recherche en faisant don de l’organe le plus noble de leur corps; sans eux, cette recherche ne serait pas possible.
Nous sommes reconnaissants à Valeria Marzagalli pour son travail précieux dans le projet ABB.
Les auteurs remercient le Professeur Johannes Attems, le Dr Paolo Fociani et le Dr Giorgio Giaccone pour leurs précieux conseils et leurs sages conseils.
Nous tenons à remercier la Dre Alice Cirrincione et Mlle Giulia Bortone pour leur précieuse aide tout au long du projet. Un grand merci à Mme Tere Cassani pour son soutien et à « Federazione Alzheimer Italia » pour sa collaboration. Les auteurs sont reconnaissants au Dr Matteo Moretti et au Professeur Antonio Marco Maria Osculati, Département de santé publique, médecine expérimentale et médico-légale de l’Université de Pavia.

Les auteurs n’ont rien à révéler.

Selon l’OMS, environ 50 millions de personnes souffrent actuellement de démence, un chiffre qui devrait tripler d’ici 2050. La maladie d’Alzheimer est la principale cause de démence, suivie par la maladie cérébrovasculaire et d’autres troubles neurodégénératifs liés à l’âge. En 2017, l’OMS a mis au point l’Observatoire mondial de la démence pour sensibiliser la population à la démence et encourager un plan d’action mondial à son encontre1. Chaque individu a sa propre trajectoire de vieillissement cérébral, donc la recherche de la guérison peut être difficile en raison de la complexité de la pathogénie des maladies neurodégénératives. Peut-être, chaque personne possède sa propre pathogénie écrite dans le tissu cérébral nécessitant une approche personnalisée. Ainsi, l’étude des tissus cérébraux sera la clé pour comprendre les mécanismes de la neurodégénérescence.
En repensant à l’histoire des neurosciences, nous nous rendons compte que les découvertes les plus impressionnantes et révolutionnaires n’auraient jamais pu se produire sans l’examen direct du cerveau humain. Au fil du temps, la source de tissus cérébraux à étudier est passée de dissections grossières, de « rencontres fortuites » aléatoires et, dans certains cas, de commerce illégal, à des collectes de cerveaux organisées et à des banques stratégiques modernes de cerveaux. La prise en compte de nombreux aspects éthiques est l’un des principaux facteurs qui différencient les banques cérébrales modernes des collections cérébrales du passé. Les premières vraies banques de cerveau modernes (BB) ont été instituées dans la seconde moitié du20ème siècle. Nicholas Corsellis et Wallace Tourtelotte peuvent être considérés comme des pionniers de la banque moderne du cerveau. Au Royaume-Uni, Corsellis a rassemblé une collection contenant plus de 1000 cerveaux bien documentés affectés par divers troubles mentaux et neurologiques2. En outre, Corsellis a contribué à révéler la nécessité de préserver les tissus cérébraux frais dans la glace pour le bien des tests biochimiques3. Pendant ce temps aux États-Unis, Wallace Tourtelotte a introduit des programmes de don de cerveau antemortem pour faciliter la sollicitation de donneurs potentiels de cerveau et de s’assurer que les cerveaux recueillis sont accompagnés d’une histoire médicale et neurologique complète4,5. Pour un aperçu historique des collections de cerveaux et des BB modernes, voir Carlos et coll. 6.
Alors, pourquoi avons-nous encore besoin de cerveaux humains ? Les maladies du cerveau ne peuvent recevoir un diagnostic précis qu’après un examen neuropathologique. La neuropathologie conteste le diagnostic clinique, et est la clé d’une interprétation correcte des symptômes cliniques et de la découverte des bases histologiques de nouvelles variantes syndromiques. En effet, le diagnostic peut être redéfini en fonction de l’image pathologique. Néanmoins, le taux d’autopsie a diminué au cours des dernières décennies en raison du développement récent de techniques de neuroimagerie innovantes. Grâce à l’imagerie cérébrale, les altérations morphologiques, fonctionnelles et métaboliques du cerveau, ainsi que l’étendue de l’erreur de pliage des protéines, peuvent être évaluées in vivo. Cependant, la neuroimagerie in vivo et d’autres études de biomarqueurs ne peuvent donner qu’une « estimation » de l’image pathologique, car elles sont incapables de détecter des changements cellulaires et moléculaires subtils. Les progrès de l’imagerie moléculaire et la découverte de nouveaux biomarqueurs, molécules cibles et traceurs7 (ex. amyloïdes, TAU, traceurs microgliaux) rendent le cerveau humain encore plus indispensable à l’interprétation des données obtenues à partir d’évaluations cliniques et de tests de biomarqueurs. En outre, les technologies omiques (génomique, épigénomique, transcriptomique, métabolomique, protéomique, lipidomique, etc.), réalisée sur des tissus cérébraux frais et congelés, a ouvert de nouvelles possibilités de compréhension des mécanismes de la maladie et de découverte des gènes de risque, de nouveaux marqueurs diagnostiques et pronostiques, et des cibles médicamenteuses potentielles8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23.
À ces fins, les BB modernes archivent des tissus cérébraux de haute qualité bien caractérisés qui les rendent disponibles pour la communauté scientifique3,24. Les cerveaux fournis par les BB devraient être accompagnés d’une histoire clinique complète. L’activité d’un BB comprend les éléments suivants : (1) Reconnaissance et recrutement de personnes malades et en bonne santé dans les programmes de don de cerveau; la condition idéale serait d’obtenir un suivi multidisciplinaire des donneurs tout au long de la vie afin d’obtenir un historique clinique, de style de vie et social complet, ainsi que des profils de biomarqueurs; en effet, la réserve cognitive et la structure du cerveau dépendent du mode de vie et des facteurs socio-éducatifs25,26, de sorte que ces informations enrichit les données totales à portée de main. (2) Acquisition du cerveau (composé de cerveaux, de cervelet et de troncs cérébraux) et des tissus connexes (p. ex., moelle épinière, nerfs crâniens et ganglions, etc.) à la suite de la disparition du donneur, tout en respectant des règlements juridiques et éthiques normalisés. (3) Traitement approprié (dissection, fixation, congélation) du cerveau, tel que défini dans un protocole opératoire normalisé, pour obtenir des tissus de haute qualité et pour permettre une utilisation future dans la recherche multidisciplinaire. (4) Caractérisation neuropathologique détaillée fournissant un diagnostic définitif défini. (5) Stockage et distribution de matériel tissulaire à la communauté de recherche27,28.
Tous les BB stockent les tissus incorporés congelés et la formaline-fixe-paraffine. Chaque BB a son propre protocole. À l’exception d’études particulières, comme le protocole de coupe bihémisphérique de l’Institut de recherche biomédicale (New Jersey)29 et l’étude de la pathologie cérébrovasculaire30du Deramecourt , les plus grands BB au monde ont simplement coupé le cerveau, le cervelet et le tronc cérébral le long de la ligne médiane (plan sagittal). Une moitié est disséquée fraîche puis congelée pour des études biochimiques, tandis que l’autre est fixée en formaline pour l’évaluation histopathologique. Ainsi, les analyses biochimiques et histopathologiques sont menées séparément sur chaque hémisphère. La décision quant à quel côté est fixé ou gelé (lateralité), dépend de la banque singulière31,32,33,34,35. Comme de nombreuses maladies neurologiques sont asymétriques, notre BB offre un protocole unique pour trancher les cerveaux frais : les sections adjacentes du tronc cérébral et chaque hémisphère sont alternativement fixes et congelées ; une tranche fixe sur un hémisphère correspond à une tranche congelée sur l’autre hémisphère. Grâce à cette méthode, l’utilisation du tissu cérébral est optimisée, et une caractérisation histologique complète de tous les matériaux congelés peut être réalisée avec la possibilité d’obtenir et de comparer des informations histologiques et biochimiques de toutes les zones des deux hémisphères.
Le cadre de notre projet de banque de cerveaux est la ville d’Abbiategrasso. Abbiategrasso est une petite ville située à environ 22 km au sud-ouest de la ville de Milan, dans le nord de l’Italie. Sa population est d’environ 32 600 habitants. Il abrite la Fondation Golgi-Cenci (GC). Gc Foundation fait partie d’un grand hôpital gériatrique de réadaptation (ASP Golgi-Redaelli), et est un institut axé sur la recherche sur le vieillissement et les soins aux personnes âgées. En particulier, il se concentre sur l’étude du vieillissement mental, les facteurs sociaux et comportementaux qui l’influencent, et la biologie et la pathologie sous-jacentes aux troubles neurocognitifs dépendants de l’âge (MNT). En 2009, la Fondation GC a lancé une nouvelle étude longitudinale auprès de 1 321 participants (sur 1644 sujets admissibles : taux de réponse initial de 80,3 %) né entre 1935 et 1939 (âgés de 70 à 75 ans), d’origine caucasienne, vivant dans la même petite zone géographique. L’étude a été appelée InveCe.Ab (Invecchiamento Cerebrale Abbiategrasso; en anglais: Brain Aging Abbiategrasso, ClinicalTrials.gov, NCT01345110) et est actuellement en cours. InveCe.Ab est prévu d’obtenir une cohorte avec une homogénéité maximale et la moindre variabilité afin d’évaluer l’incidence, la prévalence et l’histoire naturelle de la démence, ainsi que son risque possible ou des facteurs de protection, y compris les variables comportementales, psychosociales, cliniques et biologiques36. Les caractéristiques de la cohorte sont indiquées à la figure 1 et au tableau 1. Les données épidémiologiques sont compatibles avec la tendance de démence dans la population européenne37,,38 et les participants d’InveCe.Ab ont des caractéristiques génétiques et environnementales homogènes, représentant un bon modèle pour étudier la trajectoire du vieillissement normal aux désordres neurocognitifs. En effet, les populations homogènes ont besoin de moins de sujets pour atteindre une puissance statistique adéquate. La méthodologie InveCe.Ab a déjà été rapportée ailleurs36, mais il est important de souligner son approche multidimensionnelle par des contrôles périodiques (tous les 2 à 3 ans) en utilisant le même ensemble d’évaluations, y compris: l’échantillonnage sanguin (panneau métabolique, homocystéine et vitamines, extraction d’ADN au profil Apolipoprotéine E (APOE) et autres polymorphismes génétiques liés à la cognition et au vieillissement), mesures anthropométriques (poids, taille et taille), Test de marche (double test de tâche), entretien pour évaluer le mode de vie (observance du régime méditerranéen, niveaux d’activité physique et engagement cognitif) et les facteurs sociaux (implication sociale, solitude), une évaluation neuropsychologique et un examen général clinique. Comparer ces données longitudinales avec les données neuropathologiques postmortem serait crucial pour la recherche. Par conséquent, notre équipe et en particulier le Dr Michela Mangieri ont conçu l’approche neuropathologique mentionnée ci-dessus. Depuis 2014 et lors du second suivi, les participants d’InveCe.Ab ont été invités à donner leur cerveau, ce qui a entraîné la naissance de l’Abbiategrasso Brain Bank (ABB). Les principaux donateurs d’ABB sont les participants d’InveCe.Ab, mais ABB est maintenant ouvert à d’autres donateurs bénévoles. Il s’agit de patients de l’ASP Golgi-Redaelli, qui abrite plusieurs patients atteints de différentes maladies neurologiques ou de volontaires adultes qui apprennent le projet ABB et appartiennent à la même zone géographique (Abbiategrasso et environs). Tous les donateurs subissent le même protocole d’évaluation.
Les auteurs proposent une méthode pour suivre les trajectoires individuelles du vieillissement normal et la progression possible vers les MNT, et pour gérer, traiter et caractériser avec précision les cerveaux acquis auprès de ces donneurs suivis longitudinalement. En outre, notre objectif est de rencontrer et d’engager les individus dans des évaluations neurologiques périodiques, des séminaires et des activités éducatives concernant le bien-être du cerveau et de les sensibiliser au don du cerveau à des fins de recherche.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>50ml polypropilene conical tube 30x115mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>405253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NeuN (A60)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB377</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TAU (AT8)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>MN1020</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)</td>
			<td>CosmoBio</td>
			<td>TIP-PTD-P02</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-SYN (KM51)</td>
			<td>Novocastra</td>
			<td>NCL-L-ASYN</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;amyloid (4G8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>800703</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting board</td>
			<td>BD</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0101500</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical saw with 5d blade</td>
			<td>CEA</td>
			<td>06.06.14/06.00.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH measure surface 12mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>70064.250 HHH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11796338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4001</td>
			<td>secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4003</td>
			<td>secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylether</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8401530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather safety trimming knife blade 14cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11749798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WS1810500</td>
			<td>medium supplement; dilution = 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 15cm surgical or anatomical</td>
			<td>Uvex</td>
			<td>500XG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>CEA</td>
			<td>01.28.14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Arcobaleno</td>
			<td>2624000800002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head supporter</td>
			<td>Lacor</td>
			<td>60456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WX0550100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring tape</td>
			<td>CEABIS</td>
			<td>CEATA34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non adsorbable monofilament black polyamide</td>
			<td>UHU Bostik</td>
			<td>8000053131470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140050</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strept Solution (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0022100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>03.06.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel with n&#176;21 blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical basin</td>
			<td>Olcelli Farmaceutica</td>
			<td>A930857255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical mallet and surgical cisel</td>
			<td>CEA</td>
			<td>79.68.88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>CEA</td>
			<td>27.08.45/79.68.64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Feather</td>
			<td>M130RC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains

Dans une population qui vieillit constamment, on s’attend à ce que la prévalence des troubles neurodégénératifs augmente. Comprendre les mécanismes de la maladie est la clé pour trouver des mesures préventives et curatives. La façon la plus efficace d’y parvenir est par l’examen direct des tissus cérébraux malades et sains. Les auteurs présentent un protocole pour obtenir, traiter, caractériser et stocker les tissus cérébraux de bonne qualité donnés par des personnes inscrites dans un programme de don de cerveaux antemortem. Le programme de dons comprend une approche empathique en personne à l’égard des personnes, une collection d’information clinique, biologique, sociale et de style de vie complémentaire et des évaluations multidimensionnelles en série au fil du temps pour suivre les trajectoires individuelles du vieillissement normal et du déclin cognitif. Étant donné que de nombreuses maladies neurologiques sont asymétriques, notre banque de cerveaux offre un protocole unique pour trancher des spécimens frais. Les sections cérébrales des deux hémisphères sont alternativement gelées (à -80 °C) ou fixées en formaline; une tranche fixe sur un hémisphère correspond à une tranche congelée sur l’autre hémisphère. Avec cette approche, une caractérisation histologique complète de tous les matériaux congelés peut être obtenue, et des études d’omics peuvent être effectuées sur des tissus histologiquement bien définis des deux hémisphères offrant ainsi une évaluation plus complète des mécanismes de la maladie neurodégénérative. Le diagnostic correct et défini de ces maladies ne peut être réalisé qu’en combinant le syndrome clinique avec l’évaluation neuropathologique, qui ajoute souvent des indices étiologiques importants nécessaires pour interpréter la pathogénie. Cette méthode peut prendre du temps, être coûteuse et limitée car elle ne couvre qu’une zone géographique limitée. Indépendamment de ses limites, le degré élevé de caractérisation qu’il fournit peut être gratifiant. Notre but ultime est d’établir la première Banque italienne du cerveau, tout en soulignant l’importance des études épidémiologiques vérifiées neuropathologiquement.

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Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

Ce protocole décrit une méthode pour suivre les trajectoires individuelles de vieillissement du cerveau à travers un programme de don de cerveau et une caractérisation appropriée des cerveaux. Les donneurs de cerveau sont impliqués dans une étude longitudinale à long terme comprenant des évaluations multidimensionnelles en série. Le protocole contient une description détaillée du traitement du cerveau et une méthodologie diagnostique précise.

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Comme la prévalence des troubles neurocognitifs ne cesse d’augmenter, notre objectif est d’obtenir, de caractériser et de stocker des échantillons de tissus cérébraux de qualité afin d’obtenir un diagnostic précis et de faire la lumière sur les mécanismes neurodégénératifs. Compte tenu de l’assymétrie cérébrale, notre méthodologie d’échantillonnage permet d’effectuer toutes les méta-études sur des tissus histologiquement bien définis des deux hémisphères et les nombreuses données peuvent être recueillies et corrélées par l’apprentissage profond. Des effets additifs sur des dommages de cerveau par des pathologies multiples sont fréquemment observés.Le diagnostic défini exige combinant le syndrome clinique avec les résultats neuropathologiques pour découvrir la pathogénie de la maladie, et les thérapies possibles. Les procédures de coupe fraîches ainsi que la gestion des sections macro sont délicates, mais sont également essentielles pour obtenir de bons résultats. Une équipe formée et soudée est cruciale pour surmonter ces difficultés.Notre protocole comprend une série d’étapes qui sont nécessaires dextérité des mammifères, donc la démonstration visuelle peut être plus utile que les textes descriptifs pour les chercheurs qui souhaitent maîtriser ces techniques. Après confirmation de la thanatographie, utilisez un scalpel pointu pour faire une incision du cuir chevelu à travers la peau des cheveux et le tissu sous-cutané sur la plaque coronale de la pointe du processus mastoïde d’un côté à l’autre, en passant par-dessus le sommet. Séparez soigneusement les deux plis du cuir chevelu du crâne et continuez l’incision jusqu’à ce que la graisse orbitale super jaune devienne visible.Réfléchissez le cuir chevelu antérieurement et tirez l’autre section du tissu postérieurement. À l’aide d’un scalpel et de forceps, récoltez un petit échantillon du muscle temporal de chaque côté du crâne, plaçant un spécimen dans 4 % de formaldéhyde et l’autre échantillon à quatre degrés Celsius. À l’aide d’une scie électrique couper le crâne dans une coupe en V sur le côté frontal et enlever la calotte crân.Après avoir coupé les méninges, récolter un morceau de dura pour la fixation et un autre pour la congélation. Insérez une aiguille de 3,5 pouces de calibre 20 fixée à une seringue de 10 millilitres à travers le corpus callosum pour atteindre le troisième ventricule et rétracter le piston pour obtenir environ 10 millilitres de liquide céphalo-rachidien cérébral. Évaluer la couleur d’apparence et la turbidité du fluide et mesurer le pH.Tirez doucement sur les deux lobes frontaux pour soulever le cerveau et couper les deux nerfs optiques infundibulum, les artères carotides internes et les troisième, quatrième, cinquième et sixième nerfs crâniens. Couper le tentorium pour atteindre la fossa postérieure et couper les artères vertébrales et les nerfs crâniens inférieurs. Puis insérez le scalpel aussi profondément que possible à travers le magnum foramen pour couper la partie la plus caudale de la médule et enlever soigneusement tout le cerveau.Utilisez le scalpel pour apparaît à l’os au-dessus de la grotte de Meckel et de recueillir le ganglion gasserien de chaque côté pour la fixation et le gel. Utilisez un maillet chirurgical et un ciseau pour fracturer la sella turcica osseuse et enlever la glande pituitaire pour la fixation dans 4% de formaldéhyde. Inspectez le crâne et tout le cerveau à partir d’altérations macroscopiques et de changements vasculaires.Utilisez un ruban à mesurer pour mesurer les diamètres de posture transversaux et antérieurs du cerveau et peser le cerveau sur une échelle. Récupérez soigneusement le cercle de Willis pour l’évaluation macroscopique pour la présence des variantes anatomiques, des lésions, ou de la sténose de navire. Séparez et inspectez le cerveau, le cervelet et le tronc cérébral avant de peser les tissus individuellement.Retirez un à deux, deux à quatre centimètres carrés de leptomeninges de la convexité et conservez les échantillons dans le milieu de culture de DMEM à haut glucose complet à quatre degrés Celsius. Récoltez la glande pinéale pour la fixation dans 4% de formaldéhyde et retirez les bulbes olfactifs et les nerfs optiques pour la fixation et la congélation d’une de chaque paire. Placez le cerveau, le cervelet et le tronc cérébral sur la glace à quatre degrés Celsius.Lorsque tous les tissus d’intérêt ont été récoltés utiliser une colle super adhésif pour rattacher l’os et utiliser une aiguille chirurgicale, et sutures non absorbables pour recoudre le cuir chevelu. Pour la dissection de banque de cerveau emploient un couteau disséquant pour couper le tronc cérébral axially et faire la première coupure au niveau du midbrain rostral par le colliculus supérieur pour obtenir deux tranches pour exposer le nigra de substantia. Couper le tronc cérébral en tranches de 10, huit millimètres en prenant soin d’inclure des coupes passant à travers les pons rostral près des marges supérieures du quatrième ventricule pour observer le locus caeruleus et à travers la medulla oblongata inférieure à la strie acoustique, juste au-dessus de l’apex inférieur du quatrième ventricule pour obtenir des tranches, y compris le noyau moteur dorsal du vagus.Étiquetez toutes les tranches d’une manière caudale rostrale comme BS pour le tronc cérébral suivie de chiffres arabes. Après la dernière section de tronc cérébral, utilisez la désignation SC pour la moelle épinière suivie de chiffres arabes. Couper le cervelet sur le plan sagittal pour séparer les deux hémisphères cerébelleux au niveau du verme et effectuer des sections sagittales pour obtenir cinq tranches de chaque hémisphère.Nommez toutes les tranches du verme comme CBR ou CBL pour le cervelet droit et gauche respectivement, et utilisez des chiffres arabes pour identifier chaque section. Ensuite, séparez les deux hémisphères du cerveau à travers le corpus callosum sur le plan sagittal avant de trancher l’hémisphère comme singulièrement le long du plan coronal passant entre le chiasm optique et les corps mammillaires à travers le pôle temporal du lobe frontal, le cingule antérieur, le commissaire antérieur, le noyau des ganglions mineurs et basiques. Faire une deuxième coupe d’environ un centimètre postérieure en passant par les corps mammillary et en exposant les ganglions basiques, thalamus antérieurs sous thalamus, et amygdale.Continuer à trancher pour disséquer les régions antérieures et postérieures jusqu’à ce que 15 à 21 tranches de centimètre aient été obtenues pour chaque hémisphère. Placez la tranche est sur une surface plane comme ils sont atteints en suivant leur position d’origine dans la direction postérieure antérieure du frontal au pôle occipital, avec la partie continue avec les diapositives précédentes orientées vers le haut. Lorsque toutes les tranches ont été placées, sélectionnez les sections principales à fixer pour l’histopathologie, y compris les sections précédemment acquises et les sections hippocampale, pariétale et occipitale, et étiquetez les tranches comme L ou R suivies de chiffres arabes, y compris une étiquette indiquant si la tranche doit être fixée ou congelée.Lorsque tous les tissus ont été sectionnés et étiquetés, obtenir une image pour chaque série de sections avant leur fixation ou leur congélation. Pour congeler les échantillons, placez les sections réservées des tissus alternatifs sur un plateau en aluminium prégelé et recouvrez les sections d’une plaque d’aluminium imbriquée pour les garder à plat. Congelez ensuite les tranches d’azote liquide pendant trois minutes avant de placer les échantillons congelés à l’intérieur d’un sac en plastique étiqueté avec leurs codes d’identification correspondants et les numéros de tranche pour un stockage dans la boîte cryogénique appropriée à 80 degrés Celsius.Pour fixer les échantillons placer les sections réservées de tissu supplétif dans des morceaux individuels de gaze et placer les tranches dans la solution de formaline tamponnée de phosphate de 10% pendant cinq jours dans une salle froide de quatre degrés Celsius. 24 des 27 cerveaux récoltés ont reçu la caractérisation neuropathologique complète avec un diagnostic pathologique clinique défini. L’analyse quantitative préliminaire d’électroencéphalogramme d’une série de 36 donneurs de cerveau indique que le pourcentage principal de rythme alpha est sensiblement inférieur dans les désordres neurocognitifs principaux que dans le désordre neurocognitif doux de personnes âgées normales.Ici, un exemple d’une pathologie asymétrique est montré avec une atrophie du côté droit évidente macroscopiquement avec les dilatations ventriculaires graves observées dans la section coronale droite par rapport à la gauche. Un autre cas montre un infarctus de l’hémisphère droit, tandis qu’un autre spécimen montre une atrophie claire du corps mammillary droit. Les sections macro peuvent être tachées pour identifier la perte de myéline ou la distribution de l’immunoréactivité dans les hémisphères.Ces échantillons proviennent de jumeaux qui ont eu un début clinique de la maladie d’Alzheimer dans différents délais en raison de facteurs épigénétiques et environnementaux. Néanmoins, l’analyse microscopique a indiqué une image neuropathologique très semblable indiquant une pathologie élevée de la maladie d’Alzheimer et une angiopathie amyloïde. Dans ces deux patients cependant, le même diagnostic clinique de la maladie d’Alzheimer n’a pas exactement correspondu aux dispositifs neuropathologiques, qui ont indiqué un duo de démence dans les étiologies multiples.En effet, le premier cas a présenté des corps de Lewy dans le mensonge simple de gyrus et le nigra de substantia. Et le deuxième cas a montré des corps de Lewy liés aux neurites de Lewy dans l’amygdale et dans le noyau de mineurs. La photographie des tranches est soigneusement pour une identification précise des zones anatomiques pendant l’analyse microscopique.La fixation et la congélation des tranches simples sont également importantes pour préserver la microstructure tissulaire Omics la topographie de l’activation des gènes et la distribution des protéines et corréler ces données avec l’histopathologie. Cultures cellulaires à partir de tissus bien caractérisés, également une enquête sur la pathogénie de la maladie. Portez toujours suffisamment d’équipement de protection individuelle car un tissu cérébral acquis est considéré comme potentiellement infectieux et parce que l’utilisation d’outils dangereux tels que des instruments pointus et de l’azote liquide est nécessaire.

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Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

Un protocole double Tracer TEP-IRM pour la mesure quantitative de la régionale cerveau substrats énergétiques absorption chez le rat

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

High-resolution In Vivo Manual Segmentation Protocol for Human Hippocampal Subfields Using 3T Magnetic Resonance Imaging

High-resolution In Vivo Manual Segmentation Protocol for Human Hippocampal Subfields Using 3T Magnetic Resonance Imaging

Haute résolution<em&gt; In Vivo</em&gt; Protocole de segmentation manuelle pour les sous-zones de l&#39;hippocampe humain Utilisation 3T imagerie par résonance magnétique

The human hippocampus has been broadly studied in the context of memory and normal brain function and its role in different neuropsychiatric disorders has ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Protocole Chemin de longueur pour<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; larves

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Une seule étape simple protocole Dissection pour Whole-mount Préparation des adultes<em&gt; Drosophila</em&gt; Brains

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Chirurgie stéréotaxique des manipulations génétiques dans des cellules de cerveaux de souris néonatales striataux

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

Isolement et Extraction de l’ARN des neurones, les Macrophages et les cellules microgliales du cerveau de larves de poisson zèbre

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualization of Amyloid ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualisation des dépôts β-amyloïde dans le cerveau humain avec Laser assistée par matrice désorption-ionisation d’imagerie de la spectrométrie de masse

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into ...