Name: abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains
Uploaded: 2020-06-03T13:00:00
Duration: 12 min 28 s
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この作品をミケラ・マンジェリ博士に捧げたいと思います。彼女は早死にする前に、彼女は考案し、アッビアテグラッソブレインバンクプロジェクトを開始しました。
私たちは、自分の体の最も高貴な器官を寄付する研究に寛大に貢献している私たちの脳のドナーに感謝しています。彼らがいなければ、この研究は不可能であろう。
ヴァレリア・マルザガリのABBプロジェクトでの貴重な仕事に感謝しています。
著者らは、ヨハネス・アッテムス教授、パオロ・フォシアニ博士、ジョルジオ・ジャッコーネ博士の貴重な指導と賢明な助言に感謝しています。
私たちは、プロジェクト全体を通して彼らの貴重な助けのために博士アリス・シリンシオーネとミスジュリア・ボルトンに感謝したいと思います。 テレ・カッサーニ夫人の支援と「フェデラツィオーン・アルツハイマー・イタリア」の協力に感謝します。 著者らは、パビア大学公衆衛生・実験・法医学科のマッテオ・モレッティ博士とアントニオ・マルコ・マリア・オスキュラティ教授に感謝しています。

著者らは開示するものは何もない。

WHOによると、現在約5,000万人が認知症に苦しんでいますが、2050年までに3倍に増加すると予測されています。アルツハイマー病は認知症の主な原因であり、続いて脳血管疾患および他の老化性疾患が続く。2017年、WHOは、認知症に対する意識を高め、それに対する世界的な行動計画を奨励するために、グローバル認知症観測所を開発しました。各個人は、独自の脳老化軌道を持っているので、治療の検索は、神経変性疾患の病因の複雑さのために困難な場合があります。おそらく、各人は、パーソナライズされたアプローチを必要とする脳組織に書かれた彼女または彼自身の病因を所有しています。このように、脳組織の研究は、神経変性のメカニズムを理解するための鍵となります。
神経科学の歴史を振り返ってみると、人間の脳を直接調べなければ、最も印象的で画期的な発見は決して起こりにくいというのが分かります。時間を通じて、研究される脳組織の源は、粗い切離、ランダムな「偶然の出会い」、そして場合によっては違法な取引から、組織化された脳コレクションと戦略的な現代の脳バンクに変わりました。多くの倫理的側面の検討は、現代の脳バンクと過去の脳コレクションを区別する主な要因の1つです。最初の本物の近代的なブレインバンク(B)は、20世紀後半に設立されました。ニコラス・コルセリスとウォレス・トゥルテロットは、現代のブレインバンキングのパイオニアと考えることができます。英国では、コルセリスは、様々な精神および神経疾患に影響を受けた1000以上の十分に文書化された脳を保持するコレクションを組み立てました2.さらに、コルセリスは生化学的検査のために氷の中に新鮮な脳組織を保存する必要性を明らかにするのに役立ちました3.一方、米国では、ウォレス・トゥルテロッテは、潜在的な脳ドナーの勧誘を容易にし、収集された脳が完全な医学的および神経学的歴史44、5を伴うことを確実にするために、前死的な脳の寄付プログラムを導入しました。脳コレクションと現代のBBの歴史的概要については、カルロスらを参照してください。6.
では、なぜ私たちはまだ人間の脳を必要としているのでしょうか?脳疾患は、神経病理学的検査の後に明確な診断を与えることができる。神経病理学は臨床診断に挑戦し、臨床症状の正しい解釈および新しいシンドロミック変異体の組織学的基盤の発見への鍵である。確かに、診断は病理学的な画像に基づいて再定義することができる。それにもかかわらず、最近の革新的な神経イメージング技術の開発により、検死率は過去数十年間で低下している。脳イメージングを通じて、脳内の形態学的、機能的および代謝的変化、ならびにタンパク質の誤折の程度を、in vivoで評価することができる。しかし、生体内の神経イメージングやその他のバイオマーカー研究は、微妙な細胞および分子変化を検出することができないため、病理学的画像の「推定値」しか与えることができない。分子イメージングの進歩と新しいバイオマーカー、標的分子、トレーサー7(アミロイド、TAU、ミクログリアトレーサー)の発見は、臨床評価およびバイオマーカー検査から得られたデータの解釈に人間の脳をさらに不可欠なものにします。また、オミクス技術(ゲノミクス、エピゲノム、および 転写学、メタボロミクス、プロテオミクス、リピドミクスなど)は、疾患メカニズムを理解し、リスク遺伝子を発見するための新たな可能性を開き、新しい診断および予後マーカー、および潜在的な薬物標的,,,,23,,,88、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、202、12,13,14,15,16,17,1821,2219,2091011
これらの目的のために、現代のBは、科学界33、2424のためにそれらを利用できるように、よく特徴付け、高品質の脳組織をアーカイブします。Bによって供給される脳は、完全な臨床歴を伴うべきである。BBの活動には、以下が含まれます: (1) 脳の寄付プログラムに病気や健康な個人の認識と募集;理想的な条件は、完全な臨床、ライフスタイル、社会史、およびバイオマーカープロファイルを得るために生涯を通じてドナーの多分野フォローアップを達成することです。実際、認知予備と脳の構造は、ライフスタイルと社会教育因子25、26に依存するので、26これらの情報は、手元の総データを豊かにします。(2) ドナーの終焉に続く脳(大脳、小脳および脳幹からなる)および関連組織(例えば、脊髄、脳神経および神経節など)の取得は、標準化された法的および倫理的規制を遵守しながらすべて。(3)脳の適切な処理(解剖、固定、凍結)は、標準化された手術プロトコルで定義されるように、高品質の組織を得て、将来の研究での使用を可能にする。(4) 詳細な神経病理学的特徴付けにより、最終的な確定診断を提供する。(5) 研究コミュニティへの組織材料の貯蔵と流通27,,28.
すべてのBは、凍結およびホルマリン固定パラフィン埋め込み組織の両方を保存します。各 BB には独自のプロトコルがあります。生物医学研究所(ニュージャージー州)29のビヘミスフェリック切断プロトコルやデラメクールの脳血管病理30の研究など、特定の研究を除いて、世界最大のBは、単に中間線(サジタル平面)に沿って大脳、小脳、脳幹を切断します。半分は新鮮に解剖され、生化学的研究のために凍結され、もう一方は組織病理学的評価のためにホルマリンに固定される。したがって、生化学的および病理的な解析は、各半球で別々に行われます。どちら側が固定または凍結(側面)に関する決定は、特異バンク31、32、33、34、35に依存します。31,32,33,34,35多くの神経疾患は非対称的であるように、私たちのBBは新鮮な脳をスライスするためのユニークなプロトコルを提供しています:脳幹と各半球の隣接するセクションは交互に固定され、凍結されています。一方の半球の固定スライスは、もう一方の半球の凍結スライスに対応します。この方法により、脳組織の使用が最適化され、すべての凍結物質の完全な組織学的特徴付けが両半球のすべての領域から組織学的および生化学的情報を得て比較する可能性を得ることができる。
私たちの脳銀行プロジェクトのフレームは、アッビアテグラッソの町です。アッビアテグラッソは、イタリア北部のミラノ市の南西約22kmの小さな町です。人口は約32,600人です。ゴルジ・チェンチ財団(GC)の本拠地です。GC財団は大規模なリハビリテーション老人病院(ASPゴルジ・レダエリ)の一部であり、高齢者の老化とケアに関する研究に焦点を当てた研究所です。特に、精神老化、それに影響を与える社会的および行動的要因、および年齢依存性神経認知障害(NCD)の基礎となる生物学および病理学を研究することに焦点を当てています。2009年、GC財団は1321人の参加者(対象科目1644人中:初期回答率80.3%)を含む新しい縦断研究を開始しました。1935年から1939年(70歳から75歳)の間に生まれ、白人民族の同じ地理的地域に住んでいます。この研究はInveCe.Ab(インベ・チアメント・セ・レブレルアブ・ビアテグラッソ;英語:脳老化アッビアテグラッソ、ClinicalTrials.gov、NCT01345110)と呼ばれ、現在進行中です。InveCe.Abは、行動、心理社会的、臨床的および生物学的変数36を含むその可能なリスクまたは保護要因とともに、認知症の発生率、有病率および自然史を評価するために、最大均質性および最も変動性の低いコホートを得ることを計画している。コホートの特性を図 1および表 1に示します。疫学的データは、欧州の人口37、38および38InveCe.Abの参加者の認知症傾向と一致しており、正常な老化から神経認知障害までの軌道を研究するための良好なモデルを表す均質な遺伝的および環境的特徴を有する。実際、均質な集団は、適切な統計的力に達するためにより少ない被験者を必要とする。InveCe.Abの方法論は、すでに他の36の他の場所で報告されていますが、血液サンプリング(代謝パネル、代謝パネル、)を含む同じ評価セットを使用して、定期的なチェック(2〜3年ごと)を通じて多次元アプローチに下線を引くことを重要です。 ホモシステインおよびビタミン、アポリポタンパク質E(APOE)および認知および老化に関連する他の遺伝的多型をプロファイリングするためのDNA抽出、人為的測定(体重、身長および腰)、ウォーキングテスト(デュアルタスクテスト)、ライフスタイルを評価するためのインタビュー(地中海ダイエット、身体活動および認知関与のレベル)および社会的要因(社会的関与、孤独)、神経学的評価および一般的な臨床検査このような縦方向のデータを死後の神経病理学的データと比較することは、研究にとって非常に重要であろう。そこで、私たちのチーム、特にミケラ・マンジェリ博士は、上記の神経病理学的アプローチを考え出しました。2014年以来、2回目のフォローアップの間に、InveCe.Ab参加者は彼らの脳を寄付するように求められたので、アッビアテグラッソ脳銀行(ABB)の誕生をもたらしました。ABBのコアドナーはInveCe.Ab参加者ですが、ABBは現在他のボランティアドナーに開放されています。彼らは、異なる神経疾患に苦しむ数人の患者やABBプロジェクトについて学び、同じ地理的領域(アッビアテグラッソとその周辺)に属する成人ボランティアが住むASPゴルジ・レダエリの患者です。すべてのドナーは同じ評価プロトコルを受ける。
著者らは、正常な老化の個々の軌跡とNCDへの進行の可能性を追跡し、そのようなドナーから得られた脳を正確に管理、処理、特徴付ける方法を提案する。また、脳の幸福に関する定期的な神経学的評価、セミナー、教育活動に参加し、研究目的で脳の寄付意識を高めることを目的としています。

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>50ml polypropilene conical tube 30x115mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>405253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NeuN (A60)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB377</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TAU (AT8)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>MN1020</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)</td>
			<td>CosmoBio</td>
			<td>TIP-PTD-P02</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-SYN (KM51)</td>
			<td>Novocastra</td>
			<td>NCL-L-ASYN</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;amyloid (4G8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>800703</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting board</td>
			<td>BD</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0101500</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical saw with 5d blade</td>
			<td>CEA</td>
			<td>06.06.14/06.00.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH measure surface 12mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>70064.250 HHH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11796338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4001</td>
			<td>secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4003</td>
			<td>secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylether</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8401530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather safety trimming knife blade 14cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11749798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WS1810500</td>
			<td>medium supplement; dilution = 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 15cm surgical or anatomical</td>
			<td>Uvex</td>
			<td>500XG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>CEA</td>
			<td>01.28.14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Arcobaleno</td>
			<td>2624000800002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head supporter</td>
			<td>Lacor</td>
			<td>60456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WX0550100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring tape</td>
			<td>CEABIS</td>
			<td>CEATA34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non adsorbable monofilament black polyamide</td>
			<td>UHU Bostik</td>
			<td>8000053131470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140050</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strept Solution (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0022100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>03.06.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel with n&#176;21 blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical basin</td>
			<td>Olcelli Farmaceutica</td>
			<td>A930857255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical mallet and surgical cisel</td>
			<td>CEA</td>
			<td>79.68.88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>CEA</td>
			<td>27.08.45/79.68.64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Feather</td>
			<td>M130RC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains

絶え間なく高齢化が進む中で、神経変性疾患の罹患率は上昇すると予想される。病気のメカニズムを理解することは、予防的および治癒的な手段を見つけるための鍵です。これを達成するための最も効果的な方法は、病気と健康な脳組織の直接検査を通じて.著者らは、前死的な脳の寄付プログラムに登録された個人によって寄付された良質の脳組織を取得、処理、特徴付け、保存するためのプロトコルを提示する。寄付プログラムには、人々に対する対面共感的なアプローチ、補完的な臨床、生物学的、社会的、ライフスタイル情報のコレクション、および正常な老化と認知機能の低下の個々の軌道を追跡するための時間の経過とともに連続的な多次元評価が含まれています。多くの神経疾患は非対称であるため、私たちの脳バンクは新鮮な標本をスライスするためのユニークなプロトコルを提供しています。両半球の脳の部分は、交互に凍結される (-80 °C) またはホルマリンで固定;一方の半球の固定スライスは、もう一方の半球の凍結スライスに対応します。このアプローチにより、全ての凍結物質の完全な組織学的特徴を得ることができ、オミクス研究は両半球の組織学的に明確に定義された組織に対して行われ、神経変性疾患メカニズムのより完全な評価を提供する。これらの疾患の正しい、明確な診断は、臨床症候群と神経病理学的評価を組み合わせることによってのみ達成され、しばしば病因を解釈するために必要な重要な病因的手がかりを追加する。この方法は、限られた地理的領域のみをカバーするため、時間がかかり、コストがかかり、制限される可能性があります。その制限に関係なく、それが提供する高度な特性評価はやりがいがあります。私たちの究極の目標は、神経病理学的に検証された疫学研究の重要性を強調しながら、最初のイタリア脳銀行を設立することです。

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Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

このプロトコルは、脳の寄付プログラムと脳の適切な特性を通じて個々の脳老化軌道を追跡する方法を記述する。脳のドナーは、連続多次元評価を含む長期的な縦断的研究に関与しています。プロトコルは、脳処理の詳細な説明と正確な診断方法論が含まれています。

老化脳の収集、処理、特徴付けのためのアッビアテグラッソブレインバンクプロトコル

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

神経認知障害の有病率が継続的に増加するにつれて、私たちの目的は、正確な診断を達成し、神経変性メカニズムに光を当てるために質の高い脳組織サンプルを取得し、特徴付け、保存することです。脳のアサイメトリーを考慮すると、私たちのサンプリング方法論は、すべてのメタ研究を両方の半球から組織学的に明確に定義された組織に対して行うことを可能にし、多くのデータを深層学習を通じて収集し、相関させることができる。複数の病理による脳障害に対する付加的な影響が頻繁に観察される。明確な診断には、臨床症候群と神経病理学的知見を組み合わせて、疾患の病因を発見し、可能な治療法を必要とする。新鮮な切断手順とマクロセクション管理は難しいだけでなく、良い結果を得るためにも不可欠です。この困難を克服するには、訓練を受けたタイトなチームが不可欠です。私たちのプロトコルには哺乳類の器用さが必要な一連のステップが含まれているため、視覚的なデモンストレーションは、これらの技術を習得したい研究者のための説明的なテキストよりも有用であり得る。また、超音波検査を確認した後、鋭いメスを使って、一方の側の乳ソイドプロセスの先端から他方の側に毛髪の皮膚と皮下組織を通して頭皮切開を行い、頂点を通過させる。頭皮の2つの折り目を頭蓋骨から慎重に分離し、黄色の超軌道脂肪が見えるまで切開を続ける。頭皮を前に反射し、後に組織の他の部分を引っ張ります。メスと鉗子を使用して、頭蓋骨の両側の側頭筋の小さなサンプルを収穫し、1つの標本を4%ホルムアルデヒドに、もう1つの標本を摂氏4度に置く。電気鋸を使用して、正面側のVカットで頭蓋骨を切断し、頭蓋骨を取り除きます。髄膜を切断した後、固定のための硬膜の1片と凍結のための別の部分を収穫します。3番目の心室に到達するために、脳梁を通して10ミリリットルの注射器に取り付けられた20ゲージ3.5インチの針を挿入し、プランジャーを引き込んで約10ミリリットルの脳脊髄液を得る。流体の外観の色と濁度を評価し、pHを測定します。脳を持ち上げるために両前頭葉をそっと引っ張り、眼内神経インファンディブラム、内頸動脈、第3、第4、第5、第6頭脳神経の両方を切断する。後部フォッサに到達するために、テトリウムをカットし、椎骨動脈と下頭蓋神経を切断します。その後、メスを孔マグナムを通してできるだけ深く挿入して、メデュラの最も大きな部分を切断し、慎重に脳全体を取り除きます。メスを使用してメッケルの洞窟の上の骨に見え、固定と凍結のために両側からガッセリアン神経節を収集します。外科用マレットとチゼルを使用して骨のセラ・ターシカを骨折し、4%ホルムアルデヒドの固定のために下垂体を取り除きます。巨視的な変化と血管の変化から頭蓋骨と脳全体を検査します。測定テープを使用して、脳の横方向および前姿勢の直径を測定し、スケールで脳の重量を量ります。ウィリスの円を慎重に取り出し、解剖学的な評価を行い、解剖学的変異体、病変、血管狭窄の有無を評価します。組織を個別に計量する前に、大脳、小脳、脳幹を分離して検査します。凸からレプトメニンジュの1〜2〜4センチメートルの正方形の部分を取り除き、完全な高グルコースDMEM培養培地でサンプルを摂氏4度で保存します。4%ホルムアルデヒドで固定のための松葉腺を収穫し、各ペアの1つの固定と凍結のための嗅球と視神経を取り除きます。大脳、小脳、脳幹を摂氏4度の氷の上に置きます。目的の組織のすべてが収穫されている場合は、骨を再び取り付け、手術針を使用するためにスーパー接着剤接着剤を使用し、頭皮を縫い戻すために非吸収性縫合糸を使用します。脳バンク解剖のために切除ナイフを使用して脳幹を軸に切断し、上のコリカルを通して鼻孔中脳のレベルで最初のカットを行い、実質的なニグラを露出させるために2つのスライスを得る。脳幹を10ミリメートルに切り、4番目の心室の上部マージン付近のロストラルポンを通過するカットを含むように注意し、軌跡を観察し、音響線に劣る髄膜長体を通り抜け、第4心室の下頂部のすぐ上に置き、下側核を含むスライスを得る。すべてのスライスに、脳幹の BS としてラベルを付け、その後にアラビア数字を付けます。最後の脳幹セクションの後、脊髄の指定SCを使用し、その後にアラビア数字を続けて使用します。矢状平面上の小脳を切断して、2つの小脳半球をベルミのレベルで分離し、矢状切除を行い、各半球から5つのスライスを得る。ベルミのすべてのスライスに、それぞれ右および左小脳のCBRまたはCBLという名前を付け、アラビア数字を使用して各セクションを識別します。次に、射手結節面のコーパス梁を通して大脳の2つの半球を分離し、前頭葉側極、前側のcingulate、前部堆積、前方のコリスル、補助的な核、および基底核を通って、眼窩の円錐体との間を通過する冠状平面に沿って単独で半球をスライスする。約1センチメートルの後部が骨髄体を通過し、大脳基底核、視床前視床、扁桃体を露出させる。各半球に対して15〜21センチメートルのスライスが得られるまで、前部および後部領域を解剖するためにスライスを続ける。前頭部から後頭部までの前後方方向の元の位置に従ってスライスを平らな面に置き、前のスライドを上向きに連続した部分にします。すべてのスライスが配置されたら、以前に取得したセクションと海馬、頭頂部および後頭部セクションを含む組織病理学のために固定される主要なセクションを選択し、スライスを固定するか凍結するかを示すラベルを含むアラビア数字が続くLまたはRとしてスライスにラベルを付ける。すべての組織が切断され、ラベルが付かれたら、固定または凍結する前に、セクションの各シリーズの画像を取得します。サンプルを凍結するには、予約された代替組織セクションをあらかじめ凍結したアルミニウムトレイに置き、それらを平らに保つためにインターロックされたアルミニウム板でセクションを覆います。その後、液体窒素でスライスを3分間凍結してから、冷凍サンプルに対応する識別コードとスライス番号がラベル付けされたビニール袋の中に入れ、適切な極低温ボックスに80°Cで保管します。サンプルを固定するには、ガーゼの個々の部分に予約された代替組織セクションを配置し、4°Cの冷たい部屋で5日間の10%リン酸緩衝ホルマリン溶液にスライスを置きます。収穫された27の脳のうち24は、明確な臨床病理学的診断を伴う完全な神経病理学的特徴付けを受けた。一連の36の脳ドナーの予備的定量的脳波分析は、主要な神経認知障害において主要なαリズム率が、通常の高齢軽度の神経認知障害よりも有意に低いことを示している。ここでは、非対称的な病理の例が、左と比較して右の冠動脈セクションで観察された重度の心室拡張と共に、マクロ的に明らかな右側萎縮を示す。別の症例は右半球の梗塞を示し、別の標本は右骨髄体の明確な萎縮を示す。マクロセクションは、ミエリンの喪失または半球内の免疫反応性の分布を同定するために染色することができる。これらのサンプルは、エピジェネティックおよび環境要因のために異なる時間枠でアルツハイマー病の臨床発症を持っていた双子からである。それにもかかわらず、顕微鏡分析は、高いアルツハイマー病病病理およびアミロイド血管症を示す非常に類似した神経病理学的画像を明らかにした。しかし、これら2つの患者では、アルツハイマー病の同じ臨床診断は、複数の病因における認知症デュオを明らかにした神経病理学的特徴と正確に一致しなかった。確かに、最初のケースは、回の単一の嘘と実質的なニグラでレビー体を提示しました。そして2番目の症例は、扁桃体と副核におけるレウィ神経突起に関連するレビー体を示した。スライスの写真は、顕微鏡分析中に解剖学的領域を正確に識別するために慎重に行われます。単一スライスの固定および凍結は、組織微細構造Omics遺伝子活性化とタンパク質分布の地形を維持し、これらのデータを組織病理学と相関させる上でも重要である。細胞培養物は、十分に特徴付けられる組織から、病態の病態に関する調査も行う。常に十分な個人的な保護具を着用する既得脳組織は感染の可能性があると考えられ、鋭利な器具や液体窒素などの危険なツールの使用が必要であるため。

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Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualization of Amyloid ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

マトリックス支援レーザー脱離イオン化質量顕微鏡を用いたひと脳のアミロイド β の堆積物の可視化

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into ...