Name: abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains
Uploaded: 2020-06-03T13:00:00
Duration: 12 min 28 s
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Queremos dedicar este trabalho à Dra. Antes de morrer prematuramente, ela concebeu e começou o Projeto Abbiategrasso Brain Bank.
Somos gratos aos nossos doadores cerebrais, que estão generosamente contribuindo para a pesquisa doando o órgão mais nobre de seu corpo; sem eles esta pesquisa não seria possível.
Somos gratos a Valeria Marzagalli por seu precioso trabalho no projeto da ABB.
Os autores agradecem ao Prof. Johannes Attems, Dr. Paolo Fociani e Dr. Giorgio Giaccone por sua preciosa orientação e conselho sábio.
Gostaríamos de agradecer à Dra. Muito obrigado à Sra. Tere Cassani pelo apoio e à "Federazione Alzheimer Italia" por sua colaboração. Os autores agradecem ao Dr. Matteo Moretti e ao Prof. Antonio Marco Maria Osculati, Do Departamento de Saúde Pública, Medicina Experimental e Forense da Universidade de Pavia.

Os autores não têm nada a revelar.

Segundo a OMS, cerca de 50 milhões de pessoas estão atualmente sofrendo de demência, número que deve triplicar até 2050. A Doença de Alzheimer é a principal causa de demência, seguida de doença cerebrovascular e outras doenças neurodegenerativas relacionadas à idade. Em 2017, a OMS desenvolveu o Observatório Global de Demência para aumentar a conscientização sobre a demência e incentivar um plano de ação global contra ela1. Cada indivíduo tem sua própria trajetória de envelhecimento cerebral, portanto, a busca pela cura pode ser desafiadora devido à complexidade da patogênese das doenças neurodegenerativas. Talvez cada pessoa possua sua própria patogênese escrita no tecido cerebral que requer uma abordagem personalizada. Assim, o estudo do tecido cerebral será a chave para entender os mecanismos da neurodegeneração.
Olhando para trás para a história da neurociência, percebemos que as descobertas mais impressionantes e inovadoras nunca poderiam ter ocorrido sem o exame direto do cérebro humano. Ao longo do tempo, a fonte de tecido cerebral a ser estudado mudou de dissecções brutas, "encontros aleatórios" e, em alguns casos, comércio ilegal, para coleções cerebrais organizadas e bancos cerebrais modernos estratégicos. A consideração de muitos aspectos éticos é um dos principais fatores que diferenciam os bancos cerebrais modernos das coleções cerebrais do passado. Os primeiros verdadeiros bancos cerebrais modernos (BBs) foram instituídos na segunda metade do séculoXX. Nicholas Corsellis e Wallace Tourtelotte podem ser considerados pioneiros do banco cerebral moderno. No Reino Unido, Corsellis montou uma coleção com mais de 1000 cérebros bem documentados afetados com vários distúrbios mentais e neurológicos2. Além disso, Corsellis ajudou a revelar a necessidade de preservar tecido cerebral fresco no gelo por causa dos testes bioquímicos3. Enquanto isso, nos EUA, Wallace Tourtelotte introduziu programas de doação cerebral antemortem para facilitar a solicitação de potenciais doadores cerebrais e garantir que os cérebros coletados sejam acompanhados de uma história médica e neurológica completa4,,5. Para uma visão geral histórica das coleções cerebrais e dos BBs modernos, consulte Carlos et al. 6.
Então, por que ainda precisamos de cérebros humanos? Doenças cerebrais só podem ser dadas um diagnóstico definitivo após o exame neuropatológico. A neuropatologia desafia o diagnóstico clínico, e é a chave para uma interpretação correta dos sintomas clínicos e para a descoberta das bases histológicas de novas variantes sindómicas. De fato, o diagnóstico pode ser redefinido com base no quadro patológico. No entanto, a taxa de autópsia diminuiu nas últimas décadas devido ao desenvolvimento recente de técnicas inovadoras de neuroimagem. Através da imagem cerebral, as alterações morfológicas, funcionais e metabólicas no cérebro, bem como a extensão do descomposto de proteína, podem ser avaliadas in vivo. No entanto, a neuroimagem in vivo e outros estudos biomarcadores só podem dar uma "estimativa" do quadro patológico, pois são incapazes de detectar alterações celulares e moleculares sutis. Os avanços na imagem molecular e a descoberta de novos biomarcadores, moléculas-alvo e rastreadores7 (por exemplo, amiloide, TAU, rastreadores microgliais) tornam o cérebro humano ainda mais indispensável à interpretação de dados obtidos a partir de avaliações clínicas e testes biomarcadores. Além disso, as tecnologias omics (genômica, epigenômica, transcriômica, metabolômica, proteômica, lipidomics, etc.), realizado em tecido cerebral fresco e congelado, abriu novas possibilidades para a compreensão de mecanismos da doença e descoberta de genes de risco, novos marcadores diagnósticos e prognósticos, e potenciais alvos de drogas8,,9,10,,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,,921,22,23.
Para esses fins, os BBs modernos arquivam tecidos cerebrais bem caracterizados e de alta qualidade, tornando-os disponíveis para a comunidade científica3,24. Os cérebros fornecidos pelos BBs devem ser acompanhados por um histórico clínico completo. A atividade de um BB inclui o seguinte: (1) Reconhecimento e recrutamento de indivíduos doentes e saudáveis para programas de doação cerebral; a condição ideal seria realizar um acompanhamento multidisciplinar de doadores ao longo da vida para obter um completo histórico clínico, de estilo de vida e social, e perfis biomarcadores; de fato, a reserva cognitiva e a estrutura cerebral dependem do estilo de vida e dos fatores socioeducativos25,26, de modo que essas informações enriquecem os dados totais em mãos. (2) Aquisição do cérebro (consistindo de cerebrum, cerebelo e tronco cerebral) e tecidos relacionados (por exemplo, medula espinhal, nervos cranianos e gânglios, etc.) após a morte do doador, observando normas legais e éticas padronizadas. (3) Processamento adequado (dissecção, fixação, congelamento) do cérebro, conforme definido em protocolo operacional padronizado, para obter tecido de alta qualidade e permitir o uso futuro em pesquisas multidisciplinares. (4) Caracterização neuropatológica detalhada proporcionando um diagnóstico definitivo final. (5) Armazenamento e distribuição de material de tecido para a comunidade de pesquisa27,28.
Todos os BBs armazenam tecidos embutidos congelados e formadolin-fixo-parafina. Cada BB tem seu próprio protocolo. Com exceção de estudos particulares, como o protocolo de corte bihemisférico do Biomedical Research Institute (New Jersey)29 e o estudo do Deuecourt sobre patologia cerebrovascular30, os maiores BBs do mundo simplesmente cortaram o cerebrum, cerebelo e tronco cerebral ao longo da linha média (plano sagital). Uma metade é dissecada fresca e depois congelada para estudos bioquímicos, enquanto a outra é fixada em formalina para avaliação histopatológica. Assim, análises bioquímicas e histopatológicas são conduzidas separadamente em cada hemisfério. A decisão de qual lado é fixo ou congelado (lateralidade), depende do banco singular31,32,33,34,35. Como muitas doenças neurológicas são assimétricas, nosso BB oferece um protocolo único para cortar cérebros frescos: seções adjacentes do tronco cerebral e cada hemisfério são alternadamente fixas e congeladas; uma fatia fixa em um hemisfério corresponde a uma congelada no outro hemisfério. Por meio deste método, o uso do tecido cerebral é otimizado, e uma caracterização histológica completa de todo o material congelado pode ser alcançada com a possibilidade de obter e comparar informações histológicas e bioquímicas de todas as áreas de ambos os hemisférios.
A estrutura do nosso projeto de banco cerebral é a cidade de Abbiategrasso. Abbiategrasso é uma pequena cidade localizada na cidade de Milão, no norte da Itália. Tem uma população de cerca de 32.600 pessoas. Abriga a Fundação Golgi-Cenci (GC). A Fundação GC faz parte de um grande Hospital Geriátrico de Reabilitação (ASP Golgi-Redaelli), e é um instituto focado em pesquisas sobre envelhecimento e cuidados com idosos. Particularmente, foca-se no estudo do envelhecimento mental, dos fatores sociais e comportamentais que o influenciam, e da biologia e patologia subjacentes aos distúrbios neurocognitivos dependentes da idade (DCNT). Em 2009, a Fundação GC lançou um novo estudo longitudinal com 1321 participantes (de 1644 sujeitos elegíveis: taxa de resposta inicial de 80,3%) nascido entre 1935 e 1939 (idade entre 70 e 75 anos), de etnia caucasiana, vivendo na mesma pequena área geográfica. O estudo foi chamado InveCe.Ab (Invecchiamento Cerebrale Abbiategrasso; em inglês: Brain Aging Abbiategrasso, ClinicalTrials.gov, NCT01345110) e está em andamento. O InveCe.Ab está previsto para obter uma coorte com máxima homogeneidade e menor variabilidade para avaliar a incidência, prevalência e histórico natural de demência, juntamente com seus possíveis fatores de risco ou proteção, incluindo variáveis comportamentais, psicossociais, clínicas e biológicas36. As características da coorte são mostradas na Figura 1 e na Tabela 1. Os dados epidemiológicos são consistentes com a tendência de demência na população europeia37,38 e inveCe.Ab os participantes têm características genéticas e ambientais homogêneas, representando um bom modelo para estudar a trajetória do envelhecimento normal para distúrbios neurocognitivos. De fato, populações homogêneas requerem menos sujeitos para atingir o poder estatístico adequado. A metodologia InveCe.Ab já foi relatada em outros lugares36, mas é importante sublinhar sua abordagem multidimensional através de verificações periódicas (a cada 2 a 3 anos) utilizando o mesmo conjunto de avaliações, incluindo: amostragem de sangue (painel metabólico, homocisteína e vitaminas, extração de DNA para perfil Apolipoproteína E (APOE) e outros polimorfismos genéticos relacionados à cognição e envelhecimento), medidas antropométricas (peso, altura e cintura), Teste de Caminhada Falante (teste de tarefa dupla), uma entrevista para avaliar o estilo de vida (adesão à dieta mediterrânea, níveis de atividade física e engajamento cognitivo) e fatores sociais (envolvimento social, solidão), uma avaliação neuropsicológica e um exame clínico geral. Comparar tais dados longitudinais com dados neuropatológicos pós-morte seria crucial para a pesquisa. Portanto, nossa equipe e particularmente a Dra. Desde 2014 e durante a segunda continuação, os participantes do InveCe.Ab foram convidados a doar seus cérebros, e assim provocar o nascimento do Abbiategrasso Brain Bank (ABB). Os principais doadores da ABB são os participantes do InveCe.Ab, mas a ABB está agora aberta a outros doadores voluntários. São pacientes da ASP Golgi-Redaelli, lar de vários pacientes acometidos por diferentes doenças neurológicas ou voluntários adultos que aprendem sobre o Projeto ABB e pertencem à mesma área geográfica (Abbiategrasso e arredores). Todos os doadores passam pelo mesmo protocolo de avaliação.
Os autores propõem um método para rastrear trajetórias individuais de envelhecimento normal e a possível progressão para DCNT, e gerenciar, processar e caracterizar cérebros adquiridos com precisão de tais doadores seguidos longitudinalmente. Além disso, nosso objetivo é atender e engajar indivíduos em avaliações neurológicas periódicas, seminários e atividades educativas sobre o bem-estar do cérebro e aumentar sua conscientização sobre a doação cerebral para fins de pesquisa.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>50ml polypropilene conical tube 30x115mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>405253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NeuN (A60)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB377</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TAU (AT8)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>MN1020</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)</td>
			<td>CosmoBio</td>
			<td>TIP-PTD-P02</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-SYN (KM51)</td>
			<td>Novocastra</td>
			<td>NCL-L-ASYN</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;amyloid (4G8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>800703</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting board</td>
			<td>BD</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0101500</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical saw with 5d blade</td>
			<td>CEA</td>
			<td>06.06.14/06.00.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH measure surface 12mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>70064.250 HHH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11796338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4001</td>
			<td>secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4003</td>
			<td>secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylether</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8401530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather safety trimming knife blade 14cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11749798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WS1810500</td>
			<td>medium supplement; dilution = 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 15cm surgical or anatomical</td>
			<td>Uvex</td>
			<td>500XG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>CEA</td>
			<td>01.28.14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Arcobaleno</td>
			<td>2624000800002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head supporter</td>
			<td>Lacor</td>
			<td>60456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WX0550100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring tape</td>
			<td>CEABIS</td>
			<td>CEATA34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non adsorbable monofilament black polyamide</td>
			<td>UHU Bostik</td>
			<td>8000053131470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140050</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strept Solution (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0022100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>03.06.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel with n&#176;21 blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical basin</td>
			<td>Olcelli Farmaceutica</td>
			<td>A930857255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical mallet and surgical cisel</td>
			<td>CEA</td>
			<td>79.68.88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>CEA</td>
			<td>27.08.45/79.68.64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Feather</td>
			<td>M130RC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains

Em uma população em constante envelhecimento, espera-se que a prevalência de distúrbios neurodegenerativos aumente. Compreender os mecanismos da doença é a chave para encontrar medidas preventivas e curativas. A maneira mais eficaz de conseguir isso é através do exame direto do tecido cerebral doente e saudável. Os autores apresentam um protocolo para obter, processar, caracterizar e armazenar tecido cerebral de boa qualidade doado por indivíduos cadastrados em um programa de doação cerebral pré-mortetem. O programa de doação inclui uma abordagem empática presencial das pessoas, uma coleta de informações clínicas, biológicas, sociais e de estilo de vida complementares e avaliações multidimensionais seriais ao longo do tempo para acompanhar trajetórias individuais de envelhecimento normal e declínio cognitivo. Como muitas doenças neurológicas são assimétricas, nosso banco cerebral oferece um protocolo único para cortar espécimes frescos. As seções cerebrais de ambos os hemisférios são alternadamente congeladas (a -80 °C) ou fixadas em formalina; uma fatia fixa em um hemisfério corresponde a uma congelada no outro hemisfério. Com essa abordagem, uma caracterização histológica completa de todo o material congelado pode ser obtida, e estudos de omics podem ser realizados em tecidos histologicamente bem definidos de ambos os hemisférios, oferecendo assim uma avaliação mais completa dos mecanismos neurodegenera da doença. O diagnóstico correto e definitivo dessas doenças só pode ser alcançado combinando a síndrome clínica com a avaliação neuropatológica, que muitas vezes adiciona importantes pistas etiológicas necessárias para interpretar a patogênese. Este método pode ser demorado, caro e limitado, pois abrange apenas uma área geográfica limitada. Independentemente de suas limitações, o alto grau de caracterização que proporciona pode ser gratificante. Nosso objetivo final é estabelecer o primeiro Banco Do Cérebro Italiano, enfatizando o que é importante para estudos epidemiológicos neuropatologicamente verificados.

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Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

Este protocolo descreve um método para rastrear trajetórias individuais de envelhecimento cerebral através de um programa de doação cerebral e caracterização adequada de cérebros. Doadores cerebrais estão envolvidos em um estudo longitudinal de longo prazo, incluindo avaliações multidimensionais em série. O protocolo contém uma descrição detalhada do processamento cerebral e uma metodologia de diagnóstico precisa.

Protocolo do Banco Cerebral Abbiategrasso para coleta, processamento e caracterização de cérebros envelhecidos

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Como a prevalência de transtorno neurocognitivo está aumentando continuamente, nosso objetivo é obter, caracterizar e armazenar amostras de tecido cerebral de qualidade para alcançar um diagnóstico preciso e lançar luz sobre os mecanismos neurodegenerativos. Considerando a assimetria cerebral, nossa metodologia amostral permite que todos os meta estudos sejam realizados em tecidos histologicamente bem definidos de ambos os hemisférios e os muitos dados podem ser coletados e correlacionados através do aprendizado profundo. Efeitos aditivos sobre danos cerebrais por múltiplas patologias são frequentemente observados.O diagnóstico definitivo requer a combinação da síndrome clínica com os achados neuropatológicos para descobrir a patogênese da doença e possíveis terapias. Novos procedimentos de corte, bem como o gerenciamento de seções de macro são complicados, mas também são essenciais para alcançar bons resultados. Uma equipe treinada e unida é crucial para superar essas dificuldades.Nosso protocolo inclui uma série de etapas que são necessárias para a destreza dos mamíferos, portanto, a demonstração visual pode ser mais útil do que textos descritivos para pesquisadores que desejam dominar essas técnicas. Após confirmar a doatografia, use um bisturi afiado para fazer uma incisão do couro cabeludo através da pele do cabelo e tecido subcutâneo na placa coronal da ponta do processo mastoide de um lado para o outro, passando sobre o vértice. Separe as duas dobras do couro cabeludo cuidadosamente do crânio e continue a incisão até que a gordura super orbital amarela se torne visível.Reflita o couro cabeludo anteriormente e puxe a outra seção do tecido posteriormente. Usando um bisturi e fórceps, colher uma pequena amostra do músculo temporal em cada lado do crânio, colocando um espécime em 4% de formaldeído e a outra amostra a quatro graus Celsius. Usando uma serra elétrica corte o crânio em um corte V no lado frontal e remova a tampa do crânio.Depois de cortar as meninges, colher um pedaço de dura para fixação e outro para congelar. Insira uma agulha de 3,5 polegadas de calibre 20 presa a uma seringa de 10 mililitros através do caloso corpus para chegar ao terceiro ventrículo e retrair o êmbolo para obter cerca de 10 mililitros de fluido espinhal cerebral. Avalie a cor da aparência e a turbidez do fluido e meça o pH.Puxe suavemente os dois lobos frontais para levantar o cérebro e corte os nervos ópticos infundibulum, as artérias carótidas internas e o terceiro, quarto, quinto e sexto nervos cranianos. Corte o tentorium para alcançar a fossa posterior e corte as artérias vertebrais e os nervos cranianos inferiores. Em seguida, insira o bisturi o mais profundo possível através do foien magnum para cortar a porção mais caudal da medula e remover cuidadosamente todo o cérebro.Use o bisturi para aparecer até o osso sobre a caverna de Meckel e coletar o gânglio gasseriano de cada lado para fixação e congelamento. Use um martelo cirúrgico e um cinzel para fraturar a sella turcica óssea e remover a glândula pituitária para fixação em 4% de formaldeído. Inspecione o crânio e todo o cérebro a partir de alterações macroscópicas e alterações vasculares.Use uma fita de medição para medir os diâmetros de postura transversais e anteriores do cérebro e pesar o cérebro em uma escala. Recupere cuidadosamente o círculo de Willis para avaliação macroscópica para a presença de variantes anatômicas, lesões ou estenose do vaso. Separe e inspecione o cerebrum, cerebelo e tronco cerebral antes de pesar os tecidos individualmente.Remova de um a dois, dois a quatro centímetros quadrados de leptomeninges da convexidade e preserve as amostras em meio completo de cultura DMEM de alta glicose a quatro graus Celsius. Colher a glândula pineal para fixação em 4% de formaldeído e remover as lâmpadas olfativas e nervos ópticos para a fixação e congelamento de um de cada par. Coloque o cerebrum, o cerebelo e o tronco cerebral no gelo a quatro graus Celsius.Quando todos os tecidos de interesse forem colhidos, use uma cola super adesiva para recolocar o osso e usar uma agulha cirúrgica, e suturas não absorvíveis para costurar o couro cabeludo. Para dissecção do banco cerebral use uma faca dissecando para cortar o tronco cerebral axially e fazer o primeiro corte ao nível do cérebro médio rostral através do collículo superior para obter duas fatias para expor a substantia nigra. Corte o tronco cerebral em 10, oito milímetros de fatias tomando o cuidado de incluir cortes que passam pelos pons rostral perto das margens superiores do quarto ventrículo para observar o lócus caeruleus e através da medula oblongata inferior à estria acústica, logo acima do ápice inferior do quarto ventrículo para obter fatias incluindo o núcleo motor dorsal do vagus.Rotule todas as fatias de forma caudal rostral como BS para tronco cerebral seguido por numerais árabes. Após a última seção brainstem, use a designação SC para medula espinhal seguida por numerais árabes. Corte o cerebelo no plano sagital para separar os dois hemisférios cerebelares ao nível dos vermímis e realize a secção sagital para obter cinco fatias de cada hemisfério.Nomeie todas as fatias dos vermísis como CBR ou CBL para o cerebelo direito e esquerdo, respectivamente, e use numerais árabes para identificar cada seção. Em seguida, separe os dois hemisférios do cerebrum através do caloso corpus no plano sagital antes de cortar o hemisfério tão singularmente ao longo do plano coronal passando entre o quiasma óptico e os corpos mammillary através do polo temporal do lobo frontal, cingulado anterior, comissure anterior, núcleo de gânglios menores e basais. Faça um segundo corte de cerca de um centímetro posteriormente passando pelos corpos mammillary e expondo os gânglios basais, tálamo anterior sub tálamo e amígdala.Continue cortando para dissecar as regiões anterior e posterior até que fatias de 15 a 21 centímetros tenham sido obtidas para cada hemisfério. A parte em que a fatia está sobre uma superfície plana à medida que são atingidas seguindo sua posição original na direção posterior anterior da parte frontal ao polo occipital, com a porção contínua com os slides anteriores voltados para cima. Quando todas as fatias tiverem sido colocadas selecione as principais seções a serem fixadas para histopatologia, incluindo as seções adquiridas anteriormente e as seções hipocampal, parietal e occipital, e rotule as fatias como L ou R seguidas por numerais árabes, incluindo um rótulo indicando se a fatia deve ser fixada ou congelada.Quando todos os tecidos tiverem sido seccionados e rotulados, obtenha uma imagem para cada série de seções antes de sua fixação ou congelamento. Para congelar as amostras coloque as seções de tecido alternativo reservadas em uma bandeja de alumínio pré-congelada e cubra as seções com uma placa de alumínio entrelaçada para mantê-las planas. Em seguida, congele as fatias em nitrogênio líquido por três minutos antes de colocar as amostras congeladas dentro de um saco plástico rotulado com seus códigos de identificação correspondentes e números de fatias para um armazenamento na caixa criogênica apropriada a 80 graus Celsius.Para corrigir as amostras coloque as seções de tecido alternativo reservadas em pedaços individuais de gaze e coloque as fatias em solução de formalina tamponada de fosfato de 10% por cinco dias em uma sala fria de quatro graus Celsius. 24 dos 27 cérebros colhidos receberam a caracterização neuropatológica completa com um diagnóstico patológico clínico definitivo. A análise preliminar de eletroencefalograma quantitativo de uma série de 36 doadores cerebrais indica que a porcentagem principal do ritmo alfa é significativamente menor em grandes distúrbios neurocognitivos do que em uma doença neurocognitiva leve de idosos normais.Aqui um exemplo de patologia assimétrica é mostrado com uma atrofia do lado direito evidente macroscopicamente com as severas dilatações ventriculares observadas na seção coronal direita em comparação com a esquerda. Outro caso apresenta um infarto do hemisfério direito, enquanto outro espécime mostra uma atrofia clara do corpo mamário direito. As seções macro podem ser manchadas para identificar a perda de mielina ou a distribuição da imunoreatividade dentro dos hemisférios.Estas amostras são de gêmeos que tiveram um início clínico da doença de Alzheimer em diferentes períodos devido a fatores epigenéticos e ambientais. No entanto, a análise microscópica revelou um quadro neuropatológico muito semelhante indicando uma alta patologia da doença de Alzheimer e angiopatia amiloide. Nesses dois pacientes, porém, o mesmo diagnóstico clínico da doença de Alzheimer não correspondia exatamente às características neuropatológicas, que revelaram uma dupla de demência em múltiplas etiologias.De fato, o primeiro caso apresentou corpos de Lewy na mentira única do giro e na substantia nigra. E o segundo caso mostrou corpos de Lewy associados com neurites lewy na amígdala e no núcleo de menores. A fotografia das fatias é cuidadosamente para uma identificação precisa das áreas anatômicas durante a análise microscópica.A fixação e o congelamento de fatias de solteiros também são importantes para preservar a microestrutura tecidual Omics a topografia da ativação genética e distribuição de proteínas e correlacionar esses dados com a histopatologia. Culturas celulares de tecidos bem caracterizados, também uma investigação sobre a patogênese da doença. Use sempre equipamentos de proteção individual adequados como tecido cerebral investido é considerado potencialmente infeccioso e porque o uso de ferramentas perigosas como instrumentos afiados e nitrogênio líquido é necessário.

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Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

Isolamento e extração de RNA de neurônios, macrófagos e Microglia de Zebrafish Larval cérebros

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualization of Amyloid ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualização dos depósitos β amiloide no cérebro humano com Matrix-assisted Laser dessorção/ionização de imagem espectrometria de massa

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into ...