Name: abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains
Uploaded: 2020-06-03T13:00:00
Duration: 12 min 28 s
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Queremos dedicar este trabajo a la Dra. ssa Michela Mangieri. Antes de morir prematuramente, concibió e inició el Proyecto Abbiategrasso Brain Bank.
Estamos agradecidos a nuestros donantes cerebrales, que están contribuyendo generosamente a la investigación donando el órgano más noble de su cuerpo; sin ellos esta investigación no sería posible.
Agradecemos a Valeria Marzagalli su preciado trabajo en el proyecto ABB.
Los autores agradecen al Prof. Johannes Attems, al Dr. Paolo Fociani y al Dr. Giorgio Giaccone su valiosa orientación y sabio consejo.
Nos gustaría dar las gracias a la Dra. Alice Cirrincione y a la señorita Giulia Bortone por su valiosa ayuda a lo largo del proyecto. Muchas gracias a la Sra. Tere Cassani por su apoyo y a la "Federazione Alzheimer Italia" por su colaboración. Los autores agradecen al Dr. Matteo Moretti y al Prof. Antonio Marco Maria Osculati, Departamento de Salud Pública, Medicina Experimental y Forense de la Universidad de Pavía.

Los autores no tienen nada que revelar.

Según la OMS, aproximadamente 50 millones de personas padecen demencia, una cifra que se prevé triplicar para 2050. La enfermedad de Alzheimer es la principal causa de demencia, seguida de la enfermedad cerebrovascular y otros trastornos neurodegenerativos relacionados con la edad. En 2017, la OMS elaboró el Observatorio Mundial de la Demencia para sensibilizar sobre la demencia y fomentar un plan de acción mundial contra ella1. Cada individuo tiene su propia trayectoria de envejecimiento cerebral, por lo tanto, la búsqueda de la cura puede ser difícil debido a la complejidad de la patogénesis de las enfermedades neurodegenerativas. Tal vez, cada persona posee su propia patogénesis escrita en el tejido cerebral que requiere un enfoque personalizado. Por lo tanto, el estudio del tejido cerebral será la clave para entender los mecanismos de la neurodegeneración.
Mirando hacia atrás en la historia de la neurociencia, nos damos cuenta de que los descubrimientos más impresionantes y rompedores nunca podrían haber ocurrido sin el examen directo del cerebro humano. A lo largo del tiempo, la fuente de tejido cerebral a estudiar ha cambiado de disecciones brutas, "encuentros casuales" aleatorios y, en algunos casos, comercio ilegal, a colecciones de cerebros organizadas y bancos cerebrales modernos estratégicos. La consideración de muchos aspectos éticos es uno de los principales factores que diferencian a los bancos cerebrales modernos de las colecciones cerebrales del pasado. Los primeros brain Banks (BBs) modernos reales se instituyeron en la segunda mitad delsiglo XX. Nicholas Corsellis y Wallace Tourtelotte pueden ser considerados pioneros de la banca cerebral moderna. En el Reino Unido, Corsellis reunió una colección con más de 1000 cerebros bien documentados afectados con diversos trastornos mentales y neurológicos2. Además, Corsellis ayudó a revelar la necesidad de preservar el tejido cerebral fresco en hielo en aras de las pruebas bioquímicas3. Mientras tanto, en los EE.UU., Wallace Tourtelotte introdujo programas de donación de cerebros antemortem para facilitar la solicitud de posibles donantes cerebrales y asegurarse de que los cerebros recogidos están acompañados de una historia médica y neurológica completa4,5. Para obtener una visión general histórica de las colecciones de cerebros y los BB modernos, véase Carlos et al. 6.
Entonces, ¿por qué todavía necesitamos cerebro humano? Las enfermedades cerebrales sólo pueden ser dadas un diagnóstico definitivo después de un examen neuropatológico. La neuropatología desafía el diagnóstico clínico, y es la clave para una correcta interpretación de los síntomas clínicos y para el descubrimiento de las bases histológicas de nuevas variantes sindrómicas. De hecho, el diagnóstico se puede redefinir en función del panorama patológico. No obstante, la tasa de autopsias ha disminuido en las últimas décadas debido al reciente desarrollo de técnicas innovadoras de neuroimagen. A través de imágenes cerebrales, las alteraciones morfológicas, funcionales y metabólicas en el cerebro, así como la extensión de la desdolicización de proteínas, se pueden valorar in vivo. Sin embargo, la neuroimagen in vivo y otros estudios de biomarcadores sólo pueden dar una "estimación" de la imagen patológica, ya que son incapaces de detectar cambios celulares y moleculares sutiles. Los avances en la imagen molecular y el descubrimiento de nuevos biomarcadores, moléculas diana y trazadores7 (por ejemplo, amiloide, TAU, trazadores microgliales) hacen que el cerebro humano sea aún más indispensable para la interpretación de los datos obtenidos a partir de evaluaciones clínicas y pruebas de biomarcadores. Además, las tecnologías omicas (genómica, epigenómica, transcriptómica, metabolómica, proteómica, Lipidomics, etc.), realizado en tejido cerebral fresco y congelado, abrió nuevas posibilidades para comprender los mecanismos de la enfermedad y descubrir genes de riesgo, nuevos marcadores diagnósticos y de pronóstico, y posibles objetivos farmacológicos8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,,21,22,2 .
Para estos fines, los BB modernos archivan tejidos cerebrales bien caracterizados y de alta calidad que los hacen disponibles para la comunidad científica3,,24. Los cerebros suministrados por los BB deben ir acompañados de una historia clínica completa. La actividad de un BB incluye lo siguiente: (1) Reconocimiento y reclutamiento de individuos enfermos y sanos a programas de donación cerebral; la condición ideal sería lograr un seguimiento multidisciplinario de los donantes a lo largo de la vida para obtener una historia clínica, de estilo de vida y social completa, y perfiles de biomarcadores; de hecho, la reserva cognitiva y la estructura cerebral dependen del estilo de vida y de los factores socioeducativas25,,26, por lo que esta información enriquece los datos totales en cuestión. (2) Adquisición del cerebro (compuesto por cerebrum, cerebelo y tallo cerebral) y tejidos relacionados (por ejemplo, médula espinal, nervios craneales y ganglios, etc.) siguiendo la desaparición del donante, respetando al mismo tiempo las regulaciones legales y éticas estandarizadas. (3) Procesamiento adecuado (disección, fijación, congelación) del cerebro, tal como se define en un protocolo operativo estandarizado, para obtener tejido de alta calidad y para permitir su uso futuro en la investigación multidisciplinaria. (4) Caracterización neuropatológica detallada que proporciona un diagnóstico definitivo final. (5) Almacenamiento y distribución de material tisular a la comunidad de investigación27,28.
Todos los BBs almacenan tejidos incrustados congelados y de formalina fija-parafina. Cada BB tiene su propio protocolo. Excepto para estudios particulares, como el protocolo de corte bihemisférico del Instituto de Investigación Biomédica (Nueva Jersey)29 y el estudio de Deramecourt de la patología cerebrovascular30, los BBs más grandes del mundo simplemente cortan el cerebro, el cerebelo y el cerebro a lo largo de la línea media (plano sagital). Una mitad se disecciona fresca y luego se congela para estudios bioquímicos, mientras que la otra se fija en formalina para la evaluación histopatológica. Por lo tanto, los análisis bioquímicos e histopatológicos se realizan por separado en cada hemisferio. La decisión sobre qué lado está fijo o congelado (lateralidad), depende del banco singular31,32,33,34,35. Como muchas enfermedades neurológicas son asimétricas, nuestra BB ofrece un protocolo único para cortar cerebros frescos: secciones adyacentes del tronco encefálico y cada hemisferio están alternativamente fijos y congelados; una rebanada fija en un hemisferio corresponde a una congelada en el otro hemisferio. A través de este método, se optimiza el uso del tejido cerebral, y se puede lograr una caracterización histológica completa de todo el material congelado con la posibilidad de obtener y comparar información histológica y bioquímica de todas las áreas de ambos hemisferios.
El marco de nuestro proyecto de banco cerebral es la ciudad de Abbiategrasso. Abbiategrasso es una pequeña ciudad a unos 22 km al suroeste de la ciudad de Milán, en el norte de Italia. Tiene una población de unas 32.600 personas. Es el hogar de la Fundación Golgi-Cenci (GC). LA Fundación GC forma parte de un gran Hospital Geriátrico de Rehabilitación (ASP Golgi-Redaelli), y es un instituto que se centra en la investigación sobre el envejecimiento y el cuidado de los ancianos. En particular, se centra en el estudio del envejecimiento mental, los factores sociales y conductuales que influyen en él, y la biología y la patología subyacentes a los trastornos neurocognitivos dependientes de la edad (ENT). En 2009, la Fundación GC lanzó un nuevo estudio longitudinal con 1321 participantes (de 1644 sujetos elegibles: tasa de respuesta inicial del 80,3%) nacido entre 1935 y 1939 (de entre 70 y 75 años), de etnia caucásica, viviendo en la misma pequeña área geográfica. El estudio se llamó InveCe.Ab (Invecchiamento Cerebrale Abbiategrasso; en inglés: Brain Aging Abbiategrasso, ClinicalTrials.gov, NCT01345110) y actualmente está en curso. InveCe.Ab está previsto obtener una cohorte con la máxima homogeneidad y menor variabilidad con el fin de evaluar la incidencia, prevalencia e historia natural de la demencia, junto con sus posibles factores de riesgo o protección, incluyendo variables conductuales, psicosociales, clínicas y biológicas36. Las características de la cohorte se muestran en la Figura 1 y la Tabla 1. Los datos epidemiológicos son coherentes con la tendencia de la demencia en la población europea37,,38 y los participantes de InveCe.Ab tienen características genéticas y ambientales homogéneas, lo que representa un buen modelo para estudiar la trayectoria desde el envejecimiento normal hasta los trastornos neurocognitivos. De hecho, las poblaciones homogéneas requieren menos sujetos para alcanzar un poder estadístico adecuado. La metodología InveCe.Ab ya se ha notificado en otroslugares 36, pero es importante subrayar su enfoque multidimensional a través de controles periódicos (cada 2-3 años) utilizando el mismo conjunto de evaluaciones, incluyendo: muestreo de sangre (panel metabólico, homocisteína y vitaminas, extracción de ADN para perfilar la Apolipoproteína E (APOE) y otros polimorfismos genéticos relacionados con la cognición y el envejecimiento), mediciones antropométricas (peso, altura y cintura), Talking While Walking Test (prueba de doble tarea), una entrevista para evaluar el estilo de vida (adherencia a la dieta mediterránea, niveles de actividad física y compromiso cognitivo) y factores sociales (implicación social, soledad), una evaluación neuropsicológica y un examen clínico general. Comparar estos datos longitudinales con datos neuropatológicos postmortem sería crucial para la investigación. Por lo tanto, nuestro equipo y particularmente la Dra. Michela Mangieri concibieron el enfoque neuropatológico mencionado anteriormente. Desde 2014 y durante el segundo seguimiento, se pidió a los participantes de InveCe.Ab que donaran sus cerebros, y dando así lugar al nacimiento del Abbiategrasso Brain Bank (ABB). Los principales donantes de ABB son los participantes de InveCe.Ab, pero ABB ahora está abierto a otros donantes voluntarios. Son pacientes de ASP Golgi-Redaelli, hogar de varios pacientes afectados por diferentes enfermedades neurológicas o voluntarios adultos que aprenden sobre el Proyecto ABB y pertenecen a la misma zona geográfica (Abbiategrasso y alrededores). Todos los donantes se someten al mismo protocolo de evaluación.
Los autores proponen un método para rastrear trayectorias individuales del envejecimiento normal y la posible progresión a las ENT, y para gestionar, procesar y caracterizar con precisión los cerebros adquiridos de dichos donantes seguidos longitudinalmente. Además, nuestro objetivo es conocer e involucrar a las personas en evaluaciones neurológicas periódicas, seminarios y actividades educativas con respecto al bienestar del cerebro y aumentar su conciencia de la donación de cerebros con fines de investigación.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>50ml polypropilene conical tube 30x115mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>405253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NeuN (A60)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB377</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TAU (AT8)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>MN1020</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)</td>
			<td>CosmoBio</td>
			<td>TIP-PTD-P02</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-SYN (KM51)</td>
			<td>Novocastra</td>
			<td>NCL-L-ASYN</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;amyloid (4G8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>800703</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting board</td>
			<td>BD</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0101500</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical saw with 5d blade</td>
			<td>CEA</td>
			<td>06.06.14/06.00.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH measure surface 12mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>70064.250 HHH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11796338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4001</td>
			<td>secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4003</td>
			<td>secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylether</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8401530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather safety trimming knife blade 14cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11749798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WS1810500</td>
			<td>medium supplement; dilution = 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 15cm surgical or anatomical</td>
			<td>Uvex</td>
			<td>500XG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>CEA</td>
			<td>01.28.14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Arcobaleno</td>
			<td>2624000800002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head supporter</td>
			<td>Lacor</td>
			<td>60456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WX0550100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring tape</td>
			<td>CEABIS</td>
			<td>CEATA34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non adsorbable monofilament black polyamide</td>
			<td>UHU Bostik</td>
			<td>8000053131470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140050</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strept Solution (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0022100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>03.06.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel with n&#176;21 blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical basin</td>
			<td>Olcelli Farmaceutica</td>
			<td>A930857255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical mallet and surgical cisel</td>
			<td>CEA</td>
			<td>79.68.88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>CEA</td>
			<td>27.08.45/79.68.64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Feather</td>
			<td>M130RC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains

En una población en constante envejecimiento, se espera que aumente la prevalencia de trastornos neurodegenerativos. Comprender los mecanismos de la enfermedad es la clave para encontrar medidas preventivas y curativas. La forma más eficaz de lograr esto es a través del examen directo del tejido cerebral enfermo y sano. Los autores presentan un protocolo para obtener, procesar, caracterizar y almacenar tejido cerebral de buena calidad donado por individuos registrados en un programa de donación cerebral antemortem. El programa de donación incluye un enfoque empático cara a cara para las personas, una colección de información clínica, biológica, social y de estilo de vida complementaria y evaluaciones multidimensionales en serie a lo largo del tiempo para realizar un seguimiento de las trayectorias individuales del envejecimiento normal y el deterioro cognitivo. Dado que muchas enfermedades neurológicas son asimétricas, nuestro banco cerebral ofrece un protocolo único para cortar especímenes frescos. Las secciones cerebrales de ambos hemisferios se congelan alternativamente (a -80 oC) o se fijan en formalina; una rebanada fija en un hemisferio corresponde a una congelada en el otro hemisferio. Con este enfoque, se puede obtener una caracterización histológica completa de todo el material congelado, y se pueden realizar estudios de omics sobre tejidos histológicamente bien definidos de ambos hemisferios, ofreciendo así una evaluación más completa de los mecanismos de la enfermedad neurodegenerativa. El diagnóstico correcto y definitivo de estas enfermedades sólo puede lograrse combinando el síndrome clínico con la evaluación neuropatológica, que a menudo añade importantes pistas etiológicas necesarias para interpretar la patogénesis. Este método puede llevar mucho tiempo, ser costoso y limitado, ya que sólo cubre un área geográfica limitada. Independientemente de sus limitaciones, el alto grado de caracterización que proporciona puede ser gratificante. Nuestro objetivo final es establecer el primer Banco Cerebral Italiano, al mismo tiempo que enfatizamos la importancia de los estudios epidemiológicos neuropatológicamente verificados.

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Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

Este protocolo describe un método para rastrear trayectorias individuales de envejecimiento cerebral a través de un programa de donación cerebral y caracterización adecuada de cerebros. Los donantes cerebrales participan en un estudio longitudinal a largo plazo que incluye evaluaciones multidimensionales en serie. El protocolo contiene una descripción detallada del procesamiento cerebral y una metodología de diagnóstico precisa.

Protocolo del Banco Cerebral Abbiategrasso para Recopilar, Procesar y Caracterizar Cerebros De Envejecimiento

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Como la prevalencia del trastorno neurocognitivo está aumentando continuamente, nuestro objetivo es obtener, caracterizar y almacenar muestras de tejido cerebral de calidad para lograr un diagnóstico preciso y arrojar luz sobre los mecanismos neurodegenerativos. Teniendo en cuenta la asimetría cerebral, nuestra metodología de muestreo permite que todos los metaecon estudios se realicen en tejidos histológicamente bien definidos de ambos hemisferios y los muchos datos se pueden recopilar y correlacionar a través del aprendizaje profundo. Con frecuencia se observan efectos aditivos sobre el daño cerebral por múltiples patologías.El diagnóstico definitivo requiere combinar el síndrome clínico con los hallazgos neuropatológicos para descubrir la patogénesis de la enfermedad y las posibles terapias. Los procedimientos de corte fresco, así como la gestión de la sección macro son complicados, pero también son esenciales para lograr buenos resultados. Un equipo entrenado y unido es crucial para superar estas dificultades.Nuestro protocolo incluye una serie de pasos que se requieren destreza de mamíferos, por lo tanto, la demostración visual puede ser más útil que los textos descriptivos para los investigadores que deseen dominar estas técnicas. Después de confirmar la antomografía, usa un bisturí afilado para hacer una incisión del cuero cabelludo a través de la piel del cabello y tejido subcutáneo en la placa coronal desde la punta del proceso mastoideo de un lado al otro, pasando sobre el vértice. Separe los dos pliegues del cuero cabelludo cuidadosamente del cráneo y continúe con la incisión hasta que la grasa super orbital amarilla se haga visible.Refleja el cuero cabelludo antes y tira de la otra sección del tejido posteriormente. Usando un bisturí y fórceps, cosecha una pequeña muestra del músculo temporal a cada lado del cráneo, colocando un espécimen en 4%formaldehído y el otro muestra a cuatro grados centígrados. Usando una sierra eléctrica cortar el cráneo en un corte V en el lado frontal y quitar la tapa del cráneo.Después de cortar las meninges, cosechar una pieza de dura para la fijación y otra para la congelación. Inserte una aguja de 20 calibres de 3,5 pulgadas unida a una jeringa de 10 mililitros a través del cuerpo calloso para llegar al tercer ventrículo y retraiga el émbolo para obtener unos 10 mililitros de líquido cefalorraquídeo cerebral. Evaluar el color de la apariencia y la turbidez del fluido y medir el pH.Tire suavemente de ambos lóbulos frontales para levantar el cerebro y cortar ambos nervios ópticos infundibulum, las arterias carótidas internas y el tercer, cuarto, quinto y sexto nervio craneal. Cortar el tentorio para llegar a la fosa posterior y cortar las arterias vertebrales y los nervios craneales inferiores. A continuación, inserte el bisturí lo más profundo posible a través del foramen magnum para cortar la porción más caudal de la medula y eliminar cuidadosamente todo el cerebro.Usa el bisturí para aparecer en el hueso sobre la cueva de Meckel y recoge el ganglio Gasserian de cada lado para fijarlo y congelarse. Utilice un mazo quirúrgico y un cincel para fracturar la sella turcica ósea y extraer la glándula pituitaria para fijarla en 4%formaldehído. Inspeccione el cráneo y todo el cerebro a partir de alteraciones macroscópicas y cambios vasculares.Utilice una cinta métrica para medir los diámetros de postura transversal y anterior del cerebro y pesar el cerebro en una escala. Recuperar cuidadosamente el círculo de Willis para la evaluación macroscópica para la presencia de variantes anatómicas, lesiones o estenosis de los vasos. Separe e inspeccione el cerebrum, el cerebelo y el tronco encefálica antes de pesar los tejidos individualmente.Retire de uno a dos, de dos a cuatro centímetros cuadrados trozos de leptomeninges de la convexidad y conserve las muestras en un medio de cultivo DMEM de glucosa alta completa a cuatro grados centígrados. Cosecha la glándula pineal para fijarla en 4%formaldehído y retira las bombillas olfativas y los nervios ópticos para la fijación y congelación de uno de cada par. Coloque el cerebrum, el cerebelo y el tronco encefálica en hielo a cuatro grados centígrados.Cuando todos los tejidos de interés han sido cosechados utilice un pegamento súper adhesivo para volver a conectar el hueso y utilizar una aguja quirúrgica, y suturas no absorbibles para coser hacia atrás el cuero cabelludo. Para la disección del banco cerebral, utilice un cuchillo disección para cortar el tronco encefálica axialmente y hacer el primer corte a nivel del cerebro medio rostral a través del colliículo superior para obtener dos rebanadas para exponer la sustancia nigra. Cortar el tronco encefálica en rodajas de 10, ocho milímetros teniendo cuidado de incluir cortes que pasan a través de los pons rostrales cerca de los márgenes superiores del cuarto ventrículo para observar el locus caeruleus y a través de la médula oblongata inferior a la estría acústica, justo por encima del ápice inferior del cuarto ventrículo para obtener rodajas incluyendo el núcleo motor dorsal del vágus.Etiquete todas las rebanadas de una manera caudal rostral como BS para tronco encefálica seguido de números árabes. Después de la última sección de tronco encefálico, utilice la designación SC para la médula espinal seguida de números arábigos. Corte el cerebelo en el plano sagital para separar los dos hemisferios cerebelosos a nivel de los vermis y realizar seccionamiento sagital para obtener cinco rebanadas de cada hemisferio.Asigne un nombre a todos los sectores del vermis como CBR o CBL para el cerebelo derecho e izquierdo respectivamente, y utilice números árabes para identificar cada sección. A continuación, separe los dos hemisferios del cerebro a través del cuerpo calloso en el plano sagital antes de cortar el hemisferio como singularmente a lo largo del plano coronal que pasa entre el quiasmo óptico y los cuerpos mamilares a través del polo temporal del lóbulo frontal, cingulado anterior, comisura anterior, núcleo menor y ganglios basales. Haga un segundo corte de aproximadamente un centímetro posterior pasando a través de los cuerpos mamilarios y exponiendo los ganglios basales, el tálamo anterior sub tálamo y la amígdala.Continúe cortando para diseccionar las regiones anterior y posterior hasta que se hayan obtenido rodajas de 15 a 21 centímetros para cada hemisferio. Coloque la rebanada en una superficie plana a medida que se alcanzan siguiendo su posición original en la dirección posterior anterior desde el frontal hasta el polo occipital, con la porción continua con las diapositivas anteriores hacia arriba. Cuando se hayan colocado todas las rebanadas, seleccione las secciones principales que se fijarán para la histopatología, incluidas las secciones adquiridas anteriormente y las secciones del hipocampo, parietal y occipital, y etiquete las rebanadas como L o R seguidas de números árabes, incluida una etiqueta que indique si la rebanada debe ser fijada o congelada.Cuando todos los tejidos hayan sido seccionados y etiquetados, obtenga una imagen para cada serie de secciones antes de su fijación o congelación. Para congelar las muestras coloque las secciones de tejido alternativo reservadas en una bandeja de aluminio precongelada y cubra las secciones con una placa de aluminio entrelazada para mantenerlas planas. A continuación, congele las rodajas en nitrógeno líquido durante tres minutos antes de colocar las muestras congeladas dentro de una bolsa de plástico etiquetada con sus correspondientes códigos de identificación y los números de corte para un almacenamiento en la caja criogénica apropiada a 80 grados centígrados.Para fijar las muestras coloque las secciones de tejido alternativo reservadas en trozos individuales de gasa y coloque las rodajas en una solución de formalina tamponada de 10% de fosfato durante cinco días en una sala fría de cuatro grados centígrados. 24 de 27 cerebros cosechados recibieron la caracterización neuropatológica completa con un diagnóstico patológico clínico definido. El análisis preliminar cuantitativo de electroencefalogramas de una serie de 36 donantes cerebrales indica que el porcentaje de ritmo alfa principal es significativamente menor en los principales trastornos neurocognitivos que en el trastorno neurocognitivo leve de edad avanzada normal.Aquí se muestra un ejemplo de una patología asimétrica con una atrofia del lado derecho evidente macroscópicamente con las dilataciones ventriculares graves observadas en la sección coronal derecha en comparación con la izquierda. Otro caso muestra un infarto del hemisferio derecho, mientras que otro espécimen muestra una clara atrofia del cuerpo mamilario derecho. Las secciones macro se pueden teñir para identificar la pérdida de mielina o la distribución de la inmunorreactividad dentro de los hemisferios.Estas muestras son de gemelos que tuvieron un inicio clínico de la enfermedad de Alzheimer en diferentes períodos de tiempo debido a factores epigenéticos y ambientales. Sin embargo, el análisis microscópico reveló un cuadro neuropatológico muy similar que indica una alta patología de la enfermedad de Alzheimer y angiopatía amiloide. En estos dos pacientes, sin embargo, el mismo diagnóstico clínico de la enfermedad de Alzheimer no se correspondía exactamente con las características neuropatológicas, que revelaron un dúo de demencia en múltiples etiologías.De hecho, el primer caso presentó a los cuerpos de Lewy en el gyrus single lie and substantia nigra. Y el segundo caso mostró cuerpos de Lewy asociados con neuritas de Lewy en la amígdala y en el núcleo de menores. La fotografía de las rebanadas es cuidadosamente para una identificación precisa de las áreas anatómicas durante el análisis microscópico.La fijación y congelación de rodajas individuales también son importantes para preservar la microestructura tisular Omics la topografía de la activación genética y la distribución de proteínas y correlacionar estos datos con la histopatología. Cultivos celulares de tejidos bien caracterizados, también una investigación sobre la patogénesis de la enfermedad. Llevar siempre un equipo de protección personal adecuado, ya que un tejido cerebral creado se considera potencialmente infeccioso y porque se requiere el uso de herramientas peligrosas como instrumentos afilados y nitrógeno líquido.

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Cirugía estereotáctica para manipulación genética en las células estriatales de cerebro de ratón Neonatal

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

Aislamiento y extracción de ARN de las neuronas, macrófagos y Microglia de cerebros de larvas de pez cebra

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualization of Amyloid ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualización de depósitos β amiloide en el cerebro humano con desorción láser asistida por matriz/ionización del Spectrometry total de la proyección de imagen

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into ...