Name: abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains
Uploaded: 2020-06-03T13:00:00
Duration: 12 min 28 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains at JoVE.com

Bu çalışmayı Dr.ssa Michela Mangieri'ye ithaf etmek istiyoruz. O erken ölmeden önce, o gebe ve Abbiategrasso Beyin Bankası Projesi başladı.
Biz cömertçe kendi vücudunun en asil organ bağış araştırma katkıda bulunan beyin bağışçıları için müteşekkiriz; onlar olmadan bu araştırma mümkün olmazdı.
Valeria Marzagalli'ye ABB projesindeki değerli çalışmaları için minnettarız.
Yazarlar, değerli rehberlik ve bilge danışman için Prof Johannes Attems, Dr Paolo Fociani ve Dr Giorgio Giaccone teşekkür ederiz.
Dr.sa Alice Cirrincione ve Bayan Giulia Bortone'a proje boyunca yaptıkları değerli yardımlar için teşekkür ederiz. Bayan Tere Cassani'ye desteği ve işbirliği için "Federazione Alzheimer Italia" için çok teşekkür ederiz. Yazarlar Dr Matteo Moretti ve Prof Antonio Marco Maria Osculati, Halk Sağlığı, Deneysel ve Adli Tıp, Pavia Üniversitesi Bölümü müteşekkir.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

WHO'ya göre, şu anda yaklaşık 50 milyon kişi demans hastası ve bu rakamın 2050 yılına kadar üçkatına çıkarılaması öngörülüyor. Alzheimer Hastalığı demans önemli nedenidir, serebrovasküler hastalık ve diğer yaşa bağlı nörodejeneratif bozukluklar izledi. DSA, 2017 yılında demans konusunda farkındalığı artırmak ve buna karşı küresel bir eylem planını teşvik etmek için Küresel Demans Gözlemevi'nigeliştirdi. Her bireyin kendi beyin yaşlanma yörüngesi vardır, bu nedenle tedavi için arama nörodejeneratif hastalıkların patogenezkarmaşıklığı nedeniyle zor olabilir. Belki de, her kişi onu ya da kendi patogenezi kişiselleştirilmiş bir yaklaşım gerektiren beyin dokusu nda yazılı sahip. Böylece, beyin dokusu nun çalışma nörodejenerasyon mekanizmaları anlamak için anahtar olacaktır.
Nörolojitarihine baktığımızda, en etkileyici ve çığır açan keşiflerin insan beyninin doğrudan incelenmesi olmadan asla gerçekleşemeyeceğini fark ettik. Zaman boyunca, çalışılacak beyin dokusunun kaynağı ham diseksiyonlar, rasgele 'şans karşılaşmaları' ve bazı durumlarda yasadışı ticaret, organize beyin koleksiyonları ve stratejik modern beyin bankaları değişti. Birçok etik yönleri göz önünde bulundurulması, modern beyin bankalarını geçmişin beyin koleksiyonlarından farklı etkileyen başlıca faktörlerden biridir. İlk gerçek modern Beyin Bankaları (BBs)20. Nicholas Corsellis ve Wallace Tourtelotte modern beyin bankacılığının öncüleri olarak kabul edilebilir. İngiltere'de, Corsellis çeşitli zihinsel ve nörolojikbozukluklar2 etkilenen 1000'den fazla iyi belgelenmiş beyinler üzerinde tutan bir koleksiyon monte . Ayrıca, Corsellis biyokimyasal testler uğruna buz taze beyin dokusu korumak için ihtiyaç ortaya yardımcı oldu3. Bu arada ABD'de, Wallace Tourtelotte potansiyel beyin donörlerin talep kolaylaştırmak ve toplanan beyinler tam bir tıbbi ve nörolojik geçmişi 4 eşlik etmesini sağlamak için antemortem beyin bağışı programları tanıttı4,5. Beyin koleksiyonları ve modern BB'ler hakkında tarihsel bir genel bakış için Carlos ve ark. 6 .
Peki neden hala insan beynine ihtiyacımız var? Beyin hastalıkları sadece nöropatolojik inceleme sonrasında kesin bir tanı verilebilir. Nöropatoloji klinik tanıyı zorlar ve klinik semptomların doğru yorumlanmasının ve yeni sindromik varyantların histolojik bazlarının keşfinin anahtarıdır. Gerçekten de tanı patolojik tabloya göre yeniden tanımlanabilir. Bununla birlikte, otopsi oranı yenilikçi nörogörüntüleme teknikleri nin son gelişimi nedeniyle son yıllarda azalmıştır. Beyin görüntüleme yoluyla, beyindeki morfolojik, fonksiyonel ve metabolik değişiklikler, hem de protein misfolding ölçüde, vivoolarak değerlendirilebilir . Ancak, in vivo nörogörüntüleme ve diğer biyomarker çalışmalar sadece ince hücresel ve moleküler değişiklikleri tespit edemiyoruz gibi patolojik resmin bir "tahmin" verebilir. Moleküler görüntülemedeki ilerlemeler ve yeni biyobelirteçlerin, hedef moleküllerin veizleyiciler7'nin (örneğin, amiloid, TAU, mikroglial izleyiciler) keşfi, insan beynini klinik değerlendirmeler ve biyomarker testlerinden elde edilen verilerin yorumlanması için daha da vazgeçilmez kılmaktadır. Ayrıca, omik teknolojileri (genomik, epigenomik, transkripsiyon, metabolomikler, proteomikler, lipidomikler, vb), taze ve dondurulmuş beyin dokusu üzerinde yapılan, hastalık mekanizmaları anlamak ve risk genleri keşfetmek için yeni olanaklar açtı, yeni tanı ve prognostik belirteçleri, ve potansiyel ilaç hedefleri8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,22,23.
Bu amaçlar için, modern BBs arşiv iyi karakterize, yüksek kaliteli beyin dokuları onları bilimsel topluluk için kullanılabilir hale3,24. BBs tarafından sağlanan beyinler tam bir klinik geçmişi eşlik etmelidir. BB'nin faaliyeti aşağıdakileri içerir: (1) Hastalıklı ve sağlıklı bireylerin beyin bağışı programlarına tanınması ve işe alınması; ideal koşul tam bir klinik, yaşam tarzı ve sosyal tarih elde etmek için yaşam boyunca donörlerin çok disiplinli bir takip elde etmek olacaktır, ve biyomarker profilleri; gerçekten de, bilişsel rezerv ve beyin yapısı yaşam tarzı ve sosyo-eğitim faktörleri bağlıdır25,26, bu yüzden bu bilgiler eldeki toplam veri zenginleştirir. (2) Beyin (beyin, beyincik ve beyin sapından oluşan) ve ilgili dokuların (örneğin, omurilik, kranial sinirler ve ganglia, vb.) donörün ölümünden sonra edinimi, tüm bunlar sırasında standart yasal ve etik düzenlemelere uyulması. (3) Uygun işleme (diseksiyon, fiksasyon, dondurma) beynin, standart bir operatif protokolde tanımlandığı gibi, yüksek kaliteli doku elde etmek ve multidisipliner araştırmalarda gelecekte kullanıma izin vermek. (4) Kesin tanıyı sağlayan ayrıntılı nöropatolojik karakterizasyon. (5) Depolama ve araştırma topluluğuna doku materyali dağıtımı27,28.
Tüm BB'ler hem dondurulmuş hem de formalin-sabit-parafin gömülü dokuları saklar. Her BB'nin kendi protokolü vardır. Biyomedikal Araştırma Enstitüsü (New Jersey)29 ve serebrovasküler patoloji30Deramecourt çalışma bihemisferik kesme protokolü gibi özel çalışmalar dışında, dünyanın en büyük BBs sadece orta hat boyunca serebrum, beyincik ve beyin sapı kesti (sagittal düzlem). Bir yarısı taze incelenir ve daha sonra biyokimyasal çalışmalar için dondurulmuş, diğer histopatolojik değerlendirme için formalin sabitise. Biyokimyasal ve histopatolojik analizler her yarımkürede ayrı ayrı yapılır. Hangi tarafın sabit veya dondurulmuş (yanallık) olarak karar, tekil banka31,32,33,34,35bağlıdır. Birçok nörolojik hastalık asimetrik olduğu gibi, bizim BB taze beyin dilimleme için benzersiz bir protokol sunuyor: beyin sapı bitişik bölümleri ve her yarımküre dönüşümlü sabit ve dondurulmuş; bir yarımkürede sabit bir dilim diğer yarımkürede donmuş bir karşılık gelir. Bu yöntem le beyin dokusunun kullanımı optimize edilmiştir ve her iki yarımkürenin her iki alanından histolojik ve biyokimyasal bilgileri elde etme ve karşılaştırma olanağı ile tüm dondurulmuş maddelerin tam bir histolojik karakterizasyonu elde edilebilir.
Beyin bankası projemizin çerçevesi Abbiategrasso kasabasıdır. Abbiategrasso, Kuzey İtalya'da Milano şehrinin yaklaşık 22 km güneybatısında küçük bir kasabadır. Yaklaşık 32.600 kişilik bir nüfusa sahiptir. Golgi-Cenci (GC) Vakfı'naev sahipliği yapmaktadır. GC Vakfı büyük bir Rehabilitasyon Geriatrik Hastanesi (ASP Golgi-Redaelli) bir parçasıdır ve yaşlanma ve yaşlı bakımı hakkında araştırma odaklanan bir enstitüdür. Özellikle zihinsel yaşlanma, onu etkileyen sosyal ve davranışsal faktörler ve yaşa bağlı nörobilişsel bozuklukların (NPH) altında yatan biyoloji ve patolojiyi incelemeye odaklanır. 2009 yılında GC Vakfı 1321 katılımcıyla (1644 uygun deneden: ilk yanıt oranı %80,3) ile yeni bir uzunlamasına çalışma başlattı. 1935 ve 1939 yılları arasında (70-75 yaş ları arasında), Kafkas kökenli, aynı küçük coğrafi bölgede yaşayan doğdu. Çalışma InveCe.Ab (Invecchiamento Cerebrale Abbiategrasso; İngilizce: Beyin Yaşlanma Abbiategrasso, ClinicalTrials.gov, NCT01345110) olarak adlandırıldı ve şu anda devam etmektedir. InveCe.Ab, demansın görülme sıklığını, prevalansını ve doğal tarihini değerlendirmek için maksimum homojenliğe ve en az değişkenliğe sahip bir kohort, davranışsal, psikososyal, klinik ve biyolojik değişkenler de dahil olmak üzere olası risk veya koruyucu faktörleri değerlendirmek için planlanmaktadır36. Kohortun özellikleri Şekil 1 ve Tablo 1'degösterilmiştir. Epidemiyolojik veriler Avrupa popülasyonundaki demans eğilimi ile tutarlıdır37,38 ve InveCe.Ab katılımcıları homojen genetik ve çevresel özelliklere sahiptir, normal yaşlanmadan nörobilişsel bozukluklara kadar olan yörüngeyi incelemek için iyi bir modeli temsil eder. Gerçekten de, homojen popülasyonlar yeterli istatistiksel güce ulaşmak için daha az deneklere ihtiyaç duyarlar. InveCe.Ab metodolojisi zaten başka bir yerdebildirilmiştir 36 ama periyodik kontroller yoluyla çok boyutlu yaklaşım altını çizmek için önemlidir (her 2-3 yılda) dahil değerlendirmeler aynı seti kullanarak: kan örnekleme (metabolik panel, homosistein ve vitaminler, profil Apolipoprotein E (APOE) ve biliş ve yaşlanma ile ilgili diğer genetik polimorfizmler için DNA ekstraksiyonu, antropometrik ölçümler (ağırlık, boy ve bel), Talking While Walking Test (çift görev testi), yaşam tarzı (Akdeniz diyet bağlılık, fiziksel aktivite ve bilişsel bağlılık düzeyleri) ve sosyal faktörler (sosyal tutulum, yalnızlık), bir nöropsikolojik değerlendirme ve klinik genel muayene değerlendirmek için bir röportaj. Bu kadar uzunlamasına verileri postmortem nöropatolojik verilerle karşılaştırmak araştırma için çok önemli olacaktır. Bu nedenle, ekibimiz ve özellikle Dr Michela Mangieri yukarıda belirtilen nöropatolojik yaklaşım gebe. 2014 yılından bu yana ve ikinci takip sırasında, InveCe.Ab katılımcıların beyinlerini bağışlamak istendi, ve böylece Abbiategrasso Beyin Bankası (ABB)doğum hakkında getirerek. ABB çekirdek bağış InveCe.Ab katılımcılar ama ABB şimdi diğer gönüllü bağış açıktır. Onlar ASP Golgi-Redaelli, farklı nörolojik hastalıklar veya ABB Projesi hakkında bilgi ve aynı coğrafi bölgeye ait yetişkin gönüllüler (Abbiategrasso ve çevresi) ile tutulmuş birkaç hasta ev hastalardır. Tüm bağışçılar aynı değerlendirme protokolünden geçer.
Yazarlar, normal yaşlanmanın bireysel yörüngelerini ve NCD'lere olası ilerlemeyi izlemek ve bu tür bağışçılardan elde edilen beyinleri doğru bir şekilde yönetmek, işlemek ve karakterize etmek için bir yöntem önermektedirler. Ayrıca amacımız, bireylerin beynin refahı ile ilgili periyodik nörolojik değerlendirmeler, seminerler ve eğitim faaliyetlerine katılmaları ve araştırma amacıyla beyin bağışı konusundaki farkındalıklarını artırmalarıdır.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>50ml polypropilene conical tube 30x115mm</td>
			<td>BD</td>
			<td>405253</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-GFAP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-NeuN (A60)</td>
			<td>Chemicon</td>
			<td>MAB377</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TAU (AT8)</td>
			<td>ThermoScientific</td>
			<td>MN1020</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)</td>
			<td>CosmoBio</td>
			<td>TIP-PTD-P02</td>
			<td>policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#945;-SYN (KM51)</td>
			<td>Novocastra</td>
			<td>NCL-L-ASYN</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-&#946;amyloid (4G8)</td>
			<td>BioLegend</td>
			<td>800703</td>
			<td>monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cutting board</td>
			<td>BD</td>
			<td>352070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM High Glucose</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0101500</td>
			<td>medium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrical saw with 5d blade</td>
			<td>CEA</td>
			<td>06.06.14/06.00.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH measure surface 12mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>70064.250 HHH</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electrode pH needle</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11796338</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4001</td>
			<td>secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EnVision+System-HRP</td>
			<td>Dako</td>
			<td>K4003</td>
			<td>secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethylether</td>
			<td>SMI</td>
			<td>8401530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feather safety trimming knife blade 14cm</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>11749798</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WS1810500</td>
			<td>medium supplement; dilution = 20%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Forceps 15cm surgical or anatomical</td>
			<td>Uvex</td>
			<td>500XG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gloves</td>
			<td>CEA</td>
			<td>01.28.14</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glue</td>
			<td>Arcobaleno</td>
			<td>2624000800002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Head supporter</td>
			<td>Lacor</td>
			<td>60456</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WX0550100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Measuring tape</td>
			<td>CEABIS</td>
			<td>CEATA34</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non adsorbable monofilament black polyamide</td>
			<td>UHU Bostik</td>
			<td>8000053131470</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-Essential Amino Acids Solution (100X)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11140050</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen/Strept Solution (100X)</td>
			<td>Carlo Erba</td>
			<td>FA30WL0022100</td>
			<td>medium supplement; dilution = 1%</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm</td>
			<td>CEA</td>
			<td>03.06.16</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile scalpel with n&#176;21 blade</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical basin</td>
			<td>Olcelli Farmaceutica</td>
			<td>A930857255</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical mallet and surgical cisel</td>
			<td>CEA</td>
			<td>79.68.88</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical scissor</td>
			<td>CEA</td>
			<td>27.08.45/79.68.64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td>Feather</td>
			<td>M130RC</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

abbiategrasso brain bank protocol for collecting, processing and characterizing aging brains

Sürekli yaşlanan bir popülasyonda nörodejeneratif bozuklukların görülme sıklığının artması beklenmektedir. Hastalık mekanizmalarının anlaşılması önleyici ve iyileştirici önlemler inanahtarıdır. Bunu başarabilmek için en etkili yol hastalıklı ve sağlıklı beyin dokusunun doğrudan incelenmesi yoluyla. Yazarlar, bir antemortem beyin bağışı programına kayıtlı bireyler tarafından bağışlanan kaliteli beyin dokusu elde etmek, işlemek, karakterize ve depolamak için bir protokol mevcut. Bağış programı, insanlara karşı yüz yüze empatik bir yaklaşım, birbirini tamamlayan klinik, biyolojik, sosyal ve yaşam tarzı bilgileri koleksiyonu ve normal yaşlanma ve bilişsel gerilemenin bireysel yörüngelerini izlemek için zaman içinde seri çok boyutlu değerlendirmeler içermektedir. Birçok nörolojik hastalık asimetrik olduğundan, beyin bankamız taze numuneleri dilimleme için benzersiz bir protokol sunar. Her iki yarımkürenin beyin bölümleri dönüşümlü olarak dondurulur (-80 °C'de) veya formalin ile sabitlenir; bir yarımkürede sabit bir dilim diğer yarımkürede donmuş bir karşılık gelir. Bu yaklaşımla, tüm dondurulmuş maddelerin tam bir histolojik karakterizasyonu elde edilebilir ve her iki yarımküreden histolojik olarak iyi tanımlanmış dokular üzerinde omik çalışmalar yapılabilir ve böylece nörodejeneratif hastalık mekanizmalarının daha eksiksiz bir değerlendirmesini yapabilirsiniz. Bu hastalıkların doğru ve kesin tanısı ancak klinik sendrom ile nöropatolojik değerlendirmenin birleştirilmesiyle elde edilebilir ve bu da patogenezin yorumlanması için gerekli önemli etiyolojik ipuçlarını ekler. Bu yöntem, yalnızca sınırlı bir coğrafi alanı kapsadığı için zaman alıcı, pahalı ve sınırlı olabilir. Sınırlamaları ne olursa olsun, sağladığı yüksek karakterizasyon derecesi ödüllendirici olabilir. Nihai hedefimiz ilk İtalyan Beyin Bankası'nı kurmak, tüm bunlar olurken nöropatolojik olarak doğrulanmış epidemiyolojik çalışmaların önemini vurgulamaktır.

Watch this Scientific Journal Video about Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains at JoVE.com

Abbiategrasso Brain Bank Protocol for Collecting, Processing and Characterizing Aging Brains

Bu protokol, beyin bağışı programı ve beyinlerin doğru karakterizasyonu yoluyla bireysel beyin yaşlanma yörüngelerini izlemek için bir yöntem açıklar. Beyin bağışçıları seri çok boyutlu değerlendirmeler de dahil olmak üzere uzun vadeli bir uzunlamasına çalışmada yer almaktadır. Protokol beyin işleme ve doğru bir tanı metodolojisi ayrıntılı bir açıklamasını içerir.

Abbiategrasso Beyin Bankası Toplama, İşleme ve Yaşlanma Beyinleri Karakterize için Protokol

In a constantly aging population, the prevalence of neurodegenerative disorders is expected to rise. Understanding disease mechanisms is the key to find ...

Nörobilişsel bozukluk prevalansı sürekli arttıkça, amacımız doğru tanıyı koymak ve nörodejeneratif mekanizmalara ışık tutmak için kaliteli beyin dokusu örnekleri elde etmek, karakterize etmek ve depolamaktır. Beyin assimetrisi göz önüne alındığında, örnekleme metodolojimiz tüm meta çalışmaların her iki yarımküreden histolojik olarak iyi tanımlanmış dokular üzerinde yapılmasını sağlar ve birçok veri derin öğrenme yoluyla toplanabilir ve ilişkilendirilebilir. Birden fazla patoloji ile beyin hasarı üzerinde katkı etkileri sık sık görülmektedir.Kesin tanı, hastalık patogenezi ve olası tedavileri keşfetmek için klinik sendromu nöropatolojik bulgularla birleştirmeyi gerektirir. Taze kesme prosedürleri yanı sıra makro bölüm yönetimi zor ama aynı zamanda iyi sonuçlar elde etmek için gereklidir. Eğitimli ve sıkı bir ekip bu zorlukların üstesinden gelmek için çok önemlidir.Protokolümüz, memeli el becerisi gerektiren bir dizi adımı içerir, bu nedenle görsel gösteri, bu tekniklerde ustalaşmak isteyen araştırmacılar için açıklayıcı metinlerden daha yararlı olabilir. Thanatografiyi doğruladıktan sonra, bir tarafta mastoid işleminucundan diğer tarafına geçerek, saç derisi ve koronal plaka üzerinde deri altı doku ile kafa derisi kesi yapmak için keskin bir neşter kullanın. Kafa derisinin iki kıvrımını dikkatlice kafatasından ayırın ve sarı süper yörüngesel yağ görünür olana kadar kesiti devam edin.Ön kafa derisi yansıtın ve arka doku diğer bölümünü çekin. Bir neşter ve forseps kullanarak, kafatasının her iki tarafında zamansal kas küçük bir örnek hasat, 4% formaldehit bir örnek yerleştirerek ve dört santigrat derece diğer örnek. Elektrikli testere kullanarak ön taraftaki V kesiğiyle kafatasını kesip kafatası kapağını çıkarın.Menenjler kestikten sonra, sabitleme için dura bir parça hasat ve dondurma için başka bir. Üçüncü ventrikül ulaşmak ve beyin omurilik sıvısı yaklaşık 10 mililitre elde etmek için piston geri çekmek için corpus callosum ile 10 mililitrelik şırınga bağlı bir 20 gauge 3.5 inç iğne takın. Sıvının görünümünü ve bulanıklığını değerlendirin ve pH'ı ölçün.Yavaşça beyin kaldırmak için her iki frontal loblar çekin ve infundibulum hem optik sinirleri kesti, iç karotis arterler ve üçüncü, dördüncü, beşinci ve altıncı kranial sinirler. Posterior fossa ulaşmak için tentorium kesin ve vertebral arterler ve alt kranial sinirler kesti. Sonra medula en kaudal kısmını kesmek ve dikkatle tüm beyin kaldırmak için foramen magnum aracılığıyla mümkün olduğunca derin neşter yerleştirin.Meckel mağaraüzerinde kemiğe görünür neşter kullanın ve fiksasyon ve donma için her iki taraftan Gasserian ganglion toplamak. Kemik sella turcica kırık ve% 4 formaldehit fiksasyon için hipofiz bezi kaldırmak için cerrahi bir tokmak ve keski kullanın. Kafatasını ve tüm beyni makroskopik değişikliklerden ve damar değişikliklerinden kontrol edin.Beynin enine ve ön duruş çaplarını ölçmek ve beyni bir ölçekte tartmak için bir ölçüm bandı kullanın. Anatomik varyantlar, lezyonlar veya damar darlığı varlığı için makroskopik değerlendirme için Willis çemberini dikkatlice alın. Ayrı ve ayrı beyin, beyincik ve beyin sapı tek tek dokuları tartma önce inceleyin.Bir ila iki, iki ila dört santimetre karelik leptomeninges parçaları convexity çıkarın ve dört santigrat derece tam yüksek glikoz DMEM kültür orta örnekleri korumak. Hasat 4% formaldehit fiksasyon için epifiz bezi ve fiksasyon ve her çifti bir dondurma için koku ampuller ve optik sinirler ilerler. Serebrum, beyincik ve beyin sapını buza dört derece yedirin.Tüm ilgi dokuları hasat edildiğinde kemik yeniden ve cerrahi bir iğne kullanmak için süper yapışkan tutkal kullanın, ve kafa derisi geri dikiş için emilemez dikiş. Beyin bankası diseksiyonu için beyin sapı aksiyel kesmek ve superior colliculus ile rostral orta beyin düzeyinde ilk kesim yapmak için bir diseksiyon bıçak kullanın substantia nigra ortaya çıkarmak için iki dilim elde etmek. 10 içine beyin sapı kesin, sekiz milimetre lik dilimler dördüncü ventrikül üstün marjları yakın rostral pons geçen kesikler dahil etmek için dikkat ederek locus caeruleus gözlemlemek ve akustik stria inferior medulla oblongata ile, sadece dördüncü ventrikül inferior apeks üzerinde vagus dorsal motor çekirdeği de dahil olmak üzere dilimler elde etmek için.Tüm dilimleri, beyin sapı için BS ve ardından Arap rakamları olarak rostral kaudal bir şekilde etiketleyin. Son beyin sapı bölümünden sonra, omurilik için SC adını kullanın ve ardından Arap rakamları kullanın. Vermis düzeyinde iki serebellar hemisfer ayırmak ve her yarımküreden beş dilim elde etmek için sagital kesit gerçekleştirmek için sagittal düzlemde sagittal düzlemde serebellum kesin.Vermisteki tüm dilimleri sırasıyla sağ ve sol beyincik için CBR veya CBL olarak adlandırın ve her bölümü tanımlamak için Arapça sayılar kullanın. Daha sonra, sagital düzlemde korpus callosum ile serebrumun iki hemisferini ayırın ve ön lob temporal kutbundan optik kiazma ve mammillary cisimler arasında geçen koronal düzlem boyunca yarımküreyi tekil olarak dilimlemeden önce, ön sinilat, anterior komisitat, küçüklerin çekirdeği ve bazal ganglia. Bir santimetre posteriorly mammillary organları geçerek ve bazal gangliyonu açığa, anterior talamus alt talamus ve amigdala hakkında ikinci bir kesim olun.Her yarımküre için 15-21 santimetre dilim elde edilene kadar ön ve arka bölgelerin kesilmesiiçin dilimleme devam edin. Dilimin, ön cepheden oksipital direğe kadar ön arka yönde ki orijinal konumlarını takip ederek, önceki slaytların yukarı bakacak şekilde sürekli olduğu kısmı sabit olduğu düz bir yüzeye yerleştirin. Tüm dilimler yerleştirildiğinde, daha önce edinilmiş bölümler ve hipokampal, parietal ve oksipital kesitler de dahil olmak üzere histopatoloji için düzeltilecek ana bölümleri seçin ve dilimlerin sabit mi yoksa dondurulmuş mu olduğunu gösteren bir etiket içeren Arap rakamları nın ardından L veya R olarak etiketleyin.Tüm dokular kesilip etiketlendiğinde, sabitleme veya donma dan önce her bir bölüm serisi için bir görüntü elde edin. Örnekleri dondurmak için önceden dondurulmuş alüminyum tepsi üzerine ayrılmış alternatif doku bölümleri yerleştirin ve onları düz tutmak için birbirine bağlı alüminyum plaka ile bölümleri kapsayacak. Daha sonra dondurulmuş numuneleri ilgili kimlik kodları ve dilim numaraları yla etiketlenmiş plastik bir torbanın içine yerleştirmeden önce sıvı nitrojeniçindeki dilimleri üç dakika dondurun ve 80 santigrat derecedeki uygun kriyojenik kutudaki bir depoiçin dilim numaralarını belirleyin.Örnekleri düzeltmek için ayrılmış alternatif doku bölümlerini tek tek gazlı bez parçalarına yerleştirin ve dilimleri dört derecelik soğuk bir odada beş gün boyunca %10 fosfat tamponlu formalin çözeltisine yerleştirin. Hasat edilen 27 beyinden 24'ü kesin klinik patolojik tanı ile tam nöropatolojik karakterizasyon almıştır. Bir dizi ön kantitatif elektroensefalogram analizi 36 beyin donörleri ana alfa ritim yüzdesi önemli nörobilişsel bozukluklar da önemli ölçüde normal yaşlı hafif nörokognitif bozukluk daha düşük olduğunu gösterir.Burada sağ koronal kesitte gözlenen şiddetli ventriküler dilasyonlar ile sağ taraf atrofisi belirgin bir sağ taraf atrofi ile bir örnek gösterilmiştir. Başka bir olgu sağ hemisferin enfarktüs'ü gösterirken, başka bir örnek sağ meme gövdesinin açık bir atrofisi gösterir. Makro kesitler miyelin kaybını veya hemisferiçindeki immünoreaktivite dağılımını belirlemek için boyanabilir.Bu örnekler, epigenetik ve çevresel faktörlernedeniyle farklı zaman dilimlerinde Alzheimer hastalığının klinik başlangıcı olan ikizlerden elde edilebilmektedir. Bununla birlikte, mikroskobik analiz yüksek Alzheimer hastalığı patolojisi ve amiloid anjiyopati gösteren çok benzer bir nöropatolojik resim ortaya koymuştur. Ancak bu iki hastada, Alzheimer hastalığının aynı klinik tanısı nöropatolojik özelliklere tam olarak karşılık gelmedi, hangi birden fazla etiyolojide bir demans ikilisi ortaya.Nitekim, ilk durumda girus tek yalan ve substantia nigra Lewy organları sundu. İkinci vakada, amigdala'daki ve küçükler çekirdeğindeki Lewy nöritleriyle ilişkili Lewy cisimleri ortaya çıktı. Mikroskobik analiz sırasında anatomik alanların doğru bir şekilde tanımlanması için dilimlerin fotoğrafı dikkatle incelenir.Tekli dilimlerinin fiksasyonu ve dondurulması, doku mikroyapısı Omics'in gen aktivasyonu ve protein dağılımının topografyasını korumak ve bu verileri histopatoloji ile ilişkilendirmek için de önemlidir. Iyi karakterize dokulardan hücre kültürleri, aynı zamanda hastalık patogenezi bir araştırma. Her zaman bir kazanılmış beyin dokusu olarak yeterli kişisel koruyucu ekipman giymek potansiyel olarak bulaşıcı olarak kabul edilir ve keskin aletler ve sıvı nitrojen gibi tehlikeli araçların kullanımı gereklidir çünkü.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Neuroscience

Unit 1

Anatomy of the Central and Peripheral Nervous System

SCIENTISTS IN ACTION

Preparation of Oligomeric &beta;-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Preparation of Oligomeric ÃƒÅ½Ã‚Â²-amyloid1-42 and Induction of Synaptic Plasticity Impairment on Hippocampal Slices

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42</subHipokampal Dilimleri Sinaptik Plastisite değer düşüklüğü> İndüksiyon

Impairment of synaptic connections is likely to underlie the subtle amnesic changes occurring at the early stages of Alzheimer s Disease (AD). ...

TMS: Using the Theta-Burst Protocol to Explore Mechanism of Plasticity in Individuals with Fragile X Syndrome and Autism

TMS: Fragile X Sendromu ve Otizm Bireylerde Plastisite, Mechasnism keşfedin Theta-Burst Protokolü kullanma

Fragile X Syndrome (FXS), also known as Martin-Bell Syndrome, is a genetic abnormality found on the X chromosome.1,2 Individuals suffering from FXS ...

Micron-scale Resolution Optical Tomography of Entire Mouse Brains with Confocal Light Sheet Microscopy

Eşodaklı Işık Sac Mikroskobu ile Tüm Fare Brain mikron çaplı Çözünürlük Optik Tomografi

Understanding the architecture of mammalian  brain at single-cell resolution is one of the key issues of neuroscience.  However, mapping neuronal soma and ...

A Dual Tracer PET-MRI Protocol for the Quantitative Measure of Regional Brain Energy Substrates Uptake in the Rat

Rat Bölgesel Beyin Enerji Yüzeyleri Alımına Kantitatif Tedbir için A Çift Tracer PET-MR Protokolü

We present a method for comparing the uptake of the brain&#39;s two key energy substrates: glucose and ketones (acetoacetate [AcAc] in this case) in the ...

High-resolution In Vivo Manual Segmentation Protocol for Human Hippocampal Subfields Using 3T Magnetic Resonance Imaging

High-resolution In Vivo Manual Segmentation Protocol for Human Hippocampal Subfields Using 3T Magnetic Resonance Imaging

Yüksek çözünürlük<em&gt; İn Vivo</em&gt; 3T Manyetik Rezonans Görüntüleme kullanma İnsan hipokampal alanlar için Manuel Segmentasyon Protokolü

The human hippocampus has been broadly studied in the context of memory and normal brain function and its role in different neuropsychiatric disorders has ...

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

Foraging Path-length Protocol for Drosophila melanogaster Larvae

için yiyecek arama yolu uzunluğu Protokolü<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt; Larva

The Drosophila melanogaster larval path-length phenotype is an established measure used to study the genetic and environmental contributions to behavioral ...

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

A Simple One-step Dissection Protocol for Whole-mount Preparation of Adult Drosophila Brains

Basit Bir adım Yetişkin Tüm montaj Hazırlama Diseksiyon Protokolü<em&gt; Drosophila</em&gt; Brain

There is an increasing interest in using Drosophila to model human brain degenerative diseases, map neuronal circuitries in adult brains, and study the ...

Stereotaxic Surgery for Genetic Manipulation in Striatal Cells of Neonatal Mouse Brains

Yenidoğan fare beyin Striatal hücrelerdeki genetik manipülasyon için stereotaksik cerrahi

Many genes are expressed in embryonic brains, and some of them are continuously expressed in the brain after birth. For such persistently expressed genes, ...

Isolation and RNA Extraction of Neurons, Macrophages and Microglia from Larval Zebrafish Brains

Yalıtım ve RNA çıkarma larva Zebra balığı beyin sinir hücreleri, makrofajlar ve Microglia

To gain a detailed understanding of the role of different CNS cells during development or the establishment and progression of brain pathologies, it is ...

Visualization of Amyloid &#946; Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Visualization of Amyloid ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â² Deposits in the Human Brain with Matrix-assisted Laser Desorption/Ionization Imaging Mass Spectrometry

Amiloid β mevduat matris yardımlı lazer desorpsiyon/iyonlaşma kütle spektrometresi Imaging ile insan beynindeki görselleştirme

The neuropathology of Alzheimer&#39;s disease (AD) is characterized by the accumulation and aggregation of amyloid &#946; (A&#946;) peptides into ...