Name: experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing
Uploaded: 2019-10-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing at JoVE.com

R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025

وقد وافقت اللجنة المؤسسية لرعاية واستخدام الماشية (MO18M211) علي جميع البروتوكولات التجريبية.
1. ليبتين ضخ
ملاحظه: من أجل فحص تاثير الليبتين علي التنفس ، ونحن غرست جلد ليبتين في الفئران C57BL/6j العجاف بواسطة مضخة الاسموزي لرفع مستويات الليبتين المتداولة لتل...

<ol>
	<li>O'donnell, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+prevents+respiratory+depression+in+obesity.">Leptin prevents respiratory depression in obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+gender+exacerbates+respiratory+depression+in+leptin-deficient+obesity.">Female gender exacerbates respiratory depression in leptin-deficient obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164, 1470-1475 (2001).</li><li>Bassi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+leptin+replacement+enhances+chemorespiratory+responses+in+leptin-deficient+mice+independent+of+changes+in+body+weight.">Central leptin replacement enhances chemorespiratory responses in leptin-deficient mice independent of changes in body weight.</a> Pflu&#776;gers Archiv: European Journal of Physiology. 464, 145-153 (2012).</li><li>Inyushkina, E. M., Merkulova, N. A., Inyushkin, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+the+respiratory+activity+of+leptin+at+the+level+of+the+solitary+tract+nucleus.">Mechanisms of the respiratory activity of leptin at the level of the solitary tract nucleus.</a> Neuroscience and Behavioral Physiology. 40, 707-713 (2010).</li><li>Considine, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+immunoreactive-leptin+concentrations+in+normal-weight+and+obese+humans.">Serum immunoreactive-leptin concentrations in normal-weight and obese humans.</a> New England Journal of Medicine. 334, 292-295 (1996).</li><li>Maffei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+levels+in+human+and+rodent:+measurement+of+plasma+leptin+and+ob+RNA+in+obese+and+weight-reduced+subjects.">Leptin levels in human and rodent: measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects.</a> Nature Medicine. 1, 1155-1161 (1995).</li><li>Phipps, P. R., Starritt, E., Caterson, I., Grunstein, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+serum+leptin+with+hypoventilation+in+human+obesity.">Association of serum leptin with hypoventilation in human obesity.</a> Thorax. 57, 75-76 (2002).</li><li>Berger, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+and+Leptin+Resistance+in+the+Pathogenesis+of+Obstructive+Sleep+Apnea:+A+Possible+Link+to+Oxidative+Stress+and+Cardiovascular+Complications.">Leptin and Leptin Resistance in the Pathogenesis of Obstructive Sleep Apnea: A Possible Link to Oxidative Stress and Cardiovascular Complications.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018, 5137947 (2018).</li><li>Ribeiro, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+blunts+the+effects+of+leptin+on+ventilation+and+on+carotid+body+activity.">High fat diet blunts the effects of leptin on ventilation and on carotid body activity.</a> The Journal of Physiology. 96, 3187-3199 (2018).</li><li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+signaling+in+the+carotid+body+regulates+a+hypoxic+ventilatory+response+through+altering+TASK+channel+expression.">Leptin signaling in the carotid body regulates a hypoxic ventilatory response through altering TASK channel expression.</a> Frontiers in Physiology. 9, 249 (2018).</li><li>Caballero-Eraso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+acts+in+the+carotid+bodies+to+increase+minute+ventilation+during+wakefulness+and+sleep+and+augment+the+hypoxic+ventilatory+response.">Leptin acts in the carotid bodies to increase minute ventilation during wakefulness and sleep and augment the hypoxic ventilatory response.</a> The Journal of Physiology. 591, 151-172 (2018).</li><li>Jun, J. C., Shin, M. K., Yao, Q., Devera, R., Fonti-Bevans, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoneutrality+modifies+the+impact+of+hypoxia+on+lipid+metabolism.">Thermoneutrality modifies the impact of hypoxia on lipid metabolism.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 304, 424-435 (2012).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interrupted+leptin+pathways+on+ventilatory+control.">Impact of interrupted leptin pathways on ventilatory control.</a> Journal of Applied Physiology. 96, 991-998 (2004).</li><li>Pho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+leptin+replacement+on+sleep-disordered+breathing+in+the+leptin-deficient+ob/ob+mouse.">The effect of leptin replacement on sleep-disordered breathing in the leptin-deficient ob/ob mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 120, 78-86 (2016).</li><li>Hernandez, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+whole+body+plethysmography+system+for+the+continuous+characterization+of+sleep+and+breathing+in+a+mouse.">Novel whole body plethysmography system for the continuous characterization of sleep and breathing in a mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 112, 671-680 (2012).</li><li>Powell, F. L., Milsom, W. K., Mitchell, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+domains+of+the+hypoxic+ventilatory+response.">Time domains of the hypoxic ventilatory response.</a> Respiration Physiology. 112, 123-134 (1998).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16, 81-87 (1955).</li><li>Duffin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+ventilatory+response+to+hypoxia.">Measuring the ventilatory response to hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 587, 285-293 (2007).</li><li>Teppema, L. J., Dahan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ventilatory+Response+to+Hypoxia+in+Mammals:+Mechanisms,+Measurement,+and+Analysis.">The Ventilatory Response to Hypoxia in Mammals: Mechanisms, Measurement, and Analysis.</a> Physiological Reviews. 90, 675-754 (2010).</li><li>Nurse, C. A., Fearon, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carotid+body+chemoreceptors+in+dissociated+cell+culture.">Carotid body chemoreceptors in dissociated cell culture.</a> Microscopy Research and Technique. 59, 249-255 (2002).</li><li>Kumar, P., Prabhakar, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+chemoreceptors:+function+and+plasticity+of+the+carotid+body.">Peripheral chemoreceptors: function and plasticity of the carotid body.</a> Comprehensive Physiology. 2, 141-219 (2012).</li><li>Roux, J. C., Peyronnet, J., Pascual, O., Dalmaz, Y., Pequignot, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+and+central+neurochemical+reorganisation+of+O2+chemoreflex+after+carotid+sinus+nerve+transection+in+rat.">Ventilatory and central neurochemical reorganisation of O2 chemoreflex after carotid sinus nerve transection in rat.</a> The Journal of Physiology. 522, 493-501 (2000).</li></ol>

وكان التركيز الرئيسي للدراسة لدينا لدراسة الآثار التنفسية من الإشارات الليبتين في CB. وقد وضعت عده بروتوكولات لتقييم دور ليبتين بطريقه ميكانيكيه. أولا ، تم تحليل مساهمه محدده من CB إلى HVR عن طريق التقدير الدقيق لل HVR خلال أول 2 دقيقه من التعرض لنقص الأكسجين. ثانيا ، تم فحص اهميه CB في تنظيم التح...

أنتجت الخلايا الشحمية هرمون ليبتين يعمل في المهاد لقمع تناول الطعام وزيادة معدل الأيض. وأظهرت الدراسات التي أجريت في مختبرنا1,2 والمحققين الآخرين 3,4 ان ليبتين يزيد من استجابه hypercapnic تنفس (hvr) منع السمنة نقص التهوية في ليبتين نقص السمنة. ومع ذلك, غالبيه الافراد يعانون من السمنة المفرطة لديهم مستويات عاليه من الليبتين البلازما وتظهر مقاومه للآثار الايضيه والتنفسية للهرمون5,6,7,8. مقاومه ليبتين هو متعدد العوامل ، ولكن نفاذيه محدوده من حاجز الدم في الدماغ (BBB) إلى ليبتين يلعب دورا رئيسيا. نقترح ان يعمل الليبتين أدناه BBB في جهاز رئيسي من حساسية نقص الأكسجين المحيطي, الأجسام السباتية (CB), للدفاع عن التنفس في الافراد البدناء. CBs التعبير عن ايزوفورم وظيفية طويلة من مستقبلات ليبتين ، leprب، ولكن دور CB في الآثار التنفسية من ليبتين لم يتم توضيح بما فيه الكفاية9،10.
وكان الهدف من طريقتنا لدراسة تاثير الإشارات ليبتين في CB علي HVR. وكان لدينا الأساس المنطقي لأداء (ا) فقدان الاختبارات الدالة باستخدام الليبتين في الفئران مع الأجسام السباتية السليمة والأجسام السباتية التي تتبعها قياسات HVR. (ب) كسب التجارب الوظيفية في الفئران db/db التي تفتقر leprb، والتي قمنا بقياس hvr في خط الأساس وبعد التعبير عن leprb حصرا في CB. وكان الاستفادة من تقنياتنا ان أجرينا جميع التجارب لدينا في الفئران غير المقيدة غير التخدير اثناء النوم واليقظة. اجري المحققون السابقون تجاربهم تحت التخدير9 أو لم يقيسوا اثار الليبتين اثناء النوم10. الاضافه إلى ذلك ، دراستنا هي الاولي التي تستخدم مكسبا فريدا من نهج وظيفة مع التعبير LepRb انتقائية في CB الموصوفة أعلاه.
في السياق العام ، يمكن تعميم نهجنا علي المستقبلات الأخرى المعرب عنها في CB ودورها في حساسية نقص الأكسجين. يمكن للمحققين ضخ الاربطه إلى مستقبلات الاهتمام وقياس HVR في خط الأساس وبعد denervation CB. وكنهج مكمل ، يمكن المبالغة في التعبير عن مستقبلات الفائدة في قياسات CB و HVR التي يمكن اجراؤها قبل وبعد الإفراط في استخدام التكنولوجيا الموصوفة في هذه المخطوطة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS (pH 7.4)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-Lacz</td>
			<td>Dr. Christopher Rhodes (University of Chicago)</td>
			<td></td>
			<td>1x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-LepRb-GFP</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>ADV-263380</td>
			<td>2-5x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic cart</td>
			<td>Atlantic Biomedical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Products Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Gauze Sponges</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>db/db</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000697</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spring Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus Collar Sensor</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td>015022-2</td>
			<td>Medium Collar Clip Special 7&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Whole Body Plethysmography Chamber</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td>PLY3211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio Care Plus Incubator</td>
			<td>Ohmeda</td>
			<td>HCHD000173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>501753-G</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump</td>
			<td>Alzet</td>
			<td>1003D</td>
			<td>1ul per hour, 3 days</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Leptin protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>498-OB-05M</td>
			<td>5mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>RICCA Chemical</td>
			<td>7210-16</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Suture</td>
			<td>DemeTech</td>
			<td>DT-639-1</td>
			<td>Silk, size 6-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td>Innovative Calibration Solutions (INNOCAL)</td>
			<td>EW 20250-91</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing

هرمون ليبتين المنتجة الخلايا الشحمية هو منبه الجهاز التنفسي قويه ، والتي قد تلعب دورا هاما في الدفاع عن وظيفة الجهاز التنفسي في السمنة. الأجسام السباتية (CB) ، وهو الجهاز الرئيسي للحساسية الطرفية نقص الأكسجين ، والتعبير عن ايزوفورم وظيفية طويلة من مستقبلات الليبتين (LepRb) ولكن لم يتم توضيح دور الإشارات الليبتين في السيطرة علي التنفس تماما. درسنا استجابه تنفس نقص الأكسجين (HVR) (1) في الفئران C57BL/6J قبل وبعد ضخ ليبتين في خط الأساس وبعد denervation CB; (2) في leprb-نقص السمنة db/db الفئران في خط الأساس وبعد التعبير الفوقي leprb في CBs. في C57BL/6J الفئران ، وزيادة الليبتين HVR وأثار ليبتين علي HVR تم إلغاؤها بواسطة denervation CB. في db/db الفئران ، التعبير leprb في CB المضافة hvr. ولذلك ، نستنتج ان ليبتين يعمل في CB لزيادة الاستجابات لنقص الأكسجين.

التسريب المستمر من ليبتين زيادة كبيره HVR في الفئران C57BL/6J الهزيل من 0.23 إلى 0.31 mL/min/g/ΔFiO2 (P < 0.001 ، الشكل 2)11. ألغيت CSND الزيادة الناجمة عن الليبتين في HVR (الشكل 2) ، في حين لم يلاحظ اي اثار مخففه من csnd علي hvr في مجموعه جراحه الشام بعد ضخ ليبتين.
<p clas...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing at JoVE.com

Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing

تركز دراستنا علي اثار الليبتين في الجسم السباتي (CB) علي استجابه تنفس نقص الأكسجين (HVR). قمنا بتنفيذ تجارب "فقدان الوظيفة" قياس تاثير الليبتين علي hvr بعد تعصيب CB و ' كسب وظيفة ' التجارب قياس hvr بعد التعبير المفرط من مستقبلات الليبتين في CB.

النهج التجريبي لفحص الإشارات الليبتين في الأجسام السباتية وأثارها علي التحكم في التنفس

An adipocyte-produced hormone leptin is a potent respiratory stimulant, which may play an important role in defending respiratory function in obesity. The ...

يمكن استخدام بروتوكولنا لفحص الآثار التنفسية لللبتين على الجسم السباتي في التحكم في التنفس chemoreflex المحيطي ، والاستجابات الفسيولوجية لنقص الأكسجة. يمكننا أيضا تقييم آثار فقدان وكسب وظيفة الجسم السباتي باستخدام جراحية والكيميائية denervation وtransfection الفيروس الغدي على التوالي. قبل البدء في الإجراء ، وقياس درجة الحرارة داخل العرف جعل غرفة البلازماغروفيت الجسم كله ، وقياس الرطوبة النسبية للمختبر.بعد ذلك، قياس وزن الجسم ودرجة حرارة المستقيم من الماوس التجريبي. ضع الفأر داخل الغرفة ووضع طوق oximeter حول عنق حلق الحيوان. وتأكد من ختم الغرفة تماما لتجنب تسرب الهواء.انتظر حوالي 30 دقيقة حتى يكون الماوس هادئًا وال chamber هو في حجم ثابت. قبل البدء في تسجيل إشارات الجهاز التنفسي وتشبع الأكسجين المحيطي في normoxia. بعد 20 دقيقة من نورموكسيا، يعرض الحيوان لتدفق الغاز المختلط المستمر من 10٪ من الأكسجين و 3٪ ثاني أكسيد الكربون.وتبدأ في تسجيل الدورة الأولى من نقص الأكسجة الحادة في إشارات الجهاز التنفسي وتشبع الأكسجين المحيطي. خلال أول 30 ثانية من نقص الأكسجة، فتح اثنين من المنافذ الجانبية الصغيرة في قاعدة الغرفة للسماح في المقابس من الغازات مزيج. بعد ال 30 ثانية الأولى، أغلق أحد المنافذ الجانبية الصغيرة للغرفة وتواصل التسجيل في نقص الأكسجة المستمر عند 10٪ من جزء الأكسجين المستوحاة لمدة خمس دقائق.في نهاية علاج نقص الأكسجة ، قم بتبديل مصدر التدفق لإعادة تعريض الماوس إلى هواء الغرفة والسماح للحيوان بالتعافي في نورموكسيا لمدة 30 دقيقة على الأقل قبل بدء التحليل التالي. في نهاية التجربة، قم بتوصيل حقنة في أحد المنافذ الجانبية الصغيرة في قاعدة الغرفة وحقن ملليلتر واحد من هواء الغرفة في غرفة التصوير البلثوغرافي للدم بأكملها ثلاث مرات لمعايرة الغرفة. بعد تدفق الثالثة، وقياس درجة الحرارة في الغرفة مع الحيوان لا يزال داخل والغرفة لا تزال مغلقة.ثم، افتح الغرفة وقياس درجة حرارة المستقيم من الفأر قبل إعادة الحيوان إلى قفصها المنزل. لإزالة جراحيا من العصب الجيوب الأنفية السباتية، وإدارة المسكنات إلى الماوس التخدير، وإزالة الشعر في منطقة البطن من الرقبة. تطهير الجلد المكشوف مع البيتادين والكحول وتطبيق مرهم على عيون الحيوان.بعد إجراء شق في منتصف الخط، وإزالة الأنسجة الضامة والشحمية لفضح تشعب الشرايين السباتي المشترك وتحديد العصب hypoglossal. ارفع العصب الهافوغلوزالي لفضح العصب البلعومي السفلي مباشرة واستخدام مقص الربيع الصغير لتشريح الأعصاب الجيبية السباتية بشكل ثنائي. عندما تم الكشف عن الهيئات السباتية، بلطف ميكرولتر واحد من الفيروس الغدي المناسب في أربعة ميكرولترات من مصفوفة ماتريجل السائلة على الجليد، لكل جانب، وتطبيق خمسة ميكرولترات من التعليق الفيروسي لمنطقة الجسم السباتي ثنائيا.انتظر دقيقتين إلى ثلاث دقائق حتى ترسخت مصفوفة Matrigel السائلة قبل إغلاق الشق مع خياطة حريرية 6-0 وإدارة ملليلتر واحد من تحت الجلد الملحي الطبيعي. ثم منزل الماوس في غرفة الانتعاش مع الرصد حتى إعادة شغل القص قبل إعادة الحيوان إلى قفص المنزل. التسريب المستمر لللبتين يزيد بشكل كبير من استجابة التهوية نقص الأكسجة في الفئران C57BL/6 العجاف في حين أن تشريح العصب الجيوب الأنفية السباتي يلغي هذه الزيادة الناجمة عن اللبتين.كما هو متوقع ، لا توجد آثار مخففة لتشريح العصب الجيبي السباتي على استجابة التهوية تحت الأكسجة لوحظت في مجموعة الجراحة الصورية بعد ضخ اللبتين. تحريض من اللبتين مستقبلات تعبير isoform طويلة في الهيئات السباتية مستقبلات اللبتين طويلة isoform ناقص بدين db / DB الفئران النتائج في زيادة كبيرة في استجابة التهوية نقص الأكسجة. في حين بعد transfection مع السيطرة لاكز الفيروس الأدينو ، ويلاحظ أي تغيير.هذه التقنيات تسمح بتحليل دور الهيئات السباتية في chemoreflex المحيطية وآثار اللبتين على الهيئات السباتية في السيطرة على التنفس.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Biology

Unit 1

The Respiratory System

SCIENTISTS IN ACTION

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

خلق بيئات الغازية محددة لدراسة تأثير نقص الأكسجة في<em&gt; C. ايليجانس</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

تحفيز الميكانيكية التي يسببها الكالسيوم انتشار الموجات في الخلية monolayers: مثال من الأبقار الخلايا البطانية القرنية

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

The ChroP Approach Combines ChIP and Mass Spectrometry to Dissect Locus-specific Proteomic Landscapes of Chromatin

النهج ChroP يجمع بين الشذرة والطيف الكتلي لتشريح المناظر الطبيعية البروتيومية الحالة رقم محدد من الكروماتين

Chromatin is a highly dynamic nucleoprotein complex made of DNA and proteins that controls various DNA-dependent processes. Chromatin structure and ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

طريقة لتقييم الآثار المترتبة على مجموعة من موجات وشدة الأحمر / الأشعة تحت الحمراء القريبة العلاج بالضوء على الإجهاد التأكسدي<em&gt; في المختبر</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

الكميات من البطانية الإلتصاق الخليوي<em&gt; في المختبر</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

الفجوة صلي بين الخلايا الاتصالات: العلامات البيولوجية الوظيفية لتقييم التأثيرات السلبية للالسميات والسموم، والصحة فوائد المنتجات الطبيعية

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells

يقترن تصوير البروتين G مستقبلات بوساطة الكيميائي والأحداث يشير في خلايا HL60 العدلات مثل

Eukaryotic cells sense and move towards a chemoattractant gradient, a cellular process referred as chemotaxis. Chemotaxis plays critical roles in many ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

وهناك طريقة لتقييم بكتريوسين الآثار على الأمعاء الدقيقة من الفئران

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

الإنتاجية المتوسطة فحص فحوصات لتقييم الآثار على Ca2 +-إشارات ورد فعل أكروسومي في الحيوانات المنوية البشرية

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior

خط أنابيب باستخدام ثنائي في القطب الرحمي لاستجواب التأثيرات الوراثية على سلوك القوارض

As genome-wide association studies shed light on the heterogeneous genetic underpinnings of many neurological diseases, the need to study the contribution ...