Name: experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing
Uploaded: 2019-10-25T13:30:00
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R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025

Tous les protocoles expérimentaux ont été approuvés par le Comité institutionnel de soins et d'utilisation des animaux (MO18M211).
1. Infusion de leptin
REMARQUE: Afin d'examiner l'effet de la leptine sur la respiration, nous avons infusé la leptine sous-cutanée dans les souris maigres c57BL/6J par une pompe osmotique pour augmenter les niveaux circulants de leptine à ceux observés chez les souris obèses.
<ol><li>
Préparation de...

<ol>
	<li>O'donnell, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+prevents+respiratory+depression+in+obesity.">Leptin prevents respiratory depression in obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+gender+exacerbates+respiratory+depression+in+leptin-deficient+obesity.">Female gender exacerbates respiratory depression in leptin-deficient obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164, 1470-1475 (2001).</li><li>Bassi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+leptin+replacement+enhances+chemorespiratory+responses+in+leptin-deficient+mice+independent+of+changes+in+body+weight.">Central leptin replacement enhances chemorespiratory responses in leptin-deficient mice independent of changes in body weight.</a> Pflu&#776;gers Archiv: European Journal of Physiology. 464, 145-153 (2012).</li><li>Inyushkina, E. M., Merkulova, N. A., Inyushkin, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+the+respiratory+activity+of+leptin+at+the+level+of+the+solitary+tract+nucleus.">Mechanisms of the respiratory activity of leptin at the level of the solitary tract nucleus.</a> Neuroscience and Behavioral Physiology. 40, 707-713 (2010).</li><li>Considine, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+immunoreactive-leptin+concentrations+in+normal-weight+and+obese+humans.">Serum immunoreactive-leptin concentrations in normal-weight and obese humans.</a> New England Journal of Medicine. 334, 292-295 (1996).</li><li>Maffei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+levels+in+human+and+rodent:+measurement+of+plasma+leptin+and+ob+RNA+in+obese+and+weight-reduced+subjects.">Leptin levels in human and rodent: measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects.</a> Nature Medicine. 1, 1155-1161 (1995).</li><li>Phipps, P. R., Starritt, E., Caterson, I., Grunstein, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+serum+leptin+with+hypoventilation+in+human+obesity.">Association of serum leptin with hypoventilation in human obesity.</a> Thorax. 57, 75-76 (2002).</li><li>Berger, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+and+Leptin+Resistance+in+the+Pathogenesis+of+Obstructive+Sleep+Apnea:+A+Possible+Link+to+Oxidative+Stress+and+Cardiovascular+Complications.">Leptin and Leptin Resistance in the Pathogenesis of Obstructive Sleep Apnea: A Possible Link to Oxidative Stress and Cardiovascular Complications.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018, 5137947 (2018).</li><li>Ribeiro, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+blunts+the+effects+of+leptin+on+ventilation+and+on+carotid+body+activity.">High fat diet blunts the effects of leptin on ventilation and on carotid body activity.</a> The Journal of Physiology. 96, 3187-3199 (2018).</li><li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+signaling+in+the+carotid+body+regulates+a+hypoxic+ventilatory+response+through+altering+TASK+channel+expression.">Leptin signaling in the carotid body regulates a hypoxic ventilatory response through altering TASK channel expression.</a> Frontiers in Physiology. 9, 249 (2018).</li><li>Caballero-Eraso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+acts+in+the+carotid+bodies+to+increase+minute+ventilation+during+wakefulness+and+sleep+and+augment+the+hypoxic+ventilatory+response.">Leptin acts in the carotid bodies to increase minute ventilation during wakefulness and sleep and augment the hypoxic ventilatory response.</a> The Journal of Physiology. 591, 151-172 (2018).</li><li>Jun, J. C., Shin, M. K., Yao, Q., Devera, R., Fonti-Bevans, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoneutrality+modifies+the+impact+of+hypoxia+on+lipid+metabolism.">Thermoneutrality modifies the impact of hypoxia on lipid metabolism.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 304, 424-435 (2012).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interrupted+leptin+pathways+on+ventilatory+control.">Impact of interrupted leptin pathways on ventilatory control.</a> Journal of Applied Physiology. 96, 991-998 (2004).</li><li>Pho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+leptin+replacement+on+sleep-disordered+breathing+in+the+leptin-deficient+ob/ob+mouse.">The effect of leptin replacement on sleep-disordered breathing in the leptin-deficient ob/ob mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 120, 78-86 (2016).</li><li>Hernandez, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+whole+body+plethysmography+system+for+the+continuous+characterization+of+sleep+and+breathing+in+a+mouse.">Novel whole body plethysmography system for the continuous characterization of sleep and breathing in a mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 112, 671-680 (2012).</li><li>Powell, F. L., Milsom, W. K., Mitchell, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+domains+of+the+hypoxic+ventilatory+response.">Time domains of the hypoxic ventilatory response.</a> Respiration Physiology. 112, 123-134 (1998).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16, 81-87 (1955).</li><li>Duffin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+ventilatory+response+to+hypoxia.">Measuring the ventilatory response to hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 587, 285-293 (2007).</li><li>Teppema, L. J., Dahan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ventilatory+Response+to+Hypoxia+in+Mammals:+Mechanisms,+Measurement,+and+Analysis.">The Ventilatory Response to Hypoxia in Mammals: Mechanisms, Measurement, and Analysis.</a> Physiological Reviews. 90, 675-754 (2010).</li><li>Nurse, C. A., Fearon, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carotid+body+chemoreceptors+in+dissociated+cell+culture.">Carotid body chemoreceptors in dissociated cell culture.</a> Microscopy Research and Technique. 59, 249-255 (2002).</li><li>Kumar, P., Prabhakar, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+chemoreceptors:+function+and+plasticity+of+the+carotid+body.">Peripheral chemoreceptors: function and plasticity of the carotid body.</a> Comprehensive Physiology. 2, 141-219 (2012).</li><li>Roux, J. C., Peyronnet, J., Pascual, O., Dalmaz, Y., Pequignot, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+and+central+neurochemical+reorganisation+of+O2+chemoreflex+after+carotid+sinus+nerve+transection+in+rat.">Ventilatory and central neurochemical reorganisation of O2 chemoreflex after carotid sinus nerve transection in rat.</a> The Journal of Physiology. 522, 493-501 (2000).</li></ol>

L'objectif principal de notre étude était d'examiner les effets respiratoires de la signalisation de leptine dans le CB. Plusieurs protocoles ont été élaborés pour évaluer le rôle de la leptine d'une manière mécaniste. Tout d'abord, la contribution spécifique de CB au HVR a été analysée par la quantification soigneuse du HVR pendant les 2 premières min d'exposition hypoxique. Deuxièmement, la pertinence de cb dans la régulation de la leptine du contrôle de la respiration a été examinée par deux appro...

Un adipocyte produit des actes d'hormone de leptine dans l'hypothalamus pour supprimer la prise de nourriture et augmenter le taux métabolique. Les études exécutées dans notre laboratoire1,2 et par d'autres investigateurs3,4 ont prouvé que le leptine augmente la réponse ventilatoire hypercapnique (HVR) empêchant l'hypoventilation d'obésité dans la leptine l'obésité déficiente. Cependant, une majorité d'individus obèses ont des niveaux élevés de leptine de plasma et démontrent la résistance aux effets métaboliques et respiratoires de l'hormone5,6,7,8. La résistance à la leptine est multifactorielle, mais la perméabilité limitée de la barrière hémato-encéphalique (BBB) à la leptine joue un rôle majeur. Nous proposons que la leptine agit au-dessous de BBB dans un organe clé de la sensibilité hypoxique périphérique, les corps carotides (CB), pour défendre la respiration dans les individus obèses. Les CB expriment le long isoforme fonctionnel du récepteur de lepin, LepRb, mais le rôle de CB dans les effets respiratoires de la leptine n'a pas été suffisamment élucidé9,10.
Le but de notre méthode était d'examiner l'effet de la signalisation de leptine dans le CB sur HVR. Notre justification était d'effectuer (a) la perte des expériences de fonction infusant la leptine chez les souris avec les corps carotides intacts et les corps carotides denervated suivis des mesures de HVR ; b) gain d'expériences fonctionnelles chez des souris db/db dépourvues de LepRb, dans lesquelles nous avons mesuré le HVR à la ligne de base et après l'expression de LepRb exclusivement en CB. L'avantage de nos techniques était que nous avons effectué toutes nos expériences chez des souris non anésiles non retenues pendant le sommeil et l'éveil. Les chercheurs précédents ont effectué leurs expériences sous anesthésie9 ou n'ont pas mesuré les effets de la leptine pendant le sommeil10. En outre, notre étude est la première à utiliser un gain unique de l'approche de fonction avec l'expression sélective de LepRb dans CB décrit ci-dessus.
Dans le contexte général, notre approche peut être généralisée à d'autres récepteurs exprimés dans CB et leur rôle dans la sensibilité hypoxique. Les investigateurs peuvent infuser un ligand à un récepteur d'intérêt et mesurer le HVR à la ligne de base et après la dénervation de CB. En tant qu'approche complémentaire, un récepteur d'intérêt peut être surexprimé dans les mesures CB et HVR peuvent être effectuées avant et après la surexpression en utilisant notre technologie décrite dans ce manuscrit.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS (pH 7.4)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-Lacz</td>
			<td>Dr. Christopher Rhodes (University of Chicago)</td>
			<td></td>
			<td>1x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-LepRb-GFP</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>ADV-263380</td>
			<td>2-5x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic cart</td>
			<td>Atlantic Biomedical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Products Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Gauze Sponges</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>db/db</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000697</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spring Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus Collar Sensor</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td>015022-2</td>
			<td>Medium Collar Clip Special 7&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Whole Body Plethysmography Chamber</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td>PLY3211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio Care Plus Incubator</td>
			<td>Ohmeda</td>
			<td>HCHD000173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>501753-G</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump</td>
			<td>Alzet</td>
			<td>1003D</td>
			<td>1ul per hour, 3 days</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Leptin protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>498-OB-05M</td>
			<td>5mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>RICCA Chemical</td>
			<td>7210-16</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Suture</td>
			<td>DemeTech</td>
			<td>DT-639-1</td>
			<td>Silk, size 6-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td>Innovative Calibration Solutions (INNOCAL)</td>
			<td>EW 20250-91</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing

Une hormone produite par l'adipocyte la leptine est un stimulant respiratoire puissant, qui peut jouer un rôle important dans la défense de la fonction respiratoire dans l'obésité. Les corps carotides (CB), un organe clé de la sensibilité hypoxique périphérique, expriment le long isoforme fonctionnel du récepteur de la leptine (LepRb) mais le rôle de la signalisation de lepin dans le contrôle de la respiration n'a pas été entièrement élucidé. Nous avons examiné la réponse ventilatoire hypoxique (HVR) (1) chez les souris C57BL/6J avant et après l'infusion de leptine à la ligne de base et après la dénervation de CB ; (2) dans LepRb-déficients obèses souris db/db à la ligne de base et après le lepRb surexpression dans les CBs. Dans les souris de C57BL/6J, le leptin a augmenté HVR et les effets de la leptine sur HVR ont été supprimés par la dénervation de CB. Chez les souris db/db, l'expression lepRb en CB a augmenté le HVR. Par conséquent, nous concluons que la leptine agit dans CB pour augmenter les réponses à l'hypoxie.

L'infusion continue de leptine a considérablement augmenté le HVR chez les souris maigres C57BL/6J de 0,23 à 0,31 ml/min/g/FiO2 (P lt; 0,001, figure 2)11. CSND a aboli l'augmentation induite par la leptine dans HVR (figure 2), tandis qu'aucun effet atténuant de CSND sur HVR n'a été observé dans le groupe de chirurgie de faux après perfusion de leptine.
L'expression de LepRb dans le...

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Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing

Notre étude se concentre sur les effets de la signalisation de leptine dans le corps carotide (CB) sur la réponse ventilatoire hypoxique (HVR). Nous avons effectué des expériences de « perte de fonction » mesurant l'effet de la leptine sur le HVR après la dénervation CB et les expériences de « gain de fonction » mesurant le HVR après surexpression du récepteur de la leptine dans CB.

Approche expérimentale pour examiner la signalisation de leptine dans les corps carotides et ses effets sur le contrôle de la respiration

An adipocyte-produced hormone leptin is a potent respiratory stimulant, which may play an important role in defending respiratory function in obesity. The ...

Notre protocole peut être utilisé pour examiner les effets respiratoires de la leptine sur le corps carotide dans le contrôle respiratoire chemoreflex périphérique, et les réponses physiologiques à l’hypoxie. Nous pouvons également évaluer les effets de la perte et du gain de la fonction carotide de corps utilisant la dénervation chirurgicale et chimique et la transfection d’adénovirus respectivement. Avant de commencer l’intervention, mesurez la température à l’intérieur d’une chambre plasthemagrophy sur mesure et mesurez l’humidité relative du laboratoire.Ensuite, mesurez le poids corporel et la température rectale de la souris expérimentale. Placez la souris à l’intérieur de la chambre et placez un collier d’oxymètre autour du cou rasé de l’animal. Et assurez-vous de sceller complètement la chambre pour éviter les fuites d’air.Attendez environ 30 minutes jusqu’à ce que la souris soit silencieuse et que la chambre soit à volume constant. Avant de commencer à enregistrer les signaux respiratoires et la saturation périphérique en oxygène à la normoxie. Après 20 minutes de normoxie, exposer l’animal à un flux constant de gaz mixte de 10% d’oxygène et 3% de dioxyde de carbone.Et commencer à enregistrer le premier cycle de l’hypoxie aiguë dans les signaux respiratoires et la saturation périphérique en oxygène. Pendant les 30 premières secondes de l’hypoxie, ouvrez les deux petits ports latéraux à la base de la chambre pour permettre les bouchons des gaz de mélange. Après les 30 premières secondes, fermer l’un des petits ports latéraux de la chambre et continuer à enregistrer à une hypoxie constante à 10% de la fraction de l’oxygène inspiré pendant cinq minutes.À la fin du traitement par hypoxie, changer la source d’écoulement pour réexposer la souris à l’air de la pièce et permettre à l’animal de récupérer à la normoxie pendant au moins 30 minutes avant de commencer l’analyse suivante. À la fin de l’expérience, branchez une seringue dans l’un des petits ports latéraux à la base de la chambre et injectez trois fois un millilitre d’air de pièce dans la chambre de pléthysmographie de sang entier pour calibrer la chambre. Après la troisième chasse d’eau, mesurer la température dans la chambre avec l’animal encore à l’intérieur et la chambre encore fermée.Ensuite, ouvrez la chambre et mesurez la température rectale de la souris avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine. Pour la dénervation chirurgicale du nerf carotide de sinus, administrez l’analgésie à la souris d’anesthésie, et enlevez les cheveux à la région ventrale du cou. Désinfectez la peau exposée avec de la bétadine et de l’alcool et appliquez de l’onguent sur les yeux de l’animal.Après avoir fait une incision médiane, enlever les tissus conjonctifs et adipeux pour exposer la bifurcation des artères carotides communes et identifier le nerf hypoglossal. Soulevez le nerf hypoglossal pour exposer le nerf glossopharyngeal immédiatement au-dessous et employer des ciseaux de micro-ressort pour disséquer bilatéralement les nerfs carotides de sinus. Lorsque les corps carotides ont été exposés, suspendre doucement un microlitre de l’adénovirus approprié dans quatre microlitres de matrice liquide Matrigel sur la glace, de chaque côté, et appliquer cinq microlitres de la suspension virale à la zone du corps carotide bilatéralement.Attendez deux à trois minutes jusqu’à ce que la matrice liquide Matrigel se soit solidifiée avant de fermer l’incision avec une suture de soie 6-0 et d’administrer un millilitre de solution saline normale sous-cutanée. Ensuite, abritez la souris dans une chambre de récupération avec surveillance jusqu’à la récumbence sternale avant de retourner l’animal dans sa cage d’origine. L’infusion continue de leptin augmente de manière significative la réponse ventilatoire hypoxique chez les souris maigres de C57BL/6 tandis que la dissection carotide de nerf de sinus abolit cette augmentation induite par le leptin.Comme prévu, aucun effet atténuant de la dissection carotide de nerf de sinus sur la réponse ventilatoire hypoxique n’est observé dans le groupe de chirurgie simulée après infusion de leptin. L’induction de l’expression isoforme longue de récepteur de leptin dans les corps carotides du récepteur de leptin de longues souris obèses déficientes db/db d’isoforme a comme conséquence une augmentation significative de la réponse ventilatoire hypoxique. Alors qu’après la transfection avec l’adénovirus lacz de contrôle, aucun changement n’est observé.Ces techniques permettent d’analyser le rôle des corps carotides dans le chemoreflex périphérique et les effets de la leptine sur les corps carotides dans le contrôle des respirations.

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