Name: experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing
Uploaded: 2019-10-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing at JoVE.com

R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025

כל הפרוטוקולים הניסיוניים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים (MO18M211).
1. אינפוזיה לפטין
הערה: כדי לבחון את ההשפעה של לפטין על נשימה, התת-עורי לפטין C57BL/6J עכברים על ידי משאבת אוסמוטי להעלות במחזור רמות לפטין לאלה שנצפו עכברים שמנים.
<ol><li>
?...

<ol>
	<li>O'donnell, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+prevents+respiratory+depression+in+obesity.">Leptin prevents respiratory depression in obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+gender+exacerbates+respiratory+depression+in+leptin-deficient+obesity.">Female gender exacerbates respiratory depression in leptin-deficient obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164, 1470-1475 (2001).</li><li>Bassi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+leptin+replacement+enhances+chemorespiratory+responses+in+leptin-deficient+mice+independent+of+changes+in+body+weight.">Central leptin replacement enhances chemorespiratory responses in leptin-deficient mice independent of changes in body weight.</a> Pflu&#776;gers Archiv: European Journal of Physiology. 464, 145-153 (2012).</li><li>Inyushkina, E. M., Merkulova, N. A., Inyushkin, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+the+respiratory+activity+of+leptin+at+the+level+of+the+solitary+tract+nucleus.">Mechanisms of the respiratory activity of leptin at the level of the solitary tract nucleus.</a> Neuroscience and Behavioral Physiology. 40, 707-713 (2010).</li><li>Considine, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+immunoreactive-leptin+concentrations+in+normal-weight+and+obese+humans.">Serum immunoreactive-leptin concentrations in normal-weight and obese humans.</a> New England Journal of Medicine. 334, 292-295 (1996).</li><li>Maffei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+levels+in+human+and+rodent:+measurement+of+plasma+leptin+and+ob+RNA+in+obese+and+weight-reduced+subjects.">Leptin levels in human and rodent: measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects.</a> Nature Medicine. 1, 1155-1161 (1995).</li><li>Phipps, P. R., Starritt, E., Caterson, I., Grunstein, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+serum+leptin+with+hypoventilation+in+human+obesity.">Association of serum leptin with hypoventilation in human obesity.</a> Thorax. 57, 75-76 (2002).</li><li>Berger, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+and+Leptin+Resistance+in+the+Pathogenesis+of+Obstructive+Sleep+Apnea:+A+Possible+Link+to+Oxidative+Stress+and+Cardiovascular+Complications.">Leptin and Leptin Resistance in the Pathogenesis of Obstructive Sleep Apnea: A Possible Link to Oxidative Stress and Cardiovascular Complications.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018, 5137947 (2018).</li><li>Ribeiro, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+blunts+the+effects+of+leptin+on+ventilation+and+on+carotid+body+activity.">High fat diet blunts the effects of leptin on ventilation and on carotid body activity.</a> The Journal of Physiology. 96, 3187-3199 (2018).</li><li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+signaling+in+the+carotid+body+regulates+a+hypoxic+ventilatory+response+through+altering+TASK+channel+expression.">Leptin signaling in the carotid body regulates a hypoxic ventilatory response through altering TASK channel expression.</a> Frontiers in Physiology. 9, 249 (2018).</li><li>Caballero-Eraso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+acts+in+the+carotid+bodies+to+increase+minute+ventilation+during+wakefulness+and+sleep+and+augment+the+hypoxic+ventilatory+response.">Leptin acts in the carotid bodies to increase minute ventilation during wakefulness and sleep and augment the hypoxic ventilatory response.</a> The Journal of Physiology. 591, 151-172 (2018).</li><li>Jun, J. C., Shin, M. K., Yao, Q., Devera, R., Fonti-Bevans, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoneutrality+modifies+the+impact+of+hypoxia+on+lipid+metabolism.">Thermoneutrality modifies the impact of hypoxia on lipid metabolism.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 304, 424-435 (2012).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interrupted+leptin+pathways+on+ventilatory+control.">Impact of interrupted leptin pathways on ventilatory control.</a> Journal of Applied Physiology. 96, 991-998 (2004).</li><li>Pho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+leptin+replacement+on+sleep-disordered+breathing+in+the+leptin-deficient+ob/ob+mouse.">The effect of leptin replacement on sleep-disordered breathing in the leptin-deficient ob/ob mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 120, 78-86 (2016).</li><li>Hernandez, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+whole+body+plethysmography+system+for+the+continuous+characterization+of+sleep+and+breathing+in+a+mouse.">Novel whole body plethysmography system for the continuous characterization of sleep and breathing in a mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 112, 671-680 (2012).</li><li>Powell, F. L., Milsom, W. K., Mitchell, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+domains+of+the+hypoxic+ventilatory+response.">Time domains of the hypoxic ventilatory response.</a> Respiration Physiology. 112, 123-134 (1998).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16, 81-87 (1955).</li><li>Duffin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+ventilatory+response+to+hypoxia.">Measuring the ventilatory response to hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 587, 285-293 (2007).</li><li>Teppema, L. J., Dahan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ventilatory+Response+to+Hypoxia+in+Mammals:+Mechanisms,+Measurement,+and+Analysis.">The Ventilatory Response to Hypoxia in Mammals: Mechanisms, Measurement, and Analysis.</a> Physiological Reviews. 90, 675-754 (2010).</li><li>Nurse, C. A., Fearon, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carotid+body+chemoreceptors+in+dissociated+cell+culture.">Carotid body chemoreceptors in dissociated cell culture.</a> Microscopy Research and Technique. 59, 249-255 (2002).</li><li>Kumar, P., Prabhakar, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+chemoreceptors:+function+and+plasticity+of+the+carotid+body.">Peripheral chemoreceptors: function and plasticity of the carotid body.</a> Comprehensive Physiology. 2, 141-219 (2012).</li><li>Roux, J. C., Peyronnet, J., Pascual, O., Dalmaz, Y., Pequignot, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+and+central+neurochemical+reorganisation+of+O2+chemoreflex+after+carotid+sinus+nerve+transection+in+rat.">Ventilatory and central neurochemical reorganisation of O2 chemoreflex after carotid sinus nerve transection in rat.</a> The Journal of Physiology. 522, 493-501 (2000).</li></ol>

המוקד העיקרי של המחקר שלנו היה לבחון את תופעות הנשימה של איתות לפטין ב-CB. מספר פרוטוקולים פותחו כדי להעריך את התפקיד של לפטין בצורה מכניסטית. ראשון, התרומה הספציפית של CB ל HVR נותחו על ידי כימות זהיר של HVR במהלך 2 הדקות הראשונות של חשיפה ארוי. שנית, הרלוונטיות של ה-CB בלפטין-בתיווך השליטה בנשימה ...

Adipocyte המיוצר הורמון לפטין פועל ההיפותלמוס לדכא את צריכת המזון ולהגדיל את קצב חילוף החומרים. מחקרים שבוצעו במעבדה שלנו1,2 ועל ידי חוקרים אחרים3,4 הראה כי לפטין מגביר את התגובה היפרקפיניק מאווררים (hvr) מניעת השמנה hypoventilation לפטין השמנה לקויה. עם זאת, רוב האנשים שמנים יש פלזמה גבוהה לפטין רמות ולהפגין עמידות השפעות מטבולית והנשימה של הורמון5,6,7,8. עמידות לפטין הוא רב עצרת, אבל חדירות מוגבלות של מחסום הדם-מוח (BBB) לפטין משחק תפקיד מרכזי. אנו מציעים כי לפטין פועל מתחת BBB באיבר מפתח של רגישות ארוי היקפית, הגופים הראשי (CB), כדי להגן על הנשימה של אנשים שמנים. הלמ ס לבטא את התפקוד הארוך isoform של קולטן לפטין, leprb, אבל התפקיד של CB באפקטי הנשימה של לפטין לא הובהר מספיק9,10.
המטרה של השיטה שלנו היתה לבחון את ההשפעה של לפטין איתות ב-CB על HVR. הרציונל שלנו היה לבצע (a) אובדן של הפונקציה ניסויים החדרת לפטין בעכברים עם גופים העורק שלמים וגופים העורק הראש denervated ואחריו מדידות HVR; (ב) להשיג ניסויים בפונקציה db/db בעכברים חסרים leprb, שבו אנו מדדו hvr בתוכנית הבסיסית ולאחר ביטוי של leprb בלעדית ב-CB. היתרון של הטכניקות שלנו היה שאנחנו ביצעו את כל הניסויים שלנו בעכברים ללא רסן בזמן שינה ועירות. חוקרים קודמים ביצעו את הניסויים שלהם תחת הרדמה9 או לא למדוד את ההשפעות של לפטין במהלך שינה10. בנוסף, המחקר שלנו הוא הראשון לנצל את הרווח הייחודי של גישת הפונקציה עם הביטוי LepRb סלקטיבי ב-CB שתוארו לעיל.
בהקשר הרחב, הגישה שלנו יכולה להיות כללית לקולטנים אחרים המבוטא ב-CB ותפקידם ברגישות ארוי. החוקרים יכולים להחדיר ליגאל ולקולטן של ריבית ולמדוד את HVR בתוכנית הבסיסית ולאחר השעה שימור. כגישה משלימה, ניתן לבטא את קולטן הריבית ב-CB ו-HVR מדידות שניתן לבצע לפני ואחרי ביטוי יתר באמצעות הטכנולוגיה שתוארה בכתב יד זה.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS (pH 7.4)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-Lacz</td>
			<td>Dr. Christopher Rhodes (University of Chicago)</td>
			<td></td>
			<td>1x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-LepRb-GFP</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>ADV-263380</td>
			<td>2-5x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic cart</td>
			<td>Atlantic Biomedical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Products Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Gauze Sponges</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>db/db</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000697</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spring Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus Collar Sensor</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td>015022-2</td>
			<td>Medium Collar Clip Special 7&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Whole Body Plethysmography Chamber</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td>PLY3211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio Care Plus Incubator</td>
			<td>Ohmeda</td>
			<td>HCHD000173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>501753-G</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump</td>
			<td>Alzet</td>
			<td>1003D</td>
			<td>1ul per hour, 3 days</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Leptin protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>498-OB-05M</td>
			<td>5mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>RICCA Chemical</td>
			<td>7210-16</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Suture</td>
			<td>DemeTech</td>
			<td>DT-639-1</td>
			<td>Silk, size 6-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td>Innovative Calibration Solutions (INNOCAL)</td>
			<td>EW 20250-91</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing

הורמון מופק adipocyte הוא ממריץ נשימה חזקה, אשר עשוי לשחק תפקיד חשוב בהגנה על תפקוד הנשימה בהשמנה. הגופים הראשי (CB), איבר מפתח של רגישות ארוי היקפית, לבטא את התפקוד התפקודי ארוך של קולטן לפטין (LepRb) אבל את התפקיד של איתות לפטין בשליטה של נשימה לא הובהר במלואו. בדקנו את התגובה ארוי מאווררים (HVR) (1) ב C57BL/6J עכברים לפני ואחרי לפטין אינפוזיה בתוכנית הבסיסית ולאחר שימור CB; (2) ב- Leprb-שמנים לקויה db/db בעכבר בבסיס ואחרי leprb ביטוי יתר ב-CBs. ב C57BL/6J עכברים, לפטין גדל HVR ואפקטים של לפטין על HVR בוטלו על ידי CB denervation. ב- db/db , ביטוי leprb ב-CB מוגבר את hvr. לכן, אנו מסיקים כי לפטין פועל ב-CB כדי להגדיל את התגובות היפוקסיה.

אינפוזיה רציפה של לפטין גדל באופן משמעותי HVR ב רזה C57BL/6J עכברים מ 0.23 אל 0.31 mL/min/g/ΔFiO2 (P < 0.001, איור 2)11. CSND ביטלה את העלייה לפטין המושרה ב HVR (איור 2), בעוד לא השפעות מחליש של CSND על hvr נצפו בקבוצה ניתוח דמה לאחר לפטין אינפוזיה.
LepRb</sup...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing at JoVE.com

Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing

המחקר שלנו מתמקד בהשפעות של לפטין איתות בגוף העורק (CB) על התגובה ארוי מאווררים (HVR). ביצעת ' אובדן של פונקציה ' ניסויים מדידת ההשפעה של לפטין על HVR לאחר האצת CB ו ' להרוויח של פונקציה ' ניסויים מדידה HVR לאחר יתר ביטוי של קולטן לפטין ב-CB.

גישה ניסויית לבדיקת איתות לפטין בגוף העורק והשפעותיו על השליטה בנשימה

An adipocyte-produced hormone leptin is a potent respiratory stimulant, which may play an important role in defending respiratory function in obesity. The ...

ניתן להשתמש בפרוטוקול שלנו כדי לבחון את ההשפעות הנשימתיות של לפטין על גוף התת-עורקים בבקרת הנשימה ההיקפית של צ'מורפלקס, ותגובות פיזיולוגיות להיפוקסיה. אנחנו יכולים גם להעריך את ההשפעות של אובדן ותפקוד הגוף התרדמה באמצעות denervation כירורגית וכימית transfection אדנווירוס בהתאמה. לפני תחילת ההליך, למדוד את הטמפרטורה בתוך תא פלסתמגרופיה הגוף כולו בהתאמה אישית, ולמדוד את הלחות היחסית של המעבדה.לאחר מכן, למדוד את משקל הגוף ואת הטמפרטורה רקטלי של העכבר הניסיוני. מניחים את העכבר בתוך התא וממקמים צווארון אוקסימטר סביב הצוואר המגולח של החיה. ואל תאטמו לחלוטין את התא כדי להימנע מדליפת אוויר.המתן כ- 30 דקות עד שהעכבר יהיה שקט והתא יהיה בנפח קבוע. לפני שמתחילים להקליט את אותות הנשימה ואת רוויית החמצן ההיקפי בנורוקסיה. לאחר 20 דקות של נורמוקסיה, לחשוף את החיה לזרימת גז מעורבת מתמדת של 10% חמצן ו 3% פחמן דו חמצני.ולהתחיל להקליט את המחזור הראשון של היפוקסיה חריפה באותות הנשימה ורווית חמצן היקפית. במהלך 30 השניות הראשונות של היפוקסיה, פתח את שתי היציאות הצדדיות הקטנות בבסיס התא כדי לאפשר תקעים של גזי המיקס. לאחר 30 השניות הראשונות, סגרו את אחת היציאות הצדדיות הקטנות של התא והמשיכו להקליט בהיפוקסיה מתמדת ב-10% מהשבריר של חמצן מעורר השראה למשך חמש דקות.בסוף הטיפול בהיפוקסיה, החלף את המקור בזרימה כדי לחשוף מחדש את העכבר לאוויר בחדר ולאפשר לחיה להתאושש בנורמוקסיה לפחות 30 דקות לפני תחילת הניתוח הבא. בסוף הניסוי, חבר מזרק לאחד היציאות הצדדיות הקטנות בבסיס התא והזרק מיליליטר אוויר לחדר לתוך תא הדם כולו שלוש פעמים כדי לכייל את התא. לאחר הסומק השלישי, למדוד את הטמפרטורה בתא עם החיה עדיין בפנים ואת התא עדיין סגור.לאחר מכן, לפתוח את התא ולמדוד את הטמפרטורה רקטלי של העכבר לפני החזרת החיה לכלוב הבית שלה. עבור denervation כירורגית של עצב הסינוס התת,לנהל משככי כאבים לעכבר הרדמה, ולהסיר את השיער באזור הגחוני של הצוואר. לחטא את העור החשוף עם Betadine ואלכוהול ולהחיל משחה על העיניים של החיה.לאחר ביצוע חתך קו האמצע, להסיר את רקמות החיבור והשומן כדי לחשוף את bifurcation של העורקים הראשיים הנפוצים ולזהות את העצב ההיפוגלוסל. הרם את עצב ההיפוגלוסל כדי לחשוף את עצב ההברה מיד מתחת ולהשתמש במספריים מיקרו-אביביים כדי לנתח באופן דו-צדדי את עצבי הסינוסים התת-מדר. כאשר הגופות התרדמה נחשפו, בעדינות להשעות microliter אחד של אדנווירוס המתאים בארבעה microliters של מטריצת Matrigel נוזלי על הקרח, לכל צד, ולהחיל חמישה microliters של ההשעיה נגיפית על אזור הגוף התרדמה דו צדדית.המתן שתיים עד שלוש דקות עד מטריצת Matrigel נוזלי התגבש לפני סגירת החתך עם תפר משי 6-0 וניהול מיליליטר אחד של מלוחים נורמליים תת עורית. לאחר מכן לשכן את העכבר בתא התאוששות עם ניטור עד שיקום עצם החזה לפני החזרת החיה לכלוב הבית שלה. עירוי מתמשך של לפטין מגדיל באופן משמעותי את התגובה האוורור היפוקסי בעכברים רזים C57BL/6 בעוד ניתוח עצבי סינוס התרדמה מבטל את הגידול המושרה לפטין זה.כצפוי, אין השפעות מזרזות של ניתוח עצבי סינוס התרדמה על תגובת האוורור היפוקסית נצפו בקבוצת הניתוחים המזויפים לאחר עירוי לפטין. אינדוקציה של קולטן לפטין ביטוי isoform ארוך בגופים התרדמה של קולטן לפטין ארוך isoform חסר שמנים db / db עכברים תוצאות עלייה משמעותית בתגובה אוורור היפוקסי. בעוד לאחר transfection עם שליטה LacZ אדנווירוס, אין שינוי הוא ציין.טכניקות אלה מאפשרות ניתוח של תפקידם של גופים התת-ראשיים בצ'מורפלקס ההיקפי ואת ההשפעות של לפטין על גופים התת-ראשיים בשליטה על הנשימה.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Biology

Unit 1

The Respiratory System

SCIENTISTS IN ACTION

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

יצירת סביבות גזיים מוגדרים כדי לחקור את ההשפעות של היפוקסיה על<em&gt; ג elegans</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

הרבייה מכאנית מושרה גירוי סיד גל בmonolayers הסלולרי: דוגמה לתאי אנדותל קרני שור

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

The ChroP Approach Combines ChIP and Mass Spectrometry to Dissect Locus-specific Proteomic Landscapes of Chromatin

גישת ChroP משלבת שבב וספקטרומטריית המסה לנתח נופי proteomic לוקוס ספציפיים של הכרומטין

Chromatin is a highly dynamic nucleoprotein complex made of DNA and proteins that controls various DNA-dependent processes. Chromatin structure and ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

שיטה להערכת ההשפעות של טווח של אורכי גל ועוצמות של אדום / טיפול באור האינפרה-אדום קרוב בסטרס חמצוני<em&gt; במבחנה</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

כימות של דביקות תא האנדותל<em&gt; במבחנה</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

גאפ junctional אינטר תקשורת: ביומרקר פונקציונלית להערכת תופעות לוואי של toxicants ורעלים, ואת היתרונות הבריאותיים של מוצרים טבעיים

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells

G הדמית חלבון בשילוב קולטן בתיווך Chemotaxis ואירועי האיתות שלה בתאי HL60 נויטרופילים דמויים

Eukaryotic cells sense and move towards a chemoattractant gradient, a cellular process referred as chemotaxis. Chemotaxis plays critical roles in many ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

שיטה להעריך אפקטים Bacteriocin על מיקרוביוטה המעיים של עכברים

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

הקרנת מבחני עבור הערכה של השפעות על Ca2 +תפוקה בינונית-איתות ותגובה Acrosome זרע אנושי

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior

צינור באמצעות אלקטרופורציה דו-צדדית ברחם כדי לחקור השפעות גנטיות על התנהגות מכרסמים

As genome-wide association studies shed light on the heterogeneous genetic underpinnings of many neurological diseases, the need to study the contribution ...