Name: experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing
Uploaded: 2019-10-25T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing at JoVE.com

R01HL138932, RO1HL133100, RO1HL128970, AHACDA34700025

Alla experimentella protokoll har godkänts av den institutionella djuromsorg och användning kommittén (MO18M211).
1. leptin infusion
Anmärkning: För att undersöka effekten av leptin på andning, vi infunderade leptin subkutant i Lean C57BL/6J möss av en osmotisk pump för att höja cirkulerande Leptin nivåer till de som observerats hos feta möss.
<ol><li>
Osmotisk pump beredning
	<ol>
<li>Väg den tomma pumpen för att ko...

<ol>
	<li>O'donnell, C. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+prevents+respiratory+depression+in+obesity.">Leptin prevents respiratory depression in obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 159, 1477-1484 (1999).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Female+gender+exacerbates+respiratory+depression+in+leptin-deficient+obesity.">Female gender exacerbates respiratory depression in leptin-deficient obesity.</a> American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 164, 1470-1475 (2001).</li><li>Bassi, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Central+leptin+replacement+enhances+chemorespiratory+responses+in+leptin-deficient+mice+independent+of+changes+in+body+weight.">Central leptin replacement enhances chemorespiratory responses in leptin-deficient mice independent of changes in body weight.</a> Pflu&#776;gers Archiv: European Journal of Physiology. 464, 145-153 (2012).</li><li>Inyushkina, E. M., Merkulova, N. A., Inyushkin, A. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+the+respiratory+activity+of+leptin+at+the+level+of+the+solitary+tract+nucleus.">Mechanisms of the respiratory activity of leptin at the level of the solitary tract nucleus.</a> Neuroscience and Behavioral Physiology. 40, 707-713 (2010).</li><li>Considine, R. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum+immunoreactive-leptin+concentrations+in+normal-weight+and+obese+humans.">Serum immunoreactive-leptin concentrations in normal-weight and obese humans.</a> New England Journal of Medicine. 334, 292-295 (1996).</li><li>Maffei, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+levels+in+human+and+rodent:+measurement+of+plasma+leptin+and+ob+RNA+in+obese+and+weight-reduced+subjects.">Leptin levels in human and rodent: measurement of plasma leptin and ob RNA in obese and weight-reduced subjects.</a> Nature Medicine. 1, 1155-1161 (1995).</li><li>Phipps, P. R., Starritt, E., Caterson, I., Grunstein, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Association+of+serum+leptin+with+hypoventilation+in+human+obesity.">Association of serum leptin with hypoventilation in human obesity.</a> Thorax. 57, 75-76 (2002).</li><li>Berger, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+and+Leptin+Resistance+in+the+Pathogenesis+of+Obstructive+Sleep+Apnea:+A+Possible+Link+to+Oxidative+Stress+and+Cardiovascular+Complications.">Leptin and Leptin Resistance in the Pathogenesis of Obstructive Sleep Apnea: A Possible Link to Oxidative Stress and Cardiovascular Complications.</a> Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2018, 5137947 (2018).</li><li>Ribeiro, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+fat+diet+blunts+the+effects+of+leptin+on+ventilation+and+on+carotid+body+activity.">High fat diet blunts the effects of leptin on ventilation and on carotid body activity.</a> The Journal of Physiology. 96, 3187-3199 (2018).</li><li>Yuan, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+signaling+in+the+carotid+body+regulates+a+hypoxic+ventilatory+response+through+altering+TASK+channel+expression.">Leptin signaling in the carotid body regulates a hypoxic ventilatory response through altering TASK channel expression.</a> Frontiers in Physiology. 9, 249 (2018).</li><li>Caballero-Eraso, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Leptin+acts+in+the+carotid+bodies+to+increase+minute+ventilation+during+wakefulness+and+sleep+and+augment+the+hypoxic+ventilatory+response.">Leptin acts in the carotid bodies to increase minute ventilation during wakefulness and sleep and augment the hypoxic ventilatory response.</a> The Journal of Physiology. 591, 151-172 (2018).</li><li>Jun, J. C., Shin, M. K., Yao, Q., Devera, R., Fonti-Bevans, S., Polotsky, V. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thermoneutrality+modifies+the+impact+of+hypoxia+on+lipid+metabolism.">Thermoneutrality modifies the impact of hypoxia on lipid metabolism.</a> American Journal of Physiology Endocrinology and Metabolism. 304, 424-435 (2012).</li><li>Polotsky, V. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+interrupted+leptin+pathways+on+ventilatory+control.">Impact of interrupted leptin pathways on ventilatory control.</a> Journal of Applied Physiology. 96, 991-998 (2004).</li><li>Pho, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+leptin+replacement+on+sleep-disordered+breathing+in+the+leptin-deficient+ob/ob+mouse.">The effect of leptin replacement on sleep-disordered breathing in the leptin-deficient ob/ob mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 120, 78-86 (2016).</li><li>Hernandez, A. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+whole+body+plethysmography+system+for+the+continuous+characterization+of+sleep+and+breathing+in+a+mouse.">Novel whole body plethysmography system for the continuous characterization of sleep and breathing in a mouse.</a> Journal of Applied Physiology. 112, 671-680 (2012).</li><li>Powell, F. L., Milsom, W. K., Mitchell, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Time+domains+of+the+hypoxic+ventilatory+response.">Time domains of the hypoxic ventilatory response.</a> Respiration Physiology. 112, 123-134 (1998).</li><li>Drorbaugh, J. E., Fenn, W. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+barometric+method+for+measuring+ventilation+in+newborn+infants.">A barometric method for measuring ventilation in newborn infants.</a> Pediatrics. 16, 81-87 (1955).</li><li>Duffin, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+the+ventilatory+response+to+hypoxia.">Measuring the ventilatory response to hypoxia.</a> The Journal of Physiology. 587, 285-293 (2007).</li><li>Teppema, L. J., Dahan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Ventilatory+Response+to+Hypoxia+in+Mammals:+Mechanisms,+Measurement,+and+Analysis.">The Ventilatory Response to Hypoxia in Mammals: Mechanisms, Measurement, and Analysis.</a> Physiological Reviews. 90, 675-754 (2010).</li><li>Nurse, C. A., Fearon, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carotid+body+chemoreceptors+in+dissociated+cell+culture.">Carotid body chemoreceptors in dissociated cell culture.</a> Microscopy Research and Technique. 59, 249-255 (2002).</li><li>Kumar, P., Prabhakar, N. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripheral+chemoreceptors:+function+and+plasticity+of+the+carotid+body.">Peripheral chemoreceptors: function and plasticity of the carotid body.</a> Comprehensive Physiology. 2, 141-219 (2012).</li><li>Roux, J. C., Peyronnet, J., Pascual, O., Dalmaz, Y., Pequignot, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ventilatory+and+central+neurochemical+reorganisation+of+O2+chemoreflex+after+carotid+sinus+nerve+transection+in+rat.">Ventilatory and central neurochemical reorganisation of O2 chemoreflex after carotid sinus nerve transection in rat.</a> The Journal of Physiology. 522, 493-501 (2000).</li></ol>

Huvudfokus i vår studie var att undersöka luftvägs effekter av leptin signalering i CB. Flera protokoll har utvecklats för att bedöma rollen av leptin på ett mekanistiskt sätt. För det första analyserades det specifika bidraget från CB till HVR genom noggrann kvantifiering av HVR under den första 2 min av hypoxisk exponering. För det andra, relevansen av CB i Leptin-medierad upp-reglering av andningskontroll undersöktes av två kompletterande metoder. I Lean Wild-Type möss med låga Leptin nivåer, var HVR ...

En fettceller produceras hormon leptin verkar i hypotalamus att undertrycka födointag och öka ämnesomsättningen. Studier utförda i vårt laboratorium1,2 och av andra utredare3,4 visade att leptin ökar hyperkapnisk andningshjälp respons (HVR) för att förhindra obesitas hypoventilation i Leptin brist på fetma. Emellertid, en majoritet av överviktiga individer har höga halter av leptin i plasma och uppvisar resistens mot de metabola och respiratoriska effekterna av hormonet5,6,7,8. Resistens mot leptin är multifaktoriell, men begränsad permeabilitet av blod-hjärnbarriären (BBB) till leptin spelar en viktig roll. Vi föreslår att leptin verkar under BBB i ett nyckelorgan av perifer hypoxisk känslighet, halspulsådern organ (CB), att försvara andning hos överviktiga individer. CBs uttrycker den långa funktionella isoformen av Leptin receptor, leprb, men rollen av CB i respiratoriska effekter av leptin har inte varit tillräckligt klarlagd9,10.
Målet med vår metod var att undersöka effekten av leptin signalering i CB på HVR. Vår motivering var att utföra (a) förlust av funktions experiment infusion leptin hos möss med intakta karotikroppar och denervated halspulsådern organ följt av HVR mätningar; b) vinst av funktions experiment i db/DB- möss som saknar leprb, där vi mätte HVR vid baseline och efter uttryck av LEPRb uteslutande i CB. Fördelen med vår teknik var att vi utförde alla våra experiment i ohämmade tre möss under sömnen och vakenhet. Tidigare utredare utförde antingen sina experiment under anestesi9 eller inte mäta effekterna av leptin under sömn10. Dessutom är vår studie den första att använda en unik vinst av funktionssätt med selektiv LepRb uttryck i CB som beskrivs ovan.
I det breda sammanhanget, vår metod kan generaliseras till andra receptorer uttryckta i CB och deras roll i hypoxisk känslighet. Utredare kan ingjuta en ligand till en receptor av intresse och mäta HVR vid baseline och efter CB denervation. Som en kompletterande metod kan en receptor av intresse överuttryckas i CB och HVR mätningar kan utföras före och efter överuttryck med hjälp av vår teknik som beskrivs i detta manuskript.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1ml Insulin Syringes</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309311</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x PBS (pH 7.4)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>500 ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-Lacz</td>
			<td>Dr. Christopher Rhodes (University of Chicago)</td>
			<td></td>
			<td>1x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ad-LepRb-GFP</td>
			<td>Vector Biolabs</td>
			<td>ADV-263380</td>
			<td>2-5x1010 pfu/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anesthetic cart</td>
			<td>Atlantic Biomedical</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betadine</td>
			<td>Purdue Products Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine (Buprenex)</td>
			<td>Reckitt Benckiser Healthcare Ltd.</td>
			<td>12496-0757-5</td>
			<td>0.3mg/ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57Bl/6J</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000664</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cotton Gauze Sponges</td>
			<td>Fisherbrand</td>
			<td>22-362-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>db/db</td>
			<td>Jackson laboratory</td>
			<td>000697</td>
			<td>Mice Strain</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>Pharmco-AAPER</td>
			<td>111000200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoflurane</td>
			<td>Vetone</td>
			<td>502017</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Lab Chart</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Matrigel Matrix</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>356234</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Spring Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>14124</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td></td>
			<td>Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Ox Plus Collar Sensor</td>
			<td>STARR Life Sciences Corp.</td>
			<td>015022-2</td>
			<td>Medium Collar Clip Special 7&#8221;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse Whole Body Plethysmography Chamber</td>
			<td>Data Science International (DSI)</td>
			<td>PLY3211</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ohio Care Plus Incubator</td>
			<td>Ohmeda</td>
			<td>HCHD000173</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Operating Scissors</td>
			<td>World Precision Instruments (WPI)</td>
			<td>501753-G</td>
			<td>Straight</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmotic Pump</td>
			<td>Alzet</td>
			<td>1003D</td>
			<td>1ul per hour, 3 days</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phenol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4557</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Recombinant Mouse Leptin protein</td>
			<td>R&#38;D systems</td>
			<td>498-OB-05M</td>
			<td>5mg</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Saline</td>
			<td>RICCA Chemical</td>
			<td>7210-16</td>
			<td>0.9% Sodium Chloride</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Surgical Suture</td>
			<td>DemeTech</td>
			<td>DT-639-1</td>
			<td>Silk, size 6-0</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermometer</td>
			<td>Innovative Calibration Solutions (INNOCAL)</td>
			<td>EW 20250-91</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

experimental approach to examine leptin signaling in the carotid bodies and its effects on control of breathing

Ett adipocyte-producerat hormon leptin är en potent respiratorisk stimulerande, som kan spela en viktig roll för att försvara andningsfunktionen hos fetma. Den halspulsådern organ (CB), ett nyckelorgan i perifer hypoxisk känslighet, uttrycka den långa funktionella isoform av Leptin receptor (LepRb) men rollen av leptin signalering i kontroll av andning har inte helt klarlagd. Vi undersökte den hypoxiska andningshjälp responsen (HVR) (1) hos C57BL/6j möss före och efter infusion med leptin vid baseline och efter CB denervation; (2) i leprb-bristfällig feta db/DB möss vid baseline och efter Leprb överuttryck i CBs. I C57BL/6J möss ökade leptin HVR och effekterna av leptin på HVR avskaffades av CB denervation. I db/DB- möss har leprb -uttrycket i CB förstärkt HVR. Därför, vi drar slutsatsen att leptin agerar i CB att öka Svaren till hypoxi.

Kontinuerlig infusion av leptin signifikant ökad HVR i Lean C57BL/6J möss från 0,23 till 0,31 mL/min/g/ΔFiO2 (P < 0,001, figur 2)11. CSND avskaffade den leptin-inducerade ökningen av HVR (figur 2), medan inga förmildrande effekter av csnd på HVR observerades i simulerad kirurgi grupp efter infusion med leptin.
LepRb uttryck i CB av leprb-bristfällig fet...

Watch this Scientific Journal Video about Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing at JoVE.com

Experimental Approach to Examine Leptin Signaling in the Carotid Bodies and its Effects on Control of Breathing

Vår studie fokuserar på effekterna av leptin signalering i halspulsådern kroppen (CB) på hypoxisk andningshjälp svar (HVR). Vi utförde "förlust av funktion" experiment mäta effekten av leptin på HVR efter CB denervering och "vinst av funktion" experiment mäta HVR efter överuttryck av leptin receptorn i CB.

Experimentell metod för att undersöka leptin signalering i halspulsådern organ och dess effekter på kontroll av andning

An adipocyte-produced hormone leptin is a potent respiratory stimulant, which may play an important role in defending respiratory function in obesity. The ...

Vårt protokoll kan användas för att undersöka de respiratoriska effekterna av leptin på halspulsådern kroppen i den perifera chemoreflex andningskontroll, och fysiologiska svar på hypoxi. Vi kan också bedöma effekterna av förlust och vinst av halspulsådern kroppens funktion med hjälp av kirurgiska och kemiska denervation och adenovirus transfection respektive. Innan du börjar proceduren, mäta temperaturen inuti en skräddarsydd hela kroppen plasthemagrophy kammare, och mäta den relativa fuktigheten i labbet.Därefter mäter du kroppsvikten och rektaltemperaturen på den experimentella musen. Placera musen inuti kammaren och placera en oximeter krage runt den rakade halsen av djuret. Och se till att helt försegla kammaren för att undvika luftläckage.Vänta cirka 30 minuter tills musen är tyst och kammaren är på en konstant volym. Innan du börjar registrera andningssignalerna och perifer syremättnad vid normoxia. Efter 20 minuters normoxia, utsätta djuret för en konstant blandad gas flöde av 10%syre och 3%koldioxid.Och börja registrera den första cykeln av akut hypoxi i andningssignaler och perifer syremättnad. Under de första 30 sekunderna av hypoxi, öppna de två små sidoportarna vid kammarens bas för att möjliggöra in-pluggar av blandningsgaserna. Efter de första 30 sekunderna, stäng en av de små sidoportarna i kammaren och fortsätter att spela in vid en konstant hypoxi på 10%av den fraktion av inspirerat syre i fem minuter.I slutet av hypoxibehandlingen, växla in-flow källa att åter exponera musen för rumsluft och låta djuret att återhämta sig vid normoxia i minst 30 minuter innan du påbörjar nästa analys. I slutet av experimentet, plugga en spruta i en av de små sidoportarna vid basen av kammaren och injicera en milliliter rumsluft i hela blodet pletysmografi kammaren tre gånger för att kalibrera kammaren. Efter den tredje spolningen mäter du temperaturen i kammaren med djuret fortfarande inuti och kammaren fortfarande stängd.Öppna sedan kammaren och mät musens rektaltemperatur innan du återvänder djuret till sin hembur. För kirurgisk denervation av carotid sinusnerven, administrera analgesi till anesthetize musen, och ta bort håret vid den ventrala regionen i nacken. Desinficera den exponerade huden med Betadine och alkohol och applicera salva på djurets ögon.Efter att ha gjort en mittlinjen snitt, ta bort bind- och fettvävnader för att exponera bifurcation av de gemensamma halspulsådern och identifiera hypoglossal nerv. Lyft upp hypoglossal nerv att exponera glossopharyngeal nerv omedelbart under och använda mikro-våren sax att bilateralt dissekera carotid sinus nerver. När halspulsådern organ har exponerats, försiktigt avbryta en microliter av lämplig adenovirus i fyra mikroliter av flytande Matrigel matris på is, per sida, och tillämpa fem mikroliter av virus suspensionen till halspulsådern kroppen området bilateralt.Vänta två till tre minuter tills den flytande Matrigelmatrisen har stelnat innan snittet stängs med 6-0 silkessutur och administrera en milliliter normal saltlösning subkutant. Sedan hus musen i en återhämtning kammare med övervakning tills sternala recumbency innan du återvänder djuret till sitt hem bur. Kontinuerlig infusion av leptin ökar signifikant det hypoxiska ventilatory svaret i mager C57BL/6 möss medan halsartären sinus nerv dissekering avskaffar denna leptin inducerad ökning.Som väntat, inga dämpande effekter av halskärlens nerv dissektion på det hypoxiska ventilatory svaret observeras i gruppen sham kirurgi efter leptin infusion. Induktion av leptin receptor lång isoform uttryck i halsartären organ leptin receptor lång isoform bristfälliga feta db/db möss resulterar i en betydande ökning av det hypoxiska ventilatory svaret. Medan efter transfection med kontroll LacZ adenovirus, observeras ingen förändring.Dessa tekniker möjliggör analys av karotidkroppsrollen i den perifera chemoreflex och effekterna av leptin på halspulsådern organ i kontrollen av andningar.

Research

Education

JoVE Core

JoVE Journal

Anatomy and Physiology

Biology

Unit 1

The Respiratory System

SCIENTISTS IN ACTION

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Creating Defined Gaseous Environments to Study the Effects of Hypoxia on C. elegans

Skapa Definierade Gasformiga miljöer för att studera effekterna av Hypoxi på<em&gt; C. elegans</em

Oxygen is essential for all metazoans to survive, with one known exception1. Decreased O2 availability (hypoxia) can arise during states of disease, ...

Mechanical Stimulation-induced Calcium Wave Propagation in Cell Monolayers: The Example of Bovine Corneal Endothelial Cells

Mekanisk stimulering-inducerad Kalcium vågutbredning i cellmonoskikt: exemplet Nötkreatur hornhinnan endotelceller

Intercellular communication is essential for the coordination of physiological processes between cells in a variety of organs and tissues, including the ...

The ChroP Approach Combines ChIP and Mass Spectrometry to Dissect Locus-specific Proteomic Landscapes of Chromatin

Den ChroP Approach Kombinerar Chip och masspektrometri att dissekera Locus-specifika Proteomic Landscapes of Chromatin

Chromatin is a highly dynamic nucleoprotein complex made of DNA and proteins that controls various DNA-dependent processes. Chromatin structure and ...

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Method for the Assessment of Effects of a Range of Wavelengths and Intensities of Red/near-infrared Light Therapy on Oxidative Stress In Vitro

Metod för bedömning av effekterna av ett intervall av våglängder och intensiteter från Red / nära infraröda Ljusterapi på oxidativ stress<em&gt; In Vitro</em

Red/near-infrared light therapy (R/NIR-LT), delivered by laser or light emitting diode (LED), improves functional and morphological outcomes in a range of ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

Kvantifiering av endotelceller Vidhäftnings<em&gt; In Vitro</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

Kanalförbindelse kommunikationen mellan: En funktionell Biomarker att bedöma biverkningar av gifter och toxiner, och hälsoeffekterna av naturliga produkter

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Imaging G Protein-coupled Receptor-mediated Chemotaxis and its Signaling Events in Neutrophil-like HL60 Cells

Imaging G-proteinkopplad receptor-medierad kemotaxi och dess signaleringshändelser i neutrofil-liknande HL60-celler

Eukaryotic cells sense and move towards a chemoattractant gradient, a cellular process referred as chemotaxis. Chemotaxis plays critical roles in many ...

A Method to Assess Bacteriocin Effects on the Gut Microbiota of Mice

En metod för att bedöma bakterie-cin-effekter på musens tarmmikrobiota

Very intriguing questions arise with our advancing knowledge on gut microbiota composition and the relationship with health, particularly relating to the ...

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening Assays for Assessment of Effects on Ca2+-Signaling and Acrosome Reaction in Human Sperm

Medium-throughput Screening analyser för bedömning av effekter på Ca2 +-signalering och akrosomen reaktion i mänskliga spermier

Ca2+-signaling is essential to normal sperm cell function and male fertility. Similarly, the acrosome reaction is vital for the ability of a human sperm ...

A Pipeline using Bilateral In Utero Electroporation to Interrogate Genetic Influences on Rodent Behavior

En pipeline som använder bilateral in utero-elektroporering för att förhöra genetisk påverkan på gnagares beteende

As genome-wide association studies shed light on the heterogeneous genetic underpinnings of many neurological diseases, the need to study the contribution ...