Name: dissection of drosophila melanogaster flight muscles for omics approaches
Uploaded: 2019-10-17T14:00:00
Duration: 8 min 33 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches at JoVE.com

我们感谢安德烈亚斯·拉杜纳和弗兰克·施诺勒的慷慨支持。我们感谢桑德拉·埃塞尔的出色技术援助和Akanksha Roy生成质谱数据。我们承认布卢明顿和维也纳股票中心提供苍蝇。我们感谢核心设施生物成像在共聚焦成像和Zentrall für蛋白酸化技术分析质谱样本方面的帮助，无论是在LMU生物医学中心（马丁斯里德，DE）。我们的工作得到了德国福森斯Gemeinschaft（MLS，SP 1662/3-1），慕尼黑综合蛋白质科学中心（CIPSM）的支持，在路德维希-马克西米利安大学明琴大学（MLS），弗雷德里希-鲍尔基金会（MLS）和国际马克斯普朗克研究学院（EN）。

1. 暂存普佩
<ol><li>在瓶子中升起所需基因型的苍蝇（图1E）。要么对解剖股票进行新的翻转，要么用至少20只雌性处女苍蝇设置一个十字架。保持瓶子，直到苍蝇开始起起。</li>
	<li>用湿润的画笔收集预皮，并转移到60毫米培养皿中的润湿滤纸（图1F）。</li>
	<li>性别的pupae，收集适当的性别的实验（图1G）。雄性通过睾丸的存在来识别，睾丸在原本不透明的pupa中显示为半透明球。</li>
	<li>用时间、日期和基因型标记培养皿，然后将 pupae 年龄化到所需的阶段（图1H）。 注：在温度控制的培养箱中保持十字架/库存和年龄pupae（即，25°C或27°C的RNAi十字架，因为在较高温度下增加Gal4活性会增加击倒效率40）。确保湿度足够高，这样在老化数天时不会干涸。</li>
</ol>2. IFM 解剖 48 h APF 之前
<ol><li>组装必要的设备，包括两个#5生物学级钳子、移液器、移液器头、干冰和（对于RNA样品）分离试剂（见材料表）。此外，冷黑色解剖盘（见材料表），1x磷酸盐缓冲盐水（PBS）缓冲液，和1.5 mL微离心管在冰上。</li>
	<li>使用润湿的画笔，将舞台化的pupae转移到一个黑色解剖盘中，里面装满了大约三分之二的冷1x PBS（图2A，B）。移动到荧光解剖显微镜。 注：在 30 分钟的时间内，尽可能多地使用 pupae。根据经验，范围从3~15页不等。有关黑色解剖菜肴的替代品的讨论，请参阅补充方法。</li>
	<li>使用#5钳子，将其中一个pupae推到黑色解剖盘的底部，并调整显微镜的变焦和对焦，以清楚地看到pupa（图2C）。</li>
	<li>用一把钳子抓住pupa的前部（图2D），然后用另一个钳子的一个尖头在腹部稍微偏离中心，就在胸腔后面。这保持pupa就位，并防止IFM移动到腹部（图2E）。 注：从此时开始计时解剖长度，一旦 pupal 完整性被打乱。使用定义的解剖长度（例如 20-30 分钟）以尽量减少肌肉死亡和相关转录组和蛋白酶的变化。在这段时间内，尽可能多地解剖苍蝇。</li>
	<li>使用第一钳子，取出普宝箱的前半部分（图2F）。</li>
	<li>使用相同的钳子捏在胸腔后面暴露的pupae，并将腹部与胸腔分开（图2G）。</li>
	<li>使用钳子，轻轻挤压胸腔的前部分（对于 <35 h APF），或撕开胸腔以暴露荧光标记的IFM（图2H）。IFM 很容易从表皮分离，因为早期时间的肌腱附件是脆弱的。用钳子丢弃剩余的尸体，将其推到盘子的另一侧。</li>
	<li>重复步骤 2.3_2.7，剖析额外的 pupae。</li>
	<li>用钳子收集IFM纤维，并将其组织成黑色解剖盘底部的一堆（图2I，J）。使用钳子将其推出视野，清除所有碎屑。 注：通过练习，可以近距离接触钳尖，而无需相互接触。此技术可用于松散地抓取 IFM 而不销毁 IFM。其他方法包括用单个尖端或完全闭合的钳子轻轻推动或抬起IFM，或使用IFM服用一些脂肪或其他组织，并去除步骤2.10中所述的脂肪。</li>
	<li>质量控制IFM肌肉样本，使用钳子从样品中去除非IFM肌肉、脂肪、角质等（图2K，L）。 注：使用Mef2-Gal4，IFM在早期时间点比其他肌肉类型标注得更强烈（图2K，K'），允许根据荧光强度和肌肉形状去除跳跃肌肉和幼虫肌肉。脂肪和角质组织看起来不同，没有标记肌肉特定的荧光标签 （图 2K，K'。有关标有IFM的其他Gal4行，请参阅讨论部分。</li>
	<li>使用夹紧的移液器尖端，将一堆IFM转移到一个1.5 mL微离心管中，管中装有250μL的冷却1x PBS（图2M-O）。立即转到第 4 节。 注：只需粘在移液器尖端的一侧，即可丢失IFM样本。在收集IFM之前，上下移液缓冲液可以使标准吸头的粘性降低，而具有较低表面张力的硅化或全氟氧（PFA）尖端（见材料表）有助于防止样品损失。</li>
</ol>3. 48 h APF 后 IFM 解剖
<ol><li>组装必要的设备，包括两#5生物级钳子、精细剪刀、标准玻璃显微镜幻灯片、双棒胶带、移液器、移液器吸头、干冰和（用于RNA）分离试剂（见材料表）。在冰上冷却 1x PBS 和微离心管。</li>
	<li>使用轻轻润湿的画笔，将暂存的pupae转移到安装在显微镜幻灯片上的双面胶带条（图3A）。将 pupae 放在方向相同的直线上（向下和朝向幻灯片底部）。 注：小心不要在画笔或过滤器上使用过多的水，否则水坑不会粘好。如果pupae不粘住，首先转移到干过滤器或纸巾上，将其擦干。在 30 分钟的时间内，可以解剖尽可能多的 pupae，理想情况下为 ±10 pupae。</li>
	<li>从 pupal 外壳中取出 pupa。使用钳子来挑逗分开，打开前尖刺上方的 ppal 外壳 （图3B）。</li>
	<li>轻轻地将一对钳子滑向后部，在钳子移动时切割 ppal 外壳（图 3B'）。小心不要破裂底层的pupa。将 pupa 从打开的外壳上解放出来，并立即转移到第二张显微镜幻灯片上的 1x PBS 下降（图 3B"，C）。</li>
	<li>对线路中的所有 pupae 重复步骤 3.3 和 3.4，然后将双杆胶带滑片放在一边。</li>
	<li>使用精细剪刀，将胸腔的腹部从胸腔上切开，然后推入一个单独的桩中（图3D，D'）。对剩余的 pupae 重复上述步骤。 注：开始计时与步骤3.6解剖的长度，一旦pupal完整性被打乱。在20-30分钟内解剖尽可能多的苍蝇，以防止细胞死亡和相关转录组和蛋白细胞的变化。当解剖 1 d 成人或 >90 h pupae 时，通常方便以后的步骤，以额外的去除头部与精细剪刀。</li>
	<li>使用纸巾，去除大多数1xPBS（一般多云与悬浮脂肪）以及腹部堆（图3E）。在剩余的胸腔中加入一滴新鲜、冷藏的 1x PBS。</li>
	<li>使用剪刀将胸部切成两半（图3F，F'），以单一运动从头部向下切割纵向体轴。或者，如果头部已拆下，首先将剪刀插入头部连接的位置，并在IFM之间纵向切割胸部的上半部分。然后，以相同的方向切割胸部的腹侧， 用第二个切口。</li>
	<li>重复步骤 3.7 和 3.8，对所有 pupae 进行解剖，在幻灯片中心附近生成一堆胸腔。确保幻灯片上有足够的冷却 1x PBS，以便截面不会干涸。 注：48 h APF 后，IFM 足够大，可以在标准解剖显微镜下对经过训练的眼睛可见。在协议中的这一点，带有荧光标签的肌肉可以移动到荧光解剖范围，以帮助IFM识别或用于训练目的，但这不是必要的。</li>
	<li>将 IFM 从胸腔中分离出来。使用#5钳分离其中一个截面（图3G，H）。轻轻地将一个钳子的尖端插入IFM的中间和下方（图3G'，H'）。静下第一把钳子时，用细剪刀将IFM的一端从角质层和肌腱上剪开。然后，将IFM的另一端从角质层中切开（图3G''，H'）。 注：根据第一次IFM切割后胸腔的方向，旋转胸腔180°是很有用的，这样第二个IFM切割更容易执行。</li>
	<li>用钳子从胸腔中取出IFM束（图3G'''，H''），将其转移到PBS气泡的边缘，使用水张力将其保持原位（图3I ）。将尸体推到幻灯片的另一侧。对剩余的胸腔切片重复上述步骤，生成一组解剖 IFM。 注：如果IFM不停留在整齐的堆里，用纸巾取出一些1xPBS。小心不要让所有的PBS蒸发，并确保解剖的IFM和双体轴仍然被缓冲覆盖。</li>
	<li>解剖所有IFM后，快速对解剖的肌肉进行质量控制。使用#5钳子，删除任何可能进入样品的跳跃肌肉或角质碎片（图3J-K''）。 注：跳跃肌肉看起来与IFM不同。如果解剖Mef2-Gal4标记肌肉荧光下，跳跃肌肉有较弱的荧光和不同的形状和质地。在正常光线下，它看起来几乎半透明，而IFM是不透明的乳黄色（图3J-J'，K）。</li>
	<li>使用水张力，捕获（但不要在一对钳子之间）解剖IFM（图3L）。将IFM转移到预装250 μL的冷冻1x PBS的1.5 mL微离心管（图3M）。立即执行第 4 节。 注：当钳子尖端彼此靠近并提起缓冲液溶液时，水张力会导致在钳子尖端之间捕获缓冲气泡。如果IFM也存在于这个气泡中，它们就可以从解决方案中取出，并轻松转移到另一个充满缓冲的容器。重要的是挤压钳子，使提示彼此靠近，而不接触对方，以避免在缓冲气泡中捕获的组织被压住。</li>
</ol>4. 对IFM样本进行颗粒和保存
<ol><li>在台式离心机中，在2000 x g下将1.5 mL微离心管离心3~5分钟（图4A，B）。</li>
	<li>使用移液器尖端（图4C）拆下缓冲液。
</li>
	<li>对于RNA应用，将IFM颗粒重新悬浮在所需RNA分离缓冲液的50~100μL中（参见材料表，图4D）。否则，继续执行步骤 4.4。 注：在步骤4.2之后，IFM可以进行干冷冻，用于质谱制剂或用商业试剂盒分离RNA（参见代表性结果）。对于RNA应用，通过立即在分离缓冲液中重新悬浮和冻结IFM颗粒，可以获得更好的结果。</li>
	<li>在干冰上冷冻样品或液体氮卡冰（图4E）。储存在-80°C，直到准备好后续步骤的样品准备下游分析。 注：冷冻保存后，样品可以储存数月，然后再进行下游调查。</li>
</ol>

作者没有什么可透露的。

在此协议中，我们提出了从早期和晚期对蛋白质、DNA、RNA 或其他大分子进行下游分离的果蝇IFM解剖的基本技术。该协议可以很容易地调整，以解剖从成年苍蝇IFM。我们演示了我们对于mRNA-Seq、蛋白质组学和RT-PCR应用的解剖协议的效用。随着组学技术的不断改进，能够分析起始材料较少且输入浓度较低的样品，这些解剖可能对于许多附加应用变得有价值。由于IFM是人类肌病的既定模型4，24和肌肉类型特定发展9，12，我们设想，例如，IFM丰富的代谢组，染色质构象的研究通过 3C 或 4C，通过 CLiP 相互作用或肌血生成磷-蛋白质组学拼接网络评估。
请务必考虑，这些解剖会产生一个为IFM而不是纯IFM样本富集的样本。由于运动神经元内侧运动、肌腱附件和肌肉纤维的气管入侵，这是不可避免的。生物信息学分析可用于识别IFM富集基因或蛋白质，但需要进一步的实验来证明它们实际上是IFM特异性的。样品纯度可以使用已公布的组织特定标记进行检测，如条纹45（肌腱）、Act79B4、44（管状肌肉）、Act88F15 （IFM） 或 syb46（神经特定）。可能可以使用此类标记将数据集规范化为IFM特定内容，但用户需要注意，用于规范化的基因表达的时态变化，例如IFM特异性基因或图布林，可能会偏袒这种方法。
基因编码的组织特异性标记方法，例如EC标记47，48或PABP标签49，50分离RNA近年来已经开发，这可能有助于获得一个真正的组织特异性RNA样本。然而， EC 标记需要不断喂养苍蝇 47 ，因此不适用于在阶段。PABP标记转录的灵敏度和完整性可能有限制51。FACS分离单个肌肉纤维的方法由于IFM的体积大和合质而变得复杂。INTACT52，53型方法可应用于从IFM中分离特定的亚细胞腔，这可能证明对分离IFM核或线粒体的纯种群有用。对于大多数下游应用，手动解剖仍然是获得完整IFM组织的当前标准。
样品质量取决于解剖过程中的几个关键步骤。解剖技术要求很高，解剖速度和样品纯度随着经验的提高而增加。在没有洗涤剂的情况下在冷冻缓冲液中进行短时间（20-30分钟）的解剖有助于保持样品的完整性，正如之前观察到的小鼠肌腱分离54。IFM在从颗粒中去除所有缓冲液后可以成功干冷冻，但特别用于RNA分离，在隔离缓冲液中冷冻样品往往能产生更好的结果。在RNA或蛋白质分离之前，将多达20个单独解剖的IFM组合起来，允许放大和收集足够的材料，即使从早期时间点或突变体16，32进行下游分析。
对于RNA应用，最关键的步骤可能是RNA本身的分离。二恶亚硝基苯酚-氯仿分离（上述方法1）优于大多数经测试的商业试剂盒，如前所述，55便宜得多。商业试剂盒在RNA分离产量中观察到的变异性与以前的观察结果56，57一致。我们在异丙醇沉淀期间进一步添加糖原，以帮助恢复所有RNA。除了RNA产量之外，验证RNA完整性以确保样品在解剖和分离过程中没有被碎片化或降解非常重要。工作无RNase也是必不可少的。最后，RT-套件的选择会影响逆转录过程的灵敏度。虽然不经常详细讨论，但所有这些点都影响IFM样本的质量和从下游应用程序获得的数据。
几个重要的修改使协议与现有的IFM解剖协议不同。虽然 IFM 免疫荧光的详细解剖方案存在 19 ，但该协议提出了一种不同的解剖方法，允许更快速地分离 IFM 组织。这允许收集大量的IFM组织（相对而言），解剖时间有限，以防止蛋白酶或转录组的变化。其他协议描述成人 IFM 的解剖，用于在单个肌纤维蛋白 39中可视化 GFP 染色或幼虫体壁肌肉 58染色，但它们不涉及在阶段解剖或 RNA 或蛋白质的分离。这种方法也不同于现有的从低温节38中对pupal IFM进行微解剖的协议，后者可以生成更纯净的IFM样本，但劳动强度更大，产生的材料更少。与其他快速成人IFM解剖协议38，39相比，IFM在PBS缓冲液中分离，无需洗涤剂，以限制应力诱导和其他主要表达变化。
该协议的关键进展是包含一个实时的荧光报告器，允许在早期pupal阶段隔离IFM。我们标准使用Mef2-GAL459驱动UAS-CD8：：GFP 或 UAS-GFP：：Gma60。 这允许对IFM进行差异标记（飞行肌肉比其他脓肿肌肉更贴有强烈标签和形状不同），以及基于GAL4-UAS的操作的性能，例如救援或RNAi实验。也可以结合Mef2-GAL4与浴缸-GAL80ts，以避免RNAi相关的早期杀伤力或与UAS-Dcr2，以提高RNAi效率40。 
有额外的GAL4驱动程序或GFP线可用，在肌肉类型特异性，时间表达模式，和驱动器强度19，61，可以使用代替Mef2-GAL4。例如，Act88F-GAL4 首先表示大约 24 h APF，因此不能用于较早的时间点;然而，它强烈标注IFM，并可能有助于避免RNAi相关的早期杀伤力。他-GFP 或Act88F-GFP 标签 IFM，再次具有时间限制，但它们避免了标记表达式的 GAL4 依赖性，并且可能与感兴趣的突变背景结合使用。其他可能的标记行列表有19。还应注意的是，使用转基因和 GAL4/UAS 系统可能会导致基因表达伪影，因此使用适当的控制非常重要，例如，跨越到野生类型背景应变的驱动线，以便此类伪影可能在所有样本中都相同。
在随附的视频中，此详细协议旨在使 pupal IFM 解剖更易于访问，并促进使用组学方法来研究肌肉发育。将果蝇遗传学和细胞生物学的力量与通过解剖IFM获得的生物化学和组学测定相结合，有可能促进对肌发生和肌肉功能的机械理解。未来的研究将转录组和蛋白酶调控的系统级观察与代谢和功能输出联系起来，将有助于更深入地了解肌肉类型的具体发育和肌肉疾病的发病机制。

现代组学技术为肌肉发育和人类肌肉疾病背后的机制提供了重要的见解。例如，对转录组学数据的分析与动物模型中的遗传和生化验证相结合，发现由于对30多个沙科梅的目标网络进行调节，因此失去拼接因子RBM20会导致扩张性心肌病。以前与心脏病相关的基因，包括锡丁1，2，3。
在第二个例子中，来自细胞培养、动物模型和人类患者的研究表明，肌营养不良症是由肌肉盲（MBNL）的固存和CELF14，5的增强引起的RNA调节的中断造成的。MBNL 和 CELF1（也称为 CUGBP1 或 Bruno-Like-Like 2）之间的交叉调控和时间动力学有助于解释肌营养不良症患者持续的胚胎拼接模式。此外，大型错误控制的目标网络有助于解释疾病4、6、7、8的复杂性质。大多数此类研究利用基因模型生物体中的组学方法来了解人类肌肉疾病背后的机制。此外，他们强调首先了解健康肌肉中的时间和组织类型特定基因表达、蛋白质修饰和代谢模式的重要性，以了解患病或老化肌肉的变化。
果蝇黑色素是另一个成熟的遗传模型有机体。沙科梅的结构以及单个沙科梅成分从苍蝇到脊椎动物4、9、10的高度保存，间接飞行肌肉（IFMs）已成为研究的有力模型肌肉发育的多个方面11，12。首先，纤维肌在功能和形态上不同于管状体肌肉11，13，允许研究肌肉类型的特定发育机制。转录因子包括斯帕尔特主要（萨尔姆）14，外登（外联），和霍莫托拉克斯（Hth）15已被确定为纤维素命运调节器。此外，在萨尔姆下游，CELF1同源布鲁诺1号（Bru1，Aret）指导一个纤维素特拼接程序16，17。
其次，IFM是了解肌细胞生成过程的重要模型，从肌细胞融合和肌管附着到肌血生成和沙突成熟9、18、19。第三，果蝇遗传学允许调查单个蛋白质、蛋白质域和蛋白质等各形式对沙科梅形成、功能和生物物理特性的贡献 20、21、22 ， 23.最后，IFM模型已经开发用于研究多种人类肌肉疾病，如肌营养不良症、肌营养不良症、肌退行性疾病、行为性病变等24、25、26 ，27，并提供了重要的见解疾病机制和潜在的疗法28，29，30。因此，果蝇是一个有用的模型，以解决肌生成领域的许多开放问题，包括肌肉类型特定转录机制，拼接和染色质调节，以及代谢在肌肉发育中的作用。现代组学技术的应用，特别是结合果蝇中种类繁多的遗传、生化和细胞生物测定，有可能极大地促进对肌肉的理解。发展、衰老和疾病。
IFM是苍蝇中最大的肌肉，在成人31、32的胸腔长度中跨越了近1毫米。然而，这种小尺寸产生挑战，以获得足够的样本，以组织类型特定的方式应用果蝇技术在果蝇。 此外，IFM 是成人肌肉的一部分，在阴极阶段形成。肌细胞引信形成肌管，在Puparium形成（APF）后24小时左右附着在肌腱上，并经历必要的压实步骤，以启动约30 h APF（图1A-D）18、33的肌张力发生。 34.
肌纤维然后生长到跨越整个胸腔的长度，与肌纤维进入初始生长阶段集中在沙科雷添加，直到约48 h APF，然后过渡到成熟阶段，其中沙科梅里增长的长度和宽度，并改造后，通过 72 h APF（图1A-D）32、35建立拉伸激活。纤维成熟开始至少部分由Salm和E2F32、36、37和多个IFM特异性沙科梅蛋白等形体控制，其拼接由Bru1控制。阶段16，17.成熟苍蝇从90-100 h APF关闭。这意味着，为了研究肌肉发育，IFM必须从多个普帕尔时间点中分离出足够的数量、质量和纯度，以便使用omics方法进行分析。
已发布IFM解剖的若干协议。虽然这些协议非常适合其预期应用程序，但没有一种是组学方法的理想选择。保留IFM形态的表扑和成人IFM19、分离IFM纤维进行机械评价31，或利用从低温节38中微分泌的PUpal IFM的表征，其特殊性和时间性和时间性大量人力为组学应用合理获取足够数量的IFM组织。已开发其他协议，用于快速解剖特定成人IFM38，39，因此不适用于普帕尔阶段， 并使用不理想或与RNA分离不兼容的缓冲液.因此，有必要开发新的方法来分离用于生物化学或组学应用的pupalIFM。
在这里，我们提出了一个协议，在pupal阶段解剖IFM，已经成功地用于mRNA-Seq分析从16 h APF到成人阶段16，32。该协议采用绿色荧光蛋白（GFP）标签来识别在普陀和成人发育的所有阶段的IFM，允许在荧光解剖显微镜下进行活体解剖。该方法的劳动密集型程度较低，其吞吐量高于现有的IFM解剖协议。这允许快速分离和冷冻保存样品，经过几轮解剖后产生足够的材料，用于组学方法以及标准逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR） 或西方印迹。
我们将协议分为两部分，演示如何在 48 h APF 之前（在早期变形期间，当IFM附件更脆弱时）和 48 h APF 之后（当 pupal 体计划和IFM附件定义明确时）快速剖析 IFM。我们证明，我们可以在所有时间点从解剖IFM中分离出高质量的RNA，并呈现关于RNA分离和逆转录的不同方法的数据。最后，我们以CELF1同源布鲁诺1为例，演示了解剖方案在mRNA-Seq、质谱和RT-PCR中的应用。在布鲁诺1突变IFM的蛋白质组学数据中，我们显示了沙科梅蛋白异种的误读，并检查了Myosin重链（Mhc）的C端拼接事件的布鲁诺1调控。这些结果说明了组学数据如何有助于更深入地理解生物现象，补充遗传和生化实验。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:1552px;" width="1550">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">5x High Fidelity (HF) buffer</td>
			<td style="width:255px;">Thermo Fisher</td>
			<td style="width:175px;">F518L</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">60 mm culture dishes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z643084-600EA</td>
			<td style="width:607px;">Greiner dishes, 60 mm x 15 mM, vented</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">black dissecting dish (glass)</td>
			<td>Augusta Laborbedarf</td>
			<td>42021010</td>
			<td style="width:607px;">Lymphbecken, black glass, 4x4 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">black silicon dissecting dishes: activated charcoal powder</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C9157</td>
			<td style="width:607px;">Also available from most pharmacies</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:516px;">black silicon dissecting dishes: Sylgard 184</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>761036</td>
			<td style="width:607px;">Dishes are made by mixing the Sylgard (~50g) with activated charcoal powder (200 mg) and curing it in Petri dishes (~4 60 mm dishes).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">blue pestle</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z359947-100EA</td>
			<td style="width:607px;">Any pellet pestle that can sterilized, also can be used with a motor-driven grinder</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">cell phone camera, Samsung Galaxy S9</td>
			<td>Samsung</td>
			<td>SM-G960F/DS</td>
			<td style="width:607px;">used for photos not taken under a microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">chloroform</td>
			<td>PanReac AppliChem</td>
			<td style="width:175px;">A3691,0500</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">confocal microscope, Leica SP8X upright confocal</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.leica-microsystems.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">confocal microscope, Zeiss LSM 780 inverted confocal</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.zeiss.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">double stick tape</td>
			<td>Scotch/3M</td>
			<td>3M ID 70005108587</td>
			<td style="width:607px;">Double-sided tape, available at most office supply handlers</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Dumont #5 Forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11252-20</td>
			<td style="width:607px;">Inox straight tip 11 cm forceps, Biology grade with 0.05 x 0.02 mm tip</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">EtOH (100%, RNase free)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>32205-M</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">fluorescent dissecting microscope camera, Leica DFC310 FX camera</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.leica-microsystems.com</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:516px;">fluorescent dissecting microscope software, Leica Application Suite (LAS) version 4.0.0</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.leica-microsystems.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">fluorescent dissecting microscope, Leica M165 FC</td>
			<td>Leica</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.leica-microsystems.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: Bru1[M2]</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">Fly stock; This paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: Bru1[M3]</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">Fly stock; This paper</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: Mef2-GAL4</td>
			<td>Bloomington Stock Center</td>
			<td>BDSC:27390</td>
			<td style="width:607px;">Fly stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: salm[1]</td>
			<td>Bloomington Stock Center</td>
			<td>3274</td>
			<td style="width:607px;">Fly stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: salm[FRT]</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">Fly stock; see Spletter et al., Elife, 2018</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: UAS-Bru1IR</td>
			<td>Vienna Drosophila Research Center</td>
			<td>GD41568</td>
			<td style="width:607px;">Fly stock, RNAi hairpin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: UAS-GFP::Gma</td>
			<td>Bloomington Stock Center</td>
			<td>BDSC:31776</td>
			<td style="width:607px;">Fly stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: UAS-mCD8a::GFP</td>
			<td>Bloomington Stock Center</td>
			<td>BDSC:5130</td>
			<td style="width:607px;">Fly stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: w[1118]</td>
			<td>Bloomington Stock Center</td>
			<td>3605</td>
			<td style="width:607px;">Fly stock</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Fly: weeP26</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">Fly stock; see Clyne et al., Genetics, 2003</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">GFP detection reagent, GFP-Booster</td>
			<td>ChromoTek</td>
			<td>gba488-100</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">glycogen</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>10814-010</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">image processing software, Photoshop CS6</td>
			<td>Adobe</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.adobe.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">isopropanol</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>I9516-25ML</td>
			<td style="width:607px;">2-propanol</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Method 1 (RNA isolation): TRIzol</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15596018</td>
			<td style="width:607px;">Guanidinium isothiocyanate and phenol monophasic solution</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Method 2 (RNA isolation): Method 1 + TURBO DNA-free Kit</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:175px;">AM1907</td>
			<td style="width:607px;">TRIzol isolation followed by treatment with a kit to remove DNA</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:516px;">Method 3 (RNA isolation): Direct-zol RNA Miniprep Plus Kit</td>
			<td style="width:255px;">Zymo Research</td>
			<td style="width:175px;">R2070S</td>
			<td style="width:607px;">RNA isolation in TRIzol, but over commercial columns instead of using phase separation. Recommended DNase treatment performed with Monarch Dnase I in Monarch DNase I Reaction buffer.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:516px;">Method 4 (RNA isolation): RNeasy Plus Mini Kit</td>
			<td style="width:255px;">Qiagen</td>
			<td style="width:175px;">74134</td>
			<td style="width:607px;">We used the provided DNase treatment. IFM pellets were homogenized in RTL buffer as suggested for animal tissues.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Method 5 (RNA isolation): ReliaPrep RNA Tissue Miniprep System</td>
			<td style="width:255px;">Promega</td>
			<td style="width:175px;">Z6110</td>
			<td>We applied the protocol for &#8216;Purification of RNA from Fibrous Tissues&#8217;.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Method 6 (RNA isolation): Monarch Total RNA Miniprep Kit</td>
			<td style="width:255px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:175px;">T2010G</td>
			<td>We applied the protocol for tissues/leukocytes and lysed in 300 &#956;L of RNA Protection Reagent.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Microcentrifuge tubes</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>AM12400</td>
			<td style="width:607px;">RNase-free Microfuge Tubes, 1.5 mL</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Microscope slides</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>12342108</td>
			<td style="width:607px;">Standard slides, uncharged, 1 mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">microtome blades</td>
			<td>PFM Medical</td>
			<td>207500003</td>
			<td style="width:607px;">C35 feather 80mm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Monarch DNase I</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T2004-21</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Monarch DNase I Reaction Buffer</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>T2005-21</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">normal goat serum</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>16210072</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">OneTaq Polymerase</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>M0480X</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Paintbrush</td>
			<td>Marabu</td>
			<td>1910000000</td>
			<td style="width:607px;">Marabu Fino Round No. 0, or similar brush from any art supply</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>158127</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">PBS buffer (1x)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P4417</td>
			<td style="width:607px;">Phosphate buffered saline tablets for 1 L solutions, pH 7.4</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:516px;">PFA PureTip Pipette Tips</td>
			<td>Elemental Scientific</td>
			<td>ES-7000-0101</td>
			<td style="width:607px;">Optional substitute for standard pipette tips to reduce sample loss; 100 mL, 0.8 mm orifice</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Phusion High Fidelity Polymerase</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>F-530XL</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Pipette tips</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P5161</td>
			<td style="width:607px;">Universal 200 mL pipette tips</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Preomics iST 8x Kit</td>
			<td>Preomics</td>
			<td>P.O.00001</td>
			<td style="width:607px;">peptide preparation kit for mass spectrometry</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:516px;">Q Exactive mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>725500</td>
			<td style="width:607px;">mass spectrometry was performed at the Protein Analysis Unit of the LMU Biomedical Center</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Qubit RNA Assay Kit</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>Q32855</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">rhodamine-phalloidin</td>
			<td>Invitrogen, Molecular Probes</td>
			<td>10063052</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RNA concentration Approach 1 &#38; RNA integrity traces, Bioanalyzer</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>G2939BA</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RNA concentration Approach 2, Nanodrop</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>ND-2000</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RNA concentration Approach 3, Qubit 4 Fluorometer</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>Q33238</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RNA Pico Chips</td>
			<td>Agilent Technologies</td>
			<td>5067-1513</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RNase A</td>
			<td>Promega</td>
			<td>A7937</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RNase-free water, Diethyl pyrocarbonate (DEPC)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D5758</td>
			<td style="width:607px;">DEPC treat water overnight and then autoclave, to remove all RNase.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RT Kit #1: Super Script III Reverse Transcriptase Kit</td>
			<td style="width:255px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:175px;">18080-044</td>
			<td style="width:607px;">reverse transcription kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RT Kit #2: LunaScript</td>
			<td style="width:255px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:175px;">E3010S</td>
			<td style="width:607px;">reverse transcription kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">RT Kit #3: QuantiNova Reverse Transcription Kit</td>
			<td style="width:255px;">Qiagen</td>
			<td style="width:175px;">205410</td>
			<td style="width:607px;">reverse transcription kit</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">slide mounting buffer, Vectashield</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td style="width:607px;">containing DAPI</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">statistical software: GraphPad Prism</td>
			<td>GraphPad Prism</td>
			<td></td>
			<td style="width:607px;">www.graphpad.com</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">statistical software: Microscoft Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Purchased as part of the bundle: Office Home &#38; Student 2019</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Table-top centrifuge</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5405000760</td>
			<td style="width:607px;">Eppendorf Centrifuge 5425 or equivalent</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">tissue/ Kimwipes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z188956</td>
			<td style="width:607px;">Standard tissue wipes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Transfer pipette</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Z350796</td>
			<td style="width:607px;">Plastic pipette</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Triton-X100</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>T9284-500ML</td>
			<td style="width:607px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:516px;">Vannas spring scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>15000-00</td>
			<td style="width:607px;">3 mm cutting edge, tip diameter 0.05 mm, length 8 cm</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:516px;">Whatman paper</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>1004-070</td>
			<td style="width:607px;">Filter paper circles, Grade 4, 70 mm</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

dissection of drosophila melanogaster flight muscles for omics approaches

果蝇飞行肌肉是研究各种过程的有力模型，如转录调节、替代拼接、代谢和肌瘤生物学，这些过程都影响肌肉发育和肌血生成。Omics 数据（如质谱或深度测序生成的数据）可以为这些生物过程提供重要的机械见解。对于这些方法，分析组织特异性样本，提高组分指纹的选择性和特异性是有好处的。在这里，我们提出了一个协议，从活pupae解剖荧光标记飞行肌肉，为组学应用生成高度丰富的肌肉样本。我们首先描述如何在早期脓肿阶段（<48 h 后，Puprium 形成 [APF]） 解剖飞行肌肉，当肌肉可以通过绿色荧光蛋白 （GFP） 标记来识别时。然后，我们描述如何解剖晚期pupae（>48 h APF）或成人的肌肉，当肌肉在解剖显微镜下可以区分时。随附的视频协议将使这些技术要求苛刻的解剖更容易为肌肉和果蝇研究社区。对于RNA应用，我们用不同时间点和不同方法测定可分离的RNA的数量和质量。我们进一步表明，Bruno1 （Bru1） 是肌苷重链（Mhc）拼接的时态变化所必需的，表明解剖的肌肉可用于 mRNA-Seq、质谱和逆转录聚合酶链反应 （RT-PCR）应用。这种解剖方案将有助于促进组织特异性组学分析，并通常可用于研究造血的多种生物学方面。

Watch this Scientific Journal Video about Dissection of Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches at JoVE.com

Dissection of Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches

果蝇飞行肌肉是研究转录调节、替代拼接、代谢和肌生物学的有力模型。我们提出了从活pupae中解剖荧光标记飞行肌肉的协议，以生成高富集的样品，非常适合蛋白质组学和深度测序。这些样本可以提供重要的机械见解，肌肉发育的各个方面。

解剖果蝇黑色素组飞行肌肉为奥米克斯方法

Drosophila flight muscle is a powerful model to study diverse processes such as transcriptional regulation, alternative splicing, metabolism, and ...

该协议有助于解剖GGFP标签的间接飞行肌肉从果蝇在幼崽发育期间的各个时间点，以评估基因和蛋白质表达的变化。使用这些技术，可以实现高富集的飞行肌肉样本，其RNA蛋白降解最小，适用于RT-PCR、西印或奥米方法。这些专门的解剖需要实践和技能，但可解剖的幼崽数量和样品质量会随着经验的提高而提高。这种解剖的视觉演示对于确定如何区分飞行肌肉和非肌肉组织以及促进飞行肌肉与幼崽标本的快速分离至关重要。要将小狗装出舞台，请使用湿的画笔收集并转移到60毫米的培养皿中，并在双目显微镜下对小狗进行性护理。雄性由睾丸的存在来识别，睾丸在原本不透明的幼崽上显示为半透明的球。在用苍蝇的时间、日期和基因型标记菜后，在25至27摄氏度的培养箱中对幼崽进行年龄调整，直到适当的阶段。对于 48 H APF 前的 IFM 解剖，使用湿画笔将适当阶段性的 pupae 转移到黑色解剖盘中，约 2/3 充满冷藏 PBS。在荧光解剖显微镜下，使用5个钳子将其中一个钳子推到黑色解剖盘的底部。调整显微镜变焦和对焦，直到可以清楚地可视化。使用一对钳子抓住幼崽的前部，用第二对钳子的单尖戳幼崽，腹部稍微离中，就在胸部后面。使用第一对钳子取出前半部分的钳子，并捏紧胸后裸露的幼崽，将腹部与胸部分开。接下来，轻轻挤压胸部前部，露出荧光标记的 IFM。然后，使用钳子将剩余的尸体丢弃到盘子的对面，并同样解剖随后的幼崽。当所有幼崽都解剖后，使用钳子收集 IFM 纤维，并组织纤维放入黑色解剖盘底部的一堆。使用钳子将任何碎屑从视野中推出，并从样品中去除任何非 IFM 肌肉、脂肪、角质层或其他不需要的组织。然后，使用夹入的移液器尖端将一堆 IFM 转移到包含 250 微升冷却 PBS 的 1.5 毫升微离心管中。对于 48 H APF 后 IFM 解剖，使用轻轻湿润的画笔将暂存的 pupae 转移到安装在显微镜幻灯片上的双面胶带条上。将小狗定向在一条线上，腹侧向下，然后朝向滑梯底部。当所有钳子都放置好时，使用钳子来梳理，并打开前螺旋上方的第一个钳子，然后轻轻地将一对钳子滑向后部，随着钳子移动，切割钳子。将幼崽从打开的箱子中释放开放，并立即将幼崽转移到第二张显微镜幻灯片上的 PBS 滴。当所有的幼崽都被释放时，用细剪刀将幼崽的腹部从胸部切开，然后将腹部推入单独的一堆。当所有胸部都切除后，使用一张纸巾去除大部分的PBS和腹部。在剩余的胸体中加入一滴新鲜、冰冷的PBS，然后用剪刀沿着垂直体轴从头部切割，以单次运动将胸部分成两半。当所有钳子都解剖后，使用 5 个钳子选择其中一个切除，然后轻轻地在 IFM 的中间上方和下方插入一个钳子的尖端。按住第一把钳子，使用细剪刀将 IFM 的一端从角质层和肌腱上切开，然后旋转 180 度，使 IFM 的另一端从角质层和肌腱上切割。使用钳子将 IFM 捆绑包从胸部转移到 PBS 气泡的边缘，使用水张力将捆绑包保持到位。然后，将尸体推到幻灯片的另一侧，并以这种方式解剖其余的 IFM。收集所有 IFM 后，使用 5 个钳子去除可能进入样本的任何跳跃肌肉或角质层碎片。然后用水张力在一对钳子之间轻轻捕获解剖的 IFM，将 IFM 放在含有 250 微升冷却 PBS 的 1.5 毫升微离心管中。来自布鲁诺1 IR IFM的mRNA测序数据表明，与野生型测序数据相比，基因单元水平上的表达变化。使用解剖的 IFM 上全蛋白体质谱法，在蛋白质和蛋白质等同形式水平上观察到类似的调控。将蛋白质陷阱线插入 Mhc 的最终内分，在 IFM 中可以观察到 GFP 标记蛋白的合并，在 90 H APF 的 M 线两侧为两个点，而在腿部肌肉组织中，GFP 信号可以在沙康梅 M 线上均匀地观察到。在解剖的 IFM 上使用 RT-PCR 时，可以在 27 摄氏度形成 27 摄氏度的异常后 30 至 48 小时内检测到从 GFP 标记的 exon 34 到 37 事件的 Mhc 等构开关。从mRNA测序数据，腿部和跳跃肌肉组织表达所有三个Mhc等同形式，保持GGF标签等构体在成熟肌肉的表达。Spalt主要突变体和布鲁诺1 IR-IFM，未能关闭表达的GFP标签Mhc等同形式，因为他们的发展，导致一个等形表达配置文件类似于腿和跳跃肌肉组织。请记住，解剖应在30分钟内进行，以防止RNA降解。而且，注意限制其他细胞类型的污染。此方法生成适用于生物化学方法（如 RT-PCR 或西印迹）的 IFM 富集样本，以及奥米式方法（如质谱、高通量测序、染色质符合性捕获和代谢组学）。这些解剖可以补充在果蝇强大的遗传方法与系统级数据，以研究发育和基因调控的基本机制。

Research

JoVE Journal

Genetics

Dissection of Drosophila melanogaster Flight Muscles for Omics Approaches

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

Quantifying Abdominal Pigmentation in Drosophila melanogaster

量化腹部色素沉着<em&gt;黑腹果蝇</em

Pigmentation is a morphologically simple but highly variable trait that often has adaptive significance. It has served extensively as a model for ...

科研

遗传学

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

High Fat Diet Feeding and High Throughput Triacylglyceride Assay in Drosophila Melanogaster

高脂膳食喂养和高通量三测定在果蝇中的含量

Heart disease is the number one cause of human death worldwide. Numerous studies have shown strong connections between obesity and cardiac malfunction in ...

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

High Resolution Fluorescent In Situ Hybridization in Drosophila Embryos and Tissues Using Tyramide Signal Amplification

高分辨率荧光原位杂交在果蝇胚胎和组织中使用 Tyramide 信号放大

In our efforts to determine the patterns of expression and subcellular localization of Drosophila RNAs on a genome-wide basis, and in a variety of ...

Generation of Genome-wide Chromatin Conformation Capture Libraries from Tightly Staged Early Drosophila Embryos

Generation of Genome-wide Chromatin Conformation Capture Libraries from Tightly Staged Early Drosophila Embryos

大范围早期果蝇胚胎的全基因组染色质构象捕获库的生成

Investigating the three-dimensional architecture of chromatin offers invaluable insight into the mechanisms of gene regulation. Here, we describe a ...

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System (REQS)

Measuring Exercise Levels in Drosophila melanogaster Using the Rotating Exercise Quantification System REQS

使用旋转运动量化系统测量果蝇中的运动水平 (满足要求)

Drosophila melanogaster is a new model organism for studies in exercise biology. To date, two main exercise systems, the Power Tower and the Treadwheel ...

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

The TreadWheel: Interval Training Protocol for Gently Induced Exercise in Drosophila melanogaster

TreadWheel:果蝇轻度诱导运动的间歇训练协议

The incidence of complex metabolic diseases has increased as a result of a widespread transition towards lifestyles of increased caloric intake and ...

Dissection of Enhancer Function Using Multiplex CRISPR-based Enhancer Interference in Cell Lines

基于多重 CRISPR 增强器的细胞系干扰增强功能解剖

Multiple enhancers often regulate a given gene, yet for most genes, it remains unclear which enhancers are necessary for gene expression, and how these ...

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

In Vivo Forward Genetic Screen to Identify Novel Neuroprotective Genes in Drosophila melanogaster

在Vivo前向遗传屏幕识别新的神经保护基因在果蝇黑色素

There is much to understand about the onset and progression of neurodegenerative diseases, including the underlying genes responsible. Forward genetic ...

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

Use of Drosophila S2 Cells for Live Imaging of Cell Division

使用果蝇S2细胞进行细胞分裂的活成像

Drosophila S2 cells are an important tool in studying mitosis in tissue culture, providing molecular insights into this fundamental cellular process in a ...

A Screening Method for Identification of Heterochromatin-Promoting Drugs Using Drosophila

A Screening Method for Identification of Heterochromatin-Promoting Drugs Using Drosophila

使用果蝇的异色素促进药物的鉴定筛选方法

Drosophila is an excellent model organism that can be used to screen compounds that might be useful for cancer therapy. The method described here is a ...