Name: studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model
Uploaded: 2020-03-20T13:00:00
Duration: 9 min 29 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model at JoVE.com

作者感谢国家卫生研究院、国家癌症研究所、贝塞斯达医学博士、癌症和炎症计划以及弗雷德里克国家实验室-小动物成像计划的支持，莱多斯生物医学研究公司，弗雷德里克马里兰，美国。

肿瘤生长分析是利用国家癌症研究所动物实验伦理委员会批准的规程进行的，并遵循美国国家研究委员会《护理和使用指南》的建议。实验室动物"，美国公共卫生局的"实验室动物护理和使用指南"和"人道护理和使用实验室动物政策"。
1. 准备植入细胞
注：MDA-MB-231 人类乳腺腺癌细胞（商业获得）通过斜体病毒与荧光酶基因 III 和增强的绿色荧光蛋白 （GFP） 标记进行稳稳地转染，并在选择抗生素（普洛霉素）的存在下生长.
<ol><li>使用 1 x 106 MDA-MB-231-Luc/GFP 细胞启动细胞培养，并在 T75 培养瓶中加入 15 mL 预热 （37 °C） RPMI 1640 中等，10% 胎儿牛血清 （FBS）。将细胞生长在温度控制的细胞培养箱中，温度为37°C，CO2为25%。每周至少更换 2 次完整的介质。 注意：不要干扰细胞生长，并每天检查细胞生长状况。当细胞达到85%~90%的汇合度时，需要亚培养，以保持增殖阶段。</li>
	<li>在细胞植入步骤前一周，先去除培养瓶中的所有介质，然后用10 mL的1倍磷酸盐缓冲盐水（PBS）进行压湿2倍，最后用完整的介质取代培养瓶中的紫杉霉素。没有紫杉醇。在中加和压垫步骤中，请勿干扰细胞。请记住，从现在起，不要将完整的介质与选择抗生素一起用于所有中等补货步骤。</li>
	<li>在准备植入细胞的当天，在尝试增压之前去除所有完整的介质，以避免胰蛋白酶失活。在烧瓶中加入5mL的胰蛋白酶，使细胞尝试化。监控细胞并检查它们与培养瓶分离。</li>
	<li>大多数细胞分离后，加入10 mL的完整介质，以中和胰蛋白酶活性。接下来，将细胞悬浮液转移到50 mL离心管和离心机，在±150 x g时，以颗粒细胞。离心后取出上清液，然后加入10 mL的1x PBS，重新悬浮细胞并为细胞计数做好准备。</li>
	<li>用细胞计数器对细胞进行计数，并将细胞浓度调整为20 x 106细胞/mL，在含有25%基底膜基质的冷1x PBS中。在 0.1 mL 1x PBS 中注入 2 x 106个细胞，将 25% 的基底膜基质注入每个小鼠的第四个乳腺脂肪垫中。为细胞植入携带额外的针头和注射器，并在植入前将细胞-地下室-膜-基质混合在冰上。 注：注射器和针头有死区。根据针头和注射器的长度、类型和尺寸的选择，具有 0.5 在 26 G G 针中的肺结核注射器可具有高达 70 μL 的死空间10。准备40%~50%以上的细胞植入混合物，以补偿死空间和任何其他意外损失。</li>
</ol>2. 正畸乳腺癌模型和肿瘤大小测量
<ol><li>允许6周大的雌性贫血裸鼠在植入细胞前至少1周适应住房设施。 注： 使用同龄小鼠将减少数据变异。</li>
	<li>每轮，用过滤（0.2 μm）空气对五只患有等环醇的小鼠进行麻醉，流量为1 L/min，3~4分钟。注意小鼠呼吸速率和模式变化，并使用脚趾捏，确保小鼠处于适当的麻醉状态。一旦它们不再移动，取出一只老鼠，用同样的麻醉将鼻锥放在鼻子和嘴上。</li>
	<li>用酒精拭下左4号乳腺。使用细大鼠牙钳，轻轻抬起第4个乳腺，插入25G针。确保针头向上斜，然后稍微拉起柱塞，以确保针头不会击中任何血管。如果没有血液进入注射器，继续缓慢地将100μL的细胞-地下室-膜-基质混合物注射到乳腺脂肪垫中。 注：皮肤下方会出现一个圆形凸起的区域。</li>
	<li>等待 10~15 s 让地下室膜基质变硬，然后取出针头。与感应室中的剩余小鼠重复此过程。将所有用过的针头和注射器放入一个锋利的盒子里。</li>
	<li>对所有小鼠使用相同的乳腺注射部位。密切注意注射部位，注意任何细胞植入混合物从注射部位泄漏。 注意：在几分钟内，鼠标将开始恢复知觉。</li>
	<li>允许异种移植物在进行任何肿瘤尺寸测量前 7-10 天内自由生长，没有任何中断。</li>
	<li>检查所有小鼠的异种移植大小。使用卡钳测量肿瘤大小。使用以下方程确定肿瘤体积 （mm3）： <img src="/files/ftp_upload/60316/60316eq1.jpg"> 其中 L 是最长的尺寸，W 是垂直于 L 的最短尺寸。</li>
	<li>识别和删除超出平均值一个标准差的异常值。只使用具有类似肿瘤大小的小鼠进行实验。随机将小鼠分成不同的治疗组，并开始治疗。</li>
	<li>每周用卡钳2倍测量肿瘤大小。注意异种移植物的所有物理变化（即坏死、撕裂）。</li>
</ol>3. 体内生物发光和体内荧光成像
注：在这项研究中，二维生物发光和荧光成像都在实验的终点进行。生物发光成像 （BLI） 使用配备 16 位冷却 CCD 摄像机和加热成像舞台的商业临床前光学扫描仪进行。
<ol><li>在成像之前，通过在过滤（0.2 μm）空气中将isoflurane设置为3%，在3⁄4分钟内以1L/min的流速麻醉至诱导室中的最多5只含肿瘤小鼠。确保感应室保持在通风罩内，以尽量减少员工接触安曲露。</li>
	<li>使用27 G针，通过腹腔内途径给麻醉小鼠施用D-luciferin（150毫克/千克），并将麻醉小鼠转移到成像室。在扫描仪成像室，将安氟拉纳保持在2%~2.5%，O2作为流速为1 L/min的载体。 注：在手术过程中，通过将加热垫保持在麻醉感应室、成像台（如果舞台未加热）和手术后恢复保持保持37°C的体温。</li>
	<li>在成像研究小鼠之前，通过成像三个额外的肿瘤轴承小鼠（未分配给任何研究组的动物）获得荧光素动力学，使用以下参数，每隔2分钟进行40分钟：激发过滤器堵塞、发射滤光片打开、f/stop 1、FOV-D、中分箱（8 x 8）和自动曝光。使用测量的峰值生物发光信号定义所有后续时间点的最佳图像采集时间窗口。</li>
	<li>执行转移成像时，通过用从黑手套上切出的套筒覆盖高 BLI 信号，从而保护高 BLI 信号免受原发性肿瘤的影响。使用步骤 3.3 中描述的相同参数获取图像，鼠标的腹侧面向相机进行肺转移成像，鼠标的背侧面向相机进行大脑转移成像。 注：有必要测试几个不同品牌的黑手套，以挑选一个最小的自动发光。</li>
	<li>使用扫描仪和数据分析软件，在胸腔或大脑上绘制一个标准形状区域 （ROI），以确保覆盖整个感兴趣的器官以评估转移负担。将生物发光 （BL） 输出量化为总通量（光子/秒）。</li>
	<li>BLI之后，立即通过CO2窒息对小鼠进行安乐死（根据ACUC指南和机构批准的动物协议），用解剖剪刀和钳子提取肺和大脑，用于前活体成像。 注：由于程序不兼容，在同一只小鼠身上不能对肺提取用于前活体成像和肺转移结核计数。</li>
	<li>用1x PBS快速冲洗所有器官，去除任何表面血迹，并将器官放在低自动荧光的黑色塑料板上。将器官输送到多光谱荧光扫描仪，配备光谱解混合能力（固态液晶波长调谐），配备用于 GFP 检测的 12 位 CCD 摄像机。</li>
	<li>通过在10nm的步进尺寸扫描500×720nm，获取提取器官和非肿瘤轴承控制小鼠的多光谱GFP图像（激发滤波器= 457 × 23 nm;排放滤光片= 490 nm长通）。使用非肿瘤轴承控制小鼠的切除器官进行自荧光校正。</li>
	<li>多光谱 GFP 成像后，确定最佳成像设置。根据制造商的协议，对所有目标器官进行图像采集，并进行图像分析（即，为自荧光生成光谱库，为光谱解混合过程生成GFP）。</li>
</ol>4. 转移性乳腺癌细胞的分子检测
<ol><li>在进行前活体成像后，将整个大脑卡在液氮中，储存在-80°C的冰柜中，直到准备好提取DNA。</li>
	<li>对于DNA提取，将整个大脑置于一个5mL同质管与2 mLDNA液灰分缓冲液。使用功率设置为 50 的均质器使卡扣冻结的整个脑组织均化。一旦脑组织完全均质化，将1 mL悬浮液（液化）转移到无DNase和无RNase的2 mL微离心管，并继续根据制造商的协议分离DNA。 注：为了尽量减少结转DNA污染，在每次样品后彻底清洁均质剂，首先在无Nase和无RNase水中用75%乙醇冲洗，然后用1M NaOH溶液冲洗，然后在无DNase中用75%乙醇冲洗，无Nase水，有效减少和销毁任何DNA残留物。</li>
	<li>将DNA乳液缓冲液的100%乙醇的0.5 mL添加到液酸液中。通过反转混合样品，并在室温下储存 3 分钟。 注：不要反转太多次或太大力。脱氧核糖核酸将作为羊毛状沉淀物可见。</li>
	<li>使用移液器尖端将DNA转移到无DNase和无RNase的2 mL微离心管。让样品空气干燥1分钟。加入1 mL 75%乙醇，并反转微离心管3⁄6倍以清洗DNA样品。每次洗涤后通过移液丢弃乙醇。重复洗涤步骤 2x。</li>
	<li>空气将DNA样本干燥10s。然后加入52μL的8mM NaOH溶解DNA样品。脱氧核糖核酸样品的移液2 μL进行DNA定量，并在浓度调整后使用剩余的50μL进行实时PCR测定。 注：NaOH有助于完全溶解DNA样本。</li>
	<li>用分光光度计对每个DNA样品进行2μL定量，并使用A260/280之间的吸收率作为质量检查参考。使用此公式计算 DNA 浓度： <img src="/files/ftp_upload/60316/60316eq2.jpg">
</li>
	<li>将DNA浓度调整到50纳克/μL。对于每个DNA样本，使用50纳克的DNA作为实时PCR测定的起始模板。使用 8 mM NaOH 溶液或无 DNase 和无 RNase 水稀释 DNA 样本。</li>
	<li>使用开源引物设计 Web 门户，在内部设计特定于外源性绿色荧光蛋白 （GFP） 序列的引物对，以便实时检测入侵和殖民远端点的转移细胞中的 GFP 标记。 注：本研究使用F：5'-阿加加卡卡特加格加加加卡-3'，R：5'-TGCTCATAGTGTCG-3'。</li>
	<li>使用快速实时 PCR 试剂和支持快速实时 PCR 协议的实时 PCR 机器。除了常规的 30 个周期放大步骤外，在运行结束时添加一个分离曲线步骤，用于检测任何非特异性放大。 注：分子检测采用以下条件：95°C 2分钟热启动，40个周期95°C 5秒，60°C 15s，最后进行熔融曲线分析。GFP 放大器尺寸为 135 bp。</li>
	<li>使用天真的小鼠大脑DNA（不是MDA-MB-231细胞植入物）作为负对照。使用从MDA-MB-231-GFP/Luc细胞中提取的DNA作为阳性对照。将所有不含DNA模板的PCR试剂添加为无模板控制（NTC）。 注：每次PCR测定都需要PCR控制。</li>
</ol>5. 肺转移性乳腺癌细胞检测
<ol><li>对于为转移性肺结核计数选择的小鼠子组，在前活体成像后立即用异氟兰尼麻醉小鼠（如步骤2.2），进行心脏穿刺以进行血液采集，然后通过宫颈脱位安乐死。</li>
	<li>用解剖剪刀打开胸腔，切过心脏和胸腺，露出气管。</li>
	<li>将装有 Bouin 溶液的 22 G 针的 10 mL 注射器插入气管中。推注射器柱塞，直到折叠的肺部肿胀与+2 mL的布因溶液。一旦肺部膨胀，取出注射器和针头。</li>
	<li>将整个肺放入含有布因溶液的15 mL管中，轻轻反转管子几次，在室温下浸泡24小时。</li>
	<li>24小时后，从管子中取出布因溶液，用水冲洗肺部，然后用70%乙醇将其放回管中。使用解剖显微镜计算肺部表面的转移（白色斑块或结节）。</li>
</ol>6. 数据收集和分析
<ol><li>在电子电子表格上记录肿瘤体积数据，以及体内和体内成像数据，以便轻松输入、收集和管理数据。</li>
	<li>实验结束时，将所有数据传输到电子电子表格和统计软件，进行数据绘图和统计分析。</li>
</ol>

<ol>
	<li>Abramson, V. G., Lehmann, B. D., Ballinger, T. J., Pietenpol, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subtyping+of+triple-negative+breast+cancer:+implications+for+therapy.">Subtyping of triple-negative breast cancer: implications for therapy.</a> Cancer. 121, 8-16 (2015).</li><li>Zhuang, X., Zhang, H., Hu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+and+Microenvironment+Plasticity:+Double-Edged+Swords+in+Metastasis.">Cancer and Microenvironment Plasticity: Double-Edged Swords in Metastasis.</a> Trends in Pharmacological Sciences. 40 (6), 419-429 (2019).</li><li>Campbell, J. P., Merkel, A. R., Masood-Campbell, S. K., Elefteriou, F., Sterling, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+bone+metastasis.">Models of bone metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (67), e4260 (2012).</li><li>Saha, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+bioluminescence+imaging+of+tumor+hypoxia+dynamics+of+breast+cancer+brain+metastasis+in+a+mouse+model.">In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics of breast cancer brain metastasis in a mouse model.</a> Journal of Visualized Experiments. (56), e3175 (2011).</li><li>Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Portal+Vein+Injection+Model+to+Study+Liver+Metastasis+of+Breast+Cancer.">A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer.</a> Journal of Visualized Experiments. (118), e54903 (2016).</li><li>Lim, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+tumor+metastases+and+osteolytic+lesions+with+bioluminescence+and+micro+CT+imaging.">Monitoring tumor metastases and osteolytic lesions with bioluminescence and micro CT imaging.</a> Journal of Visualized Experiments. (50), e2775 (2011).</li><li>Bauerle, T., Komljenovic, D., Berger, M. R., Semmler, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-modal+imaging+of+angiogenesis+in+a+nude+rat+model+of+breast+cancer+bone+metastasis+using+magnetic+resonance+imaging,+volumetric+computed+tomography+and+ultrasound.">Multi-modal imaging of angiogenesis in a nude rat model of breast cancer bone metastasis using magnetic resonance imaging, volumetric computed tomography and ultrasound.</a> Journal of Visualized Experiments. (66), e4178 (2012).</li><li>Katsuta, E., Oshi, M., Rashid, O. M., Takabe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generating+a+Murine+Orthotopic+Metastatic+Breast+Cancer+Model+and+Performing+Murine+Radical+Mastectomy.">Generating a Murine Orthotopic Metastatic Breast Cancer Model and Performing Murine Radical Mastectomy.</a> Journal of Visualized Experiments. (141), e57849 (2018).</li><li>Rashid, O. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+tail+vein+injection+a+relevant+breast+cancer+lung+metastasis+model?.">Is tail vein injection a relevant breast cancer lung metastasis model?.</a> Journal of Thoracic Disease. 5, 385-392 (2013).</li><li>Bhambhani, V., Beri, R. S., Puliyel, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inadvertent+overdosing+of+neonates+as+a+result+of+the+dead+space+of+the+syringe+hub+and+needle.">Inadvertent overdosing of neonates as a result of the dead space of the syringe hub and needle.</a> Archives of Disease in Childhood: Fetal and Neonatal Edition. 90, F444-F445 (2005).</li><li>Zhang, G. L., Zhang, Y., Cao, K. X., Wang, X. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+Injection+of+Breast+Cancer+Cells+into+the+Mice+Mammary+Fat+Pad.">Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad.</a> Journal of Visualized Experiments. (143), e58604 (2019).</li><li>Tavera-Mendoza, L. E., Brown, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+less+invasive+method+for+orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mouse+mammary+gland.">A less invasive method for orthotopic injection of breast cancer cells into the mouse mammary gland.</a> Laboratory Animals. 51, 85-88 (2017).</li><li>Paschall, A. V., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+Orthotopic+Mouse+Model+of+Spontaneous+Breast+Cancer+Metastasis.">An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis.</a> Journal of Visualized Experiments. (114), e54040 (2016).</li><li>Kocaturk, B., Versteeg, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Orthotopic+injection+of+breast+cancer+cells+into+the+mammary+fat+pad+of+mice+to+study+tumor+growth.">Orthotopic injection of breast cancer cells into the mammary fat pad of mice to study tumor growth.</a> Journal of Visualized Experiments. (96), e51967 (2015).</li><li>Fletcher, S. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+breast+adipose+tissue:+characterization+of+factors+that+change+during+tumor+progression+in+human+breast+cancer.">Human breast adipose tissue: characterization of factors that change during tumor progression in human breast cancer.</a> Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36, 26 (2017).</li><li>Giuliano, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Axillary+dissection+vs+no+axillary+dissection+in+women+with+invasive+breast+cancer+and+sentinel+node+metastasis:+a+randomized+clinical+trial.">Axillary dissection vs no axillary dissection in women with invasive breast cancer and sentinel node metastasis: a randomized clinical trial.</a> Journal of the American Medical Association. 305, 569-575 (2011).</li><li>Rummel, S., Hueman, M. T., Costantino, N., Shriver, C. D., Ellsworth, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour+location+within+the+breast:+Does+tumour+site+have+prognostic+ability?.">Tumour location within the breast: Does tumour site have prognostic ability?.</a> Ecancermedicalscience. 9, 552 (2015).</li><li>Kroman, N., Wohlfahrt, J., Mouridsen, H. T., Melbye, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+tumor+location+on+breast+cancer+prognosis.">Influence of tumor location on breast cancer prognosis.</a> International Journal of Cancer. 105, 542-545 (2003).</li><li>Bao, J., Yu, K. D., Jiang, Y. Z., Shao, Z. M., Di, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+laterality+and+primary+tumor+site+on+cancer-specific+mortality+in+breast+cancer:+a+SEER+population-based+study.">The effect of laterality and primary tumor site on cancer-specific mortality in breast cancer: a SEER population-based study.</a> PLoS One. 9, e94815 (2014).</li><li>Faustino-Rocha, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estimation+of+rat+mammary+tumor+volume+using+caliper+and+ultrasonography+measurements.">Estimation of rat mammary tumor volume using caliper and ultrasonography measurements.</a> Lab Animal. 42, 217-224 (2013).</li><li>Mullen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+Matrigel+to+facilitate+the+establishment+of+human+cancer+cell+lines+as+xenografts.">The use of Matrigel to facilitate the establishment of human cancer cell lines as xenografts.</a> Methods in Molecular Medicine. 88, 287-292 (2004).</li><li>Jensen, R. L., Leppla, D., Rokosz, N., Wurster, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrigel+augments+xenograft+transplantation+of+meningioma+cells+into+athymic+mice.">Matrigel augments xenograft transplantation of meningioma cells into athymic mice.</a> Neurosurgery. 42, 130-136 (1998).</li><li>Mullen, P., Langdon, S. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+matrigel+in+the+establishment+of+ovarian+carcinoma+cell+lines+as+xenografts.">The use of matrigel in the establishment of ovarian carcinoma cell lines as xenografts.</a> Methods in Molecular Medicine. 39, 199-203 (2001).</li><li>Fliedner, F. P., Hansen, A. E., Jorgensen, J. T., Kjaer, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+matrigel+has+no+influence+on+tumor+development+or+PET+imaging+in+FaDu+human+head+and+neck+cancer+xenografts.">The use of matrigel has no influence on tumor development or PET imaging in FaDu human head and neck cancer xenografts.</a> BMC Medical Imaging. 16, 5 (2016).</li><li>Mullen, P., Ritchie, A., Langdon, S. P., Miller, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+Matrigel+on+the+tumorigenicity+of+human+breast+and+ovarian+carcinoma+cell+lines.">Effect of Matrigel on the tumorigenicity of human breast and ovarian carcinoma cell lines.</a> International Journal of Cancer. 67, 816-820 (1996).</li><li>Zinn, K. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive+bioluminescence+imaging+in+small+animals.">Noninvasive bioluminescence imaging in small animals.</a> Journal of the Institute for Laboratory Animal Research. 49, 103-115 (2008).</li><li>Troy, T., Jekic-Mullen, D., Sambucetti, L., Rice, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+Comparison+of+the+Sensitivity+of+Detection+of+Fluorescent+and+Bioluminescent+Reproters+in+Animal+Models.">Quantitative Comparison of the Sensitivity of Detection of Fluorescent and Bioluminescent Reproters in Animal Models.</a> Molecular Imaging. 3 (1), 9-23 (2004).</li></ol>

作者没有什么可透露的。

在动物中研究TNBC时，已经开发了两种母鼠模型：免疫受损小鼠（即心酸裸鼠、NSG小鼠）的MDA-MB-231人类乳腺腺癌细胞，以及免疫能力BALB/c小鼠中的4T1。两种型号都有其优点。研究动物模型的选择取决于研究目标。例如，MDA-MB-231模型是生长在免疫功能低下小鼠中的人类TNBC细胞系，模仿免疫抑制的人类乳腺癌患者。另一方面，BALB/c小鼠中正畸4T1三阴性鼠乳癌细胞的侵入性表型密切模仿转移过程，因为它发生在第四阶段人类乳腺癌患者。与静脉注射细胞的方法不同，人类MDA-MB-231乳腺癌细胞同样被注射到乳腺脂肪垫11，12,12在正交乳腺癌模型11，13。,13肿瘤生长时间越长，转移能力在生理上更相关，因此它不是人工转移癌模型4,4、14。这种自发转移模型密切模仿人类乳腺癌的发展，除了启动阶段。这是转移性乳腺癌体内药物筛查和疗效评估的重要模型。
小鼠中的肿瘤植入位在提供维持肿瘤生长的微环境以及选择类似于人类的转移性表型方面起着至关重要的作用。近端淋巴结和脂肪组织的存在是影响乳腺癌疾病进展的关键因素15，16。15,在人类患者中，淋巴结和脂肪组织都是影响恶性肿瘤,18,和乳腺癌发病率的关键相互作用因素。因此，选择注射部位的正确解剖位置，可以对人类疾病影响肿瘤模型的相关性。这项研究使用第四个乳腺作为植入部位，主要是因为上述要求，它是在解剖学上更容易和更容易操作。
不同的肿瘤体积计算方法，研究人员可以选择任何他们认为合适的。本研究选择的算法是基于福斯蒂诺-罗查等人的发现，他比较了不同的肿瘤体积计算公式，并得出结论，下面的公式是最准确的20。
<img src="/files/ftp_upload/60316/60316eq3.jpg">
基底膜基质是一种重要的细胞外基质，用于各种体外21和体内22、23,23检测。关于地下膜基质对异种移植恶性肿瘤的影响的报告22、24、25日有矛盾。22,24,25它似乎只影响异种移植的初始建立，对异种移植生长25没有进一步的影响。对于所述的异种移植植入，基底膜基质与癌细胞混合，以增加植入前的细胞/凝胶混合溶液粘度。基底膜基质的存在减少了注射部位的混合溶液损失，并将混合溶液保持在植入部位，从而提高了植入异种移植量的均匀性。
MDA-MB-231细胞系是一种恶性不朽的人类乳腺腺癌细胞系，因其三阴性状态，是乳腺癌研究中流行的工具。使用双分子（透明酶和GFP）细胞系，可以更灵活地处理体内和前活体成像。众所周知，生物发光信号比GFP信号具有更高的灵敏度、深度可探测性和卓越的对比度（信噪比）。因此，它是一种广泛使用的全身成像成像方式。遗憾的是，生物发光检测受到信号检测线性的狭窄时间窗口（荧光素注射后±15~20 分钟）的限制。当动物被安乐死时，BLI信号会迅速减弱。如果许多小鼠需要安乐死，需要收集多个组织或器官，这就成为一个实验设计问题。在这些研究中，血液是通过直接心脏穿刺采集的，大脑、原发性肿瘤、肺和受影响的淋巴结在40只小鼠身上被检查。当器官被采集并准备进行前活体成像时，生物发光信号已检测不到。因此，GFP检测更适合在这些情况下。GFP 信号的发射在可见范围内，在这些波长下，由于血液（即血红蛋白）引起的信号吸收明显较高。此外，由于 NADH、脂颜料和黄酮，可见范围内的自动荧光导致显著背景，因此很难区分低电平 GFP 信号和自荧光背景。采用多光谱荧光成像方法，而不是传统的滤波器对成像，并使用光谱解混合算法有助于识别感兴趣器官中的真实 GFP 信号。因此，通过结合生物发光成像在体内检测和多光谱GFP成像在活体器官/组织评估中的优势，可量化的数据可以在大量小鼠中最大化。
无论为动物研究选择哪种方法，强烈建议在器官/组织检索之前提取所有血液，尤其是针对转移负担的研究。该协议通过实时PCR检测，检测从正交乳腺癌模型中小鼠（未显示的数据）中从小鼠获得的整个血液样本的GFP信号。尽量减少器官/组织的血液量将减少目标器官中的误报信号。
最后，使用MDA-MB-231-Luc/GFP细胞的正位乳腺癌模型是一种高度相关的动物模型，它密切模仿人类TNBC患者的状况。该模型对于研究、监测和评估类似人类的肿瘤微环境的治疗效果至关重要。双报告细胞系的使用进一步提高了这种正交乳腺癌模式的实用性。

在美国，大约八分之一的妇女将在她有生之年患上侵入性乳腺癌，其中10%-20%的妇女将被诊断为侵略性三重阴性乳腺癌（TNBC）亚型。虽然主要病变可以在大多数情况下被手术切除，但亚临床微转移和化学抵抗使其成为一种难以治愈的疾病。重要的是，大多数转移性TNBC患者最终复发，即使他们在早期阶段1接受治疗。因此，癌症异质性、微转移性和治疗性是制约TNBC患者成功临床结果的三大挑战。因此，迫切需要更好地了解TNBC的多态分子背景，并开发限制转移性疾病的有效治疗剂。
肿瘤转移是一个多步骤的过程，肿瘤细胞控制并篡夺其微环境，通过膜降解和肿瘤细胞从原发病变中逃脱，通过进入（即血管内）和退出（即外显）血管，最终适应和殖民化在远端组织床2促进自身传播。动物模型已经开发用于研究乳腺癌转移，其中通常实施两种方法：直接血液循环注射和正交植入。常用的血液循环注射方法包括尾静脉注射，其他方法包括直接心脏注射3，直接脑注射4，直接肝注射5也已被使用。直接血液循环注射通常被称为人工转移模型，这是快速和容易，但生理上不太准确，因为它绕过肿瘤从原发病变和血管内6，7，87,8逃脱。与直接注射模型相比，正交乳腺癌模型在肺癌等远程器官中可检测到的转移病变的发生需要更长的时间，但它在生理上更相关，因为它密切模仿了发生在人类中的多步转移过程。重要的是，2013年的一项研究9比较了尾静脉注射和正交模型，发现注入尾静脉的乳腺癌细胞和从尾部静脉注射后从肺转移病变中分离出来的乳腺癌细胞表现出类似的全球基因表达特征。相比之下，正位注射乳腺癌细胞的全球基因表达特征与正交注射细胞9引起的肺转移病变的基因组表达特征明显不同。这些观察表明，正位模型在生理上更相关，因为转移性病变经历的选择过程类似于转移的多步过程，因为它发生在人类身上。
本研究描述了裸鼠的正位乳腺癌（MDA-MB-231-Luc/GFP）模型，该模型在我们的实验室中进行了优化，用于成像检测技术以及新型生物标志物的鉴定和靶向化疗剂的开发。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Bouins Solution</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>HT10132-1L</td>
			<td>Lung metastatic nodule staining</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>D-Luciferin, Potassium Salt</td>
			<td>GoldBio</td>
			<td>LUCK-1G</td>
			<td>Luciferase substrate</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNAzol</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10503027</td>
			<td>DNA extraction Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Excel</td>
			<td>Microsoft</td>
			<td></td>
			<td>Spreadsheet software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>homogenizer</td>
			<td>Virtis</td>
			<td>Cyclone Virtishear</td>
			<td>For tissue homogenization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IVIS SPECTRUM scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>fluorescence and BLI imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Maestro GNIR-FLEX fluorescence scanner</td>
			<td>Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td>fluorescence imaging system</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MatriGel Matrix</td>
			<td>Corning</td>
			<td>356234</td>
			<td>Store at -20C and keep old (4 C) when in use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MDA-MB-231 / Luciferase-2A-GFP Stable Cell Line</td>
			<td>GenTarget</td>
			<td>SC044</td>
			<td>Dual Reporter human breast cancer cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>EVOS</td>
			<td>histology image capture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>10010049</td>
			<td>rinse buffer</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Primer3</td>
			<td>MIT</td>
			<td></td>
			<td>Primer Design</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Prism</td>
			<td>GraphPad</td>
			<td></td>
			<td>Statistical Analysis Software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Puromycin</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>A1113803</td>
			<td>Antibiotics</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI 1640 media</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>61870127</td>
			<td>Culture media</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SeniFAST SYBR Lo-ROX kit</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-94020</td>
			<td>Fast Real-Time PCR Reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>StepOne Plus Real-Time PCR system</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td>Real-Time PCR machine</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

studying triple negative breast cancer using orthotopic breast cancer model

三阴性乳腺癌 （TNBC） 是一种具有攻击性的乳腺癌亚型，治疗选择有限。与恶性肿瘤较不强的患者相比，TNBC患者5年生存率为77%，其特有的耐药表型和转移负担。为此，建立了鼠型模型，旨在确定限制TNBC肿瘤生长和转移传播的新治疗策略。本研究描述了TNBC正位模型的实用指南，其中MDA-MB-231乳腺癌细胞悬浮在地下室膜基质中，植入第四个乳腺脂肪垫，密切模仿人体癌细胞的行为。讨论了通过卡钳测量肿瘤、通过体内和活体成像进行肺转移评估以及分子检测。该模型为研究疗效提供了一个极好的平台，特别适用于原发性肿瘤与远端转移位点相互作用的研究。

卡钳的肿瘤体积测量是评估治疗效果的成熟方法（图1）。植入的细胞数量、基底膜基质的使用、微生物群、设施清洁度和注射部位是影响肿瘤生长速度的关键因素。
与 GFP 成像不同，BLI 要求在 BLI 成像前至少 15-20 分钟管理荧光酶基板。此外，小鼠应变、细胞系、治疗和荧光酶报告器都会影响生物发光信号水平。因此，为了获得各研究小组之间的可比信号，必须进行预成像BLI动力学研究，以确定最佳成像时间范围（图2）。
由于优越的信号背景比26，27，整个体内生物发光成像是相当敏感的检测低水平转移信号相比，GFP方法（图3）。26,此外，生物发光信号比GFP提供更深的穿透深度几毫米。然而，生物发光信号的产生需要ATP，这是评估活体组织样本的一个限制因素。如果动物处理迅速，那么BLI可能是获得转移定量结果的可行方法。实现这一目的的一个方法是一次加工一只动物。然而，这种方法对于这项研究来说并不可行，因为使用了大量小鼠。当在45分钟左右的透明明素注射后成像器官时，没有检测到BLI信号。在这种情况下，使用双报告器单元行非常有用。由于GFP分子的稳定性，研究人员有足够的时间在捕获来自目标器官的GFP信号之前处理尸体（图4）。
图 5提供了一个真实的例子，用于校准器肿瘤大小测量如何扭曲数据解释，因为异种移植物失去了大部分可行的肿瘤细胞含量，但仍保持其大质量和形状。对这些异种移植物进行组织病理学检查，表明质量内部有坏死（图5B）。
对于挑战正交性乳腺癌模型中脑转移成像结果的研究人员来说，通过实时PCR进行分子检测可以提供令人信服的证据（图6）。在这种情况下，外源性 GFP DNA 序列是解决此问题的最佳方法，因为转染的 GFP DNA 序列在人类或啮齿动物中并不自然存在。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig1.jpg"> 图1：肿瘤体积测量。使用卡钳进行肿瘤体积/载荷测量始于异种移植植入后的第 10 天，然后每周测量 2 倍，直到实验结束。误差条按 SEM 值计算。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig1large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图形的较大版本。</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig2.jpg"> 图 2：确定最佳图像采集窗口。左图：选择一只带有大型异种移植物的小鼠和一只带有小异种移植物的小鼠，以获得最佳的荧光素动力学范围测定。右图：路西法林动力学曲线通过每2分钟获取一次图像获得，40分钟。观察到15-22分钟之间的高原，这被用作所有后续成像的最佳图像采集时间。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig2large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图形的较大版本。</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig3.jpg"> 图3：全身BLI成像。L：全身BLI成像。M：下身覆盖着黑色手套袖子的通风视图。R：下身覆盖着黑色手套袖子的背带视图。通过BLI成像在腹腔视图中检测到气囊淋巴结转移。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig3large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图形的较大版本。</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig4.jpg"> 图4：exvivo BLI/GFP信号检测。在老鼠牺牲20分钟后，从同一只老鼠的大脑和肺部检测到GFP信号。在路西法林注射后45分钟未检测到BLI信号。在幼稚的小鼠大脑和肺部未检测到GFP信号。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig4large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图形的较大版本。</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig5.jpg"> 图5：光学成像技术优于卡钳测量机的优势。（A） 在原发性肿瘤中显示体内 GFP 信号检测的代表性图像。只有一小部分异种移植物显示GFP信号，这表明质量的很大一部分是频闪。这不能由传统的卡钳测量来确定，并可能导致不准确的结论。此示例强调了光学成像对动物模型研究的重要性。（B） 同一只小鼠的组病理学部分显示坏死区域（即内区）也有助于肿瘤大小计算。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig5large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图形的较大版本。</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60316/60316fig6.jpg"> 图 6：熔融曲线分析。显示 GFP 放大器特异性的熔体曲线图。从MDA-MB-231-Luc/GFP植入小鼠的大脑获得的DNA和从培养中生长的MDA-MB-231-Luc/GFP细胞分离的DNA（阳性对照）被测定。进行实时PCR测定以评估脑组织中GFP的含量。（A， B）正对照的熔融曲线和从小鼠大脑中提取的DNA分别。（C） 面板 A 和 B 的重叠曲线，指示来自小鼠大脑 DA 的峰值信号特定于外源 GFP 序列。<a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60316/60316fig6large.jpg" target="_blank">请点击此处查看此图形的较大版本。</a>

Watch this Scientific Journal Video about Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model at JoVE.com

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model (Video) | JoVE

这项工作预设了一种高级协议，通过检测绿色荧光蛋白和生物发光信号以及定量分子检测技术的集成来准确评估肿瘤负荷。

研究使用正交乳腺癌模型的三阴性乳腺癌

Triple-negative breast cancer (TNBC) is an aggressive breast cancer subtype with limited therapeutic options. When compared to patients with less ...

我们的协议通过包括一个GPC标签，克服了有限的生物发光成像窗口，这也有助于通过PCR分析检测和定量微米位。由于GP标签绕过有限的生物发光采集窗口，更多的受试者可以成像，而不会丢失信号，并且错误阴性结果的可能性是有限的。这项研究将有助于研究人员评估抗癌剂的疗效。这种方法为对EMT、耐药性和与转移过程相关的癌症干细胞机制以及抗癌药物开发感兴趣的研究人员提供了一个有用的模型。在确认对踏板反射缺乏反应后，用酒精拭子左第四乳腺，并使用细的鼠牙钳稍微抬起第四乳腺。确保尖端是斜面，插入一个25表针连接到一毫升注射器，其中包含100微升的细胞地下室膜基质混合，并稍微缩回柱塞，以确保针不接触任何血管。为了进行比较结果，肿瘤细胞注射部位必须在所有接受动物之间保持一致。如果没有血液进入注射器，慢慢将整个溶液的体积注射到乳腺脂肪垫中。一个圆形凸起的质量将出现在皮肤下。等待 10 到 15 秒，让地下室膜基质硬化，然后取出针头，让异种移植在执行肿瘤尺寸测量前 7 到 10 天自由生长，而不会中断。然后使用卡钳测量所有小鼠异种移植的大小，并使用指示的方程确定肿瘤体积。在成像研究动物之前，使用指示的参数，每隔两分钟对三只额外的肿瘤携带小鼠进行成像，间隔为 40 分钟，以获得用于研究的荧光素动力学。使用峰值测量的生物发光信号定义所有后续时间点的最佳图像采集时间窗口。要执行转移成像，请用黑手套的袖子切割覆盖原发性肿瘤，将麻醉小鼠放入扫描仪中，然后使用与鼠标对着相机的腹侧相同的参数对白西林信号进行成像，而小鼠的背侧则面对相机进行脑转移成像。使用扫描仪和数据分析软件，绘制图像区域感兴趣的区域，以确保覆盖整个感兴趣的器官，以便评估转移性负担，并量化生物发光输出为总通量和光子/秒。生物发光信号量化后立即采集大脑和肺组织，并迅速冲洗PBS中的器官，以去除任何表面的血渍。将器官放在低自动荧光黑色塑料板上，将样品运送到配备光谱非混合功能的多光谱荧光扫描仪中，以进行 GFP 检测。为了获得提取器官的多光谱GP图像，扫描500至720纳米的器官，步幅为10纳米。为了获得组织自动荧光剖面，扫描未注射对照小鼠的切除器官。此外，图像GP正组织，如原发性肿瘤获得自动荧光混合GP配置文件。根据制造商的协议处理这些光谱，以建立具有纯 GFP 和自动荧光配置文件的光谱库。在确认光谱库的准确性并分离GGFP信号与组织自动荧光背景后，利用同一库将研究的所有图像解混合。对于捕捉冷冻后提取的DNA，将整个大脑放在一个五毫升均质管中，其中包含两毫升的DNA解解缓冲液，并使用设置为50的均质剂使组织均质化。当组织完全均质化后，将一毫升的莱酸盐转移到脱氧核糖核酸和RNAse自由两毫升微离心管中，并按照制造商的协议分离DNA。将 500 微升 100%乙醇添加到分离物中，然后通过反转混合样品。在室温下三分钟后，使用移液器将羊毛状DNA沉淀物转移到新的两毫升DNAse和RNASe自由管中。让样品风干一分钟，然后向管中加入一毫升 75%乙醇，并反转管子三到六次以清洗样品。上次倒置后丢弃乙醇，然后每次洗涤用新鲜乙醇清洗DNA两次，正如刚刚证明的。最后一次洗涤后，将样品风干10秒钟，然后溶解在52微升8毫摩尔氢氧化钠中的DNA。将两微升的DNA等分物转至分光光度计小瓶，根据公式使用 A260 和 280 之间的吸收比量化样品中的 DNA 浓度。使用额外的八毫摩尔氢氧化钠将样品的DNA浓度调整为每微升50毫微克，并使用开源底转设计网页门户设计特定于内部外源绿色GP序列的底像对，以便实时检测GP标签和侵入和殖民肿瘤的转移细胞的PCR。然后使用快速实时 PCR 试剂和实时 PCR 机，支持快速实时 PCR 协议，以便对样品进行实时定量 PCR 分析。为了检测肺部转移性乳腺癌细胞，使用解剖剪刀打开胸腔，切过心脏和胸腺以暴露气管。将一个22表针连接到一个10毫升的注射器，其中包含Bouin溶液到气管中，并压抑柱塞，直到折叠的肺肿了约两毫升溶液。一旦肺被充气，取出注射器和针头，将整个肺转移到含有新鲜 Bouin 溶液的 15 毫升管中。轻轻反转管子几次，然后离开组织在室温下浸泡24小时。第二天，用水冲洗肺部，将样品放入70%乙醇管中。然后使用解剖显微镜计算肺部表面转移性白色斑块和结节的数量。钳子肿瘤体积测量是评估治疗效果的成熟方法。为了获得研究组之间的可比信号，必须进行成像前BLI动力学研究，以确定最佳成像时间框架。由于信号与背景比率优越，与GP方法相比，整个体内的BLI在检测低电平转移信号方面相当敏感。然而，由于GP分子的稳定性质，研究人员有足够的时间在捕获目标器官的GGF信号之前处理尸体在双记者研究中。这个真实的例子演示了卡钳肿瘤大小测量如何扭曲数据解释，因为这个异种移植失去了大部分可行的肿瘤细胞含量，同时仍然保持其大质量和形状。通过实时PCR进行分子检测，还可以利用外源性GP DNA测序，在正畸乳腺癌模型中提供脑转移的令人信服的证据，因为转染的GGFP DNA序列在人类或啮齿动物中并不自然存在。植入点应与癌症恶性肿瘤在生理和解剖学上有关。肿瘤基因和蛋白质表达都可以在原位和远点位进行评估，转移细胞可以分离，以进一步表征。

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Studying Triple Negative Breast Cancer Using Orthotopic Breast Cancer Model

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures

Utilizing Functional Genomics Screening to Identify Potentially Novel Drug Targets in Cancer Cell Spheroid Cultures (Video) | JoVE

利用功能基因组筛选识别在肿瘤细胞球体培养潜在的新药物靶标

The identification of functional driver events in cancer is central to furthering our understanding of cancer biology and indispensable for the discovery ...

科研

癌症研究

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer

A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer (Video) | JoVE

门静脉注射模型来研究肝转移乳腺癌

Breast cancer is the leading cause of cancer-related mortality in women worldwide. Liver metastasis is involved in upwards of 30% of cases with breast ...

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema

Ultrasonographic Evaluation of Breast Cancer-related Lymphedema (Video) | JoVE

乳腺癌相关的淋巴水肿的超声评价

Lymphedema is one of the most common complications after breast cancer surgery. There are many diagnostic tools for lymphedema, but no standard method yet ...

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish

Invasive Behavior of Human Breast Cancer Cells in Embryonic Zebrafish (Video) | JoVE

在斑马鱼胚胎人乳腺癌细胞的侵袭行为

In many cases, cancer patients do not die of a primary tumor, but rather because of metastasis. Although numerous rodent models are available for studying ...

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad

Orthotopic Injection of Breast Cancer Cells into the Mice Mammary Fat Pad (Video) | JoVE

乳腺癌细胞原位注射到小鼠乳房脂肪板

A proper animal model is crucial for a better understanding of diseases. Animal models established by different methods (subcutaneous injections, ...

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases

Performing Data Mining And Integrative Analysis Of Biomarker in Breast Cancer Using Multiple Publicly Accessible Databases (Video) | JoVE

利用多个可公开访问的数据库对乳腺癌生物标志物进行数据挖掘和综合分析

In recent years, emerging databases were designed to lower the barriers for approaching the intricate cancer genomic datasets, thereby, facilitating ...

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors

Obtaining Cancer Stem Cell Spheres from Gynecological and Breast Cancer Tumors (Video) | JoVE

从妇科和乳腺癌肿瘤获得癌症干细胞球

Cancer stem cells (CSC) are a small population with self-renewal and plasticity which are responsible for tumorigenesis, resistance to treatment and ...

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer

Orthotopic Transplantation of Breast Tumors as Preclinical Models for Breast Cancer (Video) | JoVE

乳腺癌临床前模型乳腺肿瘤的矫形移植

Preclinical models that faithfully recapitulate tumor heterogeneity and therapeutic response are critical for translational breast cancer research. ...

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model

Using Computer-based Image Analysis to Improve Quantification of Lung Metastasis in the 4T1 Breast Cancer Model (Video) | JoVE

利用计算机图像分析提高4T1乳腺癌模型中肺转移的定量

Breast cancer is a devastating malignancy, accounting for 40,000 female deaths and 30% of new female cancer diagnoses in the United States in 2019 alone. ...

Studying TGF-&#946; Signaling and TGF-&#946;-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells

Studying TGF-ÃŽÂ² Signaling and TGF-ÃŽÂ²-induced Epithelial-to-mesenchymal Transition in Breast Cancer and Normal Cells (Video) | JoVE

研究TGF-β信号和TGF-β引起的乳腺癌和正常细胞的上皮到中位过渡

Transforming growth factor-&#946; (TGF-&#946;) is a secreted multifunctional factor that plays a key role in intercellular communication. Perturbations of ...