Name: a macrophage reporter cell assay to examine toll-like receptor-mediated nf-kb/ap-1 signaling on adsorbed protein layers on polymeric surfaces
Uploaded: 2020-01-07T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Macrophage Reporter Cell Assay to Examine Toll-Like Receptor-Mediated NF-kB/AP-1 Signaling on Adsorbed Protein Layers on Polymeric Surfaces at JoVE.com

Författarna erkänner tacksamt operativa finansiering från kanadensiska institut för hälso-forskningsprojektet (PTJ 162251), Queen ' s University senaten rådgivande forskningskommittén och infrastrukturstöd från den kanadensiska Stiftelsen för innovation John Evan: s ledarskaps fond (Project 34137) och ministeriet för forskning och innovation Ontario forskningsfonden (projekt 34137). L.A.M. stöddes av en Queen ' s University R. Samuel McLaughlin Fellowship, en naturvetenskap och teknik forskningsråd Kanada kanadensiska Graduate stipendium Master ' s Award och en Ontario Graduate stipendium. Författarna vill tacka Dr Myron szewczuk för hans generösa gåva NF-κb/AP-1 reporter makrofag cellinje och DRS. Michael blennerhassett och Sandra lourenssen för användning av deras gel Imaging system och plattan läsare.

1. media och REAGENSBEREDNING
<ol><li>Förbered fibroblast media. Kombinera 450 mL av Dulbecco modifierade Eagle medium (DMEM), 50 mL av foster bovint serum (FBS), och 5 mL av penicillin/streptomycin. Förvaras vid 4 ° c i upp till 3 månader.</li>
	<li>Förbered reportern makrofagtillväxtmedia i 50 mL-aliquoter. Kombinera 45 mL DMEM, 5 mL FBS, 5 μg/mL Mycoplasma elimination reagens (tabell över material) och 200 μg/ml phleomycin D1 (tabell över material). Förvaras vid 4 ° c i ...

Ett primärt fokus i vårt labb är värd svaret på solida biomaterial mjukvävnads implantat, och i synnerhet hur de cellulära skador som uppstått under implantations proceduren påverkar värd svaret. Det arbete som presenteras här beskriver preliminära experiment med hjälp av en reporter makrofag cellinjer och in vitro-genererade fuktig-innehållande cellulära lysat, att undersöka påverkan av molekyler som frigörs vid cellulära skador (dvs. från implantatkirurgi) på makrofagrespons på biomaterial. Fibrob...

Den främmande kropp reaktionen (FBR) är en kronisk värd svaren så pass kanna negativ påverka den utförande av en implanterat material eller anordning (e.g., läkemedel leveransen anordningen, bio sensoren), igenom den ihållande frige av upphetsande medlare och vid hindra integrationen emellan den implanterat material och den omgivande vävnad1. Detta medfödda immunsvar initieras av implantation förfarandet och kännetecknas av den långsiktiga närvaron av medfödda immunceller och fibrösa kapselbildning runt implantatet1. Inom ramen för material värd svar, makrofage-material interaktioner har en betydande inverkan på utvecklingen av värd svar och utveckling av en FBR1. Makrofager är en diversifierad medfödda immunceller population, rekryteras till implantatstället antingen från vävnad bosatt makrofagpopulationer eller från blodet som monocyte-härledda makrofager. De börjar ackumuleras på implantatstället strax efter implantation, och inom några dagar bli den dominerande cellpopulationen i implantatet microenvironment. Material-anhängare makrofager, tillsammans med främmande kropp jätteceller (fbgc) bildas genom makrofagfusion, kan kvarstå på materialets yta för livslängden på implantatet2,3. Följaktligen, makrofager anses vara viktiga aktörer i den främmande kroppen svar på grund av deras roller Iscensätt de karakteristiska stegen i FBR: akut inflammatorisk reaktion, vävnad remodeling, och bildandet av fibrotisk vävnad1.
Toll-liknande receptorer (TLRs) är en familj av mönsterigenkänning receptorer som uttrycks av många immunceller, inklusive makrofager, och har visat sig spela en viktig roll i inflammation och sårläkning. Förutom patogen-härledda ligander, TLRs kan binda endogena molekyler, känd som skador-associerade molekylära mönster (DAMPs), som frigörs under cell nekros och aktivera inflammatoriska signalering vägar som resulterar i produktionen av proinflammatoriska cytokiner4. Vi och andra har föreslagit att skador som uppkommit under mjuk vävnad biomaterial implantation förfaranden release damps, som sedan adsorberas till biomaterial ytor förutom blodproteiner och modulera efterföljande cell-material interaktioner5,6. När makrofager interagerar med adsorberat protein skikt på ett implantat, deras yta TLRs kan känna igen adsorberade DAMPs och aktivera proinflammatoriska signalering kaskader, vilket leder till NF-κB och AP-1 transkription faktor aktivering och produktion av proinflammatoriska cytokiner. Vi har tidigare visat att murina makrofager har signifikant ökad NF-κB/AP-1 aktivitet och tumörnekrosfaktor α (TNF-α, proinflammatorisk cytokin) sekretion som svar på fuktig-innehållande adsorberat protein skikt på en mängd olika polymera ytor jämfört med ytor med adsorberat serum eller plasma endast (dvs inga DAMPs närvarande), och att detta svar är till stor del förmedlas av TLR2, medan TLR4 spelar en mindre roll5.
NF-κb/AP-1 reporter makrofager cellinjer (tabell över material) som används i detta protokoll är en bekväm metod för att mäta relativ NF-κb och AP-1 aktivitet i makrofager5,7,8. I kombination med TLR väg hämmare, denna cell linje är ett användbart verktyg för att undersöka TLR aktivering och dess roll i inflammation som svar på en mängd olika stimuli5,7,8. Reportern celler är en modifierad mus makrofage-liknande cellinjer som stabilt kan producera utsöndras embryonala alkaliska fosfatas (SEAP) vid NF-κB och AP-1 transkriptionsfaktor aktivering9. Den kolorimetriska enzymatiska alkaliska fosfatasanalys (tabell över material) kan sedan användas för att kvantifiera relativa mängder av Seap uttryck som ett indirekt mått på NF-κb/AP-1 aktivitet. Eftersom NF-κB och AP-1 är nedströms från många cell signalvägar, neutraliserande antikroppar och hämmare riktade till specifika TLRs (t. ex., TLR2) eller TLR adapter molekyler (t. ex. MyD88) kan användas för att kontrollera rollen av en viss väg. Den metod som beskrivs i denna artikel ger en enkel och snabb metod för att bedöma bidraget av TLR signalering i murina makrofag svar på en mängd polymera ytor med adsorberat protein skikt som innehåller både blodproteiner och damps som en in vitro-modell av implanterade biomaterial.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td colspan="4">Cell culture reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-mouse/human CD282 (TLR2)</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>121802</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CLI-095 (TLR4 inhibitor)</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>TLRL-CLI95</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57 complement plasma K2 EDTA 10ml, innovative grade US origin</td>
			<td>InnovativeResearch</td>
			<td>IGMSC57-K2 EDTA-Compl-10ml</td>
			<td>Mouse plasma</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s modified eagle medium (DMEM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D6429-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dulbecco&#39;s phosphate buffered saline (DPBS)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14190250</td>
			<td>No calcium, no magnesium</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum (FBS), research grade</td>
			<td>Wisent</td>
			<td>98150</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LPS-EK</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>TLRL-EKLPS</td>
			<td>Lipopolysaccharide from Escherichia coli K12</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIH/3T3 fibroblasts</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1658</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pam3CSK4</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>tlrl-pms</td>
			<td>Synthetic triacylated lipopeptide - TLR1/2 ligand</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/streptomycin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P4333-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plasmocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ANT-MPP</td>
			<td>Mycoplasma elimination reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RAW-Blue cells</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>raw-sp</td>
			<td>NF-&#954;B/AP-1 reporter macrophage cell line</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue solution, 0.4%</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>15250061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE express enzyme (1X)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12604021</td>
			<td>animal origin-free recombinant cell dissociation enzyme</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zeocin</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>ANT-ZN-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Kits and assays</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA precoated plates, mouse IL-6</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>B213022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ELISA precoated plates, mouse TNF-&#945;</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>B220233</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Endotoxin (Escherichia coli) - Control standard endotoxin (CSE)</td>
			<td>Associates of Cape Cope Inc.</td>
			<td>E0005-5</td>
			<td>Endotoxin for standard curve in chromogenic endotoxin assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAL water, 100 mL</td>
			<td>Associates of Cape Cope Inc.</td>
			<td>WP1001</td>
			<td>Used with chromogenic endotoxin assay</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro BCA protein assay</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>PI23235</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Limulus amebocyte lysate (LAL) Pyrochrome endotoxin test kit</td>
			<td>Associates of Cape Cope Inc.</td>
			<td>C1500-5</td>
			<td>Chromogenic endotoxin assay reagent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>QUANTI-Blue alkaline phosphatase detection medium</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>rep-qb2</td>
			<td>Alkaline phosphatase assay to indirectly measure NF-&#954;B/AP-1 activity</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Polymeric coating reagents</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroform, anhydrous</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>288306-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethyl alcohol anhydrous</td>
			<td>Commercial Alcohols</td>
			<td>P006EAAN</td>
			<td>Sigma: Reagent alcohol, anhydrous, 676829-1L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Straight tapered fine tip forceps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>16-100-113</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorinert FC-40 solvent</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>F9755-100ML</td>
			<td>Fluorinated solvent for fPTFE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell culture grade water (endotoxin-free)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>SH30529LS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poly(methyl methacrylate) (PMMA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>182230-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sylgard 184 elastomer kit</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>50822180</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Teflon-AF (fPTFE)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>469610-1G</td>
			<td>Poly[4,5-difluoro-2,2-bis(trifluoromethyl)-1,3-dioxole-co-tetrafluoroethylene]</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Consumables</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesive plate seals</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>AB-0580</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axygen microtubes, 1.5 mL</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-222-155</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Borosilicate glass scintillation vials, with white polypropylene caps</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>03-337-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear PS 48-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-52</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear TCPS 96-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-2C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Clear TCPS 48-well plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-1C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glasses, circles</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-545-81</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon tissue culture treated flasks, T25</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>10-126-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>sticky-Slide 8 Well</td>
			<td>Ibidi</td>
			<td>80828</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Superfrost microscope slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture treated flasks, T150</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>08-772-48</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a macrophage reporter cell assay to examine toll-like receptor-mediated nf-kb/ap-1 signaling on adsorbed protein layers on polymeric surfaces

Den ihållande inflammatoriska värd svar på en implanterad biomaterial, känd som den främmande kroppen reaktion, är en betydande utmaning i utvecklingen och genomförandet av biomedicinska enheter och vävnad Engineering konstruktioner. Makrofager, en medfödd immun cell, är viktiga aktörer i den främmande kroppen reaktion eftersom de finns kvar på implantatplatsen för livslängden på enheten, och är vanligen studeras för att få en förståelse för denna skadliga värd svar. Många biomaterial forskare har visat att adsorberade protein skikt på implanterade material påverka makrofagbeteende, och därefter påverka värd svaret. Metoderna i detta dokument beskriver en in vitro-modell med hjälp av adsorberade protein skikt som innehåller cellulära skador molekyler på polymer biomaterial ytor för att bedöma makrofag svar. En NF-кB/AP-1 reporter makrofager cellinjer och den tillhörande kolorimetriska alkaliska fosfatasanalysen användes som en snabb metod för att indirekt undersöka aktiviteten av transkriptionsfaktorn NF-кB/AP-1 som svar på komplexa adsorberade protein skikt som innehöll blodproteiner och skadeassocierade molekylära mönster. som modell av komplexa adsorberade protein skikt bildade på biomaterial ytor in vivo.

Rengöringsmetoder för polymerbelagda ytor testades för att säkerställa att beläggningen inte stördes, vilket skulle ses som en förändring i vattenkontakt vinkeln till en obestruket glas täckslip (figur 2). Blötläggning PMMA-belagda Mikroskop diabilder i 70% etanol för 1 h konstaterades för att ta bort PMMA beläggning (figur 2, vänster panel), sannolikt på grund av lösligheten av pmma i 80 WT% etanol13, därför PMMA-bela...

Watch this Scientific Journal Video about A Macrophage Reporter Cell Assay to Examine Toll-Like Receptor-Mediated NF-kB/AP-1 Signaling on Adsorbed Protein Layers on Polymeric Surfaces at JoVE.com

A Macrophage Reporter Cell Assay to Examine Toll-Like Receptor-Mediated NF-kB/AP-1 Signaling on Adsorbed Protein Layers on Polymeric Surfaces

Detta protokoll ger forskare en snabb, indirekt metod för mätning av TLR-beroende aktivitet av transkriptionsfaktorn NF-кB/AP-1 i en murin makrofag-celllinje som svar på en mängd polymera ytor och adsorberade protein skikt som modellerar mikromiljön med biomaterial implantat.

En macrophage reporter cell assay att undersöka Toll-liknande receptor-medierad NF-kB/AP-1 signalering på adsorberat protein skikt på polymera ytor

The persistent inflammatory host response to an implanted biomaterial, known as the foreign body reaction, is a significant challenge in the development ...

Detta protokoll möjliggör snabb bedömning av NF-kappa-B och AP-1 aktivitet i reporter makrofager odlade på adsorberade proteinlager och bidraget från cellsignalering vägar, som Toll-liknande receptorer, till detta svar. Den största fördelen med denna teknik är dess enkelhet, vilket gör att cellkulturen supernatanter snabbt kan analyseras för NF-kappa-B och AP-1 aktivitet med hjälp av en okomplicerad enzymatisk analys. Börja med att lösa upp PMMA i kloroform vid en 20 milligram per milliliter slutlig koncentration i en 20-milliliter glas scintillation injektionsflaska i en fume huva.Placera en magnetisk rör bar i injektionsflaskan, och rör blandningen i minst två timmar. När alla av de fasta ämnen har lösts, överföra 400 mikroliter av PMMA lösningen på mitten av varje borosilikat glas mikroskop glida per planerat skick på en spin coater, och snurra PMMA på bilden i två minuter vid 3, 000 rotationer per minut. Förvara sedan de spinbelagda rutschbanorna i en 70%-etanolsprutad ren låda.Därefter, i ett biologiskt säkerhetsskåp, använd sterila tlys och aseptisk teknik för att fästa åtta-kammare klibbiga brunnar till PMMA belagda-diabilder, trycka stadigt på toppen av varje klibbig brunn för att se till att de är starkt fastsatta. Var noga med att rada upp de klibbiga brunnarna med kanterna på mikroskopet glida så att alla brunnar fäster på bilden och inte läcker. Inkubera de klibbiga välfästa rutschbanorna i 37 grader Celsius över natten för att säkra tätningarna.Tillsätt sedan 200 mikroliter av cellkultur grade endotoxinfritt vatten till varje brunn för en 60-minuters inkubation vid rumstemperatur för att testa tätningarna nästa morgon. I slutet av inkuberingen, aspirera vattnet, var noga med att inte störa PMMA-beläggningen. Tvätta varje brunn tre gånger med 300 mikroliter färskt endotoxinfritt vatten i en timme per tvätt följt av en 12-timmars och en 24-timmars tvätt före användning för att avlägsna eventuellt återstående lösningsmedel.Sedan UV sterilisera diabilderna i 30 minuter. För att få 3T3 cell lysates, när 3T3 cellkulturer når 70%sammanflödet i T150 odlingskolvar, tvätta varje kultur med fem milliliter PBS, och behandla cellerna med fem milliliter av animaliskt ursprung-fria, rekombinant cell dissociation enzym per kolv vid 37 grader Celsius i tre till fem minuter. I slutet av inkubationen lutar du försiktigt varje kolv fram och tillbaka några gånger för att lossa cellerna innan enzymet neutraliseras med fem milliliter PBS per odling.Pool de dissociated cellerna i en enda 50-milliliter centrifugrör, och använda en pipett för att bryta upp någon cell klumpar. Efter räkning, samla cellerna genom centrifugering. Aspirera supernatanten och återanvänd cellerna vid en gång 10 till de sex cellerna per milliliterkoncentration i färsk PBS.Frys sedan cellerna i en minus 80-graders Frys frys i Celsius i minst två timmar tills provet är helt fryst innan du placerar den frysta celllösningen i ett 37-graders Celsius vattenbad tills det tinas helt. För att bedöma effekterna av ett adsorberat proteinskikt på Toll-liknande receptormedierad NF-kappa-B/AP-1 aktivitet, efter växande reporter makrofager i en lämpligt stor kolv till 70%sammanflödet, lossa cellerna med en lämplig enzymatisk dissociation lösning som visas. Resuspend cellerna på en 7,3 gånger 10 till de fem cellerna per milliliter koncentration i analysmedel, och alikvot cellerna jämnt mellan tre rör.Behandla det första röret av celler med ett mikrogram per milliliter TLR4-hämmare i 60 minuter vid rumstemperatur, behandla det andra röret med 50 mikrogram per milliliter anti-TLR2 antikropp i 30 minuter vid rumstemperatur, och lämna det tredje röret vid rumstemperatur utan behandling. Medan cellerna inkuberar, tillsätt 200 mikroliter av lysate och 10%fetala nötkreatur serum till tre klibbiga brunnar per villkor. Låt proteinerna adsorbera vid 37 grader Celsius under lämplig experimentell period innan de aspirerar på proteinlösningarna med en ny Pasteurpipett för varje brunn och tvätta de klibbiga brunnsytorna tre gånger med 250 mikroliter PBS per brunn i fem minuter per tvätt.I slutet av reportern makrofag behandling, lägga till 200 mikroliter av celllösning till varje brunn. Lägg till Pam3CSK4 till en slutlig koncentration av 150 nanogram per milliliter till två brunnar som en TLR2 positiv kontroll som illustreras i schemat. För en TLR4 positiv kontroll, tillsätt lipopolysackarid till en slutlig koncentration av 1,5 mikrogram per milliliter till två brunnar.Efter 20 timmar vid 37 grader Celsius, plattan 20 mikroliter av supernatant från varje brunn i två exemplar i en 96-brunnsplatta, inklusive tre brunnar med 20 mikroliter av analysmedel per samt bakgrundskontrollen. Därefter lägger du till 200 mikroliter av SEAP-reporterreagens till varje brunn, och täck plattan med en självhäftande tätning för en 2 1/2-timmars inkubation vid 37 grader Celsius. Överför resten av supernatanten till ett 1,5-milliliterrör per klibbig brunn, och sediment skräpet genom centrifuger.Överför sedan supernatanterna till nya 1,5-milliliterrör för minus 80-graders Celsius-lagring för nedströms proinflammatory cytokineanalys av ELISA. Vid slutet av inkubationen, ta bort den självhäftande tätningen från plattan, och läs absorbansen på en plater läsare vid 635 nanometer. Blötläggning PMMA-belagda mikroskop diabilder i 70%etanol i en timme tar bort PMMA-beläggningen, medan varken 70%etanol eller UV-sterilisering påverkar vattenkontaktvinkeln för fPTFE-belagda täckslips.Western blot analys av 3T3 lysates avslöjar förekomsten av både HMGB1 och värmechock protein 60, två väldokumenterade skador-associerade molekylära mönster. Adsorptionen av TLR ligander från lysate på polymerytorna kan bekräftas av culturing reporter makrofager i 20 timmar på protein-adsorberade polymerytor och sedan indirekt bedöma NF-kappa-B/AP-1 verksamhet via en enzymatisk assay. Denna aktivitet reduceras efter hämning av TLR2- eller TLR4-signalering.Vidare har reporter makrofager avsevärt ökat NF-kappa-B/AP-1 aktivitet som svar på adsorberad lysate jämfört med adsorberad FBS eller plasma och ingen pre-adsorberat protein. Dessutom, små mängder av lysate utspädd i serum inducera signifikant ökade NF-kappa-B/AP-1 svar jämfört med serum ensam, med den lägsta effektiva utspädning beroende av polymerytan. För att undvika endotoxin kontaminering av de belagda ytorna, arbeta i rena områden, täck ytorna när de inte används, och använd cellkulturkvalitet vatten och buffertar för sköljningar.Efter denna procedur kan immunoassays utföras på de återstående supernatanterna för att bedöma proteinsekretion, och makrofager kan analyseras genom flödescytometri och qPCR-genuttrycksanalys.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Studying Cell Rolling Trajectories on Asymmetric Receptor Patterns

Studera Cell Rolling Trajectories på asymmetrisk Receptor Mönster

Lateral displacement of cells orthogonal to a flow stream by rolling on asymmetric receptor patterns presents an opportunity for development of new ...

On-Chip Endothelial Inflammatory Phenotyping

On-Chip Endothelial inflammatorisk Fenotypning

Atherogenesis is potentiated by metabolic abnormalities that contribute to a heightened state of systemic inflammation resulting in endothelial ...

Wide-field Fluorescent Microscopy and Fluorescent Imaging Flow Cytometry on a Cell-phone

Wide-området fluorescensmikroskopi och fluorescerande Imaging flödescytometri på en mobiltelefon

Fluorescent microscopy and flow cytometry are widely used tools in biomedical research and clinical diagnosis. However these devices are in general ...

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

Cell Patterning on Photolithographically Defined 
Parylene-C: SiO2 Substrates

Cell Mönstring på fotolitografiskt Defined Parylen-C: SiO<sub&gt; 2</sub&gt; Substrat

Cell patterning platforms support broad research goals, such as construction of predefined in vitro neuronal networks and the exploration of certain ...

From Fast Fluorescence Imaging to Molecular Diffusion Law on Live Cell Membranes in a Commercial Microscope

Från Snabb fluorescens avbildning till molekylär diffusion lagen om Live cellmembran i en kommersiell mikroskop

It has become increasingly evident that the spatial distribution and the motion of membrane components like lipids and proteins are key factors in the ...

Fluorescence Biomembrane Force Probe: Concurrent Quantitation of Receptor-ligand Kinetics and Binding-induced Intracellular Signaling on a Single Cell

Fluorescence Biomembrane Force Probe: Samtidig kvantifiering av receptor-ligand Kinetics och bindning-inducerad intracellulär signalering på en enda cell

Membrane receptor-ligand interactions mediate many cellular functions. Binding kinetics and downstream signaling triggered by these molecular interactions ...

Rapid Subtractive Patterning of Live Cell Layers with a Microfluidic Probe

Snabb Subtraktiv Mönstring av levande cellskikt med en mikroflödessystem Probe

The microfluidic probe (MFP) facilitates performing local chemistry on biological substrates by confining nanoliter volumes of liquids. Using one ...

PIP-on-a-chip: A Label-free Study of Protein-phosphoinositide Interactions

PIP-on-a-chip: En etikettfri studie av protein-fosfinositid-interaktioner

Numerous cellular proteins interact with membrane surfaces to affect essential cellular processes. These interactions can be directed towards a specific ...

Fabrication and Validation of an Organ-on-chip System with Integrated Electrodes to Directly Quantify Transendothelial Electrical Resistance

Tillverkning och validering av en orgel-on-chip System med integrerad elektroder direkt kvantifiera Transendothelial resistans

Organs-on-chips, in vitro models involving the culture of (human) tissues inside microfluidic devices, are rapidly emerging and promise to provide useful ...

Site-Directed Immobilization of Bone Morphogenetic Protein 2 to Solid Surfaces by Click Chemistry

Webbplats-regisserad immobilisering av benmorfogent Protein 2 till fasta ytor genom att klicka på kemi

Different therapeutic strategies for the treatment of non-healing long bone defects have been intensively investigated. Currently used treatments present ...