Name: a layered mounting method for extended time-lapse confocal microscopy of whole zebrafish embryos
Uploaded: 2020-01-14T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos at JoVE.com

我们感谢阿尔伯特·潘和阿恩特·西亚克曼赠送的转基因鱼。我们感谢日本教育、文化、体育、科学和技术部的国家生物资源项目国家遗传学研究所的川口孝一为转基因斑马鱼HGn39b的礼物。我们还感谢法蒂玛商人和凯瑟琳·加耶夫斯基在共聚焦显微镜方面的协助，以及特雷西·特里奥特的照片。
这项工作得到了国家卫生研究院国家环境卫生科学研究所的赠款支持（赠款号P30ES023512和合同编号HHSN273201500010C）。SU得到了凯克计算癌症生物学项目（海湾海岸联合体CPRIT赠款RP140113）和休·罗伊和莉莉捐赠基金的资助。J-+G得到了罗伯特·韦尔奇基金会（E-0004）的支持。

这里展示的动物工作得到了休斯敦大学和印第安纳大学的机构动物护理和使用委员会（IACUCs）的批准。
1. 鱼类养殖
注：使用脊椎动物模型需要IACUC批准的协议。它应按照相关的国家和国际准则进行。
<ol><li>保持成年斑马鱼如先前出版的文献9所述。</li>
	<li>下午，将成年斑马鱼放入繁殖箱。以1：2的比例培育雄性与雌性。</li>
</ol><p class="...

<ol>
	<li>Kimmel, C. B., Ballard, W. W., Kimmel, S. R., Ullmann, B., Schilling, T. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stages+of+embryonic+development+of+the+zebrafish.">Stages of embryonic development of the zebrafish.</a> Developmental Dynamics. 203 (3), 253-310 (1995).</li><li>Kaufmann, A., Mickoleit, M., Weber, M., Huisken, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multilayer+mounting+enables+long-term+imaging+of+zebrafish+development+in+a+light+sheet+microscope.">Multilayer mounting enables long-term imaging of zebrafish development in a light sheet microscope.</a> Development. 139 (17), 3242-3247 (2012).</li><li>Schmid, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-speed+panoramic+light-sheet+microscopy+reveals+global+endodermal+cell+dynamics.">High-speed panoramic light-sheet microscopy reveals global endodermal cell dynamics.</a> Nature Communications. 4, 2207 (2013).</li><li>Megason, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+toto+imaging+of+embryogenesis+with+confocal+time-lapse+microscopy.">In toto imaging of embryogenesis with confocal time-lapse microscopy.</a> Methods in Molecular Biology. 546, 317-332 (2009).</li><li>Masselink, W., Wong, J. C., Liu, B., Fu, J., Currie, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-cost+silicone+imaging+casts+for+zebrafish+embryos+and+larvae.">Low-cost silicone imaging casts for zebrafish embryos and larvae.</a> Zebrafish. 11 (1), 26-31 (2014).</li><li>Wittbrodt, J. N., Liebel, U., Gehrig, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+orientation+tools+for+automated+zebrafish+screening+assays+using+desktop+3D+printing.">Generation of orientation tools for automated zebrafish screening assays using desktop 3D printing.</a> BMC Biotechnology. 14, 36 (2014).</li><li>Weijts, B., Tkachenko, E., Traver, D., Groisman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Four-Well+Dish+for+High-Resolution+Longitudinal+Imaging+of+the+Tail+and+Posterior+Trunk+of+Larval+Zebrafish.">A Four-Well Dish for High-Resolution Longitudinal Imaging of the Tail and Posterior Trunk of Larval Zebrafish.</a> Zebrafish. 14 (5), 489-491 (2017).</li><li>Hirsinger, E., Steventon, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Versatile+Mounting+Method+for+Long+Term+Imaging+of+Zebrafish+Development.">A Versatile Mounting Method for Long Term Imaging of Zebrafish Development.</a> Journal of Visualized Experiment. (119), (2017).</li><li>Avdesh, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regular+care+and+maintenance+of+a+zebrafish+(Danio+rerio)+laboratory:+an+introduction.">Regular care and maintenance of a zebrafish (Danio rerio) laboratory: an introduction.</a> Journal of Visualized Experiment. (69), e4196 (2012).</li><li>McCollum, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Embryonic+exposure+to+sodium+arsenite+perturbs+vascular+development+in+zebrafish.">Embryonic exposure to sodium arsenite perturbs vascular development in zebrafish.</a> Aquatic Toxicology. 152, 152-163 (2014).</li><li>Pan, Y. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrabow:+multispectral+cell+labeling+for+cell+tracing+and+lineage+analysis+in+zebrafish.">Zebrabow: multispectral cell labeling for cell tracing and lineage analysis in zebrafish.</a> Development. 140 (13), 2835-2846 (2013).</li><li>Asakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+dissection+of+neural+circuits+by+Tol2+transposon-mediated+Gal4+gene+and+enhancer+trapping+in+zebrafish.">Genetic dissection of neural circuits by Tol2 transposon-mediated Gal4 gene and enhancer trapping in zebrafish.</a> Proceedings of the National Academy of Science U. S. A. 105 (4), 1255-1260 (2008).</li><li>Nagayoshi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insertional+mutagenesis+by+the+Tol2+transposon-mediated+enhancer+trap+approach+generated+mutations+in+two+developmental+genes:+tcf7+and+synembryn-like.">Insertional mutagenesis by the Tol2 transposon-mediated enhancer trap approach generated mutations in two developmental genes: tcf7 and synembryn-like.</a> Development. 135 (1), 159-169 (2008).</li><li>Huang, W. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combined+use+of+MS-222+(tricaine)+and+isoflurane+extends+anesthesia+time+and+minimizes+cardiac+rhythm+side+effects+in+adult+zebrafish.">Combined use of MS-222 (tricaine) and isoflurane extends anesthesia time and minimizes cardiac rhythm side effects in adult zebrafish.</a> Zebrafish. 7 (3), 297-304 (2010).</li><li>Craig, M. P., Gilday, S. D., Hove, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dose-dependent+effects+of+chemical+immobilization+on+the+heart+rate+of+embryonic+zebrafish.">Dose-dependent effects of chemical immobilization on the heart rate of embryonic zebrafish.</a> Laboratory Animal (NY). 35 (9), 41-47 (2006).</li><li>Swinburne, I. A., Mosaliganti, K. R., Green, A. A., Megason, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+Long-Term+Imaging+of+Embryos+with+Genetically+Encoded+alpha-Bungarotoxin.">Improved Long-Term Imaging of Embryos with Genetically Encoded alpha-Bungarotoxin.</a> PLoS One. 10 (8), 0134005 (2015).</li></ol>

本文介绍了一种用于延长整个斑马鱼胚胎的延时共聚焦显微镜的安装方法。安装方法最关键的步骤是确定琼脂糖的最佳浓度，允许不受限制的斑马鱼胚胎生长，同时使胚胎处于完全固定的位置进行共聚焦成像。由于甘蔗的最佳浓度非常窄，因此此值对在制备溶液期间测定甘蔗重量和E3体积时的错误非常敏感。最佳浓度也可能取决于胚胎的温度和阶段。因此，需要通过重复不同浓度的试验，为每一?...

斑马鱼长期以来一直是发育生物学的模型生物，显微镜是可视化胚胎发育的主要方法。使用斑马鱼胚胎进行发育研究的优点包括体积小、光学清晰度高、发育迅速和成年鱼的繁殖性高。转基因斑马鱼线在某些组织或细胞中表达荧光，使得组织发育能够以大型脊椎动物所无法得到的方式直接可视化。结合延时显微镜，可以很容易地研究组织发育的细节和动态。
成像斑马鱼发育的一个困难是胚胎长得很大;胚胎在生命前3天内伸展其长度4次。此外，早期胚胎的身体是软的，如果生长受到限制，很容易被扭曲。然而，要进行共聚焦显微镜，胚胎必须固定。为了保持胚胎在固定位置进行共聚焦延时成像，它们定期进行麻醉，并安装在0.3-1%的低熔胶胶胶中。这样做的好处是允许在一定时期内在成像过程中进行一些生长，同时限制胚胎的运动。胚胎的某些部分可以有效地成像像这样。然而，当使用这种方法对整个胚胎进行长时间的成像时，由于生长受限，生长受限，观察到扭曲。因此，需要其他安装方法。考夫曼及其同事通过将斑马鱼胚胎安装在含有低浓度的琼脂糖或甲基纤维素2的氟化乙烯丙烯（FEP）管中，描述了一种用于光片显微镜的替代安装斑马鱼胚胎，如选择性平面照明显微镜（SPIM）。该技术可以随着时间的推移对胚胎的产生产生产生极好的可视化效果。Schmidi等人描述了在FEB管中为光片显微镜3在Agarose中安装多达6个胚胎，在一次成像中提供了多个胚胎的可视化效果。模具已经被用来创造胚胎阵列，以有效地安装更多的胚胎4。Masselkink等人已经构建了3D打印塑料模具，可用于制造硅铸件，斑马鱼胚胎可以放置在不同阶段，使安装在一个恒定的位置成像，包括共聚焦成像5。3D打印也被用来制造模具，以96井格式6一致定位斑马鱼胚胎。有些模具是针对特定阶段定制的，可能不允许长时间无限制的生长，而其他模具则更灵活。最近，Weijts等人发表了一种四井盘的设计和制造，用于斑马鱼胚胎的活成像7。在这个菜中，麻醉鱼胚胎的尾巴和躯干被手动放置在一个清晰的硅胶屋顶下，紧贴在盖玻璃的上方，形成一个口袋。然后，通过添加0.4%的甘蔗，将胚胎固定在这个位置。这种安装允许对胚胎的约 2 mm 长的后部（树干和尾部）进行成像，并且由于每个井可以安装多达 12 个胚胎，该方法允许对多个样本进行成像。同样，希辛格和史蒂文顿最近提出了一种方法，其中鱼的头部安装在甘蔗，而尾巴可以自由生长，这种方法也有效地促进成像的树干和尾部区域的胚胎8。
本文介绍了斑马鱼胚胎的分层安装方法，该方法限制胚胎的运动，同时允许不受限制的生长。这种安装方法的优点是，它是一种低成本、快速、简便的方法，可使用任何倒置显微镜安装不同阶段的胚胎进行成像。在胚胎发育过程中，安装允许对全身（头部、躯干和尾部）进行长期成像。为了展示这种方法的可用性，整个胚胎血管，神经元和肌肉发育在转基因鱼的图像。每期两个胚胎，在3D的两个波长被图像的延时显微镜连续55小时，以呈现电影的组织发展。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Low melting agarose</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO</td>
			<td>A9414</td>
			<td>Store dissolved solution at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>35 mm glass bottom dishes with No. 0 coverslip and 10 mm diameter of glass bottom</td>
			<td>MatTek Corporation, MA</td>
			<td>P35GCOL-0-10-C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tricaine (MS-222)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO</td>
			<td>E10521</td>
			<td>Store dissolved solution at 4 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-phenylthiourea (PTU)</td>
			<td>Sigma-Aldrich, MO</td>
			<td>P7629</td>
			<td>Store dissolved solution at -20 &#176;C</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro cover glass 22x22 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>48366 067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leica DMi8 fluorescence microscope</td>
			<td>Leica</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS X software</td>
			<td>Leica</td>
			<td>NA</td>
			<td>Microscope software</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMC4500 digital microscope camera</td>
			<td>Leica</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon A1S confocal microscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td>NA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nikon NIS AR Version 4.40</td>
			<td>Nikon Instruments Inc.</td>
			<td>NA</td>
			<td>Microscope software</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a layered mounting method for extended time-lapse confocal microscopy of whole zebrafish embryos

发育动力学可以跟随活转基因斑马鱼胚胎在特定组织或细胞中表达荧光的共聚焦延后显微镜。成像整个胚胎发育的一个困难是斑马鱼胚胎长得很大。当像定期安装在0.3-1%低熔胶甘蔗中一样，甘蔗会施加生长限制，导致软胚胎体变形。然而，要进行共聚焦延时显微镜，胚胎必须固定。本文介绍了斑马鱼胚胎的分层安装方法，该方法限制了胚胎的活力，同时允许不受限制的生长。安装以不同浓度的甘蔗层进行。为了证明这种方法的可用性，整个胚胎血管、神经元和肌肉发育在转基因鱼中连续55小时成像。这种安装方法可用于使用倒置显微镜对整个斑马鱼胚胎进行简单、低成本的成像，无需模具或特殊设备。

安装方法的开发 这项工作的主要目的是开发一种低成本的安装技术，用于长期对斑马鱼发育进行延时成像。分层安装方法的制定是为了允许脆弱的斑马鱼胚胎体完全生长，同时限制其运动。如果第1层的Agarose浓度过高，胚胎将变形和弯曲（图2）。生长在0.1%和0.5%的胚胎的甘蔗有缩短的尾巴，扭曲的鳍和弯曲的头。相反，如果生长的胶着胶浓度过低，胚胎在延?...

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A Layered Mounting Method for Extended Time-Lapse Confocal Microscopy of Whole Zebrafish Embryos

本文介绍了一种将脆弱的斑马鱼胚胎用于延长延时共聚焦显微镜的方法。这种低成本的方法很容易使用常规玻璃底显微镜盘在任何倒置显微镜上成像。安装以不同浓度的甘蔗层进行。

全斑马鱼胚胎的延长时移共聚焦显微镜的分层安装方法

Dynamics of development can be followed by confocal time-lapse microscopy of live transgenic zebrafish embryos expressing fluorescence in specific tissues ...

我们开发了一种延时成像的安装方法，允许脆弱的斑马鱼胚胎不受限制地生长，同时将它们保持在一个完全固定的位置。这种安装方法快速、简单、便宜，适用于任何倒置显微镜上的实验室成像。我们开发了这种活斑马鱼胚胎成像方法，但可以修改用于其他小型水生动物模型的成像。首先繁殖成年斑马鱼。下午，将鱼放入养殖池中，以一对二的雄女比例。然后在胚胎介质中准备1%低熔糖的库存溶液，然后用微波炉加热溶解。将阿加罗斯溶液分成1.5毫升管。在蒸馏水中制造4%三丁的库存溶液，并在4摄氏度下储存加糖和三分。三层是有毒的，必须称重，并准备在烟罩。交配后，在培养皿中收获E3中的斑马鱼胚胎，并在26.5摄氏度下孵育约28小时，然后安装。用0.02%三叶草麻醉胚胎，并在显微镜下通过轻轻抓住和拉开胆小子来释放胚胎来除去胚胎。在安装之前，将阿加罗斯溶液加热到65摄氏度，然后让它冷却到大约30摄氏度，这样胚胎不会受到热的伤害，并在加糖溶液中加入三糖溶液。使用 35 毫米玻璃底盘，底部为零盖玻璃。用玻璃移液器或微移液器轻轻将一个侧侧朝向盘子底部的脱光胚胎，然后用微移管小心地取出剩余的 E3。将第一个阿加罗斯溶液添加到小井中，该小井由附着在盘子底部的盖玻璃制成，以覆盖胚胎，确保红糖覆盖小井，但不会溢出。用盖玻璃盖住小井，在两个盖玻璃之间用胚胎创造一个狭窄的充满糖的空间。将一层1%的加糖溶液放在盘子底部的盖玻璃上，在盖玻璃凝固时保持盖玻璃就位。然后用含有0.02%三分素的E3填充菜的其余部分，以保持系统水分。为了确定第一层的最佳阿加罗斯浓度，将胚胎安装在增加阿加罗斯浓度中，并进行延时成像，以识别最小化胚胎变形和活力的浓度，然后根据结果测试更精细的浓度范围。该协议最关键的步骤是确定第一层中阿加罗斯的最佳浓度。测试不同纳米浓度的阿加罗斯，如0.030%0.032%等。以找到最佳浓度。要对胚胎进行延时成像，请使用显微镜阶段，孵化器设置为 28.5 摄氏度，图像长达 55 小时。要同时成像多个胚胎，请使用一个舞台适配器，该适配器可以容纳多个菜盘，然后一个旋转盘子，使胚胎水平定位。选择一个低放大镜，然后使用目镜定位胚胎，最后通过旋转盘子水平对齐胚胎。在软件中记录胚胎的位置，并创建一个文件名，用于自动保存数据。设置针孔大小、扫描速度、图像大小和缩放。然后选择要拍摄的图像和荧光通道的放大倍率更高。对于每个通道，调整激光功率和探测器高电压，确保收集最佳动态范围，同时避免饱和和限制照片漂白。接下来，以10倍的目标对整个胚胎进行成像，在软件中设置大图像捕获设置，以对多个视场进行成像，并将它们拼接在一起，调整胚胎的位置，以确保它适合这个大型图像区域。根据手稿方向配置捕获 Z 堆栈的设置。为了在长期延时成像期间保持多个胚胎的焦点，请使用自动对焦并调整每个胚胎的单个偏移水平，以聚焦在参考平面上。然后在显微镜软件中设置延时参数，以一小时间隔拍摄 55 小时的图像。在每个周期中，按顺序捕获两个胚胎数据集并自动保存数据。使用显微镜软件处理图像。如果对多个胚胎进行成像，则根据成像位置拆分数据集，为每个胚胎创建独立的文件。使用最大强度投影或类似工具将 3D 时间数据集转换为 2D 时间数据集。最后，创建影片文件，将保存为 AVI，并选择具有 200 毫秒间隔的"无压缩"选项，使播放速度为每秒 5 帧。这种分层安装方法使得斑马鱼胚胎能够成像，同时允许它们生长，但同时限制它们的运动。如果阿加罗斯浓度过高，胚胎会变形。但是，如果太低，他们会在延时显微镜期间移出视野。发现最佳琼糖浓度在0.028至0.034%之间，活生生斑马鱼在整个胚胎中表达RFP，血管内皮细胞中的GFP被成像55小时，在此期间，间体血管发芽，下一个测试和头部血管发育，并发生与延伸躯干的发源性静脉凝结。表达GP和运动神经元的胚胎被成像以可视化运动神经元的发展。运动神经元轴子从腹神经管向胚胎的腹侧发芽。运动神经元轴与分体间血管位置相关的后向发芽的共开发用较高的放大倍率进行成像。这使得可以可视化腹轴发芽的精细细节，以及从神经管发芽的后轴。随着索米特数量的增加，索米特的长度和宽度也会延长。这个过程是使用转基因胚胎在肌肉中表达GP的图像。由于阿加罗斯的最佳浓度非常窄，因此在制备阿加罗斯的库存溶液时，对测量的小变化非常敏感，因此需要为每一批新一批的阿加罗斯溶液重新定义。仔细设置成像参数（包括图像大小和分辨率、扫描速度、变焦、探测器高压和激光功率）非常重要，以确保实验之间的一致性，并降低长期延时成像期间发生照片毒性和照片漂白的可能性。使用这种安装方法进行转基因斑马鱼胚胎，然后对整个生物体进行延长的延时成像，我们可以直观地看到不同的组织是如何共同发育的。

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Capturing Tissue Repair in Zebrafish Larvae with Time-lapse Brightfield Stereomicroscopy

捕获组织修复的斑马鱼幼虫与时间推移明视立体显微镜

The zebrafish larval tail fin is ideal for studying tissue regeneration due to the simple architecture of the larval fin-fold, which comprises of two ...

科研

发育生物学

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

Analyzing In Vivo Cell Migration using Cell Transplantations and Time-lapse Imaging in Zebrafish Embryos

分析<em&gt;在体内</em&gt;细胞迁移使用细胞移植和时间推移成像在斑马鱼胚胎

Cell migration is key to many physiological and pathological conditions, including cancer metastasis. The cellular and molecular bases of cell migration ...

Analysis of Zebrafish Kidney Development with Time-lapse Imaging Using a Dissecting Microscope Equipped for Optical Sectioning

配备了光学切片与成像定时使用解剖显微镜斑马鱼肾脏发展分析

In order to understand organogenesis, the spatial and temporal alterations that occur during development of tissues need to be recorded. The method ...

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

A Submerged Filter Paper Sandwich for Long-term Ex Ovo Time-lapse Imaging of Early Chick Embryos

水下滤纸三明治长期<em&gt;防爆大毛</em&gt;早期鸡胚时间推移成像

Due to its availability, low cost, flat geometry, and transparency, the ex ovo chick embryo has become a major vertebrate animal model for the study of ...

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

An Ex Vivo Method for Time-Lapse Imaging of Cultured Rat Mesenteric Microvascular Networks

一个<em&gt;离体</em&gt;方法培养大鼠肠系膜微血管网络的时间推移成像

Angiogenesis, defined as the growth of new blood vessels from pre-existing vessels, involves endothelial cells, pericytes, smooth muscle cells, immune ...

A Versatile Mounting Method for Long Term Imaging of Zebrafish Development

斑马鱼发展长期成像的多功能安装方法

Zebrafish embryos offer an ideal experimental system to study complex morphogenetic processes due to their ease of accessibility and optical transparency. ...

Induction of Hypoxia in Living Frog and Zebrafish Embryos

诱导生活青蛙和斑马鱼胚胎缺氧

Here, we introduce a novel system for hypoxia induction, which we developed to study the effects of hypoxia in aquatic organisms such as frog and ...

Multi-Photon Time Lapse Imaging to Visualize Development in Real-time: Visualization of Migrating Neural Crest Cells in Zebrafish Embryos

多光子时间推移成像实时可视化发展： 迁移神经嵴细胞在斑马鱼胚胎中的可视化

Congenital eye and craniofacial anomalies reflect disruptions in the neural crest, a transient population of migratory stem cells that give rise to ...

Quantitative Whole-mount Immunofluorescence Analysis of Cardiac Progenitor Populations in Mouse Embryos

小鼠胚胎心肌内祖群的定量全贴免疫荧光分析

The use of ever-advancing imaging techniques has contributed broadly to our increased understanding of embryonic development. Pre-implantation development ...

Single-Cell Quantification of Protein Degradation Rates by Time-Lapse Fluorescence Microscopy in Adherent Cell Culture

粘附细胞培养的时间推移荧光显微镜对蛋白质降解率的单细胞定量研究

Proteins are in a dynamic state of synthesis and degradation and their half-lives can be adjusted under various circumstances. However, most commonly used ...